Method Article

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C

DOI:

10.3791/56159

⸱

October 5th, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmaceutical Sciences, University of Toronto, 2Departments of Medical Biophysics and Radiation Oncology, University of Toronto, Ontario Cancer Institute, University Health Network

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu iletişim kuralı bir verimli ve kullanışlı analitik süreci örnek ekstraksiyon ve birden fazla uyuşturucu, doksorubisin (DOX), mitomycin C (MMC) ve doxorubicinol (DOXol), biyolojik bir kardiyo-toksik DOX metaboliti eşzamanlı belirlenmesi açıklar Preklinik meme tümör modeli örnekleri nanopartikül formülasyonları sinerjik ilaç kombinasyonu ile tedavi.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kombinasyon kemoterapi, kanser tedavisi için klinikte sık kullanılır; Ancak, ilişkili yan etkileri normal doku için onun terapötik yarar sınırlayabilir. Nanoparçacık tabanlı ilaç kombinasyonu ücretsiz uyuşturucu kombinasyon tedavisi tarafından karşılaşılan sorunların etkisini azaltmak için gösterilmiştir. Önceki çalışmalarımız var, bu iki antikanser ilaç, doksorubisin (DOX) ve mitomycin C (MMC) ile birlikte gösterilen her iki fare karşı bir sinerjik etkisi üretilen ve vitroinsan meme kanseri hücreleri. DOX ve MMC birlikte yüklenen polimer-lipid hibrid nano tanecikleri (DMPLN) tedavisine direnç ve meme tümör modelleri gelişmiş etkinlik gösterdiği danışmam çeşitli sızma ışınlama pompalar yan yol. Geleneksel çözüm biçimlerine göre DMPLN üstün böyle etkinliğinin DOX ve MMC ve artan hücre içi uyuşturucu bioavailability tümör hücreleri nanocarrier PLN tarafından etkin içinde eşitlenmiş farmakokinetik atfedilen yapıldı.

Farmakokinetik ve biyo-dağılımı değerlendirmek için DOX ve MMC özgür eriyik ve nanoparçacık formları, ters fazlı yüksek performanslı sıvı Kromatografi (HPLC) yapıldı kullanarak basit ve verimli çoklu ilaç analizi yöntemi ortak idare geliştirdi. DOX veya MMC plazmada ayrı ayrı analiz daha önce bildirilen yöntemler aksine, bu yeni HPLC yöntem aynı anda DOX, MMC ve bir büyük kardiyo-toksik DOX metaboliti, doxorubicinol (DOXol), çeşitli biyolojik matrisler ( içinde quantitate yapabiliyor Örneğin, tam kan, meme tümör ve kalp). Bir çift floresan ve ultraviyole emici sondayı 4-methylumbelliferone (4-MU) farklı algılama dalga boyu ile birden fazla ilaç analizi tespiti tek adımlı bir iç standart (I.S.) olarak kullanılmıştır. Bu yöntem DOX ve tam kan nanopartikül ve çözüm yaklaşımları ve orthotopic meme tümör fare modelinde çeşitli dokular tarafından teslim MMC konsantrasyonları belirlemek için başarıyla uygulandı. Analitik yöntemi sunulan nanoparçacık tabanlı teslimat uyuşturucu kombinasyonları önceden klinik analiz için yararlı bir araçtır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Henüz kez şiddetli yan etkiler ve ilaç direnci nedeniyle sınırlı etkinliği ve diğer etkenler1,2,3ile ilişkili kemoterapi birçok kanser için birincil tedavi yöntemi var. Kemoterapi sonucu geliştirmek için ilaç kombinasyonu rejimlerinin konuları üst üste toksisite, uyuşturucu eylem ve çapraz ilaç direnci4,5 farklı mekanizmalar gibi temel kliniğinde uygulanan , 6. klinik çalışmalarda, daha iyi bir tümör yanıt oranı genellikle aynı anda kullanarak yönetilen ardışık ilaç teslim

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

tüm hayvan deneyleri hayvan bakım komitesi, üniversite sağlık ağı Ontario Kanser Enstitüsü tarafından onaylanmış ve hayvan bakım kuralları Kanada Konseyi uyarınca yürütülen.

1. biyolojik örnek hazırlık

  1. tam kan, büyük organları toplamak ve önceden belirlenmiş zaman-Puan Intravenous (IV) yönetim uyuşturucu içeren sonra meme tümör (örneğin, formülasyonları DMPLN, liposomal DOX)
    1. meme tümörü taşıyan fare damardan uyuşturucu içeren hazır formülasyonu ile enjekte.
    2. İnhalable % 2 isoflurane mühürlü bir odasında vererek belirlenen zaman-noktalarda (örneğin, 15dk) fare anestezi.
      3. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İki antikanser ilaç, DOX ve MMC yanı sıra DOX metaboliti, DOXol, aynı anda aynı uygulanan degrade HPLC koşul I.S. floresan ve UV dedektörleri için 4-MU kullanarak altında biyolojik herhangi bir müdahale olmadan tespit edildi. DOX, MMC, DOXol ve 4-MU birbirinden MMC için 5,7 min, 10.4 min DOXol için 4-MU için 10.9 min ve 11.1 min DOX (Şekil 2) için saklama kez ile iyi ayrılmış. Tam kan her ilaç ve çeşitli dokuların konsantrasyon doğrusallık ile korelasyon kats.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir tek ilaç tür algılama bir anda diğer Kromatografik yöntemleri ile karşılaştırıldığında, mevcut HPLC protokolü aynı anda aynı biyolojik matris değiştirmeye gerek kalmadan üç uyuşturucu bileşikler (DOX, MMC ve DOXol) quantitate yapabiliyor mobil faz. Bu hazırlama ve analiz yöntemi başarıyla uygulandı farmakokinetik ve biyo-iki uyuşturucu nanoparçacık tabanlı dağıtım sistemlerinin dağıtımını belirlemek için (Yani, liposomal DOX ve DMPLN)22. Pegile nano tanecikleri yüklü uyuşturu.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının ve çıkar çatışması var.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, minnetle Doğa Bilimleri ve mühendislik araştırma (NSERC) Kanada Konseyi ekipman hibe HPLC, Kanada Enstitüsü Sağlık Araştırma (CIHR) ve Kanada meme kanseri araştırma (CBCR) çalışma hibe için kabul İttifak X.Y Wu ve Toronto Üniversitesi Burs R.X. Zhang ve T. Zhang.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Doksorubisin Polymed Theraeutics111023Antikanser ilacı
Mitomisin CPolymed Theraeutics 060814Antikanser ilacı
Doksorubisinol (DOXol)Toronto Araştırma KimyasallarıD558020
4-Metilumbelliferon sodyum tuzu metaboliti Sigma-AldrichM1508İç standart
MiristikAsit Sigma-Aldrich544-63-8   Poli-lipid hibrit nanopartiküller için malzemeler
Polioksietilen (100) StearatSpektrumuM1402Poli-lipid hibrit nanopartiküller için malzemeler
Polioksietilen (40) StearatSigma-AldrichP3440Poli-lipid hibrit nanopartiküller için malzemeler
Pluronic F68 (PF68)BASF Corp.9003-11-6Poli-lipid hibrid nanopartiküller için malzemeler
Ultrasonication (UP100H)Hielscher, Ultrason TeknolojisiNANanopartikül hazırlama
Su Banyosu (ISOTEMP 3016HS)Fisher ScientificNANanopartikül hazırlama
Lipozomal Doksorubisin ve nbsp; (Caelyx)JanssenPrincess Margaret Hastanesi eczanesinden satın alındıKlinik olarak onaylanmış nanopartikül formülasyonu 
HPLC dereceli MetanolCaledon Kimyasalları6701-7-40HPLC mobil faz bileşimi
HPLC dereceli H2OCaledon Chemicals8801-7-40HPLC mobil faz bileşimi
HPLC dereceli Asetonitril Caledon Chemicals1401-7-40HPLC mobil faz bileşimi
Trifloroasetik AsitSigma-Aldrich302031HPLC mobil faz bileşimi
0.45 μ m Naylon Membran Filtre KağıdıWhatmanWHA7404004HPLC mobil faz hazırlama
1cc Plastik ŞırıngalarBecton, Dickinson and Company2606-309659Tedavi enjeksiyonu
5cc Plastik ŞırıngalarBecton, Dickinson and Company2608-309646Doku koleksiyonları
30G 1/2 İğnelerBecton, Dickinson and Company305106Tedavi enjeksiyonu
25G 5/8 İğnelerBecton, Dickinson and Company305122Doku koleksiyonları
Steril% 0.9 SalinToronto House Brand Üniversitesi1011Doku perfüzyonu
13 ml Yuvarlak tabanlı konik tüp SARSTEDT62.515.006Proliprolen, doku homojenizasyonu
Alfa Minimum Esansiyel Ortam (MEM) Gibco12571063Hücre ortamı
1 x Fosfat Tampon TuzluGibco10010023Doku homojenizasyonu
Triton X-100Sigma-AldrichX100-100 MLDoku homojenizasyonu
Formik asitCaledon Chemicals1/5/3840Ekstraksiyon çözücüsü için pH'ı ayarlayın
Sodyum heparin püskürtülmüş plastik tüplerBecton, Dickinson and Company367878Kan alma
Analitik Tartı Terazisi Sartorius CPA225DNA
pH metreler Fisher Scientific13-637-671accumet BASIC
Vortex MixterFisher Scientific02-215-365İstenilen hızda vorteksleme
örnekleri 1.5 ml  Mikrosantrifüj TüpüFisherbrand2043-05408129Proliprolene
Model 1000 homojenizatörFisher Scientific08-451-672Doku homojenizasyon
Santrifüjü 5702REppendorf5702REkstraksiyon hazırlığı
Isıtmalı Evaporatör SistemiGlas-ColNANumune sulandırma
HPLC Vida Dişi ŞişeleriDIKMA5320HPLC numune
enjeksiyonu PTFE Beyaz Silikonlu HPLC Vidalı Kapaklar SeptaDIKMA5325HPLC numune enjeksiyonu
HPLC Polipropilen Uç   Agilent Technologies5182-0549Maksimum hacim 250 μ l, HPLC numune enjeksiyonu
Xbridge C18 ColumnWaters Corporation186003117İlaç analizi
Gradyan pompası Waters CorporationW600İlaç analizi
Otomatik örnekleyiciWaters CorporationW2707İlaç analizi
Fotodiyot dizi dedektörü Waters CorporationW2998İlaç analizi
Multi λ floresan dedektörü ve nbsp;Waters CorporationW2475İlaç analizi
EMPOWER 2Waters CorporationNAVeri analizi yazılımı
Bilim adamıMicromathNAFarmakokinetik analiz
Dişi Balb/c FarelerJackson Laboratuvarı001026İn vivo
EMT6/WT Meme Kanseri HücreleriDr. Ian Tannock tarafından sağlanmıştır; Ontario Kanser EnstitüsüNAİn vivo
DOX

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Holohan, C., Van Schaeybroeck, S., Longley, D. B., Johnston, P. G. Cancer Drug Resistance: An Evolving Paradigm. Nat. Rev. Cancer. 13 (10), 714-726 (2013).
  2. Szakacs, G., Paterson, J. K., Ludwig, J. A., Booth-Genthe, C., Gottesman, M. M. Targeting Multidrug Resistance in Cancer. Nat Rev Drug Discov. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Doxorubicin Mitomycin CHPLC QuantitationDrug Combination AnalysisNanoparticle Drug DeliveryReverse Phase HPLCBiological Matrix ExtractionInternal Standard MethodSimultaneous Drug DetectionPharmacokinetics StudyTumor Tissue Analysis

Related Articles