JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:18 dk • August 31st, 2026
Faustovirus olarak bilinen bir dev virüs ile enfekte edilmiş bir amip kültürü alın.
Faustovirus içeren kültür süpernatantını toplayın.
Glow-discharge işlemi uygulanmış bir elektron mikroskobu ızgarası üzerine süpernatantı damlatın.
Viral partiküllerin ızgaraya adsorbe olması için inkübe edin.
Bağlanmamış viral partikülleri uzaklaştırmak için ızgarayı filtre kağıdı üzerinde kurulayın.
Bir damla amonyum molibdat damlatın.
Ammonium molybdate, virüsün etrafındaki ızgaraya bağlanarak arka planı koyulaştırır ve böylece görüntüleme sırasında kontrastı artırarak negatif boya görevi görür.
Izgarayı filtre kağıdına bastırarak fazla amonyum molibdatı uzaklaştırın.
Gridi bir petri kabına yerleştirin ve kurumasını bekleyin.
Ardından, ızgarayı numune tutucusuna yerleştirin.
Tutucuyu elektron mikroskobuna yerleştirin.
Faustovirus'un bir görüntüsünü yakalayın ve daha fazla analiz için Faustovirus'un boyutunu ölçün.
Elektron mikroskopisini gerçekleştirmek için, pozitif örnekten beş mikrolitre glow-discharge uygulanmış ızgara üzerine damlatın ve yaklaşık 20 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. Izgarayı dikkatlice kurutun, ardından az miktarda %1 amonyum molibdat ekleyin ve 10 saniye boyunca inkübe edin. Damlayı dikkatlice uzaklaştırdıktan sonra, ızgaranın beş dakika boyunca kurumasını bekleyin. Ardından, elektron mikroskobunu 200 kiloelektron volt değerine ayarlayın. Sonrasında, ızgarayı tutucuya yerleştirin ve tutucuyu mikroskoba yerleştirin. Vakum genel bakış simgesine tıklayarak vakumu kontrol edin. Ardından, valfleri kapatın; gözleme başlamadan önce spot boyutunu beş ve büyütmeyi 25,000 olarak ayarlayın. Kazanım ekranında bir dev virüs tespit ettikten sonra, virüsü ölçmek için ölçüm aracını kullanın.
Metin protokolüne uygun olarak moleküler biyoloji ve viral genom dizileme işlemlerini gerçekleştirin.