Name: Radyoaktif olmayan In situ Hibridizasyon Norveç Ladin Uygulanacak Protokol ve Bitki Türlerinin Aralığı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-17T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 56 s
Description: Öğrenin, Norveç ladini ve çeşitli bitki türlerinde uygulanabilen radyoaktif olmayan in situ hibridizasyon protokolünü. Bu yöntem, gen ifadesi analizi için hızlı ve güvenilir sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz hoparlör sesi olmaya gönüllü, müzik, film için sağlanan Anders bovin ve Michael Elliot Stoklar müteşekkiriz. Destek Carl Trygger Vakfı, İsveç Tarım Bilimleri, İsveç Araştırma Kurumu (VR) Üniversitesinde stratejik araştırma programı Tarım Fonksiyonel Genomik (AgriFunGen), Çevre ve İsveç Araştırma Kurumu (TÜBİTAK), Tarım Bilimleri ve Alan Planlama (Formas tarafından sağlanmaktadır . .)

<ol><li>Carr, S. M., Irish, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Floral+homeotic+gene+expression+defines+developmental+arrest+stages+in+Brassica+oleracea+L.+vars.+botrytis+and+italica%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Floral homeotic gene expression defines developmental arrest stages in Brassica oleracea L. vars. botrytis and italica.</a> Planta. 201 (2), 179-188 (1997).</li>
<li>Coen, E. S., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+war+of+the+whorls%3A+genetic+interactions+controlling+flower+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The war of the whorls: genetic interactions controlling flower development.</a> Nature. 353 (6339), 31-37 (1991).</li>
<li>Jackson, D. In situ hybridization in plants. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJackson%2C+D+%22Molecular+Plant+Patology%3A+a+practical+approach%22">Molecular Plant Patology: a practical approach</a>. Gurr, S. J., McPherson, M. J., Bowles, D. J. , University Press. Oxford. (1991).</li>
<li>Leitch, A. R., Schwarzacher, T., Jackson, D., Leitch, I. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeitch%2C+AR+%22In+situ+hybridization%3A+a+practical+guide%22">In situ hybridization: a practical guide</a>. , BIOS Scientific Publishers Limited. Oxford. (1994).</li>
<li>Smyth, D. R., Bowman, J. L., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+flower+development+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Early flower development in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 2 (8), 755-767 (1990).</li>
<li>Azevedo, H., Lino-Neto, T., Tavares, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+high-quality+RNA+isolation+from+needles+of+adult+maritime+pine+trees%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology+Reporter%22%5BJournal%5D)">An improved method for high-quality RNA isolation from needles of adult maritime pine trees.</a> Plant Molecular Biology Reporter. , 333-338 (2003).</li>
<li>Sundstrom, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MADS-box+genes+active+in+developing+pollen+cones+of+Norway+spruce+%28Picea+abies%29+are+homologous+to+the+B-class+floral+homeotic+genes+in+angiosperms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genet%22%5BJournal%5D)">MADS-box genes active in developing pollen cones of Norway spruce (Picea abies) are homologous to the B-class floral homeotic genes in angiosperms.</a> Dev Genet. 25 (3), 253-266 (1999).</li>
<li>Tandre, K., Svenson, M., Svensson, M. E., Engstrom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conservation+of+gene+structure+and+activity+in+the+regulation+of+reproductive+organ+development+of+conifers+and+angiosperms%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Conservation of gene structure and activity in the regulation of reproductive organ development of conifers and angiosperms.</a> Plant J. 15 (5), 615-623 (1998).</li>
<li>Winter, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MADS-box+genes+reveal+that+gnetophytes+are+more+closely+related+to+conifers+than+to+flowering+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">MADS-box genes reveal that gnetophytes are more closely related to conifers than to flowering plants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (13), 7342-7347 (1999).</li>
<li>Savard, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloroplast+and+nuclear+gene+sequences+indicate+late+Pennsylvanian+time+for+the+last+common+ancestor+of+extant+seed+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Chloroplast and nuclear gene sequences indicate late Pennsylvanian time for the last common ancestor of extant seed plants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91 (11), 5163-5167 (1994).</li>
<li>Jack, T., Brockman, L. L., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+homeotic+gene+APETALA3+of+Arabidopsis+thaliana+encodes+a+MADS+box+and+is+expressed+in+petals+and+stamens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The homeotic gene APETALA3 of Arabidopsis thaliana encodes a MADS box and is expressed in petals and stamens.</a> Cell. 68 (4), 683-697 (1992).</li>
<li>Bowman, J. L., Smyth, D. R., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+directing+flower+development+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Genes directing flower development in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 1 (1), 37-52 (1989).</li>
<li>Kramer, E. M., Irish, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+genetic+mechanisms+controlling+petal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Evolution of genetic mechanisms controlling petal development.</a> Nature. 399 (6732), 144-148 (1999).</li>
<li>Sundstrom, J., Engstrom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conifer+reproductive+development+involves+B-type+MADS-box+genes+with+distinct+and+different+activities+in+male+organ+primordia%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Conifer reproductive development involves B-type MADS-box genes with distinct and different activities in male organ primordia.</a> Plant J. 31 (2), 161-169 (2002).</li>
<li>Carlsson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+reveals+altered+expression+of+a+large+number+of+nuclear+genes+in+developing+cytoplasmic+male+sterile+Brassica+napus+flowers%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis reveals altered expression of a large number of nuclear genes in developing cytoplasmic male sterile Brassica napus flowers.</a> Plant J. 49 (3), 452-462 (2007).</li>
<li>Teixeira, R. T., Farbos, I., Glimelius, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+levels+of+meristem+identity+and+homeotic+genes+are+modified+by+nuclear-mitochondrial+interactions+in+alloplasmic+male-sterile+lines+of+Brassica+napus%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Expression levels of meristem identity and homeotic genes are modified by nuclear-mitochondrial interactions in alloplasmic male-sterile lines of Brassica napus.</a> Plant J. 42 (5), 731-742 (2005).</li>
<li>Ying, S., Kay, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+of+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The technique of in situ hybridization.</a> Methods in Molecular Medicine. 56, 263-283 (2001).</li>
</ol>

P. iki yönü abies protokolü A. göre optimize edilmiştir thaliana / B. napus protokolü, RNaz tedavi ve proteinaz K konsantrasyonu. RNaz arka plan sinyalleri ortadan kaldırır ve böylece sinyal özgüllüğü 17 artırır . Proteinaz K, tedavi prob girin ve ilgi RNA havuzu melezler böylece dokular permeabilize için gerekli. DAL13 antisens prob RNaz 30 dakika (Şekil 2B, F ve H) ile tedavi bölümlerine göre RNaz-tedavi (Şekil 3C, E, G) olmadan daha yüksek bir sinyal verdi. RNaz tedavi sinyali artırmak etmediğimizden protokolden çıkarıldı. 1, 3 ve 5 mikrogram / ml proteinaz K tedavisinde üç farklı konsantrasyonlarda test edildi. P. durumda 1 mg / ml proteinaz K (Şekil 3C-D) kullanarak düşük ya da hiç bir sinyal abies gözlendi . 5 mg / ml proteinaz K ile 3 mg / ml (Şekil 3E-F) ve 5 mg / ml, hem de güçlü bir sinyal elde edilmiştir (Şekil 3G-H) proteinaz K. sinyal gücü arasında fark bu yana bulundu 3 mg / ml ile karşılaştırıldığında, biz protokolde 3 mikrogram / ml kullanmayı seçti. Bu olasılığı olduğunu P. bir proteinaz K konsantrasyonu yüksek olan ihtiyacı A. kıyasla abies erkek konileri thaliana ve B. napus çiçek tomurcukları fenolik ve polisakkaritler yüksek seviyeleri ile daha kompakt bir doku nedeniyle. Fiksasyonu sırasında ve A. arasında bazı farklılıklar gömme thaliana / B. napus protokolü ve P. abies protokolü açıktır. Ilgi doku RNA kalmalarını sağlamak için sabit ve kötü sabit malzeme mRNA oldukça bol olsa da düşük veya belirlenemeyen bir sinyal verebilir yılından bu yana önemli bir adım. Doku temizlenir ve doku hasarı önlemek için yavaş yavaş değişiklikler balmumu gömülü, kurutulmuş, ve bazı protokollerde% 0.85 NaCl içinde hücreleri 3 büzülmesi ve şişmeyi önlemek için daha fazla dehidrasyon etanol eklenir. Gömme sırasında dehidrasyon adım en az RNaz aktivite tutmak için buz üzerinde yapılabilir. P. abies protokolü% 4 paraformaldehid düzeltme çözüm, bazı muhtemelen hiçbir fark 3 iddia bile daha iyi bir RNA tutma 17 vermek gerekiyordu% 0.25 glutaraldehid içerir . (Non-spesifik prob bağlayıcı ve sonunda susuz azaltmak için tedavi permeabilize rehidrate yani mumu alınmış,,) malzemenin kesit sonra hibridizasyon önce Slaytlarınıza sabit ve önceden tedavi edilir. Burada sunulan protokol tüm saptama prosedürü sıradan laboratuvarlarda yapılabilir, sinyal genellikle 1-3 gün içinde gelişir ve arka plan üzerinde sinyal arasındaki oran, sürekli olarak izlenebilmektedir. DIG-etiketli probları genellikle radyoaktif etiketli probları kıyasla daha belirgin bir sinyal vermek, daha istikrarlı ve ardışık deneylerde tekrar edilebilir. Öte yandan, radyoaktif probları 17 ile karşılaştırıldığında duyarlılığı azalır. Situ hibridizasyon, belirli bir mRNA&#39;nın için özel etiketli prob kullanarak ifade algılar . Radyo-etiketleme, sağlam ve hassas bir etiketleme yöntemi ama radyoaktivite işlenmesini gerektirir ve sonuçları tespit edilebilir önce birkaç hafta sürer. Öte yandan Antijen-etiketli probları, daha az tehlikeli, daha kararlı ve sadece 17 bir kaç gün için algılama orta tartışma gerektirecek. Bu nedenle, antijen-etiketleme yöntemleri şu anda hakim. Protokol ne olursa olsun en kritik adım prob tasarımı. Bakım prob yüksek bir özgüllük ve yüksek kalite UTPs ile etiketlenmiş emin olmak için alınmalıdır. Bazen hibridizasyon sıcaklık ve / veya spesifik problar için tepki süresini ayarlanması gerekir. DIG etiketli probları göre modifiye protokol A. değişen türlerin aynı anda mRNA lokalizasyonu kolaylaştırmak P. için thaliana abies ve küçük ayarlamalar ile diğer bitki türlerinin de kullanılabilir olmalıdır. Protokol erkek konileri yanında, vejetatif sürgünler farklı aşamalarında ve P. Zigotik ve somatik embriyolar hem de test edilmiştir iyi sonuçlar (. Karlgren ark yayınlanmamış) abies.

<table><tbody><tr><td>Asetik anhidrit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6404-200ml</td><td>minimum %98</td></tr><tr><td>Akrilamid, lineer</td><td>Ambion</td><td>9520</td><td></td></tr><tr><td>Anti-DIG antikorları</td><td>Roche Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bloklama reaktifi</td><td>Roche Group</td><td>11 175 041 910 veya 11 096 176 001</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030-50g</td><td>minimum %98</td></tr><tr><td>Deiyonize formamid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Denhardt çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2532-5ml</td><td></td></tr><tr><td>DEPC, dietilpirokarbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dekstran sülfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DIG RNA Etiketleme Kiti (SP6/T7)</td><td>Roche Group</td><td>11175025910</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehit (%25)</td><td>Histolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glikojen</td><td>Ambion</td><td>9510G</td><td></td></tr><tr><td>Histoclear II</td><td>Histolab</td><td></td><td>Dokuyu gömerken Tissue-clear, Histoclear II, ksilen veya benzeri bir madde kullanabilirsiniz.</td></tr><tr><td>Histowax</td><td>Histolab</td><td></td><td>Gömme işlemi için Histowax veya Paraplast kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-500g</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast plus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3683-1kg</td><td>Gömme işlemi için Histowax veya Paraplast kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Phusion&amp;#8482; High-Fidility DNA Polimeraz</td><td>Finnzymes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Probe-on Plus lamlar</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-230-900</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2308-5mg</td><td></td></tr><tr><td>RNaz A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R5503-100mg</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-clear</td><td>Sakura Finetek</td><td></td><td>Dokuyu gömerken Tissue-clear, Histoclear II, ksilen veya benzeri bir madde kullanabilirsiniz.</td></tr><tr><td>Trietanolamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1377-100ml</td><td>minimum %98</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>laboratuvardaki standart ürününüzü kullanın</td><td></td><td>Triton X-100 ve Tween-20'den birini veya her ikisini kullanın.</td></tr><tr><td>tRNA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>83853-100mg</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>laboratuvardaki standart ürününüzü kullanın</td><td></td><td>Triton X-100 ve Tween-20'den birini veya her ikisini kullanın.</td></tr><tr><td>Western Blue</td><td>Promega Corp.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

radyoaktif olmayan in situ hibridizasyon norveç ladin uygulanacak protokol ve bitki türlerinin aralığı

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Yüksek verimlilik ifade analizi teknolojileri bugün mevcut bireysel dokuların diseksiyon sorunları nedeniyle sınırlı bilim adamları ifade profilleri taşması ancak doku özgü ifade açısından çözünürlük vermek. İfade verileri doğruladı ve lokalize hücre spesifik mRNA in situ hibridizasyon, kullanılan bir tekniktir örneğin kullanarak ifade desenleri ile tamamlanabilir. In situ hibridizasyon yöntemi zahmetli, zaman alıcı ve genellikle türler ve doku bağlı olarak kapsamlı iyileştirmeye ihtiyaç duyar. Yerinde deneylerde kozalaklı Norveç ladin (Picea abies) gibi odunsu türler gerçekleştirmek için nispeten daha zor. Burada P. de dahil olmak üzere bitki türlerinin geniş bir yelpazede hızlı ve uygulanabilir in situ hibridizasyon protokolü, modifiye edilmiş bir DIG mevcut abies. Değişmiş RNaz tedavi ve proteinaz K konsantrasyonu da dahil olmak üzere sadece birkaç ayarlama ile, doku spesifik genlerin homolog gymnosperm bir erkek üreme organları ve iki Angiosperm türler ifade çalışma protokolü kullanmak; P. abies, Arabidopsis thaliana ve Brassica napus. Protokol incelenen türler ve genler için de aynı derecede iyi çalıştı. AtAP3 ve BnAP3 A&#39;da ikinci ve üçüncü parmak izindeki kabarıklık çiçek organları gözlendi thaliana ve B. P. erkek kozalaklar microsporophylls napus ve DAL13 abies. P. için abies dokular permeablize için kullanılan proteinaz K konsantrasyonu, 3&#39;e yükselmiştir gerekiyordu 1 g / ml yerine muhtemelen daha kompakt bir doku ve fenolik ve polisakkaritler daha yüksek seviyelere nedeniyle g / ml. Tüm türler için RNaz tedavi özgüllüğü karşılık gelen bir artış olmadan sinyal gücünün azalması nedeniyle kaldırıldı. Çiçekli bitkiler ve iğne yapraklı ağaç hem homolog genler doku spesifik ekspresyonu karşılaştırarak, yerinde protokolde DIG sadece dakika ayarlamaları ile, burada sunulan gösteren bitki türlerinin geniş bir yelpazede uygulanabilir. Bu nedenle, protokol geniş türlerin özel optimizasyon ve zahmetli DIG etiketli probları lehine radyoaktif etiketli probların kullanımı önler. Biz filmimizde de protokolün teknik zorlu adımları göstermek için seçtik. Anna Karlgren ve Jenny Carlsson, bu çalışmaya eşit katkıda bulundu. Sorumlu yazarlar: Jens.Sundstrom @ vbsg.slu.se Anna.Karlgren @ ebc.uu.se ve Jens F. Sundström Anna Karlgren

Biz değiştirilmiş bir DIG tarif<em&gt; In situ</em&gt; Hızlı ve bitki türlerinin Norveç ladin de dahil olmak üzere geniş bir yelpazede uygulanabilir hibridizasyon protokol. Değişmiş RNaz tedavi ve proteinaz K konsantrasyonu da dahil olmak üzere sadece birkaç ayarlama ile protokol farklı dokular ve tür çalışmalarda kullanılıyor olabilir.

Radyoaktif olmayan In situ Hibridizasyon Norveç Ladin Uygulanacak Protokol ve Bitki Türlerinin Aralığı

Günümüzde mevcut olan yüksek çıktılı ekspresyon analiz teknolojileri, bilim insanlarına çok sayıda ekspresyon profili sunmaktadır; ancak bu profillerin ... açısından çözünürlüğü...

Sarıçam ve bir dizi bitki türü için uygulanabilir radyosuz in situ hibridizasyon protokolü. Carre ve ark. Merhaba, benim adım AM GaN; OBS Üniversitesi ve İsveç Tarım Bilimleri Üniversitesi'nde, obs İsveç'te çalışıyoruz.Birkaç farklı bitki türünde çalışan bir böcek ziyareti protokolü oluşturduk. Bugün size bazı zorlayıcı adımları göstereceğiz. Bu protokolde, gömme, kesit alma ve gerçek böcek ziyareti deneyindeki farklı aşamaları size sunacağız.Laboratuvar Bir'e, protokoldeki fiksasyon ve gömme aşamalarının dokuzuncu ile on birinci adımlarına gidelim. Dokuzuncu adım, Petri kaplarını ve kalıpları 60 °C'ye ısıtın. Onuncu adım, bir cımbızı ısıtın ve dokuları bir kaba eşit şekilde dağıtın.Dokuların üzeri kapanacak şekilde daha fazla histo wax ekleyin. Adım 11'de, balmumunun oda sıcaklığında sertleşmesini bekleyin. Protokoldeki 12'den 19'a kadar olan adımları takip edin.Sıcak plakaları açın ve eritilmiş histolojik wax hazır bulundurun. Örnekleri soğuk odadan çıkarın. 13. adımda, bir skalpel kullanarak bir doku wax bloğunu dikkatlice kesin.Dilimlemeyi kolaylaştırmak için parçayı şekillendirin. 14. adımda, bloğun soğuk kısmını ve topuk kısmını ısıtarak birbirine kaynatın. Hazırlığın 4 °C'de sertleşmesini bekleyin.Adım 15, wax bloğu altı ila sekiz mikrometre kalınlığında kesitler halinde kesin. Bir mikrotom kullanarak kesitleri tek bir uzun şerit halinde birbirine bağlayın. Şeridi kesin ve kağıda aktarın.Bu aşamada, ilgi çekici kesitleri seçmek için tek tek kesitlerin bir stereo mikroskop altında incelenmesi mümkündür. İnceleme, dokularla veya eozin ile boyanmış kesitlerle kolayca gerçekleştirilebilir. Adım 17'de, lamların üzerine RNA içermeyen Milli Q suyu ekleyin.Şeritleri daha küçük parçalara bölün ve lamların üzerine yerleştirin. Lamları ısıtıcı plakaya taşıyın. Adım 17, şeritlerin 42 °C sıcaklıktaki plakada bir ila iki dakika boyunca düzleşmesini sağlayın.Suyu Kimwipe kullanarak süzün. Adım 19, dokuların lamlara yapışması için lamları 42 °C'de gece boyunca inkübe edin; in situ hibridizasyon 4.1 in-situ kesit protokolündeki 36 ila 48 arası ön işlem adımlarını uygulayın.Adım 36 histolojik katmandaki depa kesitleri. Slaytlar, farklı kaplar arasındaki geçişi kolaylaştırmak için bir rafa eşit aralıklarla yerleştirilir ve kesitleryedehidratasyona tabi tutulur. Etanol serisi içinde, şiddetli karıştırma eşliğinde asetik anhidrit ekleyin.Adım 45, asetik anhidrit işlemi 4.2 in situ hibridizasyon için hazırlık. Bir protokoldeki 49 ila 52. adımlar. Adım 51, pro one plus lamların yaşlandırılması.Çözelti vizkozdur. Kabarcık oluşumundan kaçınmaya çalışın. Lamları nemli bir bölmede inkübe edin.4.3 başlangıç. Hibridizasyon sonrası, protokoldeki 53 ile 72 arasındaki adımlar. 62. adımda, lamları burer blokla birlikte plastik bir kapta inkübe edin.Adım 63, lamları sadece kaplayacak kadar bloklama çözeltisi ekleyin. Antikorlar, yaşlandırma yöntemi kullanılarak lamlara eklenir. Yaşlandırma işlemi yalnızca prob bon plus lamlarla çalışır. Benzer tasarımdaki lamlar için, Adım 65, kılcal kuvvetlerin anti dig antikor çözeltisini yukarı çekmesine izin verin.Bu adım tekrarlanır. Daha önce yapıldığı gibi, 70. adımda sandviç işlemi uygulanır ve Western Blue çözeltisi çekilir. Anti-dig antikor çözeltisi için yaptığımız gibi, Western Blue çözeltisinin iki kez çekildiğine dikkat edin.65. adım ve 71. adımda, lamları bir ila beş gün boyunca karanlıkta inkübe edin. Oda sıcaklığında, hibridizasyon sinyallerinin izlenmesi bir stereo mikroskop ile yapılabilir. Lamlar hâlâ sandviç formundayken, mor ila kahverengimsi lekelerin gözlemlenebilmesi gerekir.CW istasyonu deneyinden elde edilen sonuçlar bu şekildedir. Sinyali burada mor veya kahverengimsi boyanma şeklinde görebilirsiniz.

non-radioactive-situ-hybridization-protocol-applicable-for-norway

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Çift Floresans In situ Taze Beyin Bölüm Hibridizasyon

Tüm Dağı<em&gt; In situ</emE11.5 fare embriyolarına E8.5 ve&gt; Hibridizasyon

Bitkilerde Transkriptler Hassas Yerelleştirme Situ Hibridizasyon

Bu protokol başarıyla kantitatif omurgalı türlerin birden çok doku tipleri düzeyleri ve mRNA mekansal kalıpları tespit etmek için kullanılır. Yöntem, düşük bolluk transkript algılamak ve aynı anda slayt yüzlerce işleme izin edebilirsiniz. Biz örnek olarak kuş embriyonik beyin oluşumu ekspresyon profili kullanarak bu protokolü sunarız.

Radyoaktif In situ</emDoku Çeşitli Gen Patterns Saptayan> Hibridizasyon

RNA<em&gt; Yerinde</emTüm Dağı Embriyolar ve Hücre histolojisi&gt; Hibridizasyon Deniz Elasmobranchs İçin Uyarlanmış

Biz, böcek ve bitki dokularında virüs ve bakterilerin lokalizasyonu için burada in situ hibridizasyon, basit bir floresan (FISH) yöntemi tarif eder. Bu protokol bütün montaj mRNA görselleştirme ve mikroskopik bölümleri için uzatılabilir.

Floresan<em&gt; In situ</emVirüsler ve Bitki ve Böcek Dokularda Endosimbiyotik Bakterilerin lokalizasyonu&gt; Hibritlemeler (FISH)

Bu protokol, inatçı bitki dokuları için yararlı olan basit bir Hibrit-Kesim doku kesitleme yöntemini tanımlar. Kaliteli doku kesitleri, anatomik çalışmalara ve in situ hibridizasyon (ISH) dahil olmak üzere diğer biyolojik çalışmalara olanak tanır.

Hibrid-Cut: Dirençli Bir Bitki Doku Örnekleri Bir Geliştirilmiş Kesit Yöntemi

Taramalı elektron mikroskobu gözlemi için biyolojik örneklerin işlenmesindeki sorunlar arasında hücre çökmesi, ıslak mikro ortamlardan alınan örneklerin işlenmesi ve hücre tahribatı yer alır. Çiçek meristemleri, oomycete kistleri ve mantarlar (Agaricales) gibi zorlu numunelerin hazırlanması için uygun düşük maliyetli ve nispeten hızlı protokoller burada derlenmiş ve detaylandırılmıştır.

Sorunlu Tesisi, Oomiçet ve fungal Örnekleri için Elektron Mikroskobu (SEM) Protokoller tarayarak

Murine hipokampustaki dendritik dikenleri görüntülemek ve analiz etmek için Seri Blok-Yüz Tarama Elektron Mikroskopisi (SBEM) uygulanır.

Dendritik Dikenlerin Çalışması için Seri Blok-Yüz Tarama Elektron Mikroskopisi (SBEM)

Bu protokol, izole Arabidopsis çekirdeklerinin tek moleküllü lokalizasyon mikroskopik görüntülemesi için verimli bir iş akışı sunar; optimize edilmiş izolasyon, fiksasyon ve etiketleme kullanılarak kromatin ve RNA Polimeraz II'nin nano ölçekli görselleştirilmesini sağlar. Bu yaklaşım, yüksek çözünürlüklü görüntüleme için diğer kromatin ilişkili proteinlere veya histon modifikasyonlarına kolayca uyarlanabilir.

Arabidopsis çekirdeklerinde tek moleküllü lokalizasyon mikroskopisi için sadeleştirilmiş bir protokol

Öğrenin, Norveç ladini ve çeşitli bitki türlerinde uygulanabilen radyoaktif olmayan in situ hibridizasyon protokolünü. Bu yöntem, gen ifadesi analizi için hızlı ve güvenilir sonuçlar sunar.

Radyoaktif olmayan In situ Hibridizasyon Norveç Ladin Uygulanacak Protokol ve Bitki Türlerinin Aralığı

Daha fazla video keşfet