Name: Retina Ganglion Hücre Survival Eğitim Bir Optik Sinir Crush Yaralanma murin Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-25T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Öğrenin, fare modelinde optik sinir ezilme yaralanması sonrası retina ganglion hücre hayatta kalmasını analiz etmek için retrograd boyama yöntemini. Bu teknik glokom gibi optik nöropatileri incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bizim araştırma NIH, Ulusal Göz Enstitüsü İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenmektedir.

Kullanılan tüm ekipmanların ve reaktifler sterildir. Hayvan Bakım tarafından onaylanmış ve tüm hayvan deneyleri (hayvan çalışması protokol NEI-570) NEI / NIH Komitesi (ACUC) kullanın ve NIH kurallar ve düzenlemelere göre yapılmıştır. 1. Gün 1 Retina Ganglion Hücreleri At Temel Retrograd Etiketleme (RGCs) Bu prosedürün amacı, optik sinir ezilme yaralanması üç gün önce farelerin üstün colliculus bir sinir tracer boya enjekte edilerek retrograd retina ganglion hücrelerinin etiket. Boya retrograd retina ganglion hücrelerinin tarafından ele alınan ve yaşam RGCs (Şekil 1) için bir belirteç sağlar olacak. Bu yaklaşım, az bir değişiklik 1-5 ile yaşayabilir RGCs tekrarlanabilir etiketleme verir . <ol><li> Fareyi derinden uyutmak. Başın tepesinde saç temizleyin. Fare, küçük bir stereotaksik aparat yerleştirin. Koruyucu oinment her iki göze uygulanır. Kafa derisi Dezenfekte iyodofor ve% 70 alkol fırçalayın kullanarak her üç kez. </li><li> Kafatası açığa çıkarmak için deride bir kesi yapın ve% 3 hidrojen peroksit kullanılarak kuru ve temiz tutmak. </li><li> Belirlenmesi ve bregma işareti. Bregma arkasında 2.9 mm ve 0.5 mm, her yarımkürenin 7 orta hatta yan üstün colliculus üzerinde bir delik delin . Sondaj sırasında, ikincil ısı hasarı önlemek için delik delinmiş site için tuzlu su uygulamak. </li><li> Stereotaksik bir ölçüm cihazı ve Hamilton şırınga kullanarak, beynin kemik yüzeyinden 1.6 mm derinlikte, her yarımkürenin üstün colliculus içine çok yavaş FluoroGold nöral tracer boya enjekte (% 3 1 ul salin içinde Florokrom). </li><li> Kesi yeri dikin. Analjezi için buprenorfin subkutan enjeksiyon verin. </li><li> Sıcak ve kuru bir alana taşıyın ve dik bir duruş, bakım ve evde kafes dönmek için mümkün olduğu kadar izlemek. Sistemik analjeziklerin (örneğin, buprenorfin) ve topikal antibiyotikli merhem, etiketleme prosedürü sonra ilk üç gün boyunca, günde iki defa verilir ve fare yakından izlenmelidir. </li></ol> 2. 4. Gün, Optik Sinir Ezilme Yaralanması Bu yöntemde, optik sinir, retina ganglion hücrelerinin yavaş yavaş bir ölüme neden olacaktır aksonları birincil hasar (Şekil 2), neden bir ezilme yaralanması geçerli olacaktır. <ol><li> Tracer boya uygulaması üç gün sonra, fare derin anestezi. Diseksiyon mikroskop kullanarak, bir gözün konjonktiva bir çift yaylı makas kullanılarak 04:00 konumu hakkında çizi. </li><li> Yörünge kasları hafifçe saptırmak ve onları bir kenara koymak. Göz küresi çıkışında beyaz optik sinir Açığa. Herhangi bir kan damarlarının zarar vermemek için çok dikkatli olun. </li><li> Bir çift çapraz eylem forseps yardımı ile yaklaşık 3 saniye boyunca yaklaşık 2 mm göz küresi, optik sinir ezilme yaralanması geçerlidir. Kanamaya neden oftalmik arter zarar vermemek için çok dikkatli olun. </li><li> Ezilme yaralanması tamamlanmasından sonra, kesi sütüre edilir. </li><li> Fare anestezi kurtarır önce analjezi için buprenorfin bir subkütan enjeksiyon vermek. </li><li> Dik bir duruş korumak ve kendi ev kafesine geri gelene kadar, sıcak ve kuru bir alana taşıyın ve izlemek. Sistemik analjeziklerin (örneğin, buprenorfin) ve topikal antibiyotikli merhem, ezilme yaralanması prosedürü sonrası ilk üç gün boyunca, günde iki defa verilir ve fare yakından izlenmelidir. </li></ol> 3. Retinae Hasat ve Gün 11 yaşında RGC Survival Analiz Bu prosedürün amacı, retinaeto retina ganglion hücre sağkalım analiz hasat için. <ol><li> 11 (günde 7 ONC sonra) gün, fare, CO 2 infüzyonu ve servikal dislokasyon tarafından ötenazi . </li><li> Gözler yörüngesine basınç uygulayarak bir çift forseps yardımı ile enükleasyon. </li><li> Gözler, iki saat boyunca% 4 paraformaldehid çözüm sabit ve PBS içinde üç kere yıkanır. Retina parçalara ayır. Retina diseksiyon prosedür zaten 6 Gustmann, S. ve ark tarafından 2010 yılında vallahi daha önce yayınlanmış olan ve bu nedenle burada açıklanan olmayacaktır . </li><li> Hayatta retina ganglion hücrelerinin Görüntüler retinanın tanımlanan bölgelerde floresan mikroskop kullanılarak alınır, ve retina ganglion hücre yoğunluğu sayılabilir. Optik sinir ezilme yaralanması ya da floresan etiketli retina ganglion hücrelerinin bir temsilcisi sonucu Şekil 3'te gösterilmiştir. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: Retina ganglion hücre sağkalım, yedi gün sonra optik sinir ezilme yaralanması analiz etmek retinae, sabit, hasat basık ve monte edildi. Retina görüntüler floresan mikroskop kullanılarak alınmıştır. Yaralanmamış bir şekilde normal r ile karşılaştırıldığındaetina (Normal, sol), yaşayabilir RGCs sayısı (yeşil, retrograd üstün colliculus enjekte FluoroGold nöral tracer boya etiketli) retinae bir optik sinir ezilme yaralanması (sağ, ONC) (Şekil 3) ile anlamlı derecede düşük . <img src="/files/ftp_upload/2685/2685fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Retina ganglion hücrelerinin bazal retrograd etiketleme Optik sinir ezilme yaralanması sonrası farklı zaman noktalarında uygulanabilir retina ganglion hücreleri saymak için, retina ganglion hücrelerinin (optik sinirin beyin üç gün içinde üstün colliculus önce bir sinir tracer boya (yeşil renk) enjekte retrograd etiketli kırmızı) ezilme yaralanması. Retina ganglion hücrelerinin aksonları üstün colliculus ikamet yılından bu yana, izleme boya retrograd RGCs tarafından ele alınması ve yaşam RGCs için bir belirteç olacaktır. <img src="/files/ftp_upload/2685/2685fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Optik sinir ezilme yaralanması Retina ganglion hücrelerinin hayatta kalma durumunu analiz etmek için, bir ezilme yaralanması aksonlar için birincil hasara neden optik sinir (kırmızı) uygulanır. Bu kademeli bir retina ganglion hücrelerinin ölümüne yol açacaktır. Üç gün sonra izleme boya (yeşil) enjeksiyonu, fare anestezi. Bir gözün konjonktiva çizi. Yörünge kasları karsilayin ve onları bir kenara koymak. Göz küresi çıkışında optik sinir Açığa. Ezilme yaralanması göz küresi yaklaşık 2 mm optik sinir bir çift çapraz eylem forseps kullanarak yaklaşık 3 saniye boyunca uygulayın. <img src="/files/ftp_upload/2685/2685fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Floresan-etiketli optik sinir ezilme yaralanması ya da retina ganglion hücrelerinin Retina ganglion hücre sağkalım, yedi gün sonra optik sinir ezilme yaralanması analiz etmek retinae, sabit, hasat basık ve monte edildi. Retina görüntüler floresan mikroskop kullanılarak alınmıştır. Yaralanmamış bir şekilde normal retina (Normal, sol) ile karşılaştırıldığında, canlı RGCs sayısı (yeşil, retrograd üstün colliculus enjekte FluoroGold nöral tracer boya etiketli) bir optik sinir crush yaralanma (sağ, ONC retinae anlamlı olarak daha düşüktü ) (Şekil 3). Ölçek çubuğu: 50 mikron

<ol><li>Yoles, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GM1+reduces+injury-induced+metabolic+deficits+and+degeneration+in+the+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).</li>
<li>Fisher, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+for+neuroprotection+in+the+mouse+optic+nerve%3A+implications+for+optic+neuropathies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Vaccination for neuroprotection in the mouse optic nerve: implications for optic neuropathies.</a> J Neurosci. 21, 136-142 (2001).</li>
<li>Levkovitch-Verbin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RGC+death+in+mice+after+optic+nerve+crush+injury%3A+oxidative+stress+and+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">RGC death in mice after optic nerve crush injury: oxidative stress and neuroprotection.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 41, 4169-4174 (2000).</li>
<li>Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-B+inhibits+apoptosis+via+VEGFR-1-mediated+suppression+of+the+expression+of+BH3-only+protein+genes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats.</a> The Journal of clinical investigation. 118, 913-923 (2008).</li>
<li>Tang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+effect+of+PDGF-CC+rescues+neurons+from+apoptosis+in+both+brain+and+retina+by+regulating+GSK3beta+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">Survival effect of PDGF-CC rescues neurons from apoptosis in both brain and retina by regulating GSK3beta phosphorylation.</a> The Journal of experimental medicine. 207, 867-880 (2010).</li>
<li>Gustmann, S., Dunker, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo-like+organotypic+murine+retinal+wholemount+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo-like organotypic murine retinal wholemount culture.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Franklin, K., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+K+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. San Diego. (1997).</li>
</ol>

Optik sinir ezilme yaralanması fare modeli RGC ölüm ve hayatta kalma sürecini incelemek için yararlıdır. Bu model aynı zamanda sık sık farklı reaktifler ve genlerin RGC apoptoz ve sağkalım üzerine etkilerini araştırmak amacıyla kullanılır. Bu modelin bir diğer avantajı da minimal varyasyonları ile yüksek derecede tekrarlanabilirlik olmasıdır. Ancak bu model birkaç adım, özel bakım gereklidir. İlk olarak, optik sinir ezilme yaralanması yaparken, oftalmik arter ve bu nedenle sonraki retinal is...

<table><tbody><tr><td>Stereotaksik aparat</td><td>ASI Instruments</td><td>SAS-4100</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>PZMIV-BS</td><td></td></tr><tr><td>Neşter sapı</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Neşter uçları #15</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Mikro matkap</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-17</td><td></td></tr><tr><td>Sütur iğnesi</td><td>Fine Science Tools</td><td>12050-03</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı makas</td><td>Fine Science Tools</td><td>16144-13</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 pens</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-50</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırıngası</td><td>Hamilton Co</td><td>88400</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı bezler</td><td>Office Depot</td><td>674889</td><td></td></tr><tr><td>Florokrom</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>39286</td><td></td></tr><tr><td>Alkol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459844</td><td>70%</td></tr><tr><td>H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3410</td><td>3%</td></tr></tbody></table>

retina ganglion hücre survival eğitim bir optik sinir crush yaralanma murin modeli

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Optik sinir yaralanması ardından, geri dönüşü olmayan görme kaybı sonuçları retina ganglion hücrelerinin (RGCs), bir yavaş yavaş ölüm, aksonal dejenerasyona yol açabilir. Insan, bu tür hastalıkları örnekler travmatik optik nöropati ve glokom, optik sinir dejenerasyonu içerir. Bu, görme kaybı ve körlük önde gelen optik sinir başı tipik değişimler, progresif optik sinir dejenerasyonu, retina ganglion hücrelerinin kaybı, kontrolsüz, ile karakterizedir. Optik sinir ezmek (ONC) yaralanma fare modeli Travmatik optik nöropati için önemli bir deneysel hastalık modeli, bu model glokom, vb optik sinir kademeli retina ganglion hücrelerinin apoptozise neden ezilme yaralanması. Bu hastalık modeli nöronal ölüm ve hayatta kalma, terapötik önlemler geliştirilmesi için gerekli olan genel süreçler ve mekanizmalar çalışma kullanılabilir. Buna ek olarak, farmakolojik ve moleküler yaklaşımlar bu modelde farklı tip optik nöropati tedavisinde potansiyel terapötik reaktifler belirlemek ve test etmek için kullanılır. Burada, 1 gün retina ganglion hücrelerinin Temel retrograd etiketleme (RGCs), (II) 4 gün Optik sinir ezilme yaralanması, (III) retinae Hasat ve gün hayatta kalma RGC analiz (I) tarafından adım adım gösteri 11 ve (IV) Temsilcisi sonucu.

Bu protokol, retrograd retina ganglion hücreleri ve sonradan retina ganglion hücre hayatta kalma ve apoptosis analiz etmek için bir optik sinir ezilme yaralanması yapmak nasıl etiket gösterir. Bu glokom da dahil olmak üzere optik nöropati farklı türleri için deneysel bir hastalık modeli.

Retina Ganglion Hücre Survival Eğitim Bir Optik Sinir Crush Yaralanma murin Modeli

Optik sinir hasarı, aksonal dejenerasyona ve bunu takiben retinal ganglion hücrelerinin (RGC'ler) kademeli ölümüne yol açarak geri dönüşü olmayan ... ile sonuçlanır.

Bu prosedür, bir fare modelinde optik sinir ezilme yaralanmasını ve ardından gelen retinal ganglion hücresi sağkalım analizini göstermektedir. Bu işlem, superior colliculus'a floresan bir boya enjekte edilerek gerçekleştirilir. Birinci günde, ikinci bir adım olarak bu hücre popülasyonunu etiketlemek amacıyla DI, retinal ganglion hücrelerine retrograd olarak taşınır.Optik sinir dejenerasyonuna neden olmak ve bunun sonucunda retinal ganglion hücrelerinin kademeli olarak ölümünü sağlamak amacıyla dördüncü günde optik sinir ezme yaralanması gerçekleştirilir. 11. günde, retinal ganglion hücresi sağkalımını incelemek için retina diseke edilir. Bu prosedürün sonucu, floresan mikroskopi kullanılarak gerçekleştirilen flora Gold etiketli retinal ganglion hücrelerinin sayımıyla canlı kalan retinal ganglion hücrelerinin sayısını gösterir.Merhaba, NIH'deki Ulusal Göz Enstitüsü'nde bulunan Dr.Lab'danım. Şimdi size fare optik sinir ezilme yaralanması modelinin nasıl gerçekleştirileceğini göstereceğim. Bu tekniğin temel avantajı, retina ganglion hücrelerini işaretlemek ve optik ezilme yaralanmasının ardından hayatta kalma veya dejenerasyon süreçlerini incelemek için basit, stabil ve etkili bir yol

an-optic-nerve-crush-injury-murine-model-to-study-retinal-ganglion

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Optik Sinir transeksiyonu yetişkin MSS yaralanma yaygın olarak kullanılan bir model. Retina ganglion hücrelerinin yüzde doksanı (RGCs) olan aksonlar tamamen axotomy sonra 14 gün içinde ölürler (axotomy) transeksiyon. Bu model, deneysel manipülasyonlar kolayca mükellef ve yüksek tekrarlanabilir.

Optik Sinir transeksiyonu: Santral Sinir Sistemi Yetişkin Nöron Apoptoz Bir Model

Optik Sinir transeksiyonu yetişkin MSS yaralanma yaygın olarak kullanılan bir model. Bu model, küresel retina hedef ya da doğrudan hedef, retina ganglion hücrelerinin yaralı nöronal nüfus bir dizi deneysel manipülasyon yapmak için idealdir.

Memeli MSS Optik Sinir transeksiyonu sonra Deneysel İşlemler Yöntemleri

Bu video naif fare görsel projeksiyon kontrastlı MR görüntüleme ve akut optik sinir ezilme yaralanma ve kronik optik sinir dejenerasyonu ile ilişkili optik sinir dejenerasyonu tekrarlayan ve uzunlamasına in vivo çalışmalar için, bir klinik 3 T tarayıcı kullanarak, bir yöntemi göstermektedir knock-out fareler (p50 KO).

Farelerde kontrastlı MR ile optik sinir lifi Dürüstlük İn vivo

Bu protokolün amacı, fotokimyasal sıçan posterior optik sinir iskemik hasara yol etmektir. Bu model arka iskemik optik nöropati patofizyolojisi çalışmaları ve bunun için tedavi yaklaşımları ve diğer optik nöropatiler kritik yanı sıra diğer MSS iskemik hastalıklar.

Fotokimyasal Bağlı Posterior İskemik Optik Nöropati Rat Modeli

Glokom, retinal ganglion hücrelerinin hasar görmesi ile karakterizedir. Hayvan modellerinde glokomu indüklemek, bu hastalığın incelenmesi hakkında fikir verebilir. Burada, bir in vivo sıçan modelinde RGC kaybını indükleyen ve analiz için tam montajlı retinaların hazırlanmasını gösteren bir prosedürü özetliyoruz.

Glokom uyaran bir de Prosedürü<em&gt; İn Vivo</em&gt; Rat Modeli ve Tüm montaj Retina Hazırlık

Bu makalede, farelerde yüksek göz tansiyonu retinal iskemi-reperfüzyon hasarı uyarılması için bir yöntem tarif eder. yüksek göz içi basıncı ile retinal iskemi-reperfüzyon hasarı, retina nörovasküler biriminin, insan hastalıkları için, potansiyel hücresel mekanizmaları ve tedavi incelemelerine sağlayan retinada tehlikeye oksijen ve besin teslimat karakterize olan insan patolojilerinin model vermektedir.

Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

İkincil dejenerasyonu retina ganglion hücrelerinin (RGCs) yaygın olarak glokom içinde oluşur. Bu çalışmada kısmi optik sinir transeksiyon için yenilikçi bir operatif yaklaşım açıklar. Bu yer-koruma operatif yaklaşım kullanımı modelin uygulama aralığı genişletir ve ikincil yaralanma mekanizmaları keşfi RGCs içinde yeni bir yol sağlar.

Kısmi optik sinir transeksiyon Sıçanlarda: ikincil dejenerasyonu retina Ganglion hücrelerinin değerlendirmek için yeni bir operatif yaklaşım ile kurulan bir Model

Bu makale, standart oftalmik cerrahi teknikler kullanılarak bir tavşan modelinde optik sinir ezilmesini gerçekleştirmek için ayrıntılı talimatlar sunmaktadır.

Bir tavşan modelinde optik sinir ezilmesine yönelik cerrahi bir yaklaşım

Bu makale, fare izole retinal hazırlanması incelemek ve kaydetmek için nasıl bir açıklama sağlar. Özellikle, floresan etiketli ganglion hücre popülasyonu ışık yanıtlarını kaydetmek ve daha sonra belirlemek ve morfolojisi analiz nasıl açıklar.

Genetik Etiketli Retina Ganglion Hücreleri Işık Tepkisi Record İzole Retina Hazırlık

Sıçan optik sinirine doğrudan enjeksiyon, rejeneratif araştırmalar için yararlıdır. Kafatasının açılmasını içermeyen bir sıçan optik sinirine doğrudan enjeksiyon için minimal invaziv bir teknik gösteriyoruz. Bu yöntem kullanılarak cerrahi komplikasyonlar en aza indirilir ve iyileşme daha hızlı olur.

Sıçan Optik Sinir içine Enjeksiyon için minimal invaziv Tekniği

Öğrenin, fare modelinde optik sinir ezilme yaralanması sonrası retina ganglion hücre hayatta kalmasını analiz etmek için retrograd boyama yöntemini. Bu teknik glokom gibi optik nöropatileri incelemek için kullanılır.

Retina Ganglion Hücre Survival Eğitim Bir Optik Sinir Crush Yaralanma murin Modeli

Daha fazla video keşfet