Bu iletişim kuralı bir vitro insan preklinik modeli osteoclastogenesis kanser hücre-Osteoklast etkileşimi taklit etmek için meme kanseri hücre hatları ile kültürlü periferik kan monosit üzerinden gelişimi anlatılmaktadır. Model kemik metastaz oluşumunu anlayışımız daha fazla ve tedavi olanakları geliştirmek için kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Osteoclastogenesis periferik kan monosit kültürlü meme kanseri hücre hatları ile birlikte gelen bir insan preklinik modelinin geliştirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Tümör hücreleri ve kemik microenvironment kemik hücreleri arasında çapraz karışma kemik metastaz oluşumunu mekanizmasını anlamak için önemlidir. Meme kanseri hücreleri ve farklılaşma Osteoklastlar doğru geçiren monosit ortak bir kültürün bir vitro tamamen insan preklinik modeli geliştirdik. Periferik kan sağlıklı bağışçılardan toplanan başlayarak osteoclastogenesis modeli en iyi duruma getirilmiş. Periferik kan mononükleer hücreler (PBMCs) yoğunluk gradient Santrifüjü tarafından ayrılmış ilk, yüksek yoğunluklu seribaşı ve iki büyüme faktörleri (GDS) ekleyerek ayırt etmek için indüklenen: reseptör aktivatör nükleer faktör-κB ligand (RANKL) ve makrofaj Koloni uyarıcı faktör (MCSF). Hücreleri kültüründe 14 gün boyunca yaptı ve sonra sabit ve aşağı akım analizi ile analiz. Osteolitik kemik metastazı osteoclastogenesis indüksiyon etkileri kemik kanseri hücre varış biridir. Biz böylece meme kanseri hücreleri kanser hücrelerinin GFs ile ilgili olarak ayırt etme gücünü çalışmaya ortak kültürleri modelimizle meydan. Kanser hücre-Osteoklast etkileşim okuyan bir kolay yolu meme kanseri hücre kültürleri toplanan ve taze orta ile karışık şartına orta kullanımı dayalı dolaylı ortak kültürler gerçekleştirmektir. Bu karışım daha sonra Osteoklast farklılaşma ikna etmek için kullanılır. Biz de en iyi duruma getirilmiş bir yöntem hangi kanser hücreleri ve başkalaşım geçiren monosit orta paylaşmak ve salgılanan etkenler Döviz doğrudan ortak kültür. Araştırmacılar iki hücre tiplerinin karşılıklı etkileşimleri gözlemlemek ve kanser hücreleri ve Osteoklastlar için aşağı akım çözümlemesi gibi özgün dolaylı ortak kültür yöntemi üzerinde önemli bir gelişme bu. Bu yöntem metastatik kemik microenvironment ve tohum hücrenin satırlarına meme kanserinden türetilmiş dışındaki ilaçlar etkisini incelemek bize sağlar. Modeli de diğer hastalıklar gibi Osteoporoz veya diğer kemik koşulları incelemek için kullanılabilir.
Giriş
Kemik metastaz kemik metastazı hastalığı1,2,3boyunca gelişen hastaların % 20-25 ile birincil tümörler prostat, akciğer ve göğüs kanseri gibi farklı türleri için ortak bir sitedir. Özellikle, meme kanserli hastalarda % 70'i ölüm4' de kemik metastaz kanıtı taşımak. Tümör ve stromal hücre etkileşim birincil kanser ve ikincil Lezyonlar kanser ilerlemesi için gerekli. Kemik microenvironment osteolitik kemik metastazı meme kanseri kanser hücreleri, kemik hücreleri ve kemik microenvironment arasında meydana gelen patolojik bir kısır döngü kurulması bağlıdır. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
insan Osteoklastlar farklılaşmış PBMCs yazılı Onam çalışmaya katılmak için veren sağlıklı donör dan. Çalışma Protokolü 1964 Helsinki Bildirgesi içinde ortaya konan etik standartlarına uygun olarak yerel Etik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. Osteoklast farklılaşma
Not: toplamak periferik kan veya buffy kat EDTA içinde sağlıklı insan bağışçılardan. Daha az 20 mL periferik kan kullanmayın. Onlar mononükleer hücreler büyük bir bolluk var çünkü buffy kat tercih edilir. Steril doku kültürü mahallede tüm aşağıdaki adımları gerçekleştirin.
- Seyreltik EDTA tam kan fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) x 1 il....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bir yöntem Osteoklastlar insan periferik kan monosit kolayca ayırt etmek için optimize edildi. Monosit kültür ile kanser hücrelerinin, kanser hücrelerinin osteoclastogenesis kemik metastazı olarak sürdürülmesi yeteneğine sahiptirler (edebiyat18' açıklandığı gibi) teyit kültürlü. Osteoklastlar kanser hücreleri ayrıştırılan ve GFs şekil 1' de gösterilmiştir. Bir Osteoklast benzeri hücre 4 veya daha fazla hücre çekirdeği ile bir hücre ve .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kanser hücreleri ve kemik hücreleri arasında çapraz karışma mekanizmaları eğitim preklinik vitro modelleri yeni tedavi stratejileri oluşturmak için kullanılan kemik metastaz mekanizmaları tanımlamak için gereklidir. Osteoclastogenesis insan periferik kan (şekil 3) üzerinden tamamen insan vitro modeli geliştirdik. Metodoloji en iyileştirme sırasında bir dizi kritik noktaları tespit ve giderilir. İlk tohum mononükleer hücrelere miktarı ilgili. Lenfositler ve monosit, tohum os.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.
Teşekkürler
Yibin SCP2 hücre kültürünü sağlamak için Kang ve Cristiano Verna Editör Yardım için teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| &alfa; MEM | Euroclone | BE12-169F | |
| Glutamin | Yaşam teknolojileri | ECB3000D | |
| Fetal sığır serumu | Yaşam teknolojileri | ECS0180DPR | |
| hMCSF | Peprotech | 300-25 | Depolama endikasyonlarına uyulmalıdır |
| hRANKL | Peprotech | 310-01 | Depolama endikasyonlarına uyulmalıdır |
| Asit Fosfataz, Lökosit (TRAP) Kiti | Sigma Aldrich | 387 A | |
| Lenfosit ayırma ortamı | Biowest | L0560-100 | |
| Kırmızı Kan hücresi parçalama tamponu | SIgma | 11814389001 ROCHE | |
| Tripsin | EuroClone | COD. ECB3052D | |
| Paraformaldehit %4 sulu çözelti, EM dereceli | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 157-4-100 | |
| MDA-MB-231 hücre hattı | ATCC | CRM-HTB-267 | |
| MCF7 | ATCC | HTB-22 | |
| Transwell | Corning | 3470-Clear | Bu ekler 24 oyuklu plakalar içindir; 6,5 mm, 0,4 & mu; M; gözenek boyutu |
Kaynaklar
- Ibrahim, T., Mercatali, L., Amadori, D. Bone and cancer: the osteoncology. Clin Cases Miner Bone Metab. 10 (2), 121-123 (2013).
- Coleman, R. E., Rubens, R. D. The clinical course of bone metastases from breast cancer. Br J Cancer. 55 (1), 61-66 (1987).
- Ibrahim, T., Mercata....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
