Antikor Bazlı Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi Kullanılarak Bakteriyel Aljinatın Miktarının Belirlenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:20 dk. • September 26th, 2025
Pseudomonas aeruginosa bakterisi tarafından üretilen koruyucu bir ekzopolisakkarit olan aljinat içeren bir numune içeren bir mikroplaka alın.
Numune aljinat konsantrasyonunu ölçmek için aljinattan türetilmiş bir standardın seri seyreltmesini hazırlayın.
Moleküllerin kuyu yüzeyine yapışmasını kolaylaştırmak için bir kaplama tamponu ekleyin ve inkübe edin.
Bağlanmamış molekülleri çıkarmak için yıkayın.
Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini maskelemek için bloke edici bir ajan ile inkübe edin.
Yıkayın, ardından aljinata özgü birincil antikorlarla inkübe edin.
Tekrar yıkayın, ardından birincil antikorları hedef alan enzim konjuge ikincil antikorlarla inkübe edin.
Yıkayın ve ardından enzimin renkli bir ürün üretmek için oksitlediği kromojenik bir substrat ile inkübe edin.
Kolorimetrik algılamayı etkinleştirmek için reaksiyonu durduran ve rengi artıran asidik bir çözelti ekleyin.
Bir mikroplaka okuyucu kullanarak renk yoğunluğunu ölçün.
Standart seyreltmelerin yoğunluklarından standart bir eğri oluşturun ve aljinat konsantrasyonunu belirlemek için numune yoğunluğunu çizin.
Bir mikropipet kullanarak, toplanan numunenin 50 mikrolitresini işlenmemiş 96 oyuklu bir plakaya ekleyin.
Daha sonra kuyucuklara
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin