Kemik İliği Üretimi 2-foton Görüntüleme Kullanım murin Dendritik Hücreler Türetilmiş

Özet

Dendritik hücreler tarafından ikincil lenfoid organlara Antijen sunumu T hücre aracılı adaptif immün yanıt başlatılması için çok önemlidir. Burada kemik iliği kültürü elde edilen fare dendritik hücreler, aktivasyon, 2-foton görüntüleme için etiketleme göstermektedir.

Özet

Fare dendritik hücrelerin hazırlanması için çeşitli yöntemler literatürde bulunabilir. Burada, kültürde% 85 daha fazla CD11c yüksek dendritik hücreler üreten bir yöntem mevcut subkutan enjeksiyon ve antijen spesifik T hücreleri (video) mevcut antijen sonra drenaj lenf nodu ev. Ayrıca, 10 gün, kültürlü hücrelerinin morfolojisi, olgun bir dendritik hücre ve hücre <% 85 CD11chigh olan tipik, dendritik hücre olgunlaşması izlemek Essen Aletleri Incucyte kullanın. 2-foton görüntüleme ile periferik lenf düğümlerine antijen sunumu çalışma dendritik hücre ve T hücre etkileşimi ^{1, 2,} üç farklı aşama olduğunu ortaya çıkardı. Faz I, son derece hareketli bir antijen spesifik T hücreleri ^{ve dendritik hücreler} 1, 2 taşıyan antijen arasında kısa seri kişilerin oluşur. Faz iki antijen spesifik T hücre ve dendritik hücreler ^{1, 2} yatak antijen arasındaki uzun süreli temas ile işaretlenir . Son olarak, Faz III, dendritik hücreler ayrılmakta motilite kazanmak ^{ve 1,} 2 bölmek için, T hücreleri tarafından karakterize edilir . Bu antijen yüklü hücre izci boya etiketli dendritik hücreler iki-foton görüntüleme ile analiz edilebilir antijen-spesifik etkileşimler türünün tek örneğidir.

Protokol

1) bir fare hem de femur kemikleri çıkarın

1. Kas kesip ve femur kemik ve eklemlerde aşağıda (diz ve kalça) üzerinde açığa çıkarmak için diseksiyon makas kullanın. Diseksiyonu cımbız ile femur merkezi tutun ve mümkün olduğunca sağlam epifiz kadar terk etmek üstünde ve eklemlerde aşağıda kesmek.
2. Küçük diseksiyon makas kullanılarak mümkün olduğu kadar çok kas olarak temizleyin. Femur RPMI bir tabak içine aktarın.
3. Tüm işlemler, bu noktada sadece steril ortam, araçlar, pipet uçları ve kültür yemekleri kullanarak Kaputun yürütülen olmalıdır.

2) femur kemikleri sterilize:

1. Kaput, buz üzerinde% 70 etanol....

Tartışma

Dendritik hücreler, adaptif immün yanıt, bugüne kadar karakterize en etkili antijen sunan hücre anahtar arabulucular. Literatürde insan ve fare dendritik hücre kültürü yöntemleri farklı dendritik hücre tiplerinin gelişimini etkilemek için kullanılan sitokinlerin türü farklıdır. Özellikle, GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa ve IFN-gama, olgun, olgunlaşmamış, inflamatuvar ve kararlı durum in ^vitro 3-7 dendritik hücreler elde edilen fare kemik iliği gibi üretmek için farklı kombinasyonları kullanılır . Burada, biz yeteneğine sahipti.......