Name: İnsan Kortikal Doku Aβ multimerlerin SDS-PAGE/Immunoblot Algılama Antijen-epitop Alma kullanarak homojenatlarında (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-23T04:53:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: Öğrenin insan kortikal doku homojenatlarında Aβ multimerlerinin SDS-PAGE ve immunoblot ile antijen-epitop alma yöntemiyle güvenilir tespitini. Bu protokol Alzheimer hastalığı patolojisini anlamak için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Elaine Pranski ve mükemmel teknik yardım için Carolyn Suwyn ve Harry LeVine III, M. Paul Murphy ve Dişli Marla önemli konuşmalar için çok teşekkürler. Finansman RR-00165 PO1AG026423, P50AG025688, AG030539, Woodruff Vakfı ve Emory Üniversitesi Araştırma Komitesi tarafından sağlanmıştır.

Bölüm 1: açıklık doku homojenatlarında Hazırlık <ol><li> Yaklaşık 30 bile havaneli şart vuruş ile (yani ekle 400μl tampon - buz gibi soğuk tampon (artı 2x proteaz inhibitörü kokteyl [Santa Cruz] 0.1M fosfat tamponlu tuzlu [ve Mg + +-serbest Ca + +]) 4 kez hacmi Sabitlenmemiş kortikal doku homojenize Dounce 100 mg doku). </li><li> 3.000 az 5 dakika Spin homojenatlarında g (4 ° C). Dikkatle -80 açıklık süpernatantlar ve bu özler mağaza alikotları kaldırmak ° C kullanana kadar. </li><li> Üreticinin talimatlarına (ThermoFisher) göre, bir bicinchoninic asit (BCA) deneyi ile açıklık homojenatlarında total protein konsantrasyonu (mg / ml) belirleyin. </li></ol> Bölüm 2: SDS-PAGE ile örnek hazırlama <ol><li> Iyi bir 10 ile,% 10-20 Tricine jel (Invitrogen), yanı başına yüklenecek maksimum ses ~ 25μl. Toplam hacmi 2x SDS numune tamponu ve 10x indirgen, yanı başına yüklenecek açıklık Homojenat maksimum ses 10μl. % 20 (w / v) Sade kortikal homojenatlarında 50μg total protein için de izin veren, total protein konsantrasyonu 5 mg / ml 'den büyük olması gerekir. Daha az protein 5mg/ml numuneler başına daha az total protein yüklenmesi gerektirecektir. Ancak, yüksek protein düzeyleri monomerik ve toplu Aβ tespiti için en uygun (50 60μg total protein, optimum). Her zaman ortalama toplam protein aynı miktarda yük. </li><li> Her jel için, SeeBlue Plus2 (Invitrogen) gibi bir moleküler ağırlık marker 10μl ile en az bir yük. Pozitif kontrol olarak, sentetik Aβ40 veya başka bir kuyuda Aβ42 peptid (1xPBS içinde seyreltilmiş) 10-100ng çalıştırın. </li><li> Taze çözülmüş, açıklık homojenatlarında kullanarak, buz üzerinde reaksiyon karışımları hazırlayın. Vorteks tüpleri, 5-10 saniye için 100 kuru bir banyo ısı ° C, 5 dakika sonra, hızlı bir şekilde kapağı yoğunlaşma kaldırmak için tüm örnekler dönerler. </li></ol> Bölüm 3: SDS-PAGE Jel elektroforezi <ol><li> Tricine SDS çalışan tampon kullanarak, üreticinin talimatlarına (Invitrogen) göre,% 10-20 Tricine jel üzerine XCell Sure Lock Mini-Cell Gelbox vortekslenmiş numuneleri yükleyin </li><li> Yaklaşık 90 dakika boyunca sabit bir gerilim 125V jel çalıştırın. 4KDa marker bant jel alttan 1 cm kadar numunelerinin çalışılabilmesi edelim. </li></ol> Bölüm 4: Jeller gelen Membranlar aktarma Proteinler <ol><li> Dikkatlice plastik kasa (Invitrogen) üreticinin talimatlarına göre, jeller kaldırmak ve XCell II Blot Modülü içinde transfer sandviç montajı. Pre-Tris-Glycine transfer tampon (% 20 metanol) ile pedleri ve 0.2μm nitroselüloz membranlar ıslak kurutma ve blot pabuçları veya filtre kağıdı / membran sandviç herhangi bir kabarcıkları. </li><li> XCell Gelbox, transfer tamponu ile iç odanın doldurun ve dih 2 O (metanol maruz zamanla plastik gelbox yıpratmak) dış kamara doldurun. </li><li> 2-3 saat boyunca sabit bir 25mA amperajda transfer çalıştırın. </li><li> Transfer tamamlandığında, sandviç yapısızlaştırabileceğimizi ve dih 2 O ve membranlar içine jeller kare plastik petri kaplarına 1xPBS (veya başka uygun bir kap) içine yerleştirin. </li><li> Protein transfer verimliliği görselleştirmek için, jeller Sadece Mavi SafeStain (Invitrogen) ile boyanmış olabilir, Ponceau G Kırmızı leke (Sigma Aldrich) membranlar, hem üreticinin talimatlarına göre. Bu boyama immunoblotting engel olmaz. Boyama yetersiz protein transferi ortaya çıkarsa, Adım 3 transfer süresi değiştirin. </li></ol> Bölüm 5. Antijen-epitop alma ve İmmünoblotting <ol><li> Antijen alma antikor bağlanma membran Aβ epitoplar immunoblotting sırasında ortaya çıkarmada önemli bir adımdır. Herhangi bir vapur, mikrodalga fırın, su banyosu, tutar sabit bir sıcaklık 100 ° C yeterli olacaktır. Bir vapur antijen alımı için, oda sıcaklığında, 1xPBS dolu bir ağır Kapak plastik poşet membran ısı mühür. Sat, önceden ısıtılmış bir vapur düz kese kese genişletmek için ek bir 15 dakika boyunca inkübe başladıktan sonra. Membran aşırı kırışıklıklar önlemek için, poşetten çıkarmadan önce yavaş yavaş soğutmak için izin verin. </li><li> Oda sıcaklığında, membran dikkatle buharda poşetten çıkarın ve 5 dakika 5 dakika (% 0.05 Tween-20 ile Tuzlu, pH 8.0 Tris-Tamponlanmış TBS-T durulama ardından 1xPBS membran, durulama [Sigma] ), yörüngesel bir çalkalayıcı. Titreme, bir saat süreyle bloke çözüm membranı (% 2,5 yağsız süt TBS-T) inkübe edin. Durulama olmadan, (6E10) 1:1,000 [1μg/ml] 1:5,000 [0.2μg/ml] seyreltme Covance, kaçınarak kabarcık engelleme çözümü seyreltilmiş primer antikor içeren bir tabak veya plastik poşet membran transferis Için oda sıcaklığında bir orbital çalkalayıcı 4 sallayarak ° C (uzun inkübasyon daha iyi bir sinyal verebilir) bir saat sonra 24-48 saat inkübe </li><li> TBS-T 30 dakika membran durulayın (tek bir hızlı 3 x 10 dakika çalkalama takip durulama). </li><li> 90 dakika oda sıcaklığında çalkalayıcı engelleme çözümü 1:10,000 seyreltilmiş HRP-konjuge sekonder antikor membran (Amersham ECL koyun anti-fare, GE Healthcare), inkübe edin. </li><li> TBS-T 30 dakika membran durulayın (tek bir hızlı 3 x 10 dakika çalkalama takip durulama). </li><li> Shaker, plastik levha koruyucuları arasındaki, havsız filtre kağıdı üzerinde aşırı reaktif kurulayın ve membran bir film kaset yerleştirmek, 5 dakika boyunca taze SuperSignal West Pico Electrochemiluminescence reaktifi (ThermoFisher) membran kuluçkaya yatmaktadır. Tozsuz Kimwipes gerekirse ek SuperSignal reaktif kurutun. </li><li> 30 dakika 30 saniye aralıklarla Kodak Biomax MR film ortaya çıkarmak ve bir film geliştirici gelişir. 5 dakika sonra, Aβ monomer bantları muhtemelen doymuş olacaktır. </li><li> Membranlar Geri Yükleme sallayarak Plus oda sıcaklığında 30 dakika boyunca tampon sıyırma ve istenirse ek antikorlar ile reprobed (TBS-T durulandıktan sonra) elimden olabilir. </li></ol> Bölüm 6: Temsilcisi immüno: <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1a.jpg" alt="Şekil 1a" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1a"> <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1b.jpg" alt="Şekil 1b" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1b"> <img src="/files/ftp_upload/1916/1916fig1c.jpg" alt="Şekil 1c" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1c"> 7 insan denekler 50μg total protein içeren Şekil 1a-c. Aydınlatılmış homojenatlarında multimer Aβ ve APP varlığı için incelenir. Antikor 6E10 İmmünoblotting Aβ monomerlerin, dimerleri, trimerler, tetramers ve tüm Alzheimer durumlarda APP (üst bant) yanı sıra 2 AD durumlarda bol miktarda yüksek molekül ağırlığı Aβ multimerleri ortaya koymaktadır. Sentetik Aβ40 düşük molekül ağırlıklı bantları kimliğini onaylar. AD: Alzheimer hastalığı, LCD'de: demansı olmayan insan (a) 30 dakikalık film pozlama, (b) 5 dakikalık bir film maruz kalma, (c) 30 saniyelik film maruz kalma: Lewy Bodies, ND ile Demans .

<ol><li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+beta-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 8, 101-112 (2007).</li>
<li>Walker, L. C., LeVine, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cerebral+proteopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Aging%22%5BJournal%5D)">The cerebral proteopathies.</a> Neurobiol. Aging. 21, 559-561 (2000).</li>
<li>Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging%2C+amyloid%2C+and+Alzheimer%27s+disease%3A+a+perspective+in+honor%5BTitle%5D)+AND+%22of+Carl+Cotman.+Neurochem.+Res%22%5BJournal%5D)">Aging, amyloid, and Alzheimer's disease: a perspective in honor.</a> of Carl Cotman. Neurochem. Res. 28, 1705-1713 (2003).</li>
<li>Walsh, D. M., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abeta+oligomers+-+a+decade+of+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Abeta oligomers - a decade of discovery.</a> J. Neurochem. 101, 1172-1184 (2007).</li>
<li>Swerdlow, P. S., Finley, D., Varshavsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+immunoblot+sensitivity+by+heating+of+hydrated+filters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Enhancement of immunoblot sensitivity by heating of hydrated filters.</a> Anal. Biochem. 156, 147-153 (1986).</li>
<li>Ida, N., Hartmann, T., Pantel, J., Schröder, J., Zerfass, R., Förstl, H., Sandbrink, R., Masters, C. L., Beyreuther, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+hetergeneous+A4+peptides+in+human+cerebrospinal+fuid+and+blood+by+a+newly+developed+sensitive+Western+blot+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of hetergeneous A4 peptides in human cerebrospinal fuid and blood by a newly developed sensitive Western blot assay.</a> J. Biol. Chem. 271, 22908-22914 (1996).</li>
</ol>

Alzheimer hastalığı 1,4,5 patogenezinde Aβ agregasyonunun önemine rağmen, az sayıda çalışma açıklanan veya insan kortikal doku örnekleri 2 farklı Aβ multimerlerin sayısal dağılımı var. Yaygın olarak kullanılan immünohistokimyasal teknikler sabit kortikal doku, farklı multimer Aβ türlerin ayrımcılığa izin vermez. Sabitlenmemiş kortikal doku homojenatlarında, Aβ multimerleri ayrılmış ve biyokimyasal jel elektroforezi ve antikor tabanlı algılama yöntemleri kullanılarak değerlendirildi. Ancak, algılama...

<table><tbody><tr><td>Komple Proteaz İnhibitör Kokteyli Tabletleri</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>Sc-29130</td><td>25ml tampon içinde 1 tablet</td></tr><tr><td>BCA Protein Analiz kiti</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>XCell SureLock Mini-Cell ve XCell II Blot Modül Kiti CE İşareti</td><td>Invitrogen</td><td>EI0002</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS Numune Tamponu (2X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC1676</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE Numune İndirgeyici Ajan (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>NP0004</td><td></td></tr><tr><td>SeeBlue Plus2 Ön Boyalı Standart</td><td>Invitrogen</td><td>LC5925</td><td></td></tr><tr><td>Novex %10-20 Tricine Jel 1.0 mm, 10 kuyucuklu</td><td>Invitrogen</td><td>EC6625BOX</td><td></td></tr><tr><td>Nitroselüloz membranlar, 0.2 &amp;mu;m gözenek boyutu</td><td>Invitrogen</td><td>LC2000</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS Koşma Tamponu (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC1675</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tris-Glisin Transfer Tamponu (25X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC3675</td><td></td></tr><tr><td>SimplyBlue SafeStain</td><td>Invitrogen</td><td>LC6060</td><td>İmmunboyamayı etkilemez</td></tr><tr><td>ATX Ponceau S Kırmızı boyama çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>09276</td><td>İmmunboyamayı etkilemez</td></tr><tr><td>Kapak ısı ile mühürlenebilir plastik numune poşetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>0181225AA</td><td></td></tr><tr><td>A&amp;#946;(1-16) için 6E10 fare monoklonal antikoru</td><td>Covance</td><td>SIG-39320</td><td>WB için 1:1.000 ile 1:5.000 arasında seyreltin</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>ECL Fare IgG, HRP-Bağlı Tüm A&amp;#946; (koyundan)</td><td>GE Healthcare</td><td>NA931-1ML</td><td>1:10.000 oranında seyreltin</td></tr><tr><td>SuperSignal West Pico Kemilüminesans Substrat</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>34077</td><td></td></tr><tr><td>Kodak Biomax MR Film</td><td>Carestream Health</td><td>870 1302</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan kortikal doku aβ multimerlerin sds-page/immunoblot algılama antijen-epitop alma kullanarak homojenatlarında

SDS-PAGE/Immunoblot Detection of A&beta; Multimers in Human Cortical Tissue Homogenates using Antigen-Epitope Retrieval

Β-amiloid anormal katlama ve polimerizasyon (Aβ) peptid Alzheimer hastalığının patogenezinde nörodejeneratif kaskad başlatmak için düşünülüyor<sup&gt; 1</sup&gt;. Alzheimer hastalığında beyin senil plakların çekirdeklerinde bulunan β-sheet-zengin amiloid fibriller içine kendini agregasyonu eğilimli ya da 42 amino asit peptid - Aβ ağırlıklı bir 40. Giderek artan kanıtlar, bu düşük molekül ağırlıklı çözünen Aβ multimerleri fibriler Aβ amiloid daha toksik<sup&gt; 2</sup&gt;. Beyin dokusunda düşük ve yüksek molekül ağırlığı multimer Aβ türlerin tanımlanması ve ölçülmesi, Alzheimer hastalığı araştırmalarında önemli bir hedefi olduğunu ve aynı zamanda istihdam yöntemleri, diğer proteopathies toksik multimerlerin belirlenmesi ve tanımlanması için uygulanabilir<sup&gt; 3</sup&gt;. Doğal olarak ortaya çıkan Aβ multimerleri Aβ-spesifik antikorların immün SDS-poliakrilamid jel elektroforezi ile tespit edilebilir. Ancak, multimer Aβ ayrılması ve algılama, yüksek konsantrasyonlu kortikal homojenatlarında ve küçük gözenek boyutu nitroselüloz membranlar antijen alımı kullanımını gerektirir. Burada bir açıklık insan kortikal homojenatlarında hazırlanması için teknik, SDS-PAGE ile protein ayırma, ve antijen-epitopu alma / Aβ peptidin N-terminal bölgesi için antikor 6E10 Western blotting açıklar. Bu protokolü kullanarak, sürekli olarak insanlarda Alzheimer patolojisi ile Aβ monomerlerin, dimerleri, trimerler, tetramers ve kortikal doku yüksek molekül ağırlığı multimerleri algılayabilir.

Biz insan kortikal homojenatlarında açıklık, SDS-PAGE ile protein ayırma, antijen alımı ve Aβ peptid antikor immunoblotting hazırlanması için kullanılan bir tekniktir açıklar. Bu protokolü kullanarak, biz sürekli olarak insanlarda Alzheimer patolojisi olan kortikal doku monomerik ve multimer Aβ algılar.

İnsan Kortikal Doku Aβ multimerlerin SDS-PAGE/Immunoblot Algılama Antijen-epitop Alma kullanarak homojenatlarında

&beta;-amiloid (A&beta;) peptidinin anormal katlanması ve polimerizasyonunun, Alzheimer hastalığındaki nörodejeneratif kaskadı başlattığı düşünülmektedir...

Bu protokol, insan kortikal dokusunda beta malters tespitine olanak tanır. İlk olarak, homogenize edilmiş doku prob sonikasyonuna tabi tutulur ve düşük hızlı santrifüjleme ile berraklaştırılır. Ardından, indirgenmiş örnekler SDS tamponunda kaynatılır ve poliakrilamide yüklenir.Jel proteinleri bir nitrocelluloz membrana aktarılır ve membran, fosfat tamponlu salin içinde buharla ısıtılır. Son olarak, bir orbital çalkalayıcı üzerinde membran; önce birincil antikor, ardından HRP konjuge ikincil antikor ve x-ışını filmine maruz bırakılmadan önce luminal peroksit reaktifi ile gece boyu inkübe edilir. Merhaba, ben Emory Üniversitesi Yerkes Ulusal Primat Araştırma Merkezi Nörobilim Bölümü'ndeki Larry Walker laboratuvarından Rebecca Rosen.Bugün size, ısı ile indüklenen antijen geri kazanımıyla birlikte SDS jel elektroforezi ve immünoblotlama kullanarak Abeta multimerlerini ve kortikal homojenleri nasıl tespit edeceğinizi göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, Alzheimer hastası insanlardan ve yaşlı insan dışı primatlardan alınan tespit edilmemiş kortikal dokulardaki farklı Abeta multimerlerinin seviyelerini ve dağılımını incelemek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım.Yaklaşık yüz mil

sds-pageimmunoblot-detection-multimers-human-cortical-tissue

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Proteinlere palmitat arasında reversibl Ayrıca hücre içi protein ticaretinin önemli bir düzenleyicisidir. Bu birçok sinaptik proteinlerin palmitoylated edilir nöronların özel bir ilgi alanıdır. Biz birden fazla hücre tipleri ve dokuları için adapte edilebilir kültürü nöronlar içinde palmitoylated proteinleri tespit etmek için basit bir biyokimyasal yöntem kullanmaktadır.

Immünopresipitasyon ve Açil-Biotin Borsası (ABE) tarafından Yetiştirilmiş Hipokampal Nöronlar Protein Palmitoylation tespiti

İnsan ve fare beyin dokusu için üre / tiyoüre / SDS tamponu kullanılarak ortak bir protein ekstraksiyon protokolü sağlar: 2D-dige ve mini 2DE immunoblotting kendi müteakip özellik tayini ile protein indentification. Bu yöntem, insan biyopsi ve deneysel modellerden gerçekleştirilen daha güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için bir olanak sağlar.

Konsensus Beyin kaynaklı protein, 2D-DIGE ve Mini 2DE İmmünoblotting Hem kullanma İnsan ve Kemirgen Beyin proteomun Çalışmaları Ekstraksiyon Protokolü

Burada, ölüm sonrası insan beyin dokusundan giderek çözünmeyen/kümelenmiş alfa-sinükleinin (α-syn) izolasyonu için bir protokol sunuyoruz. Deterjan mukavemeti arttırılmış tamponların ve yüksek hızlı ultrasantrifüj tekniklerinin kullanılmasıyla, hastalıklı ve hastalıksız dokularda α-syn agregasyonunun değişken özellikleri incelenebilir.

Parkinson Brains gelen Çözünür ve çözünmez alfa-sinüklein Sıralı Ekstraksiyon

Spesifik kappa (Vκ) hafif zincirlerine sahip insan ve fare IgM antikorları için antijen içeren protein kısımlarını tanımlamak için bir protokol sunuyoruz. Bu protokol IgM sınıfı antikorlarla sınırlı değildir, ancak immünopresipitasyonlar sırasında antijenlerini yeterince yüksek afinite ile hedefleyen tüm immünoglobulin izotipleri için geçerlidir.

Kappa (VK) için Antikor Bağlama Özgünlük Hafif Zincir içeren İnsan (IgM) Antikorlar: Polysialic Asit (PSA) bir Vaka Çalışması olarak NCAM Bağlı

stabilize edici ve yeni bir iki boyutlu poliakrilamit jel elektroforez bağlanmış bir amin-reaktif protein çapraz bağlayıcı kullanılarak modifiye edilmemiş doku lizattan doğal protein kompleksleri ayırmak için bir yöntem olup (PAGE) sistemi sunulmuştur.

Multimer-PAGE: Biyolojik örnekler olarak yakalamak için bir yöntem ve özümleme protein kompleksleri

Burada yazarlar, saflaştırılmış bir monoklonal antikor ve nokta-leke hibridizasyonulama yoluyla peptit taraması kullanarak doğrusal bir antijenik epitop tanımlamak için basit ve verimli bir protokol sunmaktadır. Tanımlanan epitop daha sonra terapötik ve tanısal uygulamalarda kullanılabilir.

Peptid, bir monoklonal antikor tarafından tanınan lineer B-hücresi epitopunun belirlenmesi: Tarama destekli

Deterjan çözünmez protein toplamları--dan insan öldükten sonra beyin zenginleştirme için bir kısaltılmış Ayırma Protokolü tanımlanır.

Deterjan çözünmez Protein toplamları--dan insan öldükten sonra beyin zenginleştirme

Bu iletişim kuralı bir sentetik peptid vitro üzerinden Aβ reaksiyonlar hazırlamak için ve göreli Aβ oligomer miktarda analiz kurutma bir nokta tarafından değerlendirmek için açıklar.

A11-pozitif β-amiloid Oligomer hazırlama ve değerlendirme sistemini kullanarak Dot Blot Analizi

Bu çalışma, bir pomalidomür bazlı sentez ve karakterizasyon açıklar, yeni bir yaklaşım olarak bir roman yaklaşımı ve E3 Ubiquitin ligaz cereblon (CRBN), thalidomür analogların hedefi bozulması teşvik etmek.

Pomalidomür tabanlı homo-PROTACs tarafından E3 Ubiquitin ligase Cereblon kimyasal Inaktivasyonu

Protein-protein etkileşimleri, hedef proteinlerin işlevini aydınlatmak için önemlidir ve ko-immünopresipitasyon (co-IP), PPI'leri kolayca doğrulayabilir. Epitop etiketli bir proteini kodlayan bir plazmiti HEK-293 hücrelerine geçici olarak transfekte ettik ve iki hedef proteinin bağlanmasını kolayca doğrulamak için bir immünopresipitasyon yöntemi geliştirdik.

Protein-Protein Etkileşimlerini İncelemek için Anti-Epitop Etiket Afinite Jeli ile İmmünopresipitasyon

Burada, insan γ-sekretazı yeniden yapılandıran bir maya sistemini tarif ediyoruz. Bu sistem, aktiviteyi etkileyen mutasyonların tanımlanmasına ve incelenmesine ve γ-sekretaz inhibitörlerinin (GSI'ler) taranmasına izin verir. Ailesel Alzheimer hastalığı mutantlarının fonksiyon kaybı özelliklerini kullanarak, γ-sekretaz modülatörlerini (GSM'ler) taramak mümkündür.

Saccharomyces cerevisiae Amiloid Beta Üretimini Etkileyen Genleri, Mutasyonları ve Kimyasalları γ-Sekretaz ile Taramak için Alzheimer Hastalığı Modelleri

Öğrenin insan kortikal doku homojenatlarında Aβ multimerlerinin SDS-PAGE ve immunoblot ile antijen-epitop alma yöntemiyle güvenilir tespitini. Bu protokol Alzheimer hastalığı patolojisini anlamak için değerlidir.

İnsan Kortikal Doku Aβ multimerlerin SDS-PAGE/Immunoblot Algılama Antijen-epitop Alma kullanarak homojenatlarında

Daha fazla video keşfet