Yöntem makalesi

Baş ve boyun Skuamöz hücreli karsinom için bir küresel tabanlı 3D hücre kültür modelinde test terapi

DOI:

10.3791/57012

⸱

20 Nisan 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Otorhinolaryngology, Johannes-Gutenberg University Medical Center, 2Department of Otorhinolaryngology, Technical University of Munich Medical Center, 3Department of Otorhinolaryngology, Ludwig-Maximilian-University Medical Center, 4Department of Otorhinolaryngology, University of Goettingen Medical Center

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Terapi değerlendirilmesi amaçlayan deneysel tedavi rejimleri hücre hatları, baş ve boyun Skuamöz hücreli karsinom için geçerli standart test etmemizi sağlayan bir küresel tabanlı, üç boyutlu vitro modeli evrimi tarif duyarlılık ve direnci Primer hücre insan örnekler üzerinden üzerinde içinde belgili tanımlık gelecek.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Güncel tedavi seçenekleri için gelişmiş ve tekrarlayan baş ve boyun Skuamöz Hücre Karsinomu (HNSCC) radyasyon ve kemoterapi-radyasyon yaklaşımlar ile veya ameliyat olmadan alın. Platin tabanlı kemoterapi rejimleri şu anda altın standart etkinliği açısından temsil ve durumlarda, yeni kemoterapi rejimleri, büyük çoğunluğu verilir Yani immünoterapi gelişmekte olan. Ancak, yanıt oranları ve terapi direnç mekanizmaları ya kemoterapi rejimi için tahmin ve yeterince anlaşılır olmaya devam etmek zordur. Kemoterapi ve radyasyon direnç mekanizmaları geniş varyasyonlar Tarih olarak bilinir. Bu çalışmada kişiselleştirilmiş tümör için gelecek bir araç olarak bireysel hastalardan HNSCC hücre kültürünü'nın yanıt çeşitli tedavi rejimleri ve umut verici bir biçimde Primer hücre değerlendirmek için bir standart, yüksek üretilen iş vitro tahlil gelişimi anlatılmaktadır terapi. Tahlil kalite kontrollü standart algoritma Tersiyer bakım merkezimizde HNSCC hastalar için varlık bütünleşmek için tasarlanmıştır; Ancak, bu gelecekteki çalışmaların konusu olacaktır. Teknik fizibilite tümör biyopsi gerçek hastalarda Primer hücre için umut verici görünüyor. Örnek sonra laboratuvar aktarılır. Biyopsi mekanik olarak Enzimatik sindirim ardından ayrılır. Hücreleri sonra üç boyutlu, küresel şeklinde hücre ikinci büyük şirketler tekrarlanabilir, standart ve spontan oluşumu teşvik Ultra düşük yapışma hücre kültür şişeleri kültürlü. Pulcuklarının sonra kemoterapi-radyasyon protokolleri ve gerektiğinde immünoterapi protokolleri maruz hazırız. Son hücre canlılığı ve küresel boyutu terapi duyarlılık göstergeleri vardır ve bu nedenle gelecekte hastaların muhtemel tedavi yanıtı değerlendirmek için dikkate çekilmiş olabilir. Bu model baş ve boyun kanseri için kişiselleştirilmiş terapi doğru değerli, maliyet-etkin bir araç olabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Baş ve boyun Skuamöz Hücre Karsinomu (HNSCC) Mukozal insan Papilloma Virus (HPV) enfeksiyon ilişkili Patogenez, çoğu durumda aşırı nikotin ve alkol neden yanında yükselen insidansı ile dünya çapında altıncı en yaygın kanser olduğunu tüketimi 1,2. Daha küçük tümörler ve önceden invazif aşamalarında genellikle de genellikle servikal lenf nodu diseksiyonu ile kombine cerrahi eksizyon ile tedavi edilebilir olmakla birlikte gelişmiş aşama ve tekrarlayan HNSCC için tedavi ile agresif tümör işgali nedeniyle zorlu kalır metastatik yaymak ve direnç radyasyon ve kemoterapi protokolleri3,4,5,6,7,8. Son yıllarda yapılan çalışmalarda hücresel fenotip yüksek bir değişkenliği ve dolaşan alt karakterizasyonu önermek ve Dissemine tümör hücreleri sadece9,10başladı. Önceki inancı sağlam, tek tip tümör kitle vardı geçmişte son çalışmalar ışığında gözden geçirilmesi yıl11,12,13,14. Tümör karakterizasyonu ve anahtar mutasyonlar tanımlaması için geçerli yaklaşımlar tedavi direnci ile ilişkili ancak maliyet-yoğun yaklaşım kalır gibi görünüyor birkaç genler teşhis edebilir. Ayrıca, genotip bilgisine mutlaka fenotip ve onun tedaviye yanıt güvenilir bir tahmin izin vermez.

Gelişmiş aşama ve tekrarlayan hastalığı için genel ve hastalıksız sağkalım iyileştirilmesinde birkaç gelişmeler oldu. Nikotin - yanı sıra için virüs ilişkili Karsinomu, mevcut tedavi seçenekleri yanı sıra ameliyat agresif radyasyona ve platin tabanlı kemoterapi rejimleri alın. HPV-negatif ve pozitif Karsinomu arasında farklı yanıt oranları için etkileri olmuştur; Ancak, bu değil henüz bir değişiklik için genel olarak tedavi yönergeleri kurşun. Radyasyon ve kemoterapi direnci tüm tümör aşamalarında yaygın bir olgudur ve platin tabanlı kemoterapi de hedefe yönelik tedavi (Anti-EGFR; gelince için var epidermal büyüme faktörü reseptörü) ve son denetim noktası inhibisyon15gelişmekte olan. Etkisiz radyasyon ve kemoterapi disfaji, Mukozit, ağız kuruluğu ve diğerleri arasında böbrek veya kalp fonksiyonu azalma riski açısından önemli hasta morbidite yüksek bir maliyetle geliyor. Terapi yanıt önceden tahmin genel tedavi kavramı karar bireysel her hasta için gereksiz tedavi kavramları, yan etkileri ve maliyeti engelleyen çok önemli hedefi olacak gibi görünüyor.

Bireysel hastanın tedavi duyarlılık geçerli standart kemoterapi-düzenli ve kalite kontrollü Onkolojik tedavi algoritması teknik ayakta noktadan içine entegre olabilir radyasyon karşı test etmek için bir model kurmak istedi. Onlar kötü onların değişkenlik olmadan gerçek insan tümör hücreleri temsil ve protokol kurulması sırasında bildiğimiz gibi heterojen çeşitli hücre hatlarında yapıldı gibi ağır değiştirilmiş ve yaşlı hücre hatları, kullanmadan modeli kullanmak için uzak hedef oldu. Yalnızca ticari olarak kullanılabilir hücre satırlarından bağımsız olmak, biz son zamanlarda başarıyla "PiCa" adı verilen bir ara cep çizgi insan tümör numuneler birincil HNSCC hücrelerden onun yüzey ve sınırlı geçişleri korunmuş hücresel imleçli kaynaklandığı 16. bu pika hücre kültürünü görülmesi gerektiğini yolda modeli geliştirilmesi için bir hazırlık olarak sonra sonra denemeler ile taze insan kanser hücrelerinin tümör biyopsi aşağıdaki için. Bu hücreleri üç boyutlu hücre kültürleri tepki farklı ve daha fazla vivo içindegösterilmiştir-yönetim--dan o monolayers17,18,19',20 büyüyen kanser ilaçların ister ,21, özellikle göçmen korunması nedeniyle ve alt farklılaşma özellikleri belirli hücre alt kümeleri22,23,24. Burada, biz küresel tabanlı, üç boyutlu model ara hücre satırlarından Protokolü tanımlamak ve birincil insan Skuamöz Hücre Karsinomu hücre ve yolları nasıl böyle bir model baş ve boyun cerrah ve Onkoloji ( kanser tedavisinde entegre Şekil 1).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, yani insan tümör numuneler, kullanımı gösterilen tüm çalışmaları altında ve onayı önceden kararlarının üzerinden Üniversitesi Tıp Mainz/University of Münih Tıp Merkezi Etik Komitesi ile korunmaktadır. Hasta Onam bilimsel tedavi sırasında elde edildi aşırı biyolojik malzeme kullanımı kabul ulusal yasal esaslarına göre verdik. Araştırma insan refahı için tüm kurumsal, ulusal ve uluslararası kurallara uygun olarak yapıldı.

1. baş ve Heck Skuamöz Hücre Karsinomu tümör biyopsi alarak

  1. Genel (propofol ve/veya sevoflurane, kas rahatlatıcı Ajan) veya yerel infiltrasyon (%2 ultracaine, adrenalin) gerçekleştirmek / yüzey (xylocaine) anestezi ameliyat odası veya kulak burun boğaz muayenesi sandalyede. Üst sindirim ve solunum yolu oral kavite/yutak/gırtlak/diğer bölgelerinde tümör kitle ile standart aletleri Çalışma görselleştirmek ve gerekirse, mikroskop altında.
  2. Taze tümör biyopsi kanserli lezyon çevre ile künt veya kesme aletleri al. Bu alanda bol nekroz nedeniyle lezyon ortasına kaçının. Alınan doku izotonik Sodyum Klorür solüsyonu ile steril bir kap koymak.
  3. Gerektiğinde, örneğinsonra biyopsi, hemostazın gerçekleştirmek., vasoconstrictive maddelerin kullanımı yanı sıra iki kutuplu veya monopolar koagülasyon aygıtıyla.
  4. Hücre kültürü deneyleri doğrudan için bitişik laboratuvar yolu için kullanılmaya yönelik tümör biyopsi getir. Her zamanki gibi kanseri ekarte etmek için patolog diğer tümör biyopsi gönderin.
  5. Bir laboratuvar teknisyeni örnek doğrudan işlemek hazır olduğundan emin olun.

2. tümör numune işleme

  1. Tümör numune uygun ve steril bir yüzeye yerleştirin ve iyice steril tek kullanımlık neşterle mümkün olduğu kadar küçük parçalar halinde kesin.
    Dikkat: bulaşıcı ve kan yoluyla bulaşan hastalıklar durumunu iyi belgelenmiş ve teknisyen ilgi gibi kurumların standart protokolleri önlemek için iğne sopa ya da potansiyel olarak biohazard hasta malzeme ile kesme yaralanma olduğundan emin olun ve protokolleri olası yaralanma sonra izleyin.
  2. Birincil doku yeterli mekanik ayrılıktan sonra doku Collagenase içeren bir flakon koymak ı / II ve 37 ° C'de 1 h için kuluçkaya 70 µm Şahin hücre süzgeç aracılığıyla elek ve süspansiyon Hanks dengeli tuz solüsyonu (HBSS) ile yıkayın.
  3. Başarılı ayırma ve sonraki yıkama sonra alt-confluency 37 ° c sıcaklık ve % 5 CO2 büyümeye bir T75 hücre kültür şişeler (75 cm2) içine 1-2 × 106 hücreleri içeren süspansiyon yerleştirin Bu adım 10 gün sürebilir.
    1. Özel keratinosit kültür ortamı aşağıdaki görevlerden oluşan kullanımı: Dulbecco 125 mL 250 mL tamamlanmaktadır keratinosit orta (keratinosit SF orta, 500 mL sığır hipofiz 15 mg oluşan çıkarılan orta Kartallar orta (DMEM), modifiye (BPE), 2.5 mL penisilin/streptomisin, 150 ng rekombinant insan epitelyal büyüme faktörü (EGF), 300 mm CaCl2516 µL, hisse senedi karışımı önceden hazırlıklı olmak için F12 besin karışımı, BPE (0.75 mL), 75 ng rekombinant insan EGF 10 mg 125 mL ayıklamak) (2 µL) , 200 mm L-Alanyl-L-Glutamin-dipeptid (tablo malzemelerin) 3.75 mL.

3. tohum hücreleri Ultra düşük yapışma hücre kültür kalıplara

  1. Tümör hücre büyümesini mikroskop altında onaylayın. Kültür hücreleri saymak (birincil veya hücre kültür) ve 5000 birincil tümör hücreleri veya ara hücre kültürünü hücrelerinin 1.000-2.000 tohum / 200-300 µL medya (Adım 3.2.) içbükey, ultra düşük yapışma plakalı içine diğer hücre kültürünü yuvarlak dipleri (96-de).
  2. % %1 5 CO2 37 ° C'de ve eşit parçaya DMEM ve hava yolu epitel hücre orta (BEGM), % 10 fetal sığır serum, % 1 penisilin/streptomisin, % 1 sodyum pyruvate, %1 non-gerekli amino asitler, hücre kültür L-glutamin (Adım 2.3.). Hücre hatları kullanılıyorsa, medya DMEM temelinde yeterli olur.
    1. Medya değişikliklerini her geçen gün gerçekleştirmek. Pipet ile küresel medya değişiklikleri sırasında Aspire edin değil dikkat. 3.3 descibed (yaklaşık 7-10 gün) ulaştı olarak pulcuklarının büyüme düzeyine kadar kültür.
  3. Spontan küresel oluşumu mikroskop altında üç boyutlu, küresel şeklinde hücre ikinci büyük şirketler için bakarak onaylayın. Düzensiz ve/veya daha fazla araştırma yapılması üzerinden birden çok küresel oluşumu ile kuyuları hariç.
    Not: Pulcuklarının de, işleme daha fazla ve medya değişiklikler aşağıda açıklandığı gibi kolaylaştıran çıplak gözle görünür olması gerekir.

4. açığa pulcuklarının Multimodal standart veya deneysel tümör tedavisi için

  1. İstenilen tedavi rejimi seçin. Tedavi edilmemiş pulcuklarının veya yalnızca kısmi tedavi rejimleri, e.galma pulcuklarının tedavilere karşılaştırmalar izin yeterince büyük kontrol grubu tasarım. radyasyon yalnız. Denetim grupları boyutu üzerinde deney grubu tasarım bağlıdır ve evrensel olarak tanımlanamaz.
  2. Döviz medya ortamına katkı maddeleri ile chemotherapeutics ve/veya istenen konsantrasyonlarda monoklonal antikorlar ile anlam medya. Sisplatin 2.5/5/10 µM veya 5-fluoruracil (5FU) 30 µM, konsantrasyonları ekleyin.
    Not: daha fazla deneylerde kuruyoruz yüksek işlem hacmi deneyler veya grupları boyutları/çok sayıda büyük bir grup için bir otomatik bir pipetting robot kullanabilirsiniz.
  3. Alternatif olarak, hücre kültür plakaları pulcuklarının 2 Gy uygun radyasyon tesisi kullanarak, ile yayılır.
    Dikkat: kurumun protokolleri zararlı radyasyona maruz kalma çalışanların önlenmesi ile ilgili saygı. Sadece radyasyon koruma esaslarına göre belirlenmiş ve eğitimli teknisyenler çalışmak. İsterseniz, küçük 4.2 açıklandığı gibi chemotherapeutics öneki. daha sonra.
  4. Yukarıda açıklanan kültür koşullarında (37 ° C, adım 3.2) 24 h için hücreleri kuluçkaya.
  5. Kuluçka sonra hücre kültürü en az 6 gün için ortam değişiklikleri ile her geçen gün devam.

5. küresel boyutu ve tahlil okuma için hücresel proliferasyonu ölçüde değerlendirilmesi

  1. Küresel büyüklüğü açısından alan dijital fotoğraf belgeleri 6 gün sonra (10 gün, gün 16) grafik yazılımı (parametre 1) ile ölçmek.
  2. Vasıl 520 x g plaka 2.5 dk aralıklarla sonra süpernatant kaldırın. 1 x PBS ve plaka tekrar açıklandığı gibi süpernatant (PBS) kaldırarak takip santrifüj yeterli miktarda hücrelerle yıkayın.
  3. Enzimatik hücre dekolmanı çözeltinin 100 µL çözülmeye pulcuklarının izin vermek için her şişe ekleyin. 8 dk. 37 ° C'de plaka kuluçkaya
  4. Mikroskop altında küresel başarılı eriterek için kontrol edin. DMEM 100 µL ekleyin. Plaka 520 x g 2.5 dk. Kaldır de süpernatant santrifüj kapasitesi ve DMEM 100 µL hücrelerde askıya alma.
  5. Piyasada bulunan Renkölçer yayılması tahlil örnek WST-8 tahlil üreticinin yönergeleri25göre her şişe üzerinde gerçekleştirin. İçinde enzim bağlı immunosorbent assay (ELISA) okuyucu (parametre 2) tahlil okumak.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz tekrarlanarak pulcuklarının tek hücre süspansiyonlar, gelen ilk daha sonra birincil insan kanser hücrelerinden Hagemann ve ark içinde açıklandığı gibi taze tümör biyopsi türetilen özel pika hücre hat dahil olmak üzere farklı hücre satırları oluşturmak başardık . 26. küresel oluşturulmasında; iki kurulan yöntemleri değerlendirildi sözde asılı olan iki damla (HD) yöntemi ve ikinci daha etkili ve güvenli bir varlık Ultra düşük adezyon (ULA) yöntemi. Yönte...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz tekrarlanabilir pulcuklarının hücre süspansiyonlar, her iki hücre hatları için ve ön deneylerde, birincil insan tümör hücreleri oluşturmak için bir protokol kurmayı başardık. İlk iki önceden açıklanan yöntemleri değerlendirildi ve ULA-yöntem, ultra düşük yapışma yüzeyler ile Kültür plakalar, üniforma üç boyutlu pulcuklarının nesil için daha güvenli ve daha güvenilir biri olarak kullanıldığı bir yöntem tanımlanır. Tahlil okuma (boyutu/alan ve hücre canlılığı) için iki ayrı yöntem birleştirerek, multimodal bu tahlil gr...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu proje Münih Üniversitesi bir grant tarafından finanse edildi (FöFoLe Proje-No: 789-781).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Dulbeccos modifiye Eagles medium (DMEM)Biochrom, Berlin, AlmanyaF 0425
Fetal sığır serumuGibco Life Technologies, Paisley, İngiltere10500-064
penisilin / streptomisinBiochrom, Berlin, AlmanyaA2212
sodyum piruvatBiochrom, Berlin, AlmanyaL0473
esansiyel olmayan amino asitlerBiochrom, Berlin, AlmanyaK0293
L-GlutaminBiochrom, Berlin, AlmanyaK0293
LiberaseRoche Yaşam Bilimleri, Basel, İsviçre5401127001
GravityPLUS 3D Kültür ve Test PlatformuInSphero, Schlieren, İsviçrePB-CS 06-001
GravityTRAP plakasıInSphero, Schlieren, İsviçrePB-CS-01-001
Ultra düşük bağlantılı (ULA) kültür plakalarıCorning, Corning, NY, ABD4520
hava yolu epitel hücresi büyüme ortamıPromocell, Heidelberg, AlmanyaC-21060
amfoterisin BBiochrom, Berlin, AlmanyaA 2612
hava yolu epitel hücresi büyüme ortamı takviyesi karışımıPromocell, Heidelberg, AlmanyaC39165
WST-8 testiPromocell, Heidelberg, AlmanyaPC PK-CA705-CK04
Keratinosit SFMedium + L-Glutamin 500mLInvitrogen# 17005-034
Sığır Hipofiz Özü (BPE), 25mgInvitrogen# 37000015
Rekombinant insan Epitel Büyüme Faktörü 2.5 & mikro; gİnvitrojen# 37000015
DMEM Yüksek Glikozİnvitrojen# 21068-028
Penisilin Streptomisin 10000U / mL Penisilin / 10000 & mikro; g / mL Streptomisinİnvitrojen# 15140-122
F12 Besin KarışımıInvitrogen# 21765-029
Glutamax (NaCl'de 200 mM L-alanil-L-glutamin-Dipeptid)İnvitrojen# 35050087
HBSS (Ca, Mg)Yaşam Teknolojileri# 14025-092(fenol kırmızısı yok)
1x TrypLE Expres Enzimİnvitrojen# 12604-013(fenol kırmızısı yok)
Akaktaz (enzimatik hücre ayırma çözeltisi)Yenilikçi hücre teknolojileriCat# AT104
70 & mikro; m Falcon hücre süzgeciBD Biosciences, ABD# 352350

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hunter, K. D., Parkinson, E. K., Harrison, P. R. Profiling early head and neck cancer. Nat Rev Cancer. 5 (2), 127-135 (2005).
  2. Jerjes, W., et al. The effect of tobacco and alcohol and their reduction/cessation on mortality in oral cancer patients: short communication. Head Neck Oncol. 4, 6(2012).
  3. Chen, H. H. W., Kuo, M. T. Improving radiotherapy in cancer treatment: Promises and challenges. Oncotarget. 8 (37), 62742-62758 (2017).
  4. Boeckx, C., et al. Anti-epidermal growth factor receptor therapy in head and neck squamous cell carcinoma: focus on potential molecular mechanisms of drug resistance. Oncologist. 18 (7), 850-864 (2013).
  5. Brand, T. M., Iida, M., Wheeler, D. L. Molecular mechanisms of resistance to the EGFR monoclonal antibody cetuximab. Cancer Biol Ther. 11 (9), 777-792 (2011).
  6. Seidl, D., Schild, S. E., Wollenberg, B., Hakim, S. G., Rades, D. Prognostic Factors in Patients Irradiated for Recurrent Head-and-Neck Cancer. Anticancer Res. 36 (12), 6547-6550 (2016).
  7. Shirai, K., et al. Clinical Outcomes of Definitive and Postoperative Radiotherapy for Stage I-IVB Hypopharyngeal Cancer. Anticancer Res. 36 (12), 6571-6578 (2016).
  8. Theile, D., et al. Evaluation of drug transporters' significance for multidrug resistance in head and neck squamous cell carcinoma. Head Neck. 33 (7), 959-968 (2011).
  9. Slade, M. J., et al. Comparison of bone marrow, disseminated tumour cells and blood-circulating tumour cells in breast cancer patients after primary treatment. Brit J Cancer. 100 (1), 160-166 (2009).
  10. Mockelmann, N., Laban, S., Pantel, K., Knecht, R. Circulating tumor cells in head and neck cancer: clinical impact in diagnosis and follow-up. Eur Arch Otorhinolaryngol. 271 (1), 15-21 (2014).
  11. Gerlinger, M., et al. Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing. N Engl J Med. 366 (10), 883-892 (2012).
  12. Ledgerwood, L. G., et al. The degree of intratumor mutational heterogeneity varies by primary tumor sub-site. Oncotarget. 7 (19), 27185-27198 (2016).
  13. Loyo, M., et al. Lessons learned from next-generation sequencing in head and neck cancer. Head Neck. 35 (3), 454-463 (2013).
  14. Morris, L. G., et al. The Molecular Landscape of Recurrent and Metastatic Head and Neck Cancers: Insights From a Precision Oncology Sequencing Platform. JAMA Oncol. , (2016).
  15. Bauml, J. M., Cohen, R. B., Aggarwal, C. Immunotherapy for head and neck cancer: latest developments and clinical potential. Ther Adv Med Oncol. 8 (3), 168-175 (2016).
  16. Mack, B., et al. Rapid and non-enzymatic in vitro retrieval of tumour cells from surgical specimens. PLoS One. 8 (1), e55540(2013).
  17. Ham, S. L., Joshi, R., Thakuri, P. S., Tavana, H. Liquid-based three-dimensional tumor models for cancer research and drug discovery. Exp Biol Med (Maywood). 241 (9), 939-954 (2016).
  18. Kelm, J. M., Timmins, N. E., Brown, C. J., Fussenegger, M., Nielsen, L. K. Method for generation of homogeneous multicellular tumor spheroids applicable to a wide variety of cell types. Biotechnol Bioeng. 83 (2), 173-180 (2003).
  19. Kunz-Schughart, L. A., Freyer, J. P., Hofstaedter, F., Ebner, R. The use of 3-D cultures for high-throughput screening: the multicellular spheroid model. J Biomol Screen. 9 (4), 273-285 (2004).
  20. Lin, R. Z., Chang, H. Y. Recent advances in three-dimensional multicellular spheroid culture for biomedical research. Biotechnol J. 3 (9-10), 1172-1184 (2008).
  21. Weiswald, L. B., Bellet, D., Dangles-Marie, V. Spherical cancer models in tumor biology. Neoplasia. 17 (1), 1-15 (2015).
  22. Cancer Genome Atlas, N. Comprehensive genomic characterization of head and neck squamous cell carcinomas. Nature. 517 (7536), 576-582 (2015).
  23. Duarte, S., et al. Isolation of head and neck squamous carcinoma cancer stem-like cells in a syngeneic mouse model and analysis of hypoxia effect. Oncol Rep. 28 (3), 1057-1062 (2012).
  24. Reid, P. A., Wilson, P., Li, Y., Marcu, L. G., Bezak, E. Current understanding of cancer stem cells: Review of their radiobiology and role in head and neck cancers. Head Neck. 39 (9), 1920-1932 (2017).
  25. Cossu, F., et al. Structural Insight into Inhibitor of Apoptosis Proteins Recognition by a Potent Divalent Smac-Mimetic. PLoS ONE. 7 (11), e49527(2012).
  26. Hagemann, J., et al. Spheroid-based 3D Cell Cultures Enable Personalized Therapy Testing and Drug Discovery in Head and Neck Cancer. Anticancer Res. 37 (5), 2201-2210 (2017).
  27. Worp, H. B., et al. Can animal models of disease reliably inform human studies? PLoS Med. 7 (3), e1000245(2010).
  28. Wilding, J. L., Bodmer, W. F. Cancer cell lines for drug discovery and development. Cancer Res. 74 (9), 2377-2384 (2014).
  29. Chitcholtan, K., Asselin, E., Parent, S., Sykes, P. H., Evans, J. J. Differences in growth properties of endometrial cancer in three dimensional (3D) culture and 2D cell monolayer. Exp Cell Res. 319 (1), 75-87 (2013).
  30. Longati, P., et al. 3D pancreatic carcinoma spheroids induce a matrix-rich, chemoresistant phenotype offering a better model for drug testing. BMC Cancer. 13, 95(2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Ba Boyun Yass H creli KarsinomuUltra d k Adhezyonlu PlakalarKemoradyasyon Protokollerimm noterapi ProtokolleriPrimer T m r H creleriKollajenaz SindirimiSferoit Boyut l mH cre Canl l AnaliziKi iselle tirilmi T m r Tedavisi

İlgili makaleler