Üronik Asit Karbazol Testi Kullanılarak Bakteriyel Aljinatın Miktar Tayini

Et suyunda Pseudomonas aeruginosa bakterisinin bir kültürünü alın.

Kültürü izolasyon agarı üzerine yerleştirin ve bakteri üremesini ve üronik asitlerden oluşan bir ekzopolisakkarit olan aljinat üretimini teşvik etmek için inkübe edin.

Bakteri çimine izotonik salin ekleyin ve bakteri hücrelerini aljinat ile birlikte toplamak için kazıyın.

Süspansiyonu bir tüpe aktarın, içeriği dağıtmak için girdap yapın ve enzimatik bozulmayı önlemek için buzun üzerine yerleştirin.

Bakteri yoğunluğunu belirlemek için optik yoğunluğu veya OD'yi ölçün.

Bakteri süspansiyonunu asit-borat çözeltisine ekleyin ve aljinatı üronik asit monomerlerine hidrolize etmek için karıştırın.

Kromojenik bir reaktif olan karbazol ekleyin ve inkübe edin. Asidik koşullar altında reaktif, renkli kompleksler oluşturmak için üronik asitlerle reaksiyona girer.

Aljinat konsantrasyonunu yansıtan üronik asit seviyelerini ölçmek için absorbansı ölçün.

Standart bir eğri kullanarak aljinat konsantrasyonunu belirleyin, ardından birim biyokütle başına aljinat üretimini hesaplamak için ölçülen bakteri hücre yoğunluğuna bölün.

Üronik asit karbazol tahliline başlamak için, test edilecek istenen suşun saf kültüründen tek bir koloni tanımlayın ve