Name: Nöron Soma ve Aksonlar compartmentalization mikroakışkan Aygıt Fabrikasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: Öğrenin, PDMS mikroakışkan cihaz üretimi ile nöron soma ve aksonlarını kompartmantalize etme tekniğini. Bu yöntem, nörobiyoloji araştırmalarında saf akson fraksiyonları elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bölüm 1: mikroakışkan nöron cihaz hazırlanması <ol><li> 3 &quot;SU-8 fotolitografi tarafından yapılmış bir model silikon gofret polidimetilsiloksan (PDMS) mikroakışkan kalıp döküm için kullanılır. Master kalıpları, ya da gibi SU-8 desenli silikon gofret bakın&quot; efendileri &quot;. </li><li> PDMS 10:1 w / w oranında sertleştirici ile karıştırılır, PDMS 10 gram, 1 gram sertleştirici eklenir. </li><li> PDMS sonra iyice karıştırılır ve silikon yonga üzerine dökülür. Silikon gofret 10 cm polistren Petri kabı içinde yer alıyor. Yaklaşık 4 mm kalınlığı ile ana kapsayacak şekilde PDMS, yaklaşık 12 g 15 g alır. </li><li> PDMS ile ana ardından Petri kabı kapağı kapalı bir vakum desikatöre yerleştirilir ve vakum uygulanır. Bu sertleştirici karıştırma sırasında tanıtıldı PDMS hava kabarcıkları yardımcı olmak için yapılır. Bu hava kabarcıkları için yaklaşık 15 dakika sürer. </li><li> PDMS ile ana desikatöre kaldırılır. 0.45 um filtresi ile bir hava tabancası kalan tüm kabarcıklarını çıkarmak için kullanılır. </li><li> Usta daha sonra tedavisi için 1 saat için 80 ° C sıcak plaka üzerine yerleştirilir. </li></ol> Not: bir vakum desikatöre mevcut değilse, ana birkaç saat oda sıcaklığında bırakılmalıdır. Bu hava kabarcıkları sonunda kendi kaybolacaktır. Sıcak bir levha mevcut değilse, PDMS oda sıcaklığında 24 saat sonra tedavi olacak. Not: ana kür işlemi sırasında düzey olduğundan emin olmak da önemlidir. Bölüm 2: Nöron mikroakışkan cihaz Kesme <ol><li> PDMS ana tedavi edildikten sonra, temiz bir kaput alınır. </li><li> Cerrahi bıçak kullanarak, bir daire çevresinde cihazların kesilir. Bir PDMS içine bıçak ekler, silikon yonga ile temas kurmaya ama gofret çok fazla baskı önemlidir, başka ana çatlar. </li><li> Cihazlar (her 3 &quot;Silikon Yüksek Lisans başına 4 cihazları vardır) etrafında bir daire şekilde kesilmiş, PDMS ana dikkatlice kaldırdı. Önceden kesilmiş eklenir Bu cerrahi bıçak hafifçe bükerek başlamış olabilir . </li><li> Sonra, rezervuarlar 8 mm doku biyopsisi yumruk kullanarak cihazın içine yumrukladı. </li><li> Cihazlar, sonra dörde ve aşırı PDMS cihaz Corning Kapak Cam (No: 1) 24 mm x 40 mm uyacak böylece uzakta kesilmiş. Azot havanın herhangi bir aşırı enkaz darbe için kullanılır. İnatçı enkaz 3M Scotch Marka 471 vinil bant kullanarak silinebilir. </li></ol> Bölüm 3: Plazma cam kapak fişleri cihazlar yapıştırma. <ol><li> Plazma Cleaner kapak fişleri harrick nöron cihazlar bağ kullanılır. Kısacası, plazma temizleyici cihazlar yerleştirilir ve bir vakum pompası odasından havayı tahliye etmek için kullanılır. </li><li> Vakum basıncı 300 milliTorr ulaşıldıktan sonra, güç elektrik bobini açık ve yüksek ayarlanır. </li><li> - Elektrik bobini &quot;elektronlar, iyonlar ve nötr atomlar veya moleküller oluşan kısmen iyonize gaz, plazma oluşturur <a href="http://www.harrickplasma.com/plasma_physics.php">http://www.harrickplasma.com/plasma_physics.php</a> odasında kalan hava moleküllerini sol. Plazma reaktif türler, cam ve kalıcı bir bağ oluşturur birlikte yerleştirildiği zaman, cihaz, yüzeyleri oluşturur. Plazma da, sıvıların yanı sıra kolaylaştırmak yardımcı hidrofilik yüzeyleri, döner. Ayrıca, plazma temizleyici cihazlar sterilize eder. Mikroakışkan aygıtı içeren PDMS cihazın yüzey plazma temizleyici, cam slaytlar ile birlikte ön yüzü yukarıya yerleştirilir. Cam ve mikroakışkan cihaz plazma tedavi yüzeyler daha sonra steril 60 mm yemekler yerleştirilir, temiz bir tezgah birbirleri ile temas halinde monte edilir. Tedavi yüzeyleri sıkı bir geri dönüşü olmayan bir bağ oluşturur. </li><li> 10 dakika içinde plazma cihazları cam yapıştırma, Poli-L-Lizin (PLL) cihaza eklenir. 10 dakika sonra, cihazın hydrophilicity PLL cihaz girmek için zor hale düşecektir. Not: PLL eklenmesinden sonra cihaz hava kabarcıkları kontrol etmek için önemlidir. Hücreler okside olduğu gibi ana kanal içinde hava kabarcıkları, istenmeyen. Varolan herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarmak için kolay bir yöntem, 150 ul (bu durumda PLL) sıvı ile dolu bir P200 pipetlemeyin kullanmak için, ana kanal açılışında ucu doğrudan yerleştirin ve zorla P200 bastırın. Bu birkaç kez tekrar edilmesi gerekebilir ama sonunda kuvvet pipetlemeyin kabarcıkları sürücü olacaktır. </li><li> PLL içeren cihazlar, 37 standart doku kültürü inkübatör geceleme inkübe izin ° C ile% 5 CO 2 . </li><li> Ertesi gün de,kötü alışkanlıklardan otoklavlanmış dH2O iki kez hızlı bir şekilde durulanır. Bu işlem sırasında, sıvı tamamen sadece rezervuarları ana kanallar kaldırıldı asla. Ana kanal sıvı kaldırma kabarcıkları tanıtacak. 2 hızlı durular sonra, cihazlar otoklavlanmış dH2O ile doldurulur ve en az 3 saat bir inkübatör içine geri yerleştirilir ya da gecede vardır. </li><li> Ertesi gün, cihazlar yine otoklavlanmış dH2O ile 2 kat hızlı durulanır. Ardından, gerekli takviyeleri B27 ve glutamax kültür birincil sıçan nöron içeren sinir bazal medya, cihazlar eklenir. Cihazlar, ileride kullanmak üzere inkübatör geri yerleştirilir. Şimdi, cihazlar nöronların tohumlama için hazırız. </li></ol>

<ol><li>Park, J. W., Vahidi, B., , A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research.%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 1, 2128-2136 (2006).</li>
<li>Taylor, A. M., Blurton-Jones, M., Rhee, S. W., Cribbs, D. H., Cotman, C. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury%2C+regeneration+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nat Methods. 2, 599-605 (2005).</li>
</ol>

Bu video, cihaz bize hücre gövdeleri, dendrit ve akson bir karışımını içeren bölmesi microgrooves ayrı bir saf aksonal kesir elde etmek için içeri kültür nöronlar için kullanabileceğiniz bir PDMS mikroakışkan cihaz yapmak ve hazırlamak için nasıl göstermiştir . Bu cihazlar, araştırmacı, çeşitli tedavilerin etkilerini incelemek yanı sıra fiziksel yaralanma aksonlar yürütmek ve bu tedaviler nöronlar üzerindeki etkileri gözlemlemek için bir platform sağlamak için izin verir. Cihaz, aynı zamanda taşıma çalışmaları kolaylaştırmak yardımcı kültür nöronlar için bir düzeyi sağlar. Buna ek olarak, hücre kültürü bölmesi akson bölmesi ayrı microgrooves, mümkün cihazın diğer tarafında direkt tedavisi ile etkili olmadan bir cihazın yan tedavisinde iki bölmeleri arasında akışkan izolasyon sağlar. Bu özellik, araştırmacı, sinyal iletimi ve ulaşım tedavi sonucunda ortaya çıkan etkileri çalışma sağlar.

<table><tbody><tr><td>PDMS</td><td>Reaktif</td><td>Dow Corning</td><td></td><td>Sertleştirici ajan içeren Sylgard 184; size en yakın satıcıyı bulmak için lütfen Dow Corning ile iletişime geçin</td></tr><tr><td>Plazma Temizleyici</td><td>Araç</td><td>Harrick Scientific Products, Inc.</td><td></td><td>http://www.harrickplasma.com/</td></tr><tr><td>Neural Basal Media</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>21103-049</td><td>Neural Basal Media, Invitrogen'in Gibco hücre kültürü reaktifleri serisi altından temin edilmektedir.</td></tr><tr><td>B27</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>17504-044</td><td>B27, Invitrogen'in Gibco hücre kültürü reaktifleri serisi altında sunulan tescilli bir takviyedir.</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td>Glutamax, Invitrogen'in Gibco hücre kültürü reaktifleri serisi altında sunulmaktadır.</td></tr><tr><td>Cornig No. 1 Lamel</td><td>lamel</td><td>Corning</td><td>Corning No. X2935 244</td><td>Fisher Scientific üzerinden temin edilebilir, Fisher Katalog numarası 12-531D</td></tr><tr><td>60 mm Petri Kabı</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-13A</td><td>Cama bağlı düzeneği muhafaza etmek için 60 mm polistiren steril petri kapları kullanılır.</td></tr><tr><td>BD Falcon 50 ml Tüp</td><td>Araç</td><td>BD Biosciences</td><td>Falcon No. 352098</td><td>Fisher Scientific katalog numarası 14-959-49A üzerinden temin edilebilir</td></tr><tr><td>BD Falcon 15 ml tüp</td><td>Araç</td><td>BD Biosciences</td><td>Falcon No. 352097</td><td>Fisher Scientific katalog numarası 14-959-70C üzerinden temin edilebilir</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-1274</td><td></td></tr><tr><td>Yeni Öğe</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

nöron soma ve aksonlar compartmentalization mikroakışkan aygıt fabrikasyon

Fabrication of a Microfluidic Device for the Compartmentalization of Neuron Soma and Axons

Bu video, Polidimetil siloksan (PDMS) kültür nöronlar için mikroakışkan bir cihaz imal etmek için kullanılan yumuşak litografi tekniği göstermektedir. Daha önce, bir silikon yonga tasarımı ile SU-8 ve fotolitografi bir ana kalıp oluşturmak için, ya da biz sadece bir &quot;master&quot; olarak ne anlama kullanarak nöron mikroakışkan cihaz için desenli oldu. Sonra, silikon polimer PDMS sonra 1 saat için 80 ° C PDMS ısıtma ile tedavi ustanın üstüne dökün. PDMS cihazın olumsuz bir kalıp oluşturur. PDMS sonra dikkatlice kesilmiş ve ana uzak kaldırdı. Delik rezervuarları nerede olacak yumrukladı ve aşırı PDMS cihazdan kesilmiş. Azot cihazdan herhangi bir aşırı enkaz darbe için kullanılır. Bu noktada cihazlar artık kullanıma hazırdır ve plazma sterilizatör / temiz ya da geri dönüşümlü cam kapak cihaz sadece kapak cam üstüne koyarak bağlı olabilir ya Corning No: 1 cam kapak yapıştırılır. Geri dönüşümlü yapıştırma cam cihazın ayrı bir video kapalı ve cihaz% 70 etanol veya otoklav ile sterilize edilmelidir ilk gerektirir. Böylece başka tedaviye gerek yoktur Plazma tedavi cihazları sterilize eder. Bu yüzeyler hidrofilik iken, 10 dakika içinde plazma tedavi cihazlar sıvı eklemek için cihazlar, plazma tedavi ederken, ancak, önemlidir. Cihaz sıvı eklemek için 10 dakikadan daha uzun bir süre beklemek zor sıvı cihaz girmek için yapar. Nöron cihazlar genellikle cam ve 0.5 mg / ml pH 8.5 borat tamponu poli-L-lisin (PLL) kapsayacak şekilde plazma bağlı cihaz hemen eklenir. PLL ile inkübe en az 3 saat sonra, cihazlar her yıkama arasında en az 15 dakika dH2O su ile en az 3 kez yıkanır. Sonra, su çıkarılır ve taze medya cihazına eklenir. Bu noktada cihaz kullanıma hazır. Tüm medya cihazdan çıkarmak hiç bu noktada hatırlamak önemlidir. Her zaman ana kanal medya bırakın.

Bu video kültür nöronlar için mikroakışkan bir cihaz farbricate için kullanabileceğiniz Polidimetil siloksan (PDMS) ile yumuşak litografi tekniği göstermektedir.

Nöron Soma ve Aksonlar compartmentalization mikroakışkan Aygıt Fabrikasyon

Bu videoda, ... için bir mikroakışkan aygıt üretmek amacıyla kullandığımız polidimetilsiloksan (PDMS) ile yumuşak litografi tekniğini gösteriyoruz.

