Name: Mikroakışkan Aygıt compartmentalization E18 Kortikal Rat Nöronlar hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Öğrenin, E18 kortikal sıçan nöronlarının mikroakışkan aygıtlara yüklenmesi için hazırlanma yöntemini. Bu teknik, nörobilim araştırmalarında hücre gövdelerini aksonlardan ayırmayı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Compartmentalization E18 Fetal Sıçan Kortikal nöronlar hazırlanması Başlamadan önce, gerekli tüm medya ve reaktifler 37 ° C&#39;ye kadar ısıtmak için önemlidir. % 70 etanol ile silerek, kaput yerleştirilir hücreleri (örneğin, kauçuk ampuller, boru rafları, medya şişeleri, vb), ve hazırlanması için kullanılan her şeyi sterilize etmek için de önemlidir. <ol><li> E18 Fetal Sıçan Korteks iki adet (biri beyin, daha önce disseke) 1 ml buz Kalsiyum Magnezyum ücretsiz diseksiyonu tampon içeren 15 ml tüp yerleştirin. </li><li> Son hacmi 2 ml ve% 0.125 &#39;son tripsin konsantrasyon getirerek, diseksiyon tamponunda kortekse 1 ml% 0.25&#39; lik tripsin-EDTA ekleyin. </li><li> 8 dakika 37 ° C su banyosunda 15 ml tüp yerleştirin. </li><li> Bu süre zarfında, yangın cilası 3 su bardağı Pasteur pipetler, kısırlık korumaya yardımcı olmak için bir biyogüvenlik kabini, gittikçe daha küçük açıklıklar oluşturan. </li><li> Korteksin 8 dakika inkübasyondan sonra, DMEM korteks tripsin reaksiyon durdurmaya yardımcı olmak için% 10 FBS içeren 10 ml ekleyin. </li><li> 2 dakika süreyle 2500 rpm&#39;de korteks ve DMEM/10% FBS içeren 15 ml tüp santrifüjleyin. </li><li> Biyogüvenlik kabini, vakum emme eklenmiş bir bardak yeniden süspanse kullanarak korteks süpernatant kaldırmak. Rahatsız ya da pelet çıkarmak için dikkatli olun. </li><li> NMB 1 ml korteks pelet ve hafifçe pipetlemeyin yukarı ve aşağı ekleyin. Bu hava kabarcıkları oksidasyonu ile hücrelere zarar verebilir gibi, aşağı yukarı pipeting sırasında hava kabarcıkları oluşturarak önlemek için çok önemlidir. </li><li> Sonuna kadar steril bir kauçuk ampul takmak ve 5 kat yukarı ve aşağı pipeting korteks çiğnemek geniş açılması ile yangın cilalı yeniden süspanse kullanın, yine dikkatli olmak hava kabarcıkları tanıtmak değil. Her bir azalma açılış boyutu ile, diğer 2 cam pipetler ile bu işleme devam edin. </li><li> Öğütme sonra 2 dakika süreyle 2500 rpm&#39;de hücreleri tekrar santrifüj. </li><li> Santrifüj sonra, bir kez daha süpernatantı kaldırmak ve NBM 2 ml hücre pelletini tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> 45 um hücre süzgecinden yeniden süspanse hücre çözümü Filtresi. </li><li> Sayılır ve cihazlar içine yüklenen Tripan Mavi, hücrelerin Leke. Biz genellikle cihaz başına 20 ul hücrelerinin yükleyin. </li></ol> Not: hücrelerin nihai konsantrasyonu tipik olarak 2,5 milyon hücre / ml ve 8 milyon hücre / ml arasında Hücrelerin yükleniyor Hücreler sayılır edildikten sonra, cihaz hücreleri yük zamanı: <ol><li> Kısırlık korumak için biyogüvenlik kabini içine NBM içeren önceden hazırlanmış cihazlar getirin. </li><li> Vakum emiş kuyularından aşırı ortamı çıkarın. Ancak, tüm medya kaldırarak önlemek için dikkatli olmak, ana kanal bazı medya olması gerekir. </li><li> (Diyagram gerekirse bakınız) hücrelerin 20 ul cihazın sol üst rezervuar uygulayın. Hücreleri cihazın içine akışı ve PLL tedavi yüzey eklemek. </li><li> Yükledikten sonra, bir kuluçka hücreleri takmak için izin vermek için 10 dakika geri hücreleri içeren cihazlar yerleştirmek. </li><li> 10 dakika sonra geri inkübatör medya ve yer cihazlar rezervuarları doldurun. </li></ol>

<ol><li>Park, J. W., Vahidi, B., Taylor, A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 1, 2128-2136 (2006).</li>
<li>Taylor, A. M., Blurton-Jones, M., Rhee, S. W., Cribbs, D. H., Cotman, C. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury%2C+regeneration+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nat Methods. 2, 599-605 (2005).</li>
</ol>

Hücre yoğunlukları uygulamaya bağlı olarak çeşitli olabilir. Ancak, çok düşük bir yoğunluğu birinci nöron ekim genellikle hücre ölümüne yol açar. Inkübatör ve nem düzeyine bağlı olarak, medya cihazları her 2-3 günde değişti gerekebilir. Ortamı değiştirirken, ana kanal medya kaldırmak asla rezervuarları medya çıkardıktan sonra önemlidir. Bunun yanı sıra, taze medya üst kuyular yerleştirin ve tüm rezervuarlar doldurmadan önce cihaz üzerinden ve ana kanal içine biraz taze medya akışını sağlamak için iyi bir uygulamadır.

<table><tbody><tr><td>NBM</td><td>besiyeri</td><td>Invitrogen</td><td>21103-049</td><td>Neural Basal Media, Invitrogen'in Gibco hücre kültürü reaktifleri serisinden temin edilmiştir.</td></tr><tr><td>E18 sıçan embriyoları</td><td>Hayvan</td><td></td><td></td><td>Gebe Sprague Dawley sıçanlarından elde edilmiştir. Gebe sıçan sakrifiye edilir ve E18 fetal sıçan korteksini elde etmek için E18 fetal sıçan yavruları diseke edilir.</td></tr><tr><td>CMFM diseksiyon tamponu HBSS</td><td>tampon</td><td></td><td></td><td>HBSS bazlı, buz gibi soğuk, kalsiyumsuz ve magnezyumsuz diseksiyon tamponu.</td></tr><tr><td>15 ml Tüp</td><td>Araç</td><td>BD Biosciences</td><td>Falcon No. 352097</td><td>Fisher Scientific katalog numarası 14-959-70C üzerinden temin edilebilir</td></tr><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>37&amp;#730;C su banyosu</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetleri</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>cam</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>besiyeri</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>serum, DMEM içinde %10 konsantrasyonda kullanılır</td></tr><tr><td>santrifüj</td><td></td><td></td><td></td><td>2500 rpm değerine ayarlanmıştır</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td></td><td>Invitrogen</td><td></td><td>canlı/ölü hücre sayımı için</td></tr><tr><td>BD Falcon Hücre Süzgeci 40 um</td><td>Araç</td><td>BD Biosciences</td><td>Falcon cat# 352340</td><td>Fisher Scientific üzerinden temin edilebilir. Fisher katalog# 08-771-1</td></tr><tr><td>B27</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>17504-044</td><td>B27, Invitrogen'in Gibco hücre kültürü reaktifleri serisinden temin edilebilen tescilli bir takviyedir.</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td>Glutamax, Invitrogen'in Gibco hücre kültürü reaktifleri serisinden temin edilebilir.</td></tr></tbody></table>

mikroakışkan aygıt compartmentalization e18 kortikal rat nöronlar hazırlanması

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Bu video, E18 kortikal sıçan nöronların hazırlık göstermektedir. E18 kortikal sıçan nöronlar önceden disseke ve hazırlanan E18 fetal sıçan korteks elde edilir. E18 korteks bireysel nöronlar içine hemen ayrışmış, diseksiyon üzerine. Bu ayrışma yapmadan önce bir hafta için 4 B27 içeren Hazırda Bekleme E tampon ° C korteks E18 saklamak mümkündür. Ancak, hücre canlılığı bir düşüş olacaktır. Genelde bizim E18 Cortex taze edinin. Bu buz Kalsiyum Magnezyum ücretsiz diseksiyonu tamponu (CMFM) laboratuarına sevk edilir. Varışta, tripsin,% 0.125 final konsantrasyonu korteks eklenir. Korteks, 8 dakika sonra 37 ° C&#39;de inkübe edilir. % 10 FBS içeren DMEM reaksiyonu durdurmak için korteks eklenir. Korteks daha sonra 2 dakika süreyle 2500 rpm&#39;de santrifüj edilir. Süpernatant kaldırılır ve Sinir Bazal Medya 2 ml (NBM)% 2 B27 (hacim / hacim) ve% 0.25 &#39;Glutamax (hacim / hacim), sonra yukarı ve aşağı pipetleme tarafından yeniden askıya kortekse eklenir içeren. Ardından, korteks ardışık küçük açılması ile daha önce yangın parlatılmış cam pipetler, her triturated. Triturating sonra, korteks yine 2 dakika boyunca 2500 rpm&#39;de santrifüj edilir. Süpernatant sonra kaldırılır ve korteks pelet B27 ve Glutamax içeren NBM 2 ml ile tekrar askıya. Hücre süspansiyonu daha sonra 40 um naylon hücre süzgecinden geçirilir. Sonraki hücreler sayılır. Nöronlar, nöron mikroakışkan cihaza yüklenmesi için artık hazır.

Bu video E18 Kortikal Rat Nöronlar hazırlık göstermektedir.

Mikroakışkan Aygıt compartmentalization E18 Kortikal Rat Nöronlar hazırlanması

Bu videoda, E18 kortikal sıçan nöronlarının hazırlanışını gösteriyoruz. E18 kortikal sıçan nöronları, önceden ... fetal sıçan korteksinden elde edilir.

Merhaba, Dr. Newly John'un laboratuvarına hoş geldiniz. Önceki bir videoda, araştırmacının nöronların hücre gövdelerini saf bir aksonal fraksiyondan ayırmasına olanak tanıyan bir platform olan nöron cihazını nasıl ürettiğimizi göstermiştik. Cihazların yapımında, daha önce fotolitografi kullanılarak üretilen cihaz tasarımını içeren bir silikon gofret üzerine PDMS dökülmesi ve kürlenmesinden oluşan yumuşak litografi tekniği kullanılmaktadır.Bu videoda, spro dolly E 18 kortikal sıçan nöronlarının hazırlanmasını ve nöronların nöron cihazına nasıl yükleneceğini göstereceğiz. Sizi Kiana Lee ile tanıştırmak istiyorum. Bugünki gösterimleri kendisi gerçekleştirecek.İşleme başlamadan önce, gerekli tüm besiyerlerinin ve reaktiflerin su banyosunda 37 °C'ye ısıtılmış olması önemlidir. Burada neurobasal besiyeri, %0,25 tripsin ve %10 FBS içeren DMEM görebilirsiniz. Hücrelerin onarımı için laminer akışlı kabine yerleştirilecek her şeyin steril olduğundan ve %70 etanol ile silindiğinden emin olmak önemlidir.Öncelikle, doku kültürü kabini %70 etanol ile silinir. Ardından, tüpleri tutmak için kullanılan plastik raflar etanol ile püskürtülür. Son olarak, tri-çizgileme işleminde kullanılan kauçuk top etanol ile temizlenir.Kuruması için yeterli sürenin olduğundan emin olmak adına bu işlemin erken aşamada yapılması önemlidir. Ardından, gerekli reaktifler etanol ile silinir ve çeker ocağa taşınır. Daha önce diseksiyonu yapılmış bir beyni temsil eden, iki adet E 18 fetal sıçan korteks parçası; 1 ml buz gibi soğuk, kalsiyumsuz ve magnezyumsuz diseksiyon tamponu içeren 15 ml'lik bir tüpe yerleştirilir. Diseksiyon tamponundaki kortekse 1 ml 0,25% tripsin EDTA eklenerek nihai hacim 2 ml'ye ve nihai tripsin konsantrasyonu 0,125%'ye getirilir. Tripsin eklenmiş korteksi içeren 15 ml'lik tüp, fetal korteks 37 derecede tripsin ile inkübe edilirken sekiz dakika boyunca 37 derecelik su banyosuna yerleştirilir.Üç adet pasta pipeti ateşle parlatılır. Cam pipetin ucu, alevin mavi kısmına yakın bir yerde alevle temas edecek şekilde yerleştirilir ve açıklık turuncuya dönene kadar yavaşça döndürülür. Turuncuya döndüğünde.Cam pipeti, kapanmaması için sürekli döndürmek önemlidir. Cam pipetlerin açıklıklarının sırasıyla daha küçük olduğuna dikkat edin. Ayrıca, açıklıkları çok küçük yapmamanız gerektiğini belirtmek önemlidir; çünkü bu durum, korteksin trypsin ile 37 °C'de sekiz dakika inkübe edilmesinin ardından hücrelerin lizise uğramasına neden olabilir. Trypsin reaksiyonunu durdurmaya yardımcı olmak için kortekse %10 FBS içeren 10 mL DMEM eklenir.Korteks ve %10 FBS'li DMEM içeren 15 ml tüp, 2.500 RPM'de iki dakika boyunca santrifüj edilir. Biyogüvenlik kabininde, korteksteki süpernatanı uzaklaştırmak için cam pipete bağlı vakum emişi kullanılır. Bu işlem sırasında peletin bozulmamasına veya yerinden oynamamasına dikkat edilir.Korteks pelletine B 27 ve glutamat içeren 1 ml nöral bazal besiyeri eklenir ve pipetle nazikçe aşağı yukarı çekilerek karıştırılır. Pipetleme sırasında hava kabarcığı oluşmaması çok önemlidir, çünkü hava kabarcıkları oksidasyon yoluyla hücrelere zarar verebilir. Ardından, ucuna steril bir kauçuk pompa takılan ve en geniş açıklığa sahip olan, ateşle cilalanmış posterior pipet kullanılarak korteks yaklaşık beş kez aşağı yukarı çekilip bırakılarak tritürasyon yapılır.Hava kabarcığı oluşmamasına dikkat edilmelidir. Tamam. İşlem, her birinin açıklık boyutu daha küçük olan diğer iki cam pipetle devam ettirilmiştir. Daha önce belirtildiği gibi, üçlü çizgileme işlemi sırasında kabarcık oluşmadığından emin olmak önemlidir.Ayrıca artık görünür herhangi bir parçanın kalmadığını fark etmelisiniz. Medyada korteksin herhangi bir parçasını görene kadar tritürasyona devam etmek önemlidir. İşlemden sonra hücreler tekrar 2, 500 RPM'de iki dakika boyunca santrifüj edilir.Bu, iki korteks parçasından beklenmesi gereken peletin yaklaşık boyutudur. Santrifüjleme sonrası, süpernatant hücre peletinden bir kez daha uzaklaştırılır. Süpernatant uzaklaştırıldıktan sonra, kortekse B 27 ve glutamat içeren 1 ml nörobazal medya eklenir ve korteksin yeniden süspande edilmesi için kullanılır.Hücre peleti, hava kabarcığı oluşumunu önlemek ve peletin eşit şekilde dağılıp parçalanmasını sağlamak için dikkatlice tekrar pipetlenir. Hücre süspansiyonuna bir ml daha nöro bazal besiyeri eklenerek son hacim iki ml'ye tamamlanır. Ardından, hücreleri saymak ve canlılığı değerlendirmek için yeniden süspanse edilen hücre çözeltisi, BD biosciences 40 mikronluk bir hücre süzgecinden geçirilir.Steril bir mikrosantrifüj tüpüne 60 µL taze nöral bazal besiyeri konur. Daha sonra 60 µL nöral bazal besiyerine 20 µL hücre eklenir ve son olarak, nöral bazal besiyerindeki hücrelere 20 µL tripan mavisi eklenir. Hücreler tripan mavisi ile boyandıktan sonra, tripan mavisi artık canlı olmayan hücreleri boyayacaktır.Bir hemositometre üzerine 20 µL pipetleyip bunları mikroskop altında inceleriz. Canlı hücreler berrak ve şeffaf görünürken, membranları delinmiş hücreler tripan mavisi nedeniyle maviye boyanır. Tipik olarak, korteks başına yaklaşık 2,5 milyon hücre ve 8 milyon hücre elde ederiz.Normalde, hücrelerin 2 mL nihai hacimde resüspande edildiği tek bir beyinden iki adet korteks parçası elde ederiz. Bu nedenle, hücrelerin nihai konsantrasyonu tipik olarak mL başına 2,5 milyon hücre ile 8 milyon hücre arasındadır. Normalde, cihaz başına yaklaşık 20 µL hücre yükleriz.Bu, cihaz başına 50,000 hücre ile 160,000 hücre arasında bir hücre aralığı sağlar. Hücre yoğunlukları uygulamaya bağlı olarak değiştirilebilir. Ancak, primer nöronların çok düşük bir yoğunlukta ekilmesi tipik olarak hücre ölümüne yol açar. Nöral bazal medya içeren, önceden hazırlanmış cihazlar, steriliteyi korumak için biyogüvenlik kabinine getirilir.Kuyucuklardaki fazla besiyeri bir vakum ünitesi ile uzaklaştırılır. Ancak, tüm besiyerinin uzaklaştırılmamasına dikkat edilmelidir. Ana kanalda bir miktar besiyeri kalmalı; sadece rezervuarlardaki besiyeri aspire edilmelidir.Cihazın sol üst rezervuarına yalnızca 20 µL hücre uygulanır. Hücreler cihazın içine akar ve PLL ile işlem görmüş yüzeye tutunur. Burada hücrelerin ana kanal boyunca aşağı doğru aktığını görebilirsiniz ve bazılarının cam yüzeye tutunmaya başladığını fark edeceksiniz.Yüklemeden sonra, hücreleri içeren cihazlar, hücrelerin tutunmasını sağlamak için yaklaşık 10 dakika boyunca tekrar bir inkübatöre yerleştirilir. İnkübatörde geçen 10 dakikanın ardından cihazlar yeniden biyogüvenlik kabinine getirilir, rezervuarlar besiyeri ile doldurulur ve ardından cihazlar tekrar inkübatöre yerleştirilir. İnkübatöre ve besiyerinin ihtiyaç duyduğu nem seviyesine bağlı olarak, cihazlardaki besiyerinin her iki veya üç günde bir değiştirilmesi gerekebileceği unutulmamalıdır.Tüm rezervuarları doldurmadan önce, üst kuyucuklara taze besiyeri yerleştirmek ve bir miktar taze besiyerinin cihazdan geçerek ana kanallara akmasını sağlamak iyi bir uygulamadır. Nöronlar, burada canlı hücreleri boyayan hücre geçirgen bir boya olan kalsiyum am ile görselleştirilmiştir. Burada, hücre gövdelerini, aksonları ve dendritleri içeren cihazın so bölmesini veya hücre tarafını görebilirsiniz.Cihaz üzerinde gezinirken, aksonların cihazın diğer tarafına, yani saf aksonal fraksiyon içeren akson tarafına ulaşmak için içinden büyüdükleri mikro kanalları görebilirsiniz. Gösterim amaçlı olarak, bu floresan işaretli hücreler aksonotomi prosedürünü örneklendirmek için kullanılacaktır.Nöron cihazının özelliklerinden biri, araştırmacının cihazın saf aksonal fraksiyonundaki aksonları kesme işlemi olan aksonotomi yapmasına olanak tanımasıdır. Bu özellik, aksonal rejenerasyonun incelenmesi gibi araştırmaların yürütülmesini sağlar. Keano şimdi nöron cihazında aksonotomi işleminin nasıl gerçekleştirileceğini gösterecektir; aksonotomi, bir vakum yardımıyla gerçekleştirilir.Steril bir cam pipet, kuyucuğun aksonal taraftaki alt açıklığına yerleştirilir ve besiyeri vakumla aspire edilir. Ana kanaldaki besiyeri de dahil olmak üzere, cihazın aksonal tarafındaki tüm besiyeri tamamen uzaklaştırılır. Besiyeri uzaklaştırıldıktan sonra işlemi tekrarlamak için, pipetin ucu ana kanalın açıklığına yerleştirilir ve pipet kuvvetle bastırılarak ana kanala 150 µL besiyeri verilmiş olur.Ardından, ana kanalın açıklığına ve cihazın aksonal tarafındaki üst kuyucuğa vakum uygulanır. Ana kanal da dahil olmak üzere aksonal taraftaki tüm besiyeri ortamlari uzaklaştırmak için tekrar vakum kullanılır. Pipet ucu ana kanalın açıklığına yerleştirilip pipet kuvvetle bastırılarak ana kanala yeniden 150 µL besiyeri ortamı zorlanır.Bu noktada, araştırmacı akson kesiminin verimliliğini kontrol etmek için cihazı bir mikroskop altında inceleyebilir. Aksonlar yeterince kesilmemişse, işlem gerektiği şekilde tekrar tekrarlanabilir. Bu videoda, E 18 fetal sıçan kortikal nöronlarının nasıl hazırlanacağını ve nöron cihazına nasıl yükleneceğini gösterdik.Bu cihazların temel avantajı, nöron hücre gövdelerinin kültürlenmesini cihazın bir tarafında, saf aksonal fraksiyonu ise cihazın diğer tarafında olacak şekilde ayırma ve bölmelere ayırma yeteneğidir. Bu videoyu bilgilendirici ve faydalı bulduğunuzu umuyoruz. John Lab'den bizim için şimdilik bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler.

preparing-e18-cortical-rat-neurons-for-compartmentalization

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video kültür nöronlar için mikroakışkan bir cihaz farbricate için kullanabileceğiniz Polidimetil siloksan (PDMS) ile yumuşak litografi tekniği göstermektedir.

Nöron Soma ve Aksonlar compartmentalization mikroakışkan Aygıt Fabrikasyon

In vitro MSS akson glia etkileşim araştırmaları için bir roman çok bölmesi nöron ko-kültür mikrosistem platformu geliştirdi. Platform altı paralel olarak bağımsız deneyler yapma yeteneğine sahiptir ve yeni geliştirilmiş bir makro / mikro hibrid imalat yöntemi kullanılarak imal edildi.

Çok bölmesi MSS Nöron glia Co-kültür mikroakışkan Platformu

Bu video, birincil sıçan hipokampal nöronlarının bölümlere ayrılmış kültürü için önceden monte edilmiş bir plastik mikroakışkan çipin kullanımını göstermektedir. Nöronlar, bağlandıkları ve büyüdükleri mikroakışkan bölmelerden birine kaplanır ve aksonlarını çipin mikro oluklarından bitişik bölmeye uzatır. Dar mikro oluklar, nöronal hücre gövdelerinin girmesini önler, böylece somatik ve aksonal bölmeler arasında fiziksel ayrımı sağlar.

Plastik Mikroakışkan Çipler Kullanılarak Bölümlere Ayrılmış Primer Murin Nöron Kültürü

Video, bir mikro oluk bariyeri ile ayrılmış somatik ve aksonal bir bölme içeren bir mikroakışkan cihaz kullanılarak nöral kök hücrelerin (NSC'ler) farklılaşmasını göstermektedir. NSC'ler somatik bölmeye sokulur ve yapışmalarına izin verilir. NSC'ler somatik bölme içindeki nöronlara farklılaşır ve aksonları mikro oluk bariyerinden aksonal bölmeye kadar uzatır.

Bölümlere Ayrılmış Bir Mikroakışkan Cihaz Kullanılarak Nöral Kök Hücrelerin Nöronlara Farklılaşması

Kaynak: Struzyna, L. A. et. al., Sinir Sistemi Yeniden Yapılandırması, Modülasyonu ve Modellemesi için Anatomik Olarak İlham Alan Üç Boyutlu Mikro Doku Tasarlanmış Sinir Ağları. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, hücre dışı matris çekirdeğe sahip bir hidrojel mikro sütun kullanılarak mikro doku mühendisliği yapılmış sinir ağlarının gelişimini göstermektedir. Tohumlanmış nöronal agregatlar yapışır, projeksiyonları uzatır ve yapılandırılmış sinir ağları oluşturarak nörogelişim ve nöroterapötik...

Hidrojel Bazlı Bir Mikro Sütun Kullanarak Mikro Doku Mühendisliğine Sahip Bir Sinir Ağı Geliştirme

Tek bir nöron mikroakışkan arraying ve biyomalzeme kaplamaların içinde-çip plazma desenlendirme için su maskeleme için protokoller anlatılmıştır. Yüksek birbirine eş hücre kültürleri en az girişler kullanılarak hazırlanabilir.

Tek Hücre Hassas Nevronik Co-kültürler hazırlanması

Bu çalışmada, 3 boyutlu nöronal kültürlerin düzlemsel Mikro-Elektrot Dizilerine (MEA'lar) bağlandığı yeni bir deneysel model presented. 3D ağlar, nöronların üzerinde büyüdüğü ve birbirine bağlı 3B yapılar oluşturduğu cam mikro boncuklardan oluşan bir iskelede nöronların tohumlanmasıyla inşa edilir.

Mikro Elektrot Diziler 3D Engineered Nöronal Kültürler Arayüz: Yenilikçi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Deneysel Model

Bu iletişim kuralı kültür ve birincil fare nöronlar bölümlendirirse için plastik fiş kullanımını açıklar. Preassembled, Kullanıcı dostu ve yüksek çözünürlüklü ile uyumlu bu fişleri, canlı ve floresan görüntüleme. Bu iletişim kuralı, sıçan hipokampal nöronlar içinde bu fişleri plaka ve sıvı yalıtım, axotomy ve immunostaining gerçekleştirmek açıklar.

Birincil fare nöronlar ayrı için ön montajı plastik mikrosıvısal çip kullanımı

Bu protokol, bölümlenmiş mikrofluidik çiplerin kullanımını gösterir, insan kök hücrelerinden ayırt edilen kültürlü nöronlara döngüsel olefin kopolimer enjeksiyon kalıplı. Bu cips önceden montajlı ve daha kolay-geleneksel bölümleşmiş Poly (dimetilsiloxane) cihazlar daha kullanımı. Viral etiketleme, fluidik izolasyon, akotomi ve immünostasyon gibi çoklu yaygın deneysel paradigmalar burada açıklanmıştır.

Ön montajlı plastik mikrofluidik cips içinde ınsan kök hücresi türeyen neurons compartmentalization

Mevcut protokol, nöronal mitokondrinin mikroakışkan odalarda tohumlanmasını ve boyanmasını tanımlamaktadır. Bu odalardaki akışkan basınç gradyanı, aksonlardaki mitokondrilerin, hücre gövdesi bölmesini etkilemeden farmakolojik zorluklara yanıt olarak özelliklerini analiz etmek için seçici tedavisine izin verir.

Aksonal Mitokondrinin Mikroakışkanlar Yardımlı Seçici Depolarizasyonu

Bu protokol, aksonal yaralanma sonrası nöronal metabolik dinamikleri modelleyen, görüntüleme, çoklu omik analiz ve içsel metabolik yeniden şekillenmenin mekanik çalışmalarını mümkün kılan bir mikroakışkan sistemi tanımlar.

Aksonal Yaralanma Modelleri Yapımı ve Çoklu Omik Analizin Etkinleştirilmesi için Mikroakışkan Çip

Öğrenin, E18 kortikal sıçan nöronlarının mikroakışkan aygıtlara yüklenmesi için hazırlanma yöntemini. Bu teknik, nörobilim araştırmalarında hücre gövdelerini aksonlardan ayırmayı sağlar.

Mikroakışkan Aygıt compartmentalization E18 Kortikal Rat Nöronlar hazırlanması

Daha fazla video keşfet