18 Kasım 2012
Bu protokol zebrafish yetiştiriciliği için en uygun koşulları sağlamak için düzenli bakım ve bakım özetliyor. Video sistemi bakımı, düzenli barınma, beslenme, üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme için protokol göstermektedir.
Bu protokol, bir zebra balığı laboratuvarının düzenli bakım ve idamesini açıklamaktadır. Zebra balığı araştırmalarına olan ilginin artması nedeniyle, bir zebra balığı barındırma tesisi kurma ve sürdürme ihtiyacı da artmaktadır. Zebra balığı laboratuvarının bakımıyla ilgili literatür mevcut olsa da, kısa ve öz bir video protokolu eksikliği bulunmaktadır.
Bu video, zebrafish larvalarının sistem bakımını, beslenmesini, üretilmesini ve yetiştirilmesini açıklamaktadır. Merhaba, ben Üniversite'deki Tıp Bilimleri Fakültesi'nden ABH. Merhaba, ben Kurum'dan Manchi.
Bugün size bir zebra balığı laboratuvarının düzenli bakımı ve idamesini göstereceğiz. Zebra balıkları; genetik, farmakolojik ve davranışsal araştırmalarda popüler hale gelmektedir. Bakım kolaylıkları ve hızlı gelişimleri sayesinde, genetik modülasyona oldukça uygundurlar ve yüksek kapasiteli ilaç taramaları için elverişlidirler.
Bu bölüm kodu, zebrafish bakımıyla ilgili fikirleri balık kullanıcılarına ve yeni bir balık tesisi kurmayı düşünen araştırmacılara sunmaktadır. Öyleyse başlayalım. Birçok şirket balık sistemleri sağlamaktadır, ancak biz aquatic habitats sistemlerini kullanıyoruz.
Laboratuvarımızda zebra balıkları 26 ile 28.5 °C arasında ve 14 saat ışık, 10 saat karanlık döngüsünde tutulmaktadır. Zebra balıkları, sistem suyunu sürekli olarak filtreleyen ve havalandıran sirkülasyonlu bir sistemde beslenmektedir. Sağlıklı bir su ortamı için gerekli su kalitesini korumak amacıyla, sistemimizde farklı türlerden oluşan bir filtre seti kullanılmaktadır.
Tanklardaki su, tekrar tanka dolaştırılmadan önce bir filtre pedi, kanister filtre, biyolojik filtre, aktif karbon filtresi ve UV filtresinden geçer. Zebrafish sisteminde kloru alınmış veya dinlendirilmiş su kullanılır. Su, en az 48 saat dinlendirilerek klorundan arındırılabilir.
Sistem suyunun pH değerini günlük olarak kontrol edin ve 6,8 ile 7,5 arasında tutun. Sodyum bikarbonat kullanarak balık tankları düzenli olarak temizlenmelidir. Bir balık tankını temizlemek için, bu tanka giden su akışını kapatın, tankı geriye doğru eğerek fazla suyu boşaltın ve tankı sistemden dikkatlice çıkarın.
Temiz bir tank hazırlayın ve içini sistem suyuyla doldurun. Balıkları bir balık kepçesi yardımıyla dikkatlice bu tanka aktarın. Kapağı kapatın ve tank isim etiketini dikkatlice yeniden yerleştirin.
Tankı sisteme yerleştirin. Tüpü tekrar tankın içine yerleştirin ve su beslemesini açın. Balık ağını ve tankı %70 ethanol ile dekontamine edin.
Suyla durulayın ve kurumaya bırakın. Yeniden kullanmadan önce, dolaşım sisteminin filtrelerinin düzgün çalıştığından emin olmak için düzenli olarak kontrol edilmesi ve değiştirilmesi gerekir.
120 mikron filtre pedi her gün kontrol edilir ve değiştirilmeden önce su akış yönüne göre yeniden konumlandırılır. Kanister filtre haftalık olarak değiştirilmelidir. Kanister filtreyi değiştirmek için, filtreyi bir anahtar veya ellerinizle çıkarın.
Su sızıntısını önlemek için altına plastik bir örtü veya havlu serin. Yeni bir kanister ve filtre yerleştirip üniteyi sisteme geri takın. Önce elle, ardından bir anahtar yardımıyla dikkatlice sıkın.
Gerektiğinde, karbon filtre iki haftada bir değiştirilmelidir. Karbon filtreyi değiştirmek için filtreyi dikkatlice çıkarın. Bir İngiliz anahtarı yardımıyla, filtredeki aktif karbonu boşaltın ve yerine yeni aktif karbon ekleyin.
Karbon tutucuyu yeniden takın ve filtre ünitesine yerleştirin. Filtre ünitesini sisteme geri takın. Sistemi açın ve suyun filtreye akıp akmadığını kontrol edin.
Biyolojik filtre altı ayda bir temizlenmelidir. Biyolojik filtreyi değiştirmek için filtreyi sistemden çıkarın. Basınç tahliye düğmesine basarak filtredeki basıncı boşaltın.
Filtreyi çevirerek açın ve kapağı çıkarın. Cy Oex'i sudan ayırmak için içeriği bir süzme kabına boşaltın. Cy Oex çok kirliyse, yenisiyle değiştirin.
Filtreyi yeni cy ax ile doldurun. Üniteyi sistem suyu ile doldurun. Filtrenin kapağını kapatın, üniteyi tekrar takın ve cihazı açın.