Dr. Newly John'ın laboratuvarına hoş geldiniz. John Laboratuvarı, biyolojik uygulamalar için mikroakışkan platformların mühendisliği konusunda uzmanlaşmıştır. Bu videoda, primer nöronların bölmelere ayırılması ve kültürlenmesi için tasarlanmış bir mikroakışkan cihazın üretimini ve kullanımını göstereceğiz.Nöron cihazı ilk kez Ağustos 2005'te Nature Methods'ta yayınlanmıştır. Tanıtıldığı günden bu yana nöron cihazı, dünyanın dört bir yanındaki iş birlikçileri tarafından yaygın olarak kullanılmıştır. Nöron cihazı, fotolitografi ile önceden oluşturulmuş cihazın bir SUA desenini içeren bir silikon gofret üzerine dökülmüş bir PDMS parçasından oluşur.Cihaz üç ana özelliğe sahiptir: sekiz milimetre çapında dört rezervuar; her biri 1,5 milimetre genişliğinde, yedi milimetre uzunluğunda ve yüz mikron yüksekliğinde iki ana kanal ve iki ana kanalı birbirine bağlayan, 10 mikrometre genişliğinde ve üç mikrometre yüksekliğinde mikro oluklar. Mikro olukların uzunluğu 150 mikron ile 900 mikron arasında değişebilse de, standart tercih edilen uzunluk 450 mikrondur. Cihaz, ana kanallar ve mikro oluklar dikey olacak şekilde gözlemlendiğinde, olukların solundaki rezervuarların ana kanallar aracılığıyla birbirine bağlı olduğu, sağdaki rezervuarlar için de durumun aynı olduğu görülmektedir.Bu özellik, hücrelerin yüklenmesini ve medyumun değiştirilmesini mümkün kılan önemli bir özellik olan sıvının ana kanal boyunca akmasını sağlar. Nöron cihazının, geleneksel doku kültürü platformlarına göre üç temel avantajı vardır. Birincisi, hücre gövdelerinin (soma) ve aksonların bölmelere ayrılmasına olanak tanır; nöron cihazı ile saf aksonal fraksiyonlar elde etmek mümkündür.Mikro olukların boyutu ve uzunluğu, testere gövdelerinin karşıya geçmesini önlerken aksonların diğer ana kanaldan geçmesine olanak tanır. İkinci olarak, cihazın tasarımı sayesinde ve hidrostatik basınçtan yararlanarak, cihazın hacmini ve rezervuarlarını bir tarafta diğerine göre daha yüksek tutarak cihazın hücre tarafına ve/veya akson tarafına ayrı ayrı işlemler uygulanması mümkündür. Ve üçüncüsü, cihazın saf aksonal fraksiyonu vakumlu emişle kesilebilir, böylece araştırmacının aksonal rejenerasyonu incelemesine ve gözlemlemesine imkan sağlanır.Araştırmacı Hina Lee şimdi mikroakışkan nöron cihazının hazırlanışını gösterecek. Polidimetilsiloksan (PDMS) mikroakışkan kalıbı dökmek için fotolitografi ile SU-8'den oluşturulmuş bir desene sahip 3 Ang silikon göfer kullanılır. SU-8 desenli silikon göfere ana kalıplar veya kısaca masterlar diyoruz.PDMS, 10'a bir ağırlık oranında kürleme ajanı ile karıştırılır. Örneğin, 1,5 gram kürleme ajanı başına 15 gram PDMS kullanılır. Ardından PDMS iyice karıştırılır ve silikon gofret üzerine dökülür.Silikon gofret, 10 santimetrelik bir polistiren Petri kabı içerisindedir. MA'ları yaklaşık dört milimetre kalınlığında kaplamak için yaklaşık 12 gram ile 15 gram arasında PDMS kullanılır. Ardından, PDMS içeren kalıp, Petri kabının kapağı açık bir şekilde vakumlu desikatöre yerleştirilir ve vakum uygulanır.Bu işlem, kürleme ajanının karıştırılması sırasında PDMS'e giren hava kabarcıklarının giderilmesine yardımcı olmak için yapılır. Hava kabarcıklarının temizlenmesi yaklaşık 15 dakika sürer. PDMS içeren master, vakumlu desikatörde 15 dakika bekledikten sonra dışarı çıkarılır.PDMS kalıpta hâlâ birkaç hava kabarcığı bulunmaktadır. Kalan tüm kabarcıkları gidermek için 0,45 mikron filtreli bir hava tabancası kullanılır. Ardından kalıp, kürlenmesi için bir saat boyunca 80 derecelik bir sıcak plakaya yerleştirilir.Vakumlu bir desikatör mevcut değilse, karışım birkaç saat boyunca oda sıcaklığında bırakılabilir. Hava kabarcıkları zamanla kendiliğinden yok olacaktır. Isıtıcı tabla mevcut değilse, PDMS 24 saat sonra oda sıcaklığında kürlenecektir.Kürleşme işlemi sırasında kalıbın düz olduğundan emin olmak önemlidir. PDMS kalıpta kürleştikten sonra, cerrahi bir bisturi kullanılarak temiz bir kabine alınır. Cihazların çevresine dairesel bir kesik atılır.Bıçağı, silikon gofretle temas edecek şekilde PDMS'ye yerleştirmek önemlidir, ancak gofrete çok fazla basınç uygulanmamalıdır; aksi takdirde master, cihazların etrafı boyunca tamamen kesilmiş bir daire şeklinde çatlayacaktır. Her bir üç inçlik silikon master'da dört adet cihaz bulunur. PDMS, master'dan dikkatlice kaldırılır.Bu işlem, cerrahi bıçak önceki kesiğe yerleştirilirken nazikçe döndürülerek başlatılabilir. Kalıp üzerindeki PDMS cihazları gerçekten incedir. Sekiz milimetrelik bir doku biyopsi punch'ı kullanılarak cihaza yukarı bakan rezervuarlar açılır.Zımba içinde kalan kalıntılar bir çubukla dışarı itilir. Ardından cihazlar dört parçaya bölünür ve cihazın bir Corning lam üzerine düzgünce yerleşmesi için fazla PDMS kısımları budanır. Kalan kalıntıları temizlemek için 24 mm x 40 mm boyutunda 1 numara cam lam ve azot gazı kullanılır.İnatçı kalıntılar, 3M Scotch Brand 4 7 1 vinil bant kullanılarak da temizlenebilir. Temizlenen cihazlar artık plazma bağlanmasına hazırdır. Nöron cihazlarını lamlara kısa süreliğine bağlamak için bir herrick plazma temizleyici kullanılır.Cihazlar ve lameller bir tepsiye yerleştirilir; ardından tepsi plazma temizleyiciye konur ve oda içerisindeki havayı tahliye etmek için bir vakum pompası kullanılır. PDMS cihazlarının ön yüzü yukarı bakacak şekilde yerleştirildiğinin belirtilmesi önemlidir. Yani, plazma gazına maruz kalmaları için tasarım yüzü yukarıya gelecek şekilde konumlandırılırlar.Vakum basıncı 300 millitorr seviyesine ulaştıktan sonra, elektrik bobinine güç verilir ve yüksek ayara getirilir. Plazma oluşumuna yardımcı olmak amacıyla, hazneye az miktarda hava girmesini sağlamak için kapak hafifçe aralanır. Cihazlar ve örtü camı iki dakika boyunca plazma işlemine tabi tutulur.Haznedeki mor renge dikkat edin. Bu gerçek plazmadır. Elektrik bobini; elektronlar, iyonlar ve nötr atomlar veya moleküllerden oluşan kısmi iyonize bir gaz olan plazmayı oluşturur.Plazma, camın ve cihazın yüzeyinde, birlikte yerleştirildiklerinde kalıcı bir bağ oluşturacak reaktif türler meydana getirir. Plazma ayrıca yüzeyi hidrofilik hale getirerek sıvıların eklenmesini kolaylaştırır. Plazma temizleyici aynı zamanda cihazları sterilize eder.İki dakikalık plazma işlemi sonrası, vakumdaki güç kapatılır ve hazneye hava verilir. Plazma ile işlem görmüş cam ve mikroakışkan cihaz yüzeyleri, steril bir kabin içerisinde birbirine temas edecek şekilde birleştirilir. Cihazlar daha sonra steril 60 milimetrelik petri kaplarına yerleştirilir.Camın ve cihazın plazma ile işlem görmüş yüzeyleri sıkı ve geri dönüşümsüz bir bağ oluşturur. Plazma bağlama işleminden sonraki 10 dakika içinde, cihaz cama sabitlenir ve cihaza polyol lysine eklenir. 10 dakika sonra, cihazın hidrofilik özelliği azalacaktır.PLL'nin cihaza girmesini zorlaştırır. PLL eklemesinden sonra cihazda hava kabarcığı olup olmadığını kontrol etmek önemlidir. Mevcut hava kabarcıklarını gidermenin kolay bir yolu, 100 microliters sıvı ile doldurulmuş bir P 200 pipet kullanmaktır.Bu durumda, PLL ucunu doğrudan ana kanal açıklığına yerleştirin ve ardından P 200'e kuvvetle basın. Bu işlem birkaç kez tekrarlanması gerekebilir, ancak sonunda pipetten gelen kuvvet kabarcıkları dışarı atacaktır. PLL içeren cihazlar, 37 derece ve %5CO2 içeren standart bir doku kültürü inkübatöründe gece boyunca inkübe edilir.PLL ile 24 saatlik inkübasyonun ardından, cihazlar otoklavlanmış deiyonize su ile iki kez hızlıca durulanır. Bu işlem sırasında, ana kanallardaki sıvı asla tamamen uzaklaştırılmaz, yalnızca rezervuarlardaki sıvı uzaklaştırılır. Ana kanallardaki sıvının uzaklaştırılması hava kabarcıklarının oluşmasına neden olacaktır.İki hızlı durulama işleminin ardından, cihazlar tekrar otoklavlanmış deiyonize su ile doldurulur ve minimum üç saat veya gece boyunca inkübatöre yerleştirilir. Ertesi gün, cihazlar su ile gece boyunca veya minimum üç saat inkübe edildikten sonra, tekrar biyogüvenlik kabinine alınır ve deiyonize su ile iki kez durulanır. Ardından, primer sıçan nöronlarının kültürü için gerekli takviyeleri, B 27 ve glutamatı içeren nöral bazal medya cihazlara eklenir.Cihazlar daha sonra gelecekteki kullanımlar için tekrar inkübatöre yerleştirilir. Cihazlar artık nöron ekimi için hazırdır. Bu videoda, nöron cihazlarımızı üretmek için kullandığımız yumuşak litografi tekniğini göstermiş olduk.Bu cihazlar, nöronların ve ilgilenilen diğer hücre tiplerinin kültürü için kullanılabilir. Bu cihazların temel avantajı, nöron hücre gövdelerinin cihazın bir tarafındaki kültürlenmesini, diğer taraftaki saf aksonal fraksiyondan ayırma ve bölmelere ayırma yeteneğidir. Bir sonraki videoda, E 18 fetal sıçan kortikal nöronlarını nasıl hazırladığımızı ve hücreleri cihaza nasıl yüklediğimizi göstereceğiz.John Laboratuvarı'ndan paylaştıklarımız bunlardı. İzlediğiniz için teşekkürler.

fabrication-microfluidic-device-for-compartmentalization-neuron-soma

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video E18 Kortikal Rat Nöronlar hazırlık göstermektedir.

Mikroakışkan Aygıt compartmentalization E18 Kortikal Rat Nöronlar hazırlanması

BioMEMS: Biyologlar ve Mühendisler Arasında Yeni İşbirlikleri Dövme

In vitro MSS akson glia etkileşim araştırmaları için bir roman çok bölmesi nöron ko-kültür mikrosistem platformu geliştirdi. Platform altı paralel olarak bağımsız deneyler yapma yeteneğine sahiptir ve yeni geliştirilmiş bir makro / mikro hibrid imalat yöntemi kullanılarak imal edildi.

Çok bölmesi MSS Nöron glia Co-kültür mikroakışkan Platformu

Bu video, birincil sıçan hipokampal nöronlarının bölümlere ayrılmış kültürü için önceden monte edilmiş bir plastik mikroakışkan çipin kullanımını göstermektedir. Nöronlar, bağlandıkları ve büyüdükleri mikroakışkan bölmelerden birine kaplanır ve aksonlarını çipin mikro oluklarından bitişik bölmeye uzatır. Dar mikro oluklar, nöronal hücre gövdelerinin girmesini önler, böylece somatik ve aksonal bölmeler arasında fiziksel ayrımı sağlar.

Plastik Mikroakışkan Çipler Kullanılarak Bölümlere Ayrılmış Primer Murin Nöron Kültürü

Video, bir mikro oluk bariyeri ile ayrılmış somatik ve aksonal bir bölme içeren bir mikroakışkan cihaz kullanılarak nöral kök hücrelerin (NSC'ler) farklılaşmasını göstermektedir. NSC'ler somatik bölmeye sokulur ve yapışmalarına izin verilir. NSC'ler somatik bölme içindeki nöronlara farklılaşır ve aksonları mikro oluk bariyerinden aksonal bölmeye kadar uzatır.

Bölümlere Ayrılmış Bir Mikroakışkan Cihaz Kullanılarak Nöral Kök Hücrelerin Nöronlara Farklılaşması

Tek bir nöron mikroakışkan arraying ve biyomalzeme kaplamaların içinde-çip plazma desenlendirme için su maskeleme için protokoller anlatılmıştır. Yüksek birbirine eş hücre kültürleri en az girişler kullanılarak hazırlanabilir.

Tek Hücre Hassas Nevronik Co-kültürler hazırlanması

Bu el yazması, mikro-doku ile tasarlanmış sinir ağlarının imalatını ayrıntılarıyla anlatmaktadır: boru biçiminde bir hidrojel içine konan agrega nöronal popülasyon (lar) yı kapsayan uzunlamasına hizalanmış aksonal yollardan oluşan üç boyutlu mikron boyutlu yapılar. Bu canlı iskele, sinirsel devreleri yeniden yapılandırmak veya modüle etmek için fonksiyonel röleler veya gri-beyaz madde nöroanatomisini taklit eden biyofiziksel test yatakları olarak işlev görebilir.

Sinir Sistemi Yeniden Yapılanma, Modülasyon ve Modelleme için Anatomik olarak İlham Almış Üç Boyutlu Mikro-Dokulu Mühendisli Sinir Ağları

Bu iletişim kuralı kültür ve birincil fare nöronlar bölümlendirirse için plastik fiş kullanımını açıklar. Preassembled, Kullanıcı dostu ve yüksek çözünürlüklü ile uyumlu bu fişleri, canlı ve floresan görüntüleme. Bu iletişim kuralı, sıçan hipokampal nöronlar içinde bu fişleri plaka ve sıvı yalıtım, axotomy ve immunostaining gerçekleştirmek açıklar.

Birincil fare nöronlar ayrı için ön montajı plastik mikrosıvısal çip kullanımı

Bu protokol, bölümlenmiş mikrofluidik çiplerin kullanımını gösterir, insan kök hücrelerinden ayırt edilen kültürlü nöronlara döngüsel olefin kopolimer enjeksiyon kalıplı. Bu cips önceden montajlı ve daha kolay-geleneksel bölümleşmiş Poly (dimetilsiloxane) cihazlar daha kullanımı. Viral etiketleme, fluidik izolasyon, akotomi ve immünostasyon gibi çoklu yaygın deneysel paradigmalar burada açıklanmıştır.

Ön montajlı plastik mikrofluidik cips içinde ınsan kök hücresi türeyen neurons compartmentalization

Mevcut protokol, nöronal mitokondrinin mikroakışkan odalarda tohumlanmasını ve boyanmasını tanımlamaktadır. Bu odalardaki akışkan basınç gradyanı, aksonlardaki mitokondrilerin, hücre gövdesi bölmesini etkilemeden farmakolojik zorluklara yanıt olarak özelliklerini analiz etmek için seçici tedavisine izin verir.

Aksonal Mitokondrinin Mikroakışkanlar Yardımlı Seçici Depolarizasyonu

Bu protokol, aksonal yaralanma sonrası nöronal metabolik dinamikleri modelleyen, görüntüleme, çoklu omik analiz ve içsel metabolik yeniden şekillenmenin mekanik çalışmalarını mümkün kılan bir mikroakışkan sistemi tanımlar.

Aksonal Yaralanma Modelleri Yapımı ve Çoklu Omik Analizin Etkinleştirilmesi için Mikroakışkan Çip

Öğrenin, PDMS mikroakışkan cihaz üretimi ile nöron soma ve aksonlarını kompartmantalize etme tekniğini. Bu yöntem, nörobiyoloji araştırmalarında saf akson fraksiyonları elde etmeyi sağlar.

Nöron Soma ve Aksonlar compartmentalization mikroakışkan Aygıt Fabrikasyon

Daha fazla video keşfet