Tüm araştırmalar, hayvanların bakımı için kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi.
1. Deney için dikkat edilmesi gerekenler ve hazırlıklar
- AV aracılığıyla kardiyak debinin simülasyonu için uygun bir nabız çoğaltıcı (PD) kullanın. PD'nin biyolojik materyalleri barındırabilmesi ve temizlenebilmesi gerekecektir.
- AV'yi test etmek için uygun PD ayarlarını kullanın: 70 mL deplasman hacmi ve dakikada 70 atım (5 L / dak kalp debisi), sistolde kardiyak siklusun 5'i, 100 mmHg ortalama transvalvüler basınç gradyanı, 120 maksimum basınç gradyanı ve 80 minimum basınç gradyanı.
- Akışkan ortam olarak oda sıcaklığında (RT) normal salin (% 0.9 NaCl) kullanın.
- PD üzerinde test etmek üzere porcine AV'yi monte etmek için uygun fikstürleri bulun veya oluşturun (3D baskı veya benzer bir yöntem kullanarak).
- Darbeli çoğaltıcı ile birlikte verilen armatürler üzerinde modellenen ve aşağıdaki özelliklere sahip armatürler kullanın: armatürün iç çapının incelenen AV'nin çapına benzer olduğundan, bağlantı uzunluğunun en az 2 cm olduğundan ve kullanılabilir bağlantı genişliğinin en az 4 cm olduğundan emin olun (Şekil 1).
- Fikstürlerin uçlarında conta olarak kauçuk O-ringler kullanın.
- Kardiektomi sonrası kalp örneği alın (Şekil 2A).
- Mezbahadan domuz kardiyak örnekleri veya sağlıklı olan ve kalplerini etkileyecek herhangi bir deneysel protokolün parçası olmayan hayvanlardan alınan atık dokuları kullanın.
- Kardiyektomiden sonra örnek alın veya superior vena kava, inferior vena kava, ana pulmoner arter (PA), tüm pulmoner venler ve aort arkının distal yüzünde aort transeksiyonu dahil olmak üzere ölüm sonrası kardiyomektomi gerçekleştirin.
NOT: Bu deney için, ölümden sonra 6 saatten daha kısa bir süre içinde veya% 1 antibiyotik solüsyonu (penisilin ve streptomisin) içeren steril salin içinde 4 °C'lik bir buzdolabında 7 güne kadar saklanan taze örnekler kullanılmalıdır. Formalin veya glutaraldehit içinde sabitlenen dokular, artan sertlik nedeniyle değişmiş hidrodinamik sonuçlar üretecektir.

Şekil 1: Domuz aort kapakçıklarını nabız çoğaltıcıya monte etmek için özel 3D baskılı armatürler. Protokolde belirtildiği gibi, bağlantı uzunluğu en az 2 cm, kullanılabilir bağlantı genişliği en az 4 cm olmalıdır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
2. Sağ taraflı yapıların rezeksiyonu
- Ventriküler doku görünene kadar PA'yı aorttan Metzenbaum makasıyla inceleyin (Şekil 2B).
- Sinüsleri daraltmamaya dikkat ederek, her iki koroner arteri aort sinüslerinden kökenlerinde ipek bağlarla diseke edin ve bağlayın.
- İpek bağlarının distalindeki koroner arterleri kesin.
- Metzenbaum makası kullanarak pulmoner kapağın tabanında aort ve PA arasındaki sağ ventrikülü (RV) kesin (Şekil 2C).
- Önden başlayarak, RV serbest duvarını çıkarmak için insizyona interventriküler septum boyunca çevresel olarak devam edin (Şekil 2D, E).
- Tüm sağ atriyal dokuyu çıkarmak için insizyona interatriyal septum boyunca triküspit kapak anulusundan posteriordan devam edin (Şekil 2F).

Şekil 2: Kardiektomi spesmeni ve sağ taraflı yapıların rezeksiyonu. (A) Kardiektomi spesmeni. (B) Ana pulmoner arter, ventriküler doku görünene kadar aorttan diseke edildi. (C) Pulmoner kapağın tabanında sağ ventrikülün (RV) kesilmesi. (D) İnsizyonun interventriküler septum boyunca anterior olarak devam etmesi. (E) İnsizyonu interventriküler septum boyunca çevresel olarak devam ettirerek RV'siz duvarın çıkarılması. (F) Sağ kenarlı yapıları çıkarılmış numune. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
3. PD fikstürü ile kanülasyon için sol ventrikül çıkış yolunun (LVOT) hazırlanması
- Sol atriyum (LA) sağ pulmoner ven ostiumundan aorta paralel olarak Metzenbaum makası kullanılarak kesilmelidir (Şekil 3A).
NOT: Sınırlı değişkenlik olmasına rağmen, domuz pulmoner ven anatomisi genellikle LA8'e giren iki pulmoner ven ostisi ile sonlanır.
- Aort tarafında en az 3 mm'lik bir atriyal doku manşeti bırakarak mitral kapağın (MV) anterolateral komisürüne doğru insizyona devam edin.
- Aort üzerindeki 3 mm'lik atriyal doku manşetini ve MV anulusunu çevresel olarak koruyarak fazla LA dokusunu kesin (Şekil 3B).
- Anterolateral papiller kası korumaya dikkat ederek, insizyonu MV'nin anterolateral komissüründen sol ventriküle (LV) uzatın (Şekil 3C).
- Korda tendineae'yi anterolateral papiller kastan posterior MV broşürüne bölün ve anterior MV broşürüne olan ekleri koruyun.
- Kesiye kalbin tepesine kadar devam edin.
- Her iki papiller kası koruyarak papiller kasların altındaki fazla LV dokusunu kesin (Şekil 3D).

Şekil 3: Pulse çoğaltıcı fikstürü ile kanülasyon için sol ventrikül çıkış yolunun hazırlanması. (A) Sol atriyumun (LA) sağ pulmoner venin ostiumundan kesilmesi. (B) Fazla LA dokusu kesilmiş, aort üzerinde en az 3 mm'lik bir atriyal doku manşeti korunmuş ve mitral kapak halkasını çevresel olarak korumuş. (C) İnsizyonun mitral kapağın anterolateral komissür yoluyla sol ventrikül (LV) üzerine uzatılması. (D) Papiller kasların altındaki fazla LV dokusunun çıkarılması. Makas resmin sağ üst köşesinde görülebilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
4. PD fikstürü ile aortun kanülasyon için hazırlanması
- Aorttaki fazla lenfatik, bağ veya pulmoner arter dokusunu kesin (Şekil 4A).
- Aort arkının üst yönünün inen aorttan sol subklavyen artere doğru olan kısmı Metzenbaum makası ile kesilmelidir (Şekil 4B).
- Sol subklavyen arterden brakiyosefalik gövdeye kadar aortik arkın üst yüzündeki insizyona devam edin (Şekil 4C, D).
NOT: Domuz aort arkının distalden proksimal dalları, sol subklavyen arter ve sağ subklavyen arter, sağ karotis arter ve sol karotis artere yol açan brakiyosefalik gövdeyi içerir9.

Şekil 4: Nabız çoğaltıcı fikstürü ile aortun kanülasyon için hazırlanması. (A) Fazla doku çıkarılmış aort arkı. Domuz aort arkı, brakiyosefalik gövde ve sol subklavyen arterdeki iki ark damarına dikkat edin. (B) İnen aorttan sol subklavyen artere kadar aort arkının üst yönü boyunca insizyonun başlatılması. (C) Sol subklavyen arterden brakiyosefalik gövdeye kadar aort arkının üst yönü boyunca insizyona devam etmek. (D) Tamamlanmış aort arkı insizyonu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
5. LVOT'un PD fikstürü ile kanülasyonu
- Fikstürün LVOT'taki konumunu test edin ve fazla LV dokusunu kesin.
- Fikstürü, MV'nin ön broşürünün altındaki LVOT'a yerleştirin.
- AG'siz duvarı armatürün etrafına sarın.
- Fikstürün etrafını sıkı bir şekilde sarmak için fazla LV dokusunu kesin.
- İnterventriküler septumdan başlayarak LV serbest duvarın kalınlığının yarısını kaldırın, sütür hattının bütünlüğünü korumak için serbest kenarda en az 1 cm epikard bırakın (Şekil 5A).
- LV içermeyen duvar kaplamasının üst köşesinden 1 cm doku kesin (Şekil 5A).
- Fikstürü, destek çubuğu bağlantı deliği AG kesiğinin 1 cm gerisinde olacak şekilde LVOT'a yerleştirin (Şekil 5B).
- Armatürü, AV halkasını genişletecek şekilde LVOT'a çok fazla sokmamaya dikkat edin.
- Broşürün kordae tendineae'si arasına yerleştirilmiş bir veya iki adet 6 inçlik fermuar kullanarak MV'nin ön broşürünü fikstüre sabitleyin (Şekil 5C).
- AG serbest duvarı armatürün etrafına dikin (Şekil 5D).
- Aort üzerindeki LA dokusunun manşetini konik uçlu bir iğne ile basit bir koşu sütürü kullanarak MV halkasına dikerek başlayın.
- LV dokusunu yırtmadan LV üzerine akan dikişe devam edin.

Şekil 5: Sol ventrikül çıkış yolunun nabız çoğaltıcı fikstürü ile kanülasyonu. (A) Serbest kenarda tutulan 1 cm epikard ile LV serbest duvarın yarısı kaldırıldı. Noktalı çizgi, AG'siz duvar kaplamasının üst köşesinden kaldırılacak 1 cm'lik alanı gösterir. (B) AG'siz duvar kesiğinin 1 cm arkasına yerleştirilmiş destek çubuğu bağlantı deliği. (C) MV'nin ön broşürünü proksimal fikstüre sabitleyen fermuar. (D) Armatürün etrafına dikilmiş AG'siz duvar. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
6. Aortun PD fikstürü ile kanülasyonu ve PD testi için son hazırlık
- PD testinin sonuçlarının yorumlanmasına yardımcı olmak için Hegar dilatörlerini kullanarak AV'nin çapını ölçün.
- Aortu kavrayarak numuneyi masadan kaldırarak aortun nötr pozisyonunu belirleyin (Şekil 6A).
- Çubuk bağlantı deliklerini aortun nötr konumunda hizalamaya dikkat ederek PD fikstürünü aort içine yerleştirin.
- Destek çubuklarını yerleştirerek numunenin uzunluğunu kontrol edin.
- PD fikstürünü bir veya iki adet 6 inçlik fermuar kullanarak aorta sabitleyin (Şekil 6B).
- Bir veya iki adet 8 inçlik fermuar kullanarak LVOT'u PD armatürünün etrafına sabitleyin.
- PD setiyle birlikte verilen vidaları kullanarak destek çubuklarını yerine sabitleyin.
- Numuneyi PD'ye yerleştirin ve testi başlatın (Şekil 6C, Video 1 ve Video 2).
- Gerektiğinde herhangi bir sızıntıyı dikin.

Şekil 6: Aortun kanülasyonu ve nabız çoğaltıcıda test edilmesi. (A) Aortun nötr pozisyonunu belirlemek için numunenin aort tarafından masadan kaldırılması. (B) Aortta fermuarlarla sabitlenmiş distal fikstür. (C) Hidrodinamik test için darbeli çoğaltıcıya monte edilmiş numune. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
7. Deneysel prosedür uygulayın
NOT: Daha önce 5,6,7'de açıklandığı gibi Ozaki prosedürü gibi deneysel prosedürler uygulayın ve PD testini tekrarlayın.
- İşlem sırasında doku kuruduysa, fermuarları sıkın ve dikiş hattını gerektiği gibi güçlendirin.
8. Numunenin uzun süreli saklanması (istenirse)
- Numuneyi 168 saat (1 hafta) boyunca% 10 formalin içine yerleştirin10,11.
- Doku fiksasyonundan sonra, numuneyi deiyonize suyla yıkayın ve uzun süreli saklama için% 70 etanol içine koyun.