Biyolojik kontaminantları kontrol etmek için UV filtreler kullanılır ve bunlar her dokuz ila 10 ayda bir değiştirilmelidir. Zebra balıkları, kuru yemle veya artemia gibi canlı yemlerle beslenebilir; artemia yumurtaları yerel evcil hayvan mağazalarından temin edilebilir ve burada açıklanan basit adımlar takip edilerek laboratuvarda açılabilir. Litre başına 30 ila 35 gramlık bir çözelti hazırlamak için sistem suyunda kırmızı deniz tuzunu çözün.
Artemia kuluçka kabını tuzlu suyla doldurun ve litre başına 1,2 yemek kaşığı konsantrasyonda Artemia yumurtaları ekleyin. Kuluçka kabını bir hava pompasıyla kuvvetlice havalandırın ve Artemia yumurtalarının yaklaşık 48 saat boyunca gelişmesi için bekletin. Hava borusunu çıkarın ve kültürün dört ila beş dakika boyunca çökelmesini sağlayın.
Döllenmiş tuzlu su karidesleri kuluçka kabının dibinde toplanır; kuluçka kabının altındaki musluğu kullanarak, döllenmemiş yumurtaları içeren ilk akışı boşaltın. Ardından döllenmiş tuzlu su karideslerini toplayın. Tuzlu su karideslerini tuzlu sudan ayırın.
Bir tuzlu su karidesi toplama ağı kullanarak karidesleri bir kaba durulayın. Sistem suyu kullanıldığında, tuzlu su karidesleri kabın dibinde yüksek konsantrasyonda toplanır ve zebra balıklarını beslemek için hazır hale gelir. Tuzlu su karideslerini bir pipet veya damlalık kullanarak balıklara yedirin.
Dağıtılan yem miktarı, münferit tankların popülasyon büyüklüğüne bağlıdır. Suya yem enjekte edildikten sonra aç balıklar, düzenli egzersizleri için önemli olan brine shrimp'leri yakalamak için yüzerler. Kuru besleme, ya sucul habitatlar, balık yemi dağıtıcısı kullanılarak ya da basit bir kaşık yardımıyla gerçekleştirilebilir.
Zebra balıkları ışık başlangıcında üremeye başlar. Yumurtalar, in-tank veya çiftleme yöntemiyle elde edilebilir. In-tank üreme daha emek verimli olduğu için düzenli embriyo toplama işlemlerinde kullanılırken; genlerin veya mutasyonların tank içi üremede taranması gerektiğinde çiftleme yöntemi tercih edilir, tank içi üreticiyi kurun ve yavaşça bir tankın içine bırakın.
Işık açıldıktan sonra, balıkların çiftleşmesine izin vermek için üretme düzeneğini tankta yaklaşık 15 dakika bekletin; ardından üreticiyi tanktan çıkarın ve yumurtaları toplayın. Pear wise üretimi, üretme tankı kurularak ve sistem suyuyla doldurularak öğleden sonra geç saatlerde hazırlanır. Bir dişi ve bir erkek balığı tankın karşıt kenarlarına aktarın.
Dişiler, daha büyük karınları sayesinde erkeklerden ayırt edilebilir. Ayırıcıyı ertesi sabah çıkarın. Işığın başlamasından kısa bir süre sonra, balıkları 20 dakika boyunca veya tankın dibine yeterli sayıda embriyo bırakana kadar rahatsız edilmeden çiftleşmeye bırakın.
Üretimden sonra, balıkları tanklarına geri koyun. Yumurtaları bir süzgeç yardımıyla toplayın. Embriyoları iyice yıkayın.
Sistem suyu ile. Embriyoları, süzgeci embriyo besiyeri ile durulayarak bir petri kabına aktarın. Embriyolar mikroskop altında gözlemlenebilir.
Döllenmemiş embriyolar, bir iğne ve pipet kullanılarak döllenmiş embriyolardan ayrılmalıdır. Döllenmiş yumurtalar, döllenmemiş yumurtalardan ayrıldıktan sonra, larvalar çıkana kadar yaklaşık 28,5 °C sıcaklıktaki bir inkübatörde 72 saat boyunca tutulur. Artık larvalar koryonlardan (COR) çıkmış ve serbestçe yüzmektedir.
Larvaların döllenmeden beş gün sonra beslenmeye başlanması ve sisteme aktarılmadan önce birkaç gün durgun suda tutulması gerekir. Larvaları, yaklaşık 300 ila 400 mikron boyutunda küçük bir süzgeç içeren tanka nazikçe aktarın. 14 gün sonra, larva tankları sisteme yerleştirilebilir ve düşük debili döngüsel su ile beslenebilir.
Larvaların ve yetişkin balıkların boyutuna bağlı olarak farklı boyutlarda bariyerler kullanılmalıdır. Embriyoların cinsel olarak olgun yetişkinlere dönüşmesi genellikle üç ay sürer. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.
Bu protokol, optimal zebra balığı yetiştiriciliği için gerekli olan düzenli bakım ve uygulamaları ana hatlarıyla açıklamaktadır. Sistem bakımı, barındırma, besleme, üretme ve zebra balığı larvalarının büyütülmesine yönelik ayrıntılı prosedürleri içermektedir.
Sağlam zebra balığı bakım protokollerinin oluşturulması, farmakolojik ve genetik araştırmalar için güvenilir preklinik modelleri destekler. Standartlaştırılmış barındırma, besleme ve üretme uygulamaları, biyolojik değişkenliği azaltır ve erken keşif iş akışlarında veri tekrarlanabilirliğini artırır. Bu durum, hastalıkla ilgili sistemlerde tutarlı fenotipik tarama ve hedef doğrulamasına olanak tanır.
Zebrafish bakımı, kararlı ve ölçeklenebilir bir biyolojik platform sağlayarak, erken hedef doğrulamadan öncü bileşik tanımlamaya ve preklinik profillemeye kadar olan keşif sürecine entegre olur.