Bu protokol, farelerde aterosklerotik yükü analiz etmek için adım adım bir prosedür sağlar. Araştırmacılar bu protokolü farklı hayvanlardaki aterosklerotik lezyonların bolluğunu, yerini ve boyutunu karşılaştırmak için kullanabilirler.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Anevrizma Hiperlipidemi Fare Modelinde Yağ Kırmızı O-Boyalı Bütün Aort Lezyonlarının Görüntülenmesi ve Analizi
Bu makalede
Özet
Özet
Apolipoprotein E (Apoe) veya düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü (Ldlr) eksikliği olan hiperlipidemik fareler, ateroskleroz araştırması için en sık kullanılan iki modeldir. Çeşitli genetik faktörlerin ve farklı hücre tiplerinin aterosklerotik lezyon oluşumu üzerindeki etkisini incelemek ve yeni tedavilerin gelişimini test etmek için kullanılırlar. Tüm aortun izolasyonu, eksizyonu ve Yağ Kırmızı O boyalı aterosklerotik lezyonların miktarının belirlenmesi aterosklerotik yükü değerlendirmek için kullanılan temel morfometrik yöntemlerdir . Bu protokolün amacı, Oil Red O ile fare aortlarındaki aterosklerotik lezyonları diseke etmek, perfüzyon-fix, izole etmek, boyamak, görüntülemek ve analiz etmek için optimize edilmiş, adım adım cerrahi bir yöntemi tanımlamaktır. Aterosklerotik lezyonlar tüm aort ağacının herhangi bir yerinde oluşabildiğinden, tüm bu aort Yağı Kırmızı O boyama yöntemi, tüm aorttaki lipit yüklü plakları ve tüm dalları tek bir farede değerlendirme avantajına sahiptir. Yağ Kırmızı O boyamasına ek olarak, taze izole edilmiş bütün aortlar çeşitli in vitro ve in vivo deneyler ve hücre izolasyonları için kullanılabilir.
Giriş
ABD'de önde gelen bir mortalite nedeni olan koroner arter hastalığına genellikle arteriyel duvarların içinde plak birikmesine yol açan bir süreç olan ateroskleroz neden olur1. Hiperlipidemiye eğilimli Apee ve Ldlr eksikliği olan fareler, ateroskleroz ve komplikasyonlarının araştırılmasında ve tedavilerin geliştirilmesinde merkezidir2,3,4,5. Aterosklerotik lezyonların en face aorttan nicelleştirilmesi, farklı hücre tiplerinde genetik manipülasyonun etkisini değerlendirmek için önemli bir son nokta ana....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
mT/mG (stok no. 007676) ve Apoe-/- (stok no. 002052) fareleri Jackson Laboratuvarı'ndan satın alındı. Myh11-CreERT2 fareleri Stefan Offermanns'ın bir hediyesiydi (Jackson Laboratuvarı'ndan stok numarası 019079 olarak temin edilebilir). Tgfbr2fl/fl fareleri Harold L. Moses'tan (Vanderbilt Üniversitesi) elde edildi. Tüm hayvan prosedürleri, Yale Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanan protokoller kullanılarak gerçekleştirildi.
1. Fareler
- MYH11-CreERT2; mT / mGf / f üretin; Apoe-....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu protokolde, TGFβR2iSMC-Apoe farelerdeki aterosklerotik lezyonlar HCHF diyetinde 4 ay sonra analiz edildi7. Yaygın ateroskleroza ek olarak, bu fareler daha önce bildirildiği gibi hem torasik hem de abdominal aort anevrizmaları geliştirdi. Apoe-/- farelerle karşılaştırıldığında, TGFβR2iSMC-Apoe farelerinin aort duvarları ciddi ateroskleroz göstererek lezyonların diseksiyonunu zorlaştırdı (Şekil 2C, D, E). Ek olarak, a.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Apolipoprotein E (Apoe) ve düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü (Ldlr) eksikliği olan fareler, aterosklerozun gelişimini ve tedavisini incelemek için yararlıdır. Araştırmacılar, genetik ve terapötik manipülasyonların, tüm aortun Yağ Kırmızı O boyamasını kullanarak aterosklerozla ilişkili hastalıkların başlaması, ilerlemesi ve regresyonu üzerindeki etkisini değerlendirebilirler9. Aort Yağı Kırmızı O boyama ve lezyon miktarının belirlenmesi ateroskleroz araştırmalarında altın sta.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar rakip finansal çıkarlar olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Bu çalışma, kısmen, NIH hibesi P30AR070253 (P.-Y.C.) ve HL135582 (MS) kapsamında sağlanan Ortak Biyoloji Konsorsiyumu Microgrant tarafından desteklenmiştir. Bu çalışmada kullanılan fareleri korudukları için R. Webber ve L. Coon'a minnettarız.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1.5 mL Eppendorf tüpü | DENVILLE | C2170 | |
| 10 mL şırınga | BD | 302995 | |
| %16 Formaldehit | Polysciences | 18814-10 | |
| %70 etanol | VWR | RC2546.70-5 | Diseksiyon aletlerini temizlemek için |
| Siyah diseksiyon mumu | CR Scientific | C3541 | |
| Mısır yağı | Sigma | Tamoksifen | |
| Çözücü & Doku kiti | QIAGEN | 69506 | Fare kulağından DNA'yı izole etmek için |
| Dulbecco' s Fosfat tamponlu salin (1X DPBS), pH 7.4 | Gibco | 14190-144 | |
| İnce makas | Güzel Bilim Araçları | 14059-11 | Fare derisini kesmek ve göğüs kafesini açmak için |
| Fisherbrand Ekonomi Düz Cam Mikroskop Slaytları | Fisher Scientific | 12-550-A3 | |
| Yüksek kolesterol yüksek yağlı diyet | Araştırma Diyetleri | D12108 | Ateroskleroz Görüntülemeyi indüklemek için |
| yazılım | Ulusal Sağlık Enstitüleri | Resim J | Aort lezyonu miktar tayini |
| İzopropanol | VWR | JT9079-5 | |
| Kimwipes | Fisher Scientific | 06-666A | Cam mikroskop slaytlarını temizlemek için |
| McPherson-Vannas Mikro Diseksiyon Yaylı Makas | ROBOZ | RS-5602 | Kalp ile aortu ayırmak ve aort ve aort dallarını |
| kesip açmak içinMikroskop kontrol yazılımı | Olympus | DP Kontrol Cihazı | Aort görüntüleme için |
| Minutien pimleri | Güzel Bilim Araçları | 26002-10 | |
| İğne-25G | BD | 305124 | |
| Dokumasız Sünger | McKesson | 94442000 | |
| Yağ Kırmızısı O | Sigma | O-0625 | Ateroskleroz lezyonlarını boyamak için |
| Pall Acrodisc Steril Şırınga Süper Membranlı Filtreler | VWR | 28143-312 | O çözeltisini filtrelemek için |
| Bahar Makas | Güzel Bilim Araçları | 15021-15 | Aortu incelemek ve temizlemek için |
| İstatistiksel yazılım | GraphPad | Prism 8 | Statik analiz |
| Stereomikroskop | Nikon | SMZ1000 | Aort diseksiyonu için |
| Stereomikroskop | Olympus | SZX16 | Aort görüntüleme için |
| Tamoksifen | Sigma | T5648 | Cre-loxP rekombinasyonunu indüklemek için |
| Tissue-Tek OCT Bileşiği, Sakura Finetek | VWR | 25608-930 | |
| Cımbız Stil 4 Elektron | Mikroskobu Bilimleri | 0302-4-PO | Fare derisini kesmek ve göğüs kafesini açmak için |
| Cımbız Stil 5 | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 0302-5-PO | Parçalamak ve temizlemek için aort damarı |
Kaynaklar
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-241 (2000).
- Emini Veseli, B., et al. Animal models of atherosclerosis. European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).
- Plump, A. S., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
