JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:45 dk. • July 8th, 2025
Düzenleyici T hücreleri veya Treg'ler, bağışıklık sistemi homeostazına aracılık etmek için immünosüpresif etkiler gösteren özel bir T hücresi alt popülasyonudur. Treg'ler, hücre yüzeyi belirteçleri CD4, CD25 ve Neuropilin 1, Nrp1'i ve nükleer transkripsiyon faktörleri çatal başlı kutu P3, Foxp3 ve Helios'u eksprese eder.
Treg'leri fare pankreas drenaj lenf düğümlerinden veya PDLN'lerden izole etmek için konik bir tüpün üzerine metal bir ağ yerleştirin. PDLN'leri ağın üzerine yerleştirin ve dokuyu mekanik olarak ayırmak için öğütün. Kafesin üzerine uygun bir ortam ekleyin, hücreleri tüpe yıkayın.
Santrifüj, ölü hücreleri ve hücresel kalıntıları giderir. Ortamdaki canlı hücreleri yeniden askıya alın. Homojen bir tek hücreli süspansiyon elde etmek için hücreleri yuvarlak tabanlı bir tüpe takılan bir hücre süzgeci kapağından geçirin ve kalan hücre kümelerini ortadan kaldırın.
Florokrom konjuge anti-CD4, anti-CD25 ve anti-Nrp1 antikorları ekleyin. Anti-CD4 ve anti-CD25 antikorları, Treg'ler üzerindeki ilgili hücre yüzeyi antijenlerine bağlanır. Eşzamanlı olarak, anti-Nrp1, Nrp1 reseptörlerine bağlanır.
Hücreleri uygun bir geçirgenlik fiksasyon tamponu ile tedavi edin, hücreleri sabitley
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin