Name: Bir Nöro-İnvazif encephalitic Virüs Vivo Görüntüleme Sistemleri (IVIS) Algılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Öğrenin, biyolüminesan teknoloji ve IVIS kullanarak merkezi sinir sistemi enfeksiyonlarını canlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik, viral yayılımı gerçek zamanlı izleyerek aşı ve antiviral tedavi etkinliğini değerlendirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu makale için video düzenleme ile ona yardım için Translasyonel Bilimleri UTMB-NIH hibe 1UL1RR029876-01 ve Alisha Prather Enstitüsü.

1. Hayvan Hazırlama <ol><li> Hayvan Varış: Hayvan biyogüvenlik seviye 2 (ABSL2) tesislerine girişte, hayvanlar da yeni ortama gelmesini 2 gün en az izin. Bu dinlenme döneminin ardından, onların sağlık ve genel fiziksel görünümünü değerlendirmek için hayvanlar inceleyin. <ol><li> Floresan gazetecilere kullanarak zaman GI otofloresans ve arka sinyal miktarını sınırlamak için bir yonca ücretsiz diyet tüm hayvansal konularda yerleştirmek önemlidir. </li></ol></li><li> Hayvanlar Tıraş: görüntüleme sırasında kranial bölgeden tespit bioluminescent sinyal artırmak için; tüm hayvanların kafaları traş ediyorum. Oksijen gaz karışımı ile anestetize hayvanlar izofluran ve buharlaştırılır. Hayvanlar tamamen uyuşturulduktan olunca, başlarını traş elektrikli makasları kullanın. Bir kez tıraş ile bitmiş, kendi kafesleri hayvanların dönmek ve anestezi etkisinden tam iyileşme için gözlemlemek. </li><li> Bio Medic VeriSistemleri (KMY) transponder ekleme (hayvanlar tamamen uyuşturulduktan ise farelerin tıraş ardından gerçekleşmek üzere): daha az invazif yöntemlerin için önceden programlanmış BMDS kablosuz transponder her fare dorsal bölgede subkütan sıcaklığı implant izlemek için. Bunlar, transponder kablosuz kimlik ve sıcaklık kayıt için izin verir. Transponder, implantasyonu takiben yara bir veteriner dereceli doku yapıştırıcısı uygulayın. </li><li> Temel toplama: Enfeksiyon önce, tüm hayvanlar için bir temel sıcaklık ve ağırlık kaydedin. Fareler anestezi altında iken retro-orbital (RO) sızdırma yoluyla plak redüksiyon nötralizasyon testi (PRNT) analizi için kan toplayın. Kan toplama takiben, potansiyel sekonder bakteriyel enfeksiyon azaltmak için veteriner antibiyotikli göz merhemi uygulanır. Bu, temel toplama hayvanlar fareler üzerinde meydana gelen gerilme ile anestezi altına yerleştirilir sayısını dikkate alınarak, tamamlanması gerekmektedir. Gelecek RO koleksiyonları sfare anestezi altında iken hould, görüntüleme sonra tamamlanacak. Bir RO elde edilen maksimum kan 200 ul civarında olmalıdır. </li><li> Enfeksiyon: Daha önce tarif edildiği gibi anestezi altında yer fareler. Fosfat ile sulandırılmış 40 ul toplam hacim içinde-Lusiferaz TC83 5x10 6 ila 5x10 pfu 7 arasında bir doz kullanılarak burun içi yolu üzerinden inoküle intranazal enfeksiyon ile (PBS) Tamponlu Tuzlu. HIV bulaştıktan sonra, kendi konut kafes içinde fareler yerleştirin ve kurtarma gözlemlemek. </li></ol> 2. Hayvan Görüntüleme Yasal Uyarı: Onların konut ünitesi, biyogüvenlik kabini (BSC), veya her zaman XIC çevreleme kutu içinde fare tutun. Bu protokol için onaylanmış BSC&#39;ler Sınıf II Tip B1 veya B2 vardır. <ol><li> 15 mg / ml &#39;lik bir konsantrasyonda, intraperitoneal (ip), luciferase ve vücut ağırlığının gramı başına 10 ul ile tüm hayvanlar enjekte edilir. <ol><li> Fareler injecte Ampligen kabul edilmelidirkendi grup dayalı -4 saat sonrası enfeksiyon veya +48 saat sonrası enfeksiyona 12.5 mg / kg vücut ağırlığı dozunda d IP. </li></ol></li><li> Önceki luciferase ile enjeksiyon, XIC-3 çevreleme kutusu