Sıçan Pulmoner Endotel Hücrelerinin Bakteriyel Enfeksiyonunu Takiben Sitotoksik Amiloidlerin Elde Edilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:14 dk. • September 26th, 2025
Tek katmanlı sıçan pulmoner endotel hücrelerini alın.
Hücreleri tamponla yıkayın. Pseudomonas aeruginosa'nın bir süspansiyonunu ekleyin ve inkübe edin.
İnkübasyon sırasında bakteriler hücrelerle temas eder ve efektör proteinleri sitoplazmaya enjekte eder.
Bu efektör proteinler, mikrotübül parçalanmasına ve hücre iskeleti bozulmasına neden olur.
Hücre iskeleti bozulması, hücresel stres tepkilerini aktive ederek yanlış katlanmış, sitotoksik protein agregatlarının-amiloid oligomerlerinin oluşumuna yol açar.
Efektör proteinler ayrıca hücre zarında gözenekler oluşturarak amiloid oligomerinin hücre dışı boşluğa salınmasına izin verir.
Ek olarak, hücre iskeleti bozulması hücresel morfolojiyi değiştirerek endotelyal tek tabakada hücreler arası boşluklar oluşturur.
Ardından, tek tabakayı ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Hücreler arası boşluklar belirginleştiğinde, inkübasyonu sonlandırın.
Ardından, sitotoksik amiloidler içeren süpernatanı toplayın ve kalıntıları peletlemek için santrifüjleyin.
Süpernatanı toplayın ve kalan bakterileri uzaklaştırmak için filtreleyin.
Sitotoksik amiloidler içeren hasat edilen süpernatant, daha ileri analizler için hazırdır.
Sitotoksik süpernatan üretmek için, 150 sa
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin