MALDI Numune Hazırlama: Ultra İnce Tabaka Yöntemi

Özellikle proteinlerin doğru kütle tayini için yararlı olan ultra ince tabaka yöntemiyle ilgili CHI Lab eğitimine hoş geldiniz. Kütle spektrometresinin hassas doğası nedeniyle, plakayı temizlemek için yalnızca HPLC sınıfı reaktiflerin yanı sıra pudrasız lateks veya nitril eldivenler kullanıyoruz. Dönüşümlü olarak metanol suyu ile durulayın ve son olarak tekrar metanol ekleyin.

Her durulama arasında, lens mendili kullanarak fazla çözücüyü nazikçe silin. Temiz bir tabak elde etmek için bu yıkama adımlarını gerektiği kadar tekrarlayabilirsiniz. Ve temizlendikten ve kuruduktan sonra, plaka hemen kullanılmalıdır.

Temiz MALDI plakasına 20 ila 30 mikrolitre ince tabaka alt tabaka solüsyonu uygulayın ve yayın. Burada, plakanın çizilmesini önlerken çözeltiyi eşit şekilde yaymak için bir P two 50 pipet ucu kullanıyoruz. İnce tabaka kurudukça, varsa kalan su damlacıklarını bir silme mendiliyle nazikçe kurulayarak temizleyin.

Ardından, ince tabakayı düzgün bir şekilde oluşturmak için plakayı bir Kim mendiliyle tek bir yumuşak hareketle nazikçe silin. Son olarak, Kütle spektrometresinin kirlenmesini önlemek için plakanın kenarlarını temizleyin. Numunenizi uygulamadan önce ince tabakayı test etmek çok önemlidir.

Kristallerin homojen olmadığı yerlerde test noktasının kuruması çok uzun sürerse, sorun ince tabakanın kendisinde veya matris çözeltisinde olabilir, plakayı temizleyin, ince tabakayı tekrar uygulayın ve yeniden test edin. İnce tabakayı lekelerken, lekelerinizin kuruyana kadar buharlaşmasını istemezsiniz. Bunun yerine, kristalleşme yavaşladığında ve durduğunda, fazla çözücüyü çıkarın.

Bir vakum aspiratörü kullanarak, tuzlar ve deterjanlar gibi kirleticilerin yanı sıra yüksek analit konsantrasyonunun varlığı kristalleşmeyi engelleyebilir. Daha fazla numune seyreltmesi kristalleşmeyi iyileştirebilir Karıncaları numuneye yakın bir yerde bulun. Bu, plakanın numune noktasından kalibrasyon noktasına hareket ettirildiği sahte dahili kalibrasyona izin verecektir.

Numune alımı sırasında, spektruma CAS'ın birkaç lazer atışı ekleyerek, bu yaklaşım tek başına harici kalibrasyondan daha yüksek bir kütle doğruluğu kalibrasyonunu garanti eder. Analit ile etkileşime girebilecek tuz veya deterjan gibi kirleticileri yıkamak çok önemlidir. İyonlaşma. Bunu yapmak için, HPLC'de buz gibi, %0.1 Tri Fluor asetik asit damlatın, suyu doğrudan lekelerin üzerine not edin.

Burada gösterildiği gibi bir vakum Aspiratörü kullanarak yıkama solüsyonunu çıkarın. Bu yöntem, hem zar hem de çözünür proteinler için mükemmel spektrumlar üretir.