içinde uygun bir uyum sağlamak için üç gruba fareler ayırın. <ol><li> Tüm görüntüleme için prosedür boyunca korneanın kurumasını önlemek için göz merhemi / yağlayıcı kullanmaktadır. </li></ol></li><li> LivingImage yazılım ve basın görüntüleme kutusu hazırlamak için Initialize açın; seti otomatik kaydetme, otomatik maruz kalma süresinin (otomatik LivingImage yazılım 3.2 ve daha yeni yeni bir özellik üzerinde pozlama süresi), C alanını görüntülemek ve açmak için filtre; alanı bakış Eğer görüntüleme vardır farelerin sayısı üzerine dayanır ve diğer görüntüleme projeleri için gerekli olduğu gibi filtre optimize edilebilir. </li><li> Hava, kömür filtrelerde dolmamış olması onaylayın, oksijen deposu dolu ve izofluran rezervuar doldurulur. XIC-3 i elektrik bandı küçük şeritler yerleştirinHangi solation kutusunu görüntüleme sırasında hayvan hareketlerini azaltarak yardımcı olmaktadır. </li><li> 3-5 dakika İzofluran indüksiyon odasında (kapak açık değilken) içindeki bölüm 2.1 ve yerde açıklandığı gibi luciferase IP ile fareler enjekte. </li><li> 5 dakika sonra, indüksiyon odasının kapağını kapatın ve İzofluran akışı başlar. Anestezik yaklaşık 2.0 L / dk oksijen akış hızı set ile yaklaşık% 3-5 işletilmektedir. Bir kez tam olarak bilinçsiz bir ek 30 saniye bekleyin ve XIC-3 izolasyon kutusuna fare aktarın. Bu prosedür indüksiyon odasında (IVIS birim kendi Pasif Fuarı kutu ve XIC-3 çevreleme kutusuna doğrudan içinde / soketleri üzerinden bağlanır içeren gelen izofluran kaybı içerecektir olarak kullanılmaktadır biyogüvenlik kabini izofluran atma güvenli olanak sağlayın ) içerdiği anestezik akışını sağlamak için. <ol><li> Bir bağlı izofluran konektör ile XIC-3 izolasyon kutusu içine çip / grup sayısı dayalı fareler aktarınd açın. Onlar yavaşça bant şeritlerini üzerine oturtulmuş başkanları ile sternum yatabilme ortaya koyulur böylece fareler yerleştirin. </li></ol></li><li> Cavicide ile etanol, sprey eller ve XIC-3 alt ile XIC muhafaza kutusundan silin ve IVIS görüntüleme odasına aktarın. Bir kez görüntüleme ünitesi içindeki çevreleme kutusuna anestezi bağlayın. </li><li> Sonra luciferase ve enjeksiyonu takiben 10 dk, canlı görüntü yazılımı ile görüntü fareler. </li><li> Açık bir filtre ile ilk görüntüleme takiben, Dizi analizi ve bioluminescent ateşböceği lusiferaz için Resim Sihirbazı kurulumu kullanarak bir DLIT 3-Boyutlu görüntüleme başlatmak. Bu görüntüleme işlemi 4-5 dk sürer ve istenen farelerin sayısı için ilgili bir görüş alanı az tamamlanması gerekmektedir. <ol><li> Ex-vivo analiz beyin nekropsi sonra mümkündür ve koleksiyonudur. Steril bir Petri kabı beyin yerleştirin, ima içinde 50-100 üstüne stok luciferase ul ve yerine damlakutusu ging. </li></ol></li><li> DLIT görüntüleme tamamlandıktan sonra 15-17 dk sonrası enfeksiyon ikinci bir açık filtre görüntüyü Finalize. Dizi analizi kapalı olduğundan emin olun ve görünümü ve filtre ayarları alanında önceki ayarlarına geri döner. </li></ol> 3. Dönüş Fareler ve Veri Analizi <ol><li> Izofluran buharlaştırıcı kapatın ve biyogüvenlik kabini geri XIC çevreleme kutusu aktarın. </li><li> Kendi konut ünitesi içinde geri fareler yerleştirin, geri gövde rafına uygun dezenfekte edici ve yer ile dış sprey, üst kısmını kapatın. <ol><li> Olun fareler tamamen anestezi kurtarıldı. </li></ol></li><li> Görüntüleme tamamlanıncaya kadar deneme gerektirir yukarıdaki işlemi tekrarlayın. </li><li> , BSC dezenfekte ekipmanı kapatın ve daha fazla analiz için bir dış laboratuar konuma tüm veri aktarmak. </li><li> Veri Analizi ve IVIS sonuçları uti dayalı 3 boyutlu görüntüler oluşturmakLivingImage yazılımı lizing. <ol><li> Görüntü düzgün odaklı ve ışıklandırma / renk dengesi ayarlanmış olduğundan emin olun. Aracı Palet içinde seçenekleri Görüntü, ayarlayın Düzeltmeler, Görüntü Bilgi ve YG Araçları içerir. </li><li> Konuma dayalı spesifik sinyal gücünü belirlemek için ROI şekiller yararlanın. </li><li> , Fare vücut vurgulamak için yüzey topografyası Yeniden İnşa 3D DLIT yeniden başlatmak ve topografik rekonstrüksiyonuna organı haritayı ayarlamak için lineer uygun kullanın. </li></ol></li><li> Ayrıca viral titrasyon ölçümü, kan ve organlarının toplanması yoluyla tamamlanabilir. Bu çalışmada Titrasyon modifiye kartal orta (MEM) beyin dokusunun homojenizasyon ile tamamlanmıştır. Homojenat, seri olarak seyreltildi ve 1 saat boyunca Vero hücreleri 6 plaka enfekte edildi. Hücreler,% 1.5 agarose/2xMEM kaplaması ile kaplanmış ve 37 derece az 2 gün için inkübe edilmiştir. Hücreler 30 dakika için% 10 formalin ile sabitlenmiş ve lekelikristal viyole. </li></ol>

<ol><li>Steele, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Neurovirulence+and+Tissue+Tropism+of+Wild-type+and+Attenuated+Strains+of+Venezuelan+Equine+Encephalitis+Virus+Administered+by+Aerosol+in+C3H%2FHeN+and+BALB%2Fc+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology+Online%22%5BJournal%5D)">Comparative Neurovirulence and Tissue Tropism of Wild-type and Attenuated Strains of Venezuelan Equine Encephalitis Virus Administered by Aerosol in C3H/HeN and BALB/c Mice.</a> Veterinary Pathology Online. 35, 386-397 (1998).</li>
<li>Ludwig, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+neurovirulence+of+attenuated+and+non-attenuated+strains+of+Venezuelan+equine+encephalitis+virus+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Comparative neurovirulence of attenuated and non-attenuated strains of Venezuelan equine encephalitis virus in mice.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 64, 49-55 (2001).</li>
<li>Charles, P. C., Walters, E., Margolis, F., Johnston, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Neuroinvasion+of+Venezuelan+Equine+Encephalitis+Virus+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Neuroinvasion of Venezuelan Equine Encephalitis Virus in the Mouse.</a> Virology. , 208-662 (1995).</li>
<li>Volkova, E., Gorchakov, R., Frolov, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficient+packaging+of+Venezuelan+equine+encephalitis+virus-specific+RNAs+into+viral+particles+is+determined+by+nsP1-3+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">The efficient packaging of Venezuelan equine encephalitis virus-specific RNAs into viral particles is determined by nsP1-3 synthesis.</a> Virology. 344, 315-327 (2006).</li>
<li>Patterson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+non-invasive+imaging+of+alphaviral+brain+infection%3A+Reducing+animal+numbers+and+morbidity+to+identify+efficacy+of+potential+vaccines+and+antivirals%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Rapid, non-invasive imaging of alphaviral brain infection: Reducing animal numbers and morbidity to identify efficacy of potential vaccines and antivirals.</a> Vaccine. 29, 9345-9351 (2011).</li>
<li>Cook, S. H., Griffin, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luciferase+Imaging+of+a+Neurotropic+Viral+Infection+in+Intact+Animals%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Luciferase Imaging of a Neurotropic Viral Infection in Intact Animals.</a> J. Virol. 77, 5333-5338 (2003).</li>
<li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+indicators+in+living+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nat. Med. 4, 245-247 (1998).</li>
