Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

7.9K görüntüleme

DOI:

10.3791/57558

25 Mayıs 2018

Bu makalede

Özet

Burada, biyolojik ilgili sitelerdeki kanser için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için bir protokol ultrason destekli enjeksiyon Nöroblastom (NB) ve Ewing sarkomu (ES) hücre yararlanmak için (hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri kurulu) mevcut araştırma.

Özet

Preklinik antikanser terapiler test kanser doğuştan gelen eğilimleri taklit ilgili xenograft modellerde dayanır. Yordam kolaylığı ve yeteneği monitör tümör ilerleme ve yanıt invaziv görüntüleme olmadan standart subkutan kanat modelleri avantajları şunlardır. Modelleri gibi çoğu kez translasyonel klinik deneylere tutarsız ve yerel bir microenvironment eksikliği olduğu biyolojik ilgili özellikleri metastaz, üretmek için düşük meyil ile sınırlı. Buna karşılık, orthotopic xenograft modelleri yerli tümör sitelerdeki tümör microenvironment taklit ve uzak metastatik yaymak gibi önemli hastalık özellikleri çoğaltmak için gösterilmiştir. Bu modeller genellikle sıkıcı cerrahi anestezik zaman ve kurtarma takmaktan ile gerektirir. Bu sorunu çözmek için kanser araştırmacılar son zamanlarda kanser xenograft modeller için doku Yönetmen: fare modelleri hızlı ve güvenilir kurulması için sağlar preklinik deneyler kurmak için ultrason destekli enjeksiyon teknikleri kullanılan. Ultrason görselleştirme de boyuna değerlendirme tümör engraftment ve büyüme için invaziv bir yöntem sağlar. Burada, böbreküstü bezi NB ve böbrek alt kapsülü kullanmak için ES için kanser hücrelerinin ultrason destekli enjeksiyon yöntemi açıklanmaktadır. Bu minimal invaziv yaklaşım sıkıcı açık cerrahi implantasyon kanser hücrelerinin büyüme ve metastaz doku özel konumlarda üstesinden gelir ve marazi kurtarma dönemleri azaliyor. Biz kurulan hücre satırları ve hasta türetilmiş hücre satırları orthotopic enjeksiyon için kullanımını açıklar. Tümör ayrılma ve luciferase hücrelerinin etiketleme için önceden hazırlanmış ticari kitleri mevcuttur. Görüntü Kılavuzu kullanarak hücre süspansiyon enjeksiyon preklinik modellerinin oluşturulması için minimal invaziv ve tekrarlanabilir bir platform sağlar. Bu yöntem, mesane, karaciğer ve pankreas delinmemiş potansiyeline çok sayıda kanser modelleri için örnekli gibi diğer kanserler için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için kullanılmaktadır.

Giriş

Hayvan xenograft modelleri roman antikanser terapiler preklinik çalışmaları için gerekli araçları vardır. Subkutan kanat implantasyon hücrelerinin tümör büyümesini izlemek için bir verimli ve kolay erişilebilir sitesi sağlayan standart fare xenografts güveniyor. Subkutan modelleri1metastaz potansiyellerini sınırlayabilir tümör özgü biyolojik özellikleri onların eksikliği dezavantajdır. Gibi sınırlamalar tarafından hangi tümör hücreleri metastatik potansiyel2ile ilgili bir microenvironment sağlayan yerel doku sitelerdeki engrafted orthotopic xenografts kullanımı üstesinden vardır. Orthotopic xenograft modelleri orijinal b....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm iş The University of Michigan Kurumsal değerlendirme Komitesi (HUM 00052430) uygun olarak yapıldığını ve kullanımı ve bakımı hayvanlar (UCUCA) üniversite Komitesi tarafından onaylanmış yordamlar için uygundur. Birim için laboratuvar, hayvan Tıp (ULAM) hayvan bakımı konusunda çalışmalar yaptı.

Tüm çalışma onayı ile University of Michigan kurumsal İnceleme Kurulu (HUM 00052430) yapıldı ve bütün insan Araştırma Etik Komitesi düzenlemeler için uygundur. İnsan hücreleri potansiyel biyolojik bir malzeme olması, bu yüzden tüm özel önlemler ve kurum tarafından gerekli uygun Biyogüvenlik uygulamaları takip için kabul edilir. NSG fareler ağır imm....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sunulan yordamları kullanarak, ultrason destekli implantasyon NB hücrelerinin böbrek üstü bezi içine ısıtılmış bir cerrahi tablo ile donatılmış bir özel yordamın Oda yapıldı. Kol ve ayak pedleri fare kalp etkinlik (Şekil 1A) izlemek için yerleştirildi. Hayvan imzalat burun konisi inhalasyon kullanarak isoflurane altında kaldı. Bir yüksek çözünürlüklü ultrason sonda kullanarak, sol böbrek böbrek (Şekil 1B) sadece kafatası böbreküs.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Ultrason destekli implantasyon NB ve ES hücre kanser biyolojide preklinik çalışmaları için güvenilir fare xenografts kurmak için verimli ve güvenli bir yöntemdir. Ultrason destekli başarısı için kritik doku hedefli implantasyon varlığı ve uzmanlık anatomik olarak faiz organı yerelleştirme ve tümör hücrelerinin stereotaksik enjeksiyon ile eğitimli personel durumu olduğunu.

Tümör dokusunun ayrılma açıklanan hasta kaynaklı xenograft modeli geliştirmek çok önemli bir adım olduğu ortaya çıktı. Yere.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir açıklamalar var.

Teşekkürler

Bu eser Robert Wood Johnson Vakfı/Amos tıbbi öğretim geliştirme programı, Taubman Araştırma Enstitüsü ve bölüm, çocuk cerrahisi, The University of Michigan destek aldı. Yazarlar Kimber'la Converso-Baran ve Dr. Marcus Jarboe yardımı ile ultrason enjeksiyon yordamlar ve görüntüleme platformu için teşekkür etmek istiyorum. Paul Trombley şekil grafik ile onun yardım için teşekkür. Ayrıca merkezi kullanım kısmen olarak kapsamlı Kanser Merkezi NIH tarafından desteklenen, tümörü Imaging Core, moleküler görüntüleme ve için için Radyoloji Bölümü, University of Michigan teşekkür P30 CA046592 verin. Üniversitenin NIH (OD016502) ve Frankel dolaşım merkezi hibe fon tarafından kısm....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Fareler
NOD-SCIDCharles Nehri394
NSGJackson Laboratuvarı5557
Hücre Hattı  < / güçlü >
< güçlü > NB < / güçlü >
IMR-32ATCCCCL-127Kurulmuş insan nöroblastom hücre hattı
SH-SY5YATCCCRL-2266Kurulmuş insan nöroblastom hücre hattı
SK-N-Be2ATCCCRL-2271Kurulmuş insan nöroblastom hücre hattı
< güçlü>ES
TC32 İnsan Ewing Sarkom hücre hattı
A673kuruldu COGcell.ORGİnsan Ewing Sarkom hücre hattı
CHLA-25COGcell.ORGİnsan Ewing Sarkom hücre hattı
kuruldu A4573COGcell.ORGİnsan Ewing Sarkom hücre hattı
Cell Line media
RPMIYaşam Teknolojileri11875-093
MatrigelBD BioSciences354234
Dissociation
Diseksiyon AraçlarıKentScientificINSMOUSEKIT
İnsan Tümörü Dissosiyasyon Kiti MACS Miltenyi Biotec130-095-929
gentleMACS ayrıştırıcıMACS Miltenyi Biotec130-093-235
gentleMACS C tüpleriMACS Miltenyi Biotec130-096-334
Hücre SüzgeciCorning431751
lusiferaz Etiketleme
Lenti-GFP1 virüsüÜniversite Michigan, Vektör ÇekirdekLuciferaz Virüsü
Sabit Glo-Luciferase Test KitiPromegaE2510
Biyolüminesans Görüntüleme< / güçlü>
Ivis Spektrum Görüntüleme SistemiPerkinElmer124262
D-LuciferinPromegaE160X
anestezik< / güçlü>
Solunan İzofluran Piramal Critical Care Inc66794-0017-25
< güçlü > Ultrason Kılavuzlu Enjeksiyon< / güçlü >
Vevo 2100 Yüksek Çözünürlüklü GörüntülemeVevo2100
Hamilton Şırıngalar (27 gauge iğne)Hamilton80000
22 Gauge AnjiyokateterBD Biosciences381423
Optik merhemBaşlıca İlaç301909
NairKilisesi & Dwight CoEpilasyon ajanı
Aquasonic 100 Ultrason İletim jeliParkerUltrason
jeli histoloji< / güçlü >
CD99DAKOM3601Birincil Antikor
Tirozin HidroksilazSigma-AldrichT2928Birincil Antikor
İkincil HRP-Polimer antikoruBiocareBRR4056KG
Çeşitli
10 mL PipetlerFisher Scientific13-676-10J
5 mL PipetlerFisher Scientific13-676-10H
1,5 mL Mikrosantrifüj tüpleriFisher Scientific05-408-129
P1000 pipetEppendorf
3120000062 P200 pipetEppendorf3120000054
P1000 pipet uçlarıFisher Scientific21-375E
P200 pipet uçlarıFisher Scientific21-375D
Taşınabilir pipet yardımcısıDrummond4-000-101
dijital hayvan Tartısı KentScientificSCL-1015
KaliperlerFisher Scientific06-664-16
6 kuyulu alçak bağlantı plakalarıCorning07-200-601
10 cm Doku Kültürü İşlem Görmüş YemeklerFisher ScientificFB012924
PolybreneSigma-AldrichTR-1003-G
COGcell.ORG kuruldu kuruldu

Kaynaklar

  1. Sanmamed, M. F., Chester, C., Melero, I., Kohrt, H. Defining the optimal murine models to investigate immune checkpoint blockers and their combination with other immunotherapies. Ann Oncol. 27 (7), 1190-1198 (2016).
  2. Fidler, I. J., Hart, I. R.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Ultrasound Rehberli inde EnjeksiyonOrtotopik Ksenogreft ModelHasta Kaynakl H crelerAdrenal Bez mplantasyonuT m r Disosyasyon KitiBiyol minesans G r nt lemeMinimal nvaziv Prosed rNSG Fare Modeli