Name: Anjiyogenez Çalışması Kornea Cep Testi Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: Öğrenin, fare kornea cep testi modeliyle basic FGF'nin anjiyogenik etkisini değerlendirmeyi. Bu yöntem, limbal damarlardan sağlam yeni kan damarı büyümesi üretir ve yüksek tekrarlanabilirlik sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bizim araştırma NIH, Ulusal Göz Enstitüsü İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenmektedir.

Kullanılan tüm ekipmanların ve reaktifler sterildir. Hayvan Bakım protokol tarafından onaylanmış ve NEI / NIH Komitesi (ACUC) kullanın (hayvan çalışması protokol NEI-553), ve Ulusal Sağlık Enstitüsü, kurallar ve düzenlemelere göre yapıldı. 1. Anjiogenik faktör içeren pelet üretimi Bu bölümde, faiz anjiogenik faktör içeren pelet hazırlanmıştır. <ol><li> % 10 (w / v) PBS ile sukralfat çözümü olun. Oda sıcaklığında saklayın. </li><li> % 12 (w / v) mutlak etanol ile poli-HEMA olun. Oda sıcaklığında saklayın. </li><li> 1 mcg / ml bFGF çözüm olun. -80 ° C saklayın </li><li> 50 pelet yapmak için, poli-HEMA sukralfat ve bFGF stok solüsyonu 4 ul 1μl 5 ul, vorteks iyice karıştırın. </li><li> Petri kabı temiz parafilm bir parçası koyun, bir doku kültürü kaputu 15 dakika UV ışık altında bırakmayın. 0.2 ul çözüm karışımı bir pelet parafilm bırakın. Böylece, çözüm karışımı 10 ul 50 pelet verim gerekir. Oda sıcaklığında 1-2 saat pelet kurumasını bekleyin. Kuru pelet ° C'de birkaç ay, birkaç gün ya da -80 4 oC saklanabilir. </li><li> Kullanımı üzerine, kaldıraç ve forseps bir çift ipuçları pelet pick up. Onları kırmak ya da onları uzakta bahar yapmak için son derece dikkatli olun. </li></ol> 2. Fare kornea cebine tahlil yapılması Bu bölümde, cebine bir pelet eklemek için nasıl bir cep fare kornea nasıl göstermek ve olacaktır. Pelet bulunan anjiogenik faktör kornea çevresindeki alanlarda (Şekil 1) yavaş yavaş piyasaya sürülecek. Bu gösteri, biz 8 haftalık dişi C57/Bl6 fareler kullanın. <ol><li> Fare derin sistematik ketamin (75 mg / kg) ve xylazine (5mg/kg, ip enjeksiyon) karışımı ile anestezi. Bu 30-60 dakika süreyle fare anestezi bir devlet çatısı altında devam edecek. Topikal anestezik (% 0.5 proparacaine HCl) kornea uygulanır. 5 dakika sonra, bir diseksiyon mikroskobu altında bir göz düzeltme. </li><li> Von Graefe katarakt bıçakla kornea limbus (Şekil 1'de gösterildiği gibi) kornea 1.2 -1.4 mm ortasında çok nazik bir kesim yapılır. Kornea kesmek için son derece dikkatli olun. </li><li> Bir cep korneanın ortasına bıçağı yatay olarak takılması ve limbus dikkatli bir şekilde (Şekil 1) doğru uzanan bıçak kornea epitel tabakası altında yapılır. Cep boyutu bir anjiogenik faktör içeren pelet karşılamak için yeterince büyük olması gerekir. Ponksiyon yoluyla kornea değil son derece dikkatli olun. </li><li> Forseps yavaşça cebine bir çift ile bir pelet yerleştirin. Mümkün olduğunca düz olarak pelet yapmaya çalışın. </li><li> Pellet implantasyonu sonra, topikal oftalmik antibiyotikli merhem göze uygulanır. Cihazlar hayvanlar arasında% 70 alkol pedleri ile silinir. </li><li> Dik bir duruş korumak ve daha sonra kendi ev kafesine geri kadar sıcak ve kuru bir alana taşıyın ve izlemek. Sistemik analjezikler (örneğin, buprenorfin, 2 mg / kg, ip enjeksiyon) ve topikal antibiyotikli merhem (ör: gentamisin), ameliyat sonrası 2 gün boyunca günde iki defa verilir ve fare 3 gün boyunca yakından takip edilmektedir. Şifa-cerrahi sonrası ilk 48 saat içinde tamamlanması bekleniyor. Cepli göz pelet implantasyon sonra 4-10 gün arasında bir yarık lamba biomicro kapsamında ele alınacaktır. </li></ol> 3. Temsilcisi sonuçları <ol><li> Pelet implantasyon Yedi gün sonra, fare, sistemik ve topikal olarak 2.1 'de açıklandığı gibi anestezi. </li><li> Diseksiyon mikroskop altında anjiogenik faktör tarafından indüklenen kornea kan damarları uyun. Araç ile tedavi kornea, kan damarı büyümesi (Şekil 2A, araç-tedavi kornea) görülebilir. BFGF ile tedavi kornea, sağlam anjiyogenez (Şekil 2B) görülebilir. Kan damarı büyümesi, kan damarları (yeni gemiler üst normal limbal damarları), ve toplam kan damarı alanları (Şekil 2B, bFGF kırmızı bir kesik çizgi ile tasvir maksimum uzunluğu kullanılarak değerlendirildi. ) kornea tedavi. Diğer kantifikasyon yöntemleri de 2,5 tarif edilmiştir. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3077/3077fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. H &amp; E boyama ile Normal kornea. Kan damarı yok, normal bir kornea bulunan B . , Kornea C epitel tabakası altında bir cep olun . Cebine bir pelet Embed D. Anjiogenik faktör pelet yayımlanan ve yeni kan damarlarının normal limbal damarlar büyür. <img src="/files/ftp_upload/3077/3077fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 im beş gün sonra Temsilcisi sonucupelet plantasyon. Sadece araç içeren bir pelet Kornea. Kornea yok yeni kan damarları oluşumu. Sadece önceden varolan normal limbal damarları görünür. B. Kornea bir pelet içeren bFGF. Sağlam yeni kan damarlarının (nokta çizgili) önceden varolan normal limbal damarlarından büyüdü.

<ol><li>Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+angiogenic+activity+and+hypoxia+induction+of+heterodimers+of+placenta+growth+factor%2Fvascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor.</a> The Journal of clinical investigation. 98, 2507-2511 (1996).</li>
<li>Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+cornea+micropocket+angiogenesis+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The mouse cornea micropocket angiogenesis assay.</a> Nature. 2, 2545-2550 (2007).</li>
<li>Poche, R. A., Saik, J. E., West, J. L., Dickinson, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+cornea+as+a+transplantation+site+for+live+imaging+of+engineered+tissue+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+protocols%22%5BJournal%5D)">The mouse cornea as a transplantation site for live imaging of engineered tissue constructs.</a> Cold Spring Harbor protocols. , 5416-54 (2010).</li>
<li>Zhang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-B+is+dispensable+for+blood+vessel+growth+but+critical+for+their+survival%2C+and+VEGF-B+targeting+inhibits+pathological+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">VEGF-B is dispensable for blood vessel growth but critical for their survival, and VEGF-B targeting inhibits pathological angiogenesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 106-6152 (2009).</li>
<li>Tong, S., Yuan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dose+response+of+angiogenesis+to+basic+fibroblast+growth+factor+in+rat+corneal+pocket+assay%3A+I.+Experimental+characterizations%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+research%22%5BJournal%5D)">Dose response of angiogenesis to basic fibroblast growth factor in rat corneal pocket assay: I. Experimental characterizations.</a> Microvascular research. 75, 10-15 (2008).</li>
<li>Muthukkaruppan, V., Auerbach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+the+mouse+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in the mouse cornea.</a> Science. 205, 1416-1418 (1979).</li>
<li>Ziche, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+assay+for+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+medicine%22%5BJournal%5D)">Corneal assay for angiogenesis.</a> Methods in molecular medicine. 46, 131-142 (2001).</li>
<li>Ziche, M., Morbidelli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+corneal+pocket+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">The corneal pocket assay.</a> Methods in molecular biology. 467, 319-329 (2009).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Fare kornea cep tahlil modeli, ilk olarak Muthukkaruppan VR ve Auerbach R 6 1979 yılında tarif edilmiştir. Detaylı protokolleri farklı laboratuvarlar 2,3,7,8 tarafından yayınlanmıştır. Laboratuvarımız, uzun yıllar 4 için modifiye edilmiş ve çalışmalarımız bu yöntem kullanılır . Fare kornea cep testi büyük tekrarlanabilirlik ile nispeten basit bir model. Bu modelin bir diğer avantajı, kornea, kan damarlarının normal yoksun olması nedeniyle, bu testte arka plan en az miktarda olduğunu. Bu ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Ekipman </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Diseksiyon mikroskobu </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> PZMIV-BS </td></tr><tr><td> Von Graefe katarakt bıçakla (1.5x25mm bıçak, düz) </td><td> Ambler Cerrahi </td><td> 3401E </td></tr><tr><td> Dumont # 5 forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11252-50 </td></tr><tr><td> Oftalmoskopla </td><td> Zeiss </td><td> 30 SL-M </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Ekipmanları <table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif </th><th> Şirket </th><th> Katalog # </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> bFGF (temel fibroblast büyüme faktörü) </td><td> PEPROTECH A.Ş. </td><td> 100-18B </td><td></td></tr><tr><td> Sukralfat (Sakkaroz octasulfate-alüminyum kompleksi) </td><td> Sigma </td><td> S0652 </td><td> PBS içinde% 10 </td></tr><tr><td> poli-HEMA (Poli (2-hidroksi etil metakrilat)) </td><td> Sigma </td><td> P3932 </td><td> Etanol% 12 </td></tr></tbody></table> Tablo 2. Reaktifler ve materyaller

anjiyogenez Çalışması kornea cep testi fare modeli

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

Normal kornea vasküler dokuların açıktır. Ancak, kan damarları, büyümek ve hayatta kalmak için güçlü anjiogenik faktörler 1 yönetilmektedir kornea uyarılabilir . Bu teklik kornea cep tahlil anjiyogenez çalışmalar için en çok kullanılan modeller biri yaptı. Kornea hücrelerinin çoklu katmanlar oluşturur. Bu nedenle, anjiyogenik etkisi 2,3 araştırmak için kornea ilgi anjiogenik faktör içeren bir pelet gömmek mümkündür. Burada, (I) anjiogenik faktör içeren pelet (II) (III) ilgi anjiogenik faktör tarafından tetiklenen anjiyogenez analiz pelet kornea içine gömün üretmek için nasıl bir adım adım gösteri sağlar. Temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF), en güçlü anjiogenik faktörler 4 biri olarak bilindiğinden, korneada anjiyogenez ikna etmek için kullanılır .

Kornea vasküler dokularda yoksun olduğunu eşsizdir. Ancak, güçlü bir anjiyojenik faktörler tarafından güçlü bir kan damarı büyümesi ve hayatta kalma kornea uyarılabilir. Bu nedenle, kornea bizimle anjiyogenik çalışmalar için değerli bir araç sağlayabilir. Bu protokol, kornea cep tahlil ve nasıl anjiyogenik faktörleri kullanarak bu model ile indüklenen anjiyogenez değerlendirmek için fare modeli gerçekleştirmek için nasıl kullanılacağını gösterir.

Anjiyogenez Çalışması Kornea Cep Testi Fare Modeli

Normal bir kornea vasküler dokulardan arınmıştır. Bununla birlikte, güçlü anjiyojenik faktörler ... olduğunda korneada kan damarlarının büyümesi ve hayatta kalması tetiklenebilir.

Bu prosedürün genel amacı, temel FGF'nin anjiyojenik etkisini test etmek için kornea cep deneyi modelini kullanmaktır. Bu işlem, korneada bir cep oluşturularak ve bu cebin içine temel FGF peleti yerleştirilerek gerçekleştirilir. Temel FGF daha sonra peletten salınır ve limbal damarlardan yeni kan damarlarının büyümesini uyarır.Nihayetinde, bu protokol, limbal damarlardan temel FGF peletine doğru güçlü yeni kan damarı büyümesi sağlayabilir. Merhaba, ben National Institute INIH'teki Dr. Shiley laboratuvarından Shuan. Bu modelin temel avantajı, yüksek tekrarlanabilirliğe sahip nispeten basit bir model olmasıdır.Diğer bir avantaj ise, normal korneanın kan damarları içermemesi nedeniyle arka planın oldukça net olmasıdır. Artık model hakkında genel bir fikre sahibiz. Şimdi size kornea popülasyon hastalığının nasıl oluşturulacağını adım adım göstereceğim.Hadi başlayalım. Bu prosedüre hazırlanmak için şu çözeltileri hazırlayın: ağırlıkça hacimce %10 sate ve ağırlıkça hacimce %12 PBS, poly hema ve etanol ile mikrolitre başına bir gram basic FGF. Basic FGF, -80 °C'de saklanmalıdır; ancak diğer iki çözelti oda sıcaklığında saklanabilir.50 adet anjiyojenik faktör peleti hazırlamak için, beş µL

a-mouse-model-of-the-cornea-pocket-assay-for-angiogenesis-study

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fizyolojik anjiyogenez ve yoksun Normal erişkin vaskülarize memeli doku çalışma için kullanılan cerrahi müdahaleye maruz kalmamış: (i) başlatılması ve test ajanların intraperitoneal uygulanması aşağıdaki anjiyogenez geliştirilmesi; ve sistemik uygulanması aşağıdaki (ii) anjiyogenez değişiklik Test ajanlar seçilir.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

Bu video, oküler mikrovasküler anjiyogenezi incelemek için bir ex vivo koroid filizlenme modelinin geliştirilmesini göstermektedir. Test, koroidal mikrovasküler filizlenmeyi teşvik eden belirli koşullar altında sklera ve retina pigment epiteline bağlı koroid dokusunu içeren fare gözü eksplantlarının kültürlenmesini içerir.

Oküler mikrovasküler proliferasyonu ex vivo incelemek için koroid filizlenme testi

Korneanın neovaskülarizasyon (NV) çoklu görsel patolojileri karmaşık hale getirebilir. Kontrollü, alkali-yanık yaralanması modeli kullanılarak, korneal NV bir ölçülebilir düzeyde neovasküler hastalıkları için potansiyel tedavilerinin kornea NV ve değerlendirme mekanik çalışma için üretilebilir.

Fare Kornea Neovaskülarizasyonunun bir Alkali-yanık Yaralanma Modeli

Protokol farelerde geliştirilen komea mikro-tahlili tarif eder.

Kornea mikrocep Testi: Fare Eye Angiogenezis Bir Model

Burada, neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) vasküler özelliklerini yeniden yaratan deneysel bir model olan fare lazer kaynaklı koroidal neovaskülarizasyon (CNV) protokolünü sunuyoruz. Bir kez ustalaştıktan sonra, çeşitli deneysel önlemleri test etmek için bir model sistem olarak CNV'yi güvenilir ve etkili bir şekilde indükleyebilir.

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

Iris neovaskülarizasyon, iskemik retina hastalığı, ortak bir komplikasyonu görme tehdit neovasküler glokom için neden olabilir. Burada, anjiogenez oransal maddeler noninvaziv değerlendirme için kullanılabilir deneysel Iris neovaskülarizasyon inducing için fare bir protokol açıklayın.

Delici cisim kaynaklı Iris neovaskülarizasyon Rubeosis Iridis bir fare modeli olarak

Burada kornea endotel hücrelerinin (MSK) neodimyum kullanarak Descemet zarından (DM) ayrılması için bir protokol sunuyoruz:YAG (Nd:YAG) lazer, büllöz keratopati (BK) için eksvivo hastalık modeli olarak.

Kornea Endotel Hücre Kaybının Noninvaziv, Lazer Destekli Deneysel Modelinin Geliştirilmesi

Bu protokol, mikrovasküler proliferasyonun ex vivo modeli olan koroid filizlenme testini sunar. Bu tsay koroidal mikro damarlar çoğalan dahil yolları değerlendirmek ve yabani tip ve genetiği değiştirilmiş fare dokusu kullanarak ilaç tedavileri değerlendirmek için kullanılabilir.

Oküler Mikrovasküler Anjiyogenezin Ex Vivo Koroid Filizlenme Satomu

Bu protokol, farelerde alkali yanığın neden olduğu kornea neovaskülarizasyonuna odaklanır. Yöntem, patolojik anjiyogenezi ve ilişkili moleküler mekanizmaları incelemek ve kornea neovaskülarizasyonunu önlemek için yeni farmakolojik ajanları test etmek için tekrarlanabilir ve kontrol edilebilir bir kornea hastalığı modeli oluşturur.

Alkali Yanığı ile Kornea Neovaskülarizasyonu için Bir Fare Modeli

Burada, korneayı innerve eden duyu liflerine zarar vermek için üç farklı yöntem öneriyoruz. Bu yöntemler, farelerde akson rejenerasyonunun incelenmesini kolaylaştırır. Diğer hayvan modellerine uyarlanabilen bu üç yöntem, kornea innervasyon fizyolojisi ve rejenerasyonunun incelenmesi için idealdir.

Murin Korneasında Nörotrofik Keratit ve Sinir Rejenerasyonunu İndüklemek için Üç Strateji

Bu çalışma, iki boyutlu (2D) çizik yara migrasyon testini ve üç boyutlu (3D) küresel filizlenme testini, RNA ekstraksiyonu ve immünositokimya dahil olmak üzere ilgili aşağı akış analiz yöntemleriyle birlikte, in vitro anjiyogenezi incelemek için uygun testler olarak sunmaktadır.

Çizik Yara Migrasyon Testi ve Sferoid Filizlenme Testinden Yararlanarak Anjiyogenezin Fonksiyonel ve Moleküler Düzeyde İncelenmesi

Öğrenin, fare kornea cep testi modeliyle basic FGF'nin anjiyogenik etkisini değerlendirmeyi. Bu yöntem, limbal damarlardan sağlam yeni kan damarı büyümesi üretir ve yüksek tekrarlanabilirlik sunar.

Anjiyogenez Çalışması Kornea Cep Testi Fare Modeli

Daha fazla video keşfet