<li>Osorio, J. E., Iams, K. P., Meteyer, C. U., Rocke, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Monkeypox+Viruses+Pathogenesis+in+Mice+by+In+Vivo+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Comparison of Monkeypox Viruses Pathogenesis in Mice by In Vivo Imaging.</a> PLoS ONE. 4, e6592(2009).</li>
<li>Luker, G. D., Prior, J. L., Song, J., Pica, C. M., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+Imaging+Reveals+Systemic+Dissemination+of+Herpes+Simplex+Virus+Type+1+in+the+Absence+of+Interferon+Receptors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence Imaging Reveals Systemic Dissemination of Herpes Simplex Virus Type 1 in the Absence of Interferon Receptors.</a> J. Virol. 77, 11082-11093 (2003).</li>
<li>Russell, W. M. S., Burch, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRussell%2C+WMS+%22The+Principles+of+Humane+Experimental+Technique%22">The Principles of Humane Experimental Technique</a>. , (1959).</li>
<li>Kuehne, R. W., Pannier, W. L., Stephen, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indirect+mouse+model+for+the+evaluation+of+potential+antiviral+compounds%3A+results+with+Venezuelan+equine+encephalomyelitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Indirect mouse model for the evaluation of potential antiviral compounds: results with Venezuelan equine encephalomyelitis virus.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 11, (1977).</li>
<li>Lukaszewski, R. A., Brooks, T. J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pegylated+Alpha+Interferon+Is+an+Effective+Treatment+for+Virulent+Venezuelan+Equine+Encephalitis+Virus+and+Has+Profound+Effects+on+the+Host+Immune+Response+to+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Pegylated Alpha Interferon Is an Effective Treatment for Virulent Venezuelan Equine Encephalitis Virus and Has Profound Effects on the Host Immune Response to Infection.</a> J. Virol. 74, 5006-5015 (2000).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu protokol vivo analizi için görüntüleme yönlerini kapsar iken, gelecekteki çalışmalar için önemli bir faktör olarak bioluminescent vektör tanımak önemlidir. Lusiferaz ifadesi için bir vektör olarak TC83 oluşan kullanımı, VEEV zayıflatılmış bir aşı suşu, enzim büyük miktarlarda 1-4 daha önce tarif edildiği gibi merkezi sinir sistemi içinde, virüsün yüksek çoğaltma oranına bağlı üretilmektedir sağlar. Rekombinant virüsün daha fazla zayıflatılması, ikinci bir alt genomik promotör ve lusiferaz gen sonu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> D-lusiferin </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> İzofluran </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Xenogen IVIS Sistemi (Spektrum) </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td> XGI-8-gaz Anestezi Sistemi </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td> XIC-3 Sınırlama Kutusu </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td> LivingImage 4.0 Yazılım </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Telemetri / tanımlama çipleri </td><td> Bio Medic Data Systems </td><td> IPTT-300 </td><td> Hayvan kimlik ve Temperdüs ük </td></tr><tr><td> 26 gx 3/8 &quot;iğne ile BD Integra 1ml TB şırınga </td><td> Fisher Scientific </td><td> 305279 </td><td></td></tr><tr><td> Vet Bond doku yapıştırıcısı </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9259532 </td><td></td></tr><tr><td> Vetropolycin Oftalmik merhem </td><td> Webster Veteriner Ürünleri </td><td> 78444656 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco Fosfat Salin 1X Buffered </td><td> Invitrogen </td><td> 14190-144 </td><td></td></tr><tr><td> BMDS Chip Okuyucu </td><td> Bio Medic Data Systems </td><td> DAS-7007S </td><td></td></tr><tr><td> DAS-HOST Yazılım </td><td> Bio Medic Data Systems </td><td></td><td> Prob bilgileri indirmek için kullanılır </td></tr></tbody></table>

bir nöro-İnvazif encephalitic virüs vivo görüntüleme sistemleri (ivis) algılama

In Vivo Imaging Systems (IVIS) Detection of a Neuro-Invasive Encephalitic Virus

Görüntüleme teknolojisi Modern gelişmeler viral araştırmalar gerçekleştirilir şekilde daha da geliştirilmesi ve arıtma teşvik. Başlangıçta Hume&#39;un 3R&#39;si yılında Russel ve Burch tarafından önerilen (değiştirilmesi, azaltılması, arıtma), bilimsel araştırma hayvan modellerinin kullanımı bilimsel doğruluk ve hız artırırken hayvan kullanımını azaltmak için yeni yöntemler belirlemek için sürekli baskı altındadır. Hume&#39;un sorumlularına büyük bir meydan okuma Ancak, hayvan hastalıklarının morbidite ve genel numaraları azaltırken çalışmalar istatistiksel olarak doğru olduğundan emin olmak için nasıl. Aşı etkinlik çalışmaları şu anda istatistiksel olarak anlamlı kabul edilebilmesi için çok büyük bir hayvan sayısı gereklidir ve sıklıkla immün koruma tanımlanması için yüksek morbidite ve mortalite uç ile sonuçlanabilir. Biz giderek bir ence ile merkezi sinir sistemi (MSS) işgali izlemek için bir ateş böceği bioluminescent enzim ile birlikte in vivo görüntüleme sistemleri (IVIS) kullanılmıştırbir fare modelinde phalitic virüs. Tipik olarak, hastalık yavaş ilerler, bununla birlikte virüs replikasyonu, özellikle merkezi sinir sistemi içinde, hızlı ve sık sık, ölümcül sonuçlara yol açabilir. TC83-Luc ile farelerin intranazal enfeksiyonu takiben, zayıflatılmış bir Venezüella ensefaliti virüsü suşu bir lusiferaz gen ifade değiştirilmiş, biz en az üç gün klinik hastalık belirtilerinin gelişiminden önce beynin içindeki virüs replikasyonu görselleştirmek edebiliyoruz. Biz klinik semptomlar ortaya çıkmadan önce hızlı TC83-Luc enfeksiyona karşı tedavi ve aşı koruması tespit edebiliyoruz bir anahtar encephalitic hastalık gelişimi nokta olarak MSS işgali kullanılması. IVIS teknolojisi ile hayvan sayıları ve morbiditeyi azaltırken uyuşturucu tedavi ve aşıların hızlı ve doğru test göstermek edebiliyoruz.

Virüs çoğaltma merkezi sinir sistemi (Şekil 1) içine nazal bölgesinden hareket ederken bir genetiği değiştirilmiş virüs ile, TC83-Lusiferaz, biz bioluminescent sinyal gücü bir artış gördüm. Yüksek viral replikasyon hızı nedeniyle, vektör ve vektör hayvan bağışıklık yanıtı bağlı bioluminescent sinyal düzeyi yüksek (Şekil 2A) görmek için bekliyoruz. Biz CNS içindeki viral replikasyon pik (Şekil 2B) ile birlikte, günde 5-7 sonrası enfeksiyon arasındaki, bu sinyal artışı zi...

Bir roman olarak lusiferaz ve in vivo görüntüleme sistemleri (IVIS) olarak kullanılması klinik gelişmeler ortaya çıkmadan hastalığın bitiş noktaları tespit etmek anlamına gelir. IVIS bizim gelecekteki çalışma için daha doğru bir hastalık modeli sağlayan, gerçek zamanlı olarak birden fazla gün içinde encephalitic virüs istilasına görselleştirmek için izin verdi. Bu da bize daha hızlı şu anda kullanılan hayvan modellerinde daha antiviral ve aşıların potansiyel koruyucu özellikleri tanımlamak için izin verdi. Çoklu zaman puan üzerinden bireysel hayvanların kullanmak için yeteneği azalmış hayvan gereklilikleri, masraflar ve hastalık çalışmanın daha insancıl ve bilimsel yöntemlerle sağlanması yararlanılan hayvanlar genel morbidite sağlar.

Bir Nöro-İnvazif encephalitic Virüs Vivo Görüntüleme Sistemleri (IVIS) Algılama

Görüntüleme teknolojisindeki modern ilerlemeler, viral araştırmaların yürütülme yöntemlerinde daha fazla geliştirme ve rafine etmeyi teşvik etmektedir. İlk olarak ... tarafından önerilen

Bugün, biyolüminesans teknolojisi kullanarak Aurine türlerinde bir alfa virüsünün neden olduğu merkezi sinir sistemi enfeksiyonunun tespit edilmesine yönelik bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, konakçı içindeki yayılımı sırasında virüsün replikasyonunu takip edebilmemizi sağlayan, içine ateş böceği lusiferaz geni yerleştirilmiş Venezuela equine ensefaliti canlı atenüye aşı suşu olan TC 83'ü kullanmaktadır. Yakın zamanda yayımlanan bir aşı makalesinde, MSS istilasını görselleştirme yeteneğimizi kanıtlamış ve bunu, kontrol gruplarımızda klinik hastalık belirtileri ortaya çıkmadan önce aşıların ve antiviral tedavilerin etkinliğini test etmek için bir çalışma sonlanım noktası olarak kullandığımızı göstermiş bulunuyoruz.Merhaba, benim adım Allison Ard; University of Texas Medical Branch bünyesindeki yüksek korumalı laboratuvarlarda hayvan teknoloğu olarak görev yapmaktayım. Bu videoda izleyeceğiniz çalışma; şahsım, UTMB'de lisansüstü öğrencisi olan Michael Patterson ve laboratuvarımızdaki kıdemli lisansüstü öğrencisi Katie Taylor tarafından gerçekleştirilmiştir. Görülecek tüm çalışmalar, çevresel sağlık ve güvenlik düzenlemelerine uygun olarak, tam IACUC onayıyla Galveston Ulusal Laboratuvarı'nda, in vivo görüntüleme sistemleri kullanılarak tamamlanmıştır.IVUS, her bir hayvan için günlük olarak görüntüleme yapabilme kabiliyetimiz sayesinde çalışmalarımızda gereken hayvan sayısını azaltmamıza olanak tanır. Bugün sunulacak genel bakış; hayvanın ön alın tıraşı ve BMDS'yi içeren hazırlığını, çipleme işlemini, TC 80 D ile intranazal enfeksiyonu, görüntüleme için Lucifer'in intraperitonal enjeksiyonunu, hayvanın Biocon muhafaza kabininden görüntüleme kutusuna taşınmasını ve yönetimini gösterecektir. Görüntüleme kutusundan hayvanı caliper görüntüleme ünitesine aktaracağız; ardından gerçek görüntüleme sürecini, iki ve üç boyutlu görüntülemeyi ve görüntüleme sonrası hayvanların biyogüvenlik kabinine geri transferini gerçekleştireceğiz.Hayvan laboratuvarımızda, tüm in vitro ve in vivo prosedürlerin gerçekleştirildiği bir adet 2. Sınıf biyogüvenlik kabini bulunmaktadır. Biyogüvenlik kabininin yanında, ekli isofluran buharlaştırıcı ve bilgisayar arayüzüne sahip Cali ivu spectrum yer almaktadır. İsofluran buharlaştırıcı, inhalasyon anestezisinin hassas bir şekilde uygulanmasını sağlar ve farelerin anesteziye alınması için enjekte edilebilir anesteziklere kıyasla daha hızlı ve güvenli bir yöntemdir.XI C3 görüntüleme kutusu, laboratuvar içinde hayvanların güvenli bir şekilde taşınmasını sağlayan, HEPA filtrasyon sistemine sahip kapalı bir ünitedir. Önceki çalışmalarda, koyu renkli tüylere sahip deniz türlerinin, kürkleriyle doğrudan ilişkili olarak inhibe edilmiş biyolüminesans sinyalleri verdiğini belirledik. Çalışma boyunca sinyal tespitini iyileştirmek için alın ve burun bölgesinin tıraş edilmesini öneriyoruz.Çalışmalarımız boyunca, sıcaklık ve hayvan kimlik bilgilerini kablosuz olarak toplamamıza olanak tanıyan BMDS transponder çiplerini kullanıyoruz. Bu toplama yöntemi, hayvanla temasın ve stresin azaltılmasını sağlar. Kürk, bir etanol mendiliyle temizlenir ve çip deri altına yerleştirilir.Fare anestezi altındayken, intranazal enfeksiyon için hayvanları anesteziye alırız. Bilinç kaybı gerçekleştikten sonra, her bir hayvanı burnu yukarıya bakacak şekilde ensesinden nazikçe tutarız.Her bir burun deliğine 20 µL pipetlenir. Fare başına toplam 40 µL için, inokülumun boğazın arkasında birikmemesi amacıyla damlalar arasında hayvanların nefes almasına izin verilir. IP luciferian enjeksiyonu için hayvanlar, enselerinden tutularak ve kuyrukları serçe ile yüzük parmağı altına yerleştirilerek nazikçe sabitlenir.Ardından, Luciferin'in kan dolaşımı içinde maksimum difüzyonunu sağlamak için her hayvanın abdomenine enjekte edilir. Görüntüleme için fareleri anestezi altına almadan önce enjeksiyondan sonra beş ila 10 dakika bekleriz. Anestezi uygulandıktan sonra, hayvanlar XI C3 görüntüleme muhafaza kutusuna taşınabilir.Kranial yer değiştirmeyi azaltmak için başları nazikçe siyah elektrik bandı şeritleri üzerine yerleştirilir. Solunum hareketinin tüm görüntüleme süreçlerini etkileyeceği göz önüne alındığında, üç boyutlu görüntüleme, tam ekstremite protraksiyonu ve XI C3 ünitesi içinde yüzüstü pozisyon, optimal topografik haritalama sağlar. Tüm hayvanlar uygun şekilde yerleştirildiğinde, XI C3 kutusunu kapatın, ünitenin dışını etanol ile silin ve kutuyu biyogüvenlik kabininden çıkarmadan önce ellerinizi dezenfekte edin.XI C3 kutusunu ivus Görüntüleme Ünitesinin içine yerleştirirken, anestezi giriş ve çıkışlarının XI C3 kutusuna bağlı HEPA filtrelere doğru şekilde bağlandığından emin olun. Ayrıca, görüntüleme ünitesini kapatmadan ve anestezi akışını başlatmadan önce, görüntüleme ızgarasının fareleri tamamen çevrelediğinden emin olun. Canlı görüntüleme yazılımını açtıktan sonra, kullanıcı adınızla giriş yapmanız gerekecektir.Ardından IVUS ünitesini başlatırsınız. IVUS ünitesi hazır olduğunda, yaklaşık -90 °C civarında gerçekleşen sıcaklık göstergesi yeşile dönecektir. Otomatik algılamalı pozlama süresini kullanıyoruz ve diğer tüm ayarları varsayılan değerlerinde bırakıyoruz.Görüntü elde edildikten sonra ana ekranda görünecektir. Güçlü sinyal yoğunluğuna sahip belirli alanları otomatik olarak tespit etmenize olanak tanıyan ilgi bölgelerini seçme seçeneğiniz bulunmaktadır. Ayrıca, sistemin üç boyutlu görüntüleme için otomatik olarak tanımlamadığı ve görselleştirmek istediğiniz yoğunluk bölgelerini manuel olarak girmenize de olanak tanır.Bir sekans kurulum seçeneği belirleyin, görüntüleme sihirbazını seçin ve biyolüminesansı seçin. Biyolüminesans seçildikten sonra DLIT'e tıklayın ve ardından sonraki seçeneğine tıklayın. DLIT altında, US Firefly için uygun raporun seçili olduğundan emin olun ve Sonraki seçeneğine tıklayın.Tüm bilgilerinizin doğru olduğundan emin olun. Bizim örneğimizde, C boyutunda bir görüş alanına sahip bir farenin görüntülemesi yapılmaktadır. Ardından "ileri"ye tıklarız ve bu işlem, 60 nanometreden 40 nanometreye kadar değişen dalga boylarına sahip beş görüntülük bir set oluşturur.İlk görüntümüzde, üç boyutlu görüntüleme yapmaya olanak sağlamak için alınan topografik görüntü de yer almaktadır. Ardından, diziyi edin (acquire sequence) seçeneğine tıklarız. Beş görüntünün tamamı alındığında, görüntüleme dizisi kurulumunu kapatıp görüntümüz üzerinde manipülasyonlara başlama imkanına sahip oluruz.Üç boyutlu bir yeniden oluşturma geliştirmek için, öncelikle güçlü bir topografik haritamız olduğundan emin olmamız gerekir. Denek olarak bir tüylü fare seçip dorsal oryantasyon ayarlıyoruz ve yeniden oluşturma işlemini gerçekleştiriyoruz. Kutunun arka plan alanlarından herhangi birini seçmemeye dikkat ederek, farenin kendisini vurguluyoruz.Sıradaki butona tıklıyoruz; bu bölüm, görüntünüze ve kullandığınız bilgisayar sistemine bağlı olarak biraz zaman alabilir. İşlem tamamlandığında, fare vücudunun topografik haritasına sahip olacaksınız. Ardından DLIT 3D rekonstrüksiyon aşamasına geçebilirsiniz.Eşik ayarlarınızın ve doku özelliklerinizin doğru şekilde yapılandırıldığından emin olun. Bizimki için beyin seçeneğini başlatın ve ardından yeniden oluştur seