Antikor bazlı ilaçlara inflamatuar hastalıkları tedavisinde devrim. Belirli hedefleri üzerinde doğrudan etkileri sahip olmanın yanı sıra, antikorlar makrofajlar anti-inflamatuar olmak için etkinleştirebilirsiniz. Bu protokolü nasıl anti-inflamatuar makrofaj açıklar harekete geçirmek-ebilmek var olmak istimal fare kemik iliği makrofajlar ve Periton makrofajlar kullanarak içinde vivo biçilen in vitro .
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare kemik iliği ve Periton makrofaj harekete geçirmek antikor bazlı ilaçlara etkileri değerlendirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Makrofajlar fagositik doğuştan gelen bağışıklık hücreleri, bağışıklık yanıtı patojenlere başlatmak ve şifa ve doku iadesi için katkıda bulunmaktadır. Makrofajlar inflamatuar yanıt dönüm eşit derecede önemlidir. Makrofajlar intravenöz immünglobulin (IVIG) ile uyarılan yüksek miktarda anti-inflamatuar sitokin, İnterlökin 10 (IL-10) ve yanıt olarak bakteriyel lipopolisakkaritler (pro-inflamatuar sitokinlerin seviyesinin düşük üretebilir göstermiştir LPS). IVIG polivalan antikor, öncelikle immünglobulin Gs (IgGs), 1.000'den fazla kan bağış plazma havuza alınmış olduğunu. Bu antikorlar bağışıklık eksikliği olan hastalarda ek olarak ya da otoimmün veya inflamatuar koşulları olan hastalarda immün yanıt-e doğru bastırmak için kullanılır. İnfliksimab, bir tedavi anti-tümör nekroz faktör alfa (TNFα) antikor, ayrıca IL-10 inflamatuar uyaranlara yanıt üretmek için makrofajlar etkinleştirmek için gösterilmiştir. IVIG ve diğer antikor tabanlı destekte makrofaj harekete geçirmek üzerindeki etkileri belirlemek için test edilecek. Bu kağıt türetme, stimülasyon ve değerlendirme fare kemik iliği makrofajlar tarafından antikorlar vitro aktif ve ile antikor içinde vivoaktif fare peritoneal makrofajlar yöntemleri açıklar. Son olarak, belirli hücre anti-inflamatuar makrofaj aktivitesi yolları sinyal katkısını belirlemek için western Blot kullanımını göstermektedir. Bu protokoller genetiği değiştirilmiş fare ile anti-inflamatuar makrofaj etkinleştirme belirli bir protein(s) etkisini belirlemek için kullanılabilir. Bu teknikler, belirli destekte inflamatuar yanıt içinde vivoazaltan bir IL 10 üreten anti-inflamatuar harekete geçirmek durum için makrofajlar değiştirerek hareket edebilir olup olmadığını değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu etkinliği sırasında hastalık modelleri farelerde makrofaj etkinleştirme destekte, rolü hakkında bilgi vermek ve bir potansiyel yeni etki mekanizması kişilerde içgörü sağlamak. Özellikle makrofajlar bu enfeksiyona karşı konak savunmasında önemli bir rol oynamak Eğer tersine, bu belirli antikor tabanlı destekte kullanımına karşı bulaşıcı hastalığı tedavi etmek için dikkat.
Giriş
Enfeksiyon ya da yaralanma bağışıklık yanıtında birden çok rol oynamak doğuştan gelen bağışıklık hücreleri makrofajlar vardır. Makrofajlar, enfeksiyon veya doku hasarı bir bağışıklık yanıtı başlatmak, inflamatuar yanıt durdurma ve şifa yanıt1teşvik için sorumludur. Üç en iyi okudu makrofaj harekete geçirmek durum örnekleri şunlardır: 1) ile interferon gama (IFNγ) ve bakteriyel lipopolysaccharide (LPS), M (IFNγ + LPS), inflamatuar yanıt; katkıda belirlenmiş tedavi makrofajlar 2) şifa yanıtıyla ilişkili olan makrofajlar ile İnterlökin 4 (Il-4), M(IL-4), uyarılmış; 3) makrofajlar bağışıklık kompleksleri (IC) ile uyarılmış ve LPS, M (IC + LPS), inf....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) British Columbia Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. kemik iliği makrofaj türetme ve ile antikor etkinleştirme
- Ötenazi CO2 boğulma kullanarak gerçekleştirin.
- İndüksiyon odasında yerde fare. Derin ve yavaş hareketsiz ve nefes kadar fare ile 60-90 s, % 5 isoflurane anestezi ötenazi.
- İsoflurane anestezi açmak ve fare nefes durana kadar 6-8 L/dak CO2 yönetmek. Fare CO2 ile en az 5 dk. doğrula için orada olduğunu artık bir kalp atışı veya solunum çıkarma. Ölüm sağlamak için servikal yerindençıkma....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Fare kemik iliği türetilmiş makrofajlar hematopoietik hücre kemik iliği boğulmadan Kara filmin tarih öncesi gelen kültürlü. Kalça ve yırtılmalarıteşhis bir C57BL/6 fare genellikle havuza alınmış kemik iliği örnekleri 107 kemik iliği türetilmiş makrofajlar onları makrofajlar deneyleri için uygun bir kaynak yapma, verim. BMDMs ne zaman ile inflamatuar uyarıcı vitromeydan dayalı antikor uyuşturucu yanıt test etmek için kullanılabilir. Şekil 1.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Makrofaj harekete geçirmek Birleşik her iki doku homeostazı ve hastalık22içinde önemli bir rol oynamaktadır. Makrofajlar bağlı olarak kendi microenvironment3ipuçlarını etkinleştirme Birleşik örtüşen yanı sıra farklı olabilir. İnflamatuar yanıt tüm aşamalarında farklı rollere sahip: savunma patojenlere karşı yara iyileşmesi ve doku restitüsyon ve da inflamatuar yanıt2 dönüm için önemli bir farklı anti-inflamatuar etkinleştirme durumları vardır . Anti-.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.
Teşekkürler
L.K. British Columbia Üniversitesi 4 yıllık arkadaş grubu (4YF) lisansüstü öğrencilik Ödülü alıcı olduğunu. L.M.S. olduğunu Kanadalı bir Gastroenteroloji Derneği alıcı / Crohn ve kolit Kanada / CIHR yeni araştırmacı maaş Ödülü ve biyomedikal bilim adamı Michael Smith Vakfı Sağlık Araştırma için. Bu eser Kanada Enstitüleri Sağlık (# CIHR2016-LS vermek) araştırma ile işbirliği içinde Kanada kan Hizmetleri, bir proje hibe tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Iscove' s modifiye Dulbecco' s medium (IMDM) | Yaşam teknolojileri | 12440053 | |
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | Yaşam teknolojileri | 12483-020 | |
| Rekombinant murin makrofaj koloni uyarıcı faktör (MCSF) | Kök hücre teknolojileri | 78059 | |
| Penisilin-streptomisin | Yaşam teknolojileri | 15140148 | |
| Monotiogliserol (MTG) | Sigma | 88640 | |
| 1X kırmızı kan hücresi lizis tamponu | eBioscience | ||
| Hücre ayrışma tamponu | Yaşam teknolojileri | 13150016 | Enzim İçermeyen, Hanks bazlı, EDTA |
| Lipopolisakkarit (LPS) | Sigma aldrich | L 4516 | E. coli 0127:B8 |
| IVIg (Gammunex) | BC Çocuk Hastanesi, Transfüzyon Tıbbından | ||
| Alınan GrifollarIVIg (Gammagard sıvısı) | Baxter Healthcare Corporation | , BC Çocuk Hastanesi'nden Alındı, Transfüzyon Tıbbı | |
| IVIg (Octagam) | BC Çocuk Hastanesi'nden Alınan Octapharma, Transfüzyon Tıbbı | ||
| Fosfat tamponlu salin (PBS) (steril), pH 7.4 | Fare | 10010023 | |
| IL-10 ELISA | BD biosciences | 555252 | |
| fare IL-12/23p40 ELISA | BD biosciences | 555165 | |
| anti-Erk1/2 antikoru | Hücre sinyal teknolojisi | 9101 | |
| anti-pp38 antikoru | Hücre sinyal teknolojisi | 9211 | |
| anti-GAPDH antikoru | Fitzgerald endüstrileri | 10R-G109A | |
| 26 g iğne | BD biyolojik bilimler | 305110 | |
| 1 mL şırınga | BD biosciences | 309659 | |
| 10 mL şırınga | BD biosciences | 309604 | |
| 15 mL konik tüp | BD biosciences | 352096 | |
| 50 mL konik tüp | BD biosciences | 352070 | |
| mikrosantrifüj tüpü (1.7 mL) | Diamed | SPE155-N | |
| 75 cm2 doku kültürü uygulanmış şişe | BD biosciences | 353136 | |
| Hücre sıyırıcı | BD biosciences | 353085 | |
| Forcepts | VWR | 82027-386 | ince uç, diseksiyon |
| Makas | VWR | 82027-582 | Hassas, 4 1/2" |
| Parlak alan mikroskobu | Motic | AE31 | Ters faz kontrast |
| Ölçeği | Mettler | PE 3000 |
Kaynaklar
- Murray, P. J., Wynn, T. A. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nat Rev Immunol. 11 (11), 723-737 (2011).
- Martinez, F. O., Gordon, S. The M1 and M2 paradigm of macrophage activation: time for reassessment. F1000Prime Rep. 6, 13(201....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
