mikrotiter plakaları orta düzensiz kaybı üniforma çok hücreli tümör sfero oluşumu tekrarlanabilirlik etkiler. Kültür şartlarının iyileştirilmesi küremsi oluşumu tekrarlanabilirlik ve sıvı üst tabaka tekniği ile küremsi bazlı deneylerin sonuçları geliştirmek önemli bir orta kaybını azaltmak.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Buharlaşma azaltıcı Kültür Durumu Mikrotiter Tabaklar Multisellüler Sfero Oluşumunun Tekrarlanabilirlik artırır
Bu makalede
Özet
Özet
Yakından in vivo koşullarda taklit Tümör modelleri potansiyel anti-kanser ilaçların taranması için ilaç keşfi ve geliştirilmesi giderek daha popüler hale gelmektedir. Çok hücreli tümör sferoidler (MCTSes) etkili bir talebi optimizasyonu ve hedef doğrulama için in vitro bir model bunları uygun hale getirir, katı tümörlerin fizyolojik koşulları taklit eder. MCTS kültürü için çeşitli tekniklerin dışında, agaroz üzerinde sıvı bindirme yöntemi MCTS üretimi için en ucuz yöntemlerden biridir. Bununla birlikte, yüksek verimli tarama için sıvı kaplama kullanarak MCTS kültürleri güvenilir aktarım agaroz ile mikrotiter plakaları (MAS) kaplanması ve kuyu boyunca tek MCTS formasyonunun irreproducibility dahil kısıtlamaları bir dizi tarafından tehlikeye. Milletvekilleri ilaç için tüm plaka kullanımını engelleyen, plaka dış ortamdaki aşırı buharlaşma sonucu etkileri kenar önemli yatkındırtestleri. Bu el yazması üniforma MCTS formasyonu ölçeklenebilirlik ve tekrarlanabilirlik arttırmak için sıvı bindirme tekniği detaylı teknik geliştirmeler sağlar. ilaç tedavisi sunulmuştur sonra Ayrıca, MCTS değerlendirilmesi için basit, yarı otomatik ve evrensel olarak uygulanabilir yazılım aracı ile ilgili detaylar sunuyor.
Giriş
tümörlerde kanser hücreleri fizyolojik hücre dışı matris ve etkileşim hücreleri ile çevrili bir kompleks 3 boyutlu (3D) bir yapı içerisinde düzenlenir. Yaklaşık dokularda bütün hücreler 3 boyutlu bir ortamda bulunan tümör özellikleri taklit nitro tümör modellerinde daha fazla fizyolojik olarak uygun olan ihtiyaç çok 3D kültür teknikleri, 1, 2, 3 geliştirilmesi ile sonuçlanmıştır. Bu modeller artık 3D 2 terapötik metastazı ve hücre yanıtına tümör mikro rolü çalışmak için temel araştırma araçları haline gelmektedir. Ayrı....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Agaroz kaplı plakalar hazırlanması 1.
- düşük erime noktalı agaroz 0.75 g tartılır ve serumsuz ml McCoy'un 5A ortamı (ya da fenol kırmızısı olmadan) 100 ekleyin. Bir mikrodalga çözüm ısıtın ve tamamen agaroz çözmek için her 1-2 dakikada bir girdap. sterilize çözüm Otoklav.
- yaklaşık 70 ° C'ye kadar agaroz otoklava soğutun ve bir laminer akış kutusu, vakumla süzülerek 500 mL, 0.22 um'lik bir filtre üst yoluyla filtre. bir kerede tüm çözüm kullanarak değilse küçük hacimlere% 0.75 filtrelenmiş agaroz çözeltisi (FAS) alikotu. soğuk oda ya da 4 hafta boyunca 4 ° C'de buzdolabında Bu hazır kullanım agaroz çözelti aseptik saklayın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Özellikle periferik kuyulardan orta düzensiz kaybı, küçük kültür hacimleri ile milletvekilleri sık karşılaşılan bir sorundur. Bu tür iyi kontrol sıcaklık / nemlendirme sistemleri ve buharlaştırma azaltıcı MP'lerin ve plaka kapaklı kuluçka esas olarak geliştirilmiş kültür koşulları, kuyu 8 boyunca ortam önemli kaybını azaltır. nispi bir buharlaşma ölçmek için, Orange G (RG) eşit hacimleri her bir kuyucuğa ilave edildi ve 3 gün boyunca RG absorbans değişikliği, .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Filtreli Agaroz ile 384 Kuyu TC Plakaları Kaplama
LOT standart bir uygulama kaplamak için agaroz ve / veya dağıtma birimi gerekir plakaları, agaroz 6 jelleşmenin önlenmesi için ısıtıldı tutulması için% 1-1.5, düşük-erime noktalı agarozda kullanmaktır. çapı 0.2 ila 0.4 mm arasında değişen küçük bir boru delikler sıvı dağıtma kasetleri kullanılarak birden fazla tabak hazırlarken agaroz jel potansiyel bir sorun değildir. Bu dağıtma sırasında ek ısıtma gerektirir dağıtma kas.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Bu çalışma Eğitim, Gençlik ve Spor (LO1304) Çek Bakanlığı ve Çek Cumhuriyeti Teknolojik Ajansı (TE01020028) hibe tarafından desteklenmiştir. Yazarlar çevresel kapak fotoğraf çekerken Dr. Lakshman Varanasi teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Agarose | Sigma-Aldrich | A9414 | Düşük erime |
| noktalı McCOY'un 5A Orta | Sigma-Aldrich | M8403 | |
| " hızlı" Filtermax filtresi | TPP | 99505 | 0.22 & m, 500 mL |
| Multidrop ve ticaret; Kombi Reaktif Dispenseri | Thermo Fisher Scientific | 5840300 | |
| Küçük Tüp Dağıtım kaseti | Thermo Fisher Scientific | 24073295 | Metal uç |
| 384 kuyulu TC plakası | PerkinElmer | 6057308 | Plaka tipi- CellCarrier |
| Standart Tüp Dağıtım Kaseti | Thermo Fisher Scientific | 24072670 | |
| MicroClime Çevresel Kapak | Labcyte | LLS-0310 | |
| DMSO | Sigma | D4540 | |
| Döner İnkübatör (SteriStore) | HighRes Biosolutions | 23641 | Seri No.: D00384 |
| Mikroplaka Yıkama Dispenseri | BioTek | Belirtilmemiş | Model: EL406 |
| Yüksek İçerikli Görüntüleme Sistemi (CellVoyager) | Yokogawa Electric Corporation Belirtilmemiş | Model: CV7000 | |
| Orange G | New England Biolabs | B7022S | |
| TrypLE ve ticaret; Ekspres rekombinant hücre ayrışma reaktifi | Thermo Fisher Scientific | 12604021 | Fenol kırmızı içermez |
Kaynaklar
- Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: An update. Mol Carcinog. 52 (3), 167-182 (2013).
- Das, V., Bruzzese, F., Konečný, P., Iannelli, F., Budillon, A., Hajdúch, M. Pathophysiologically relevant in vitr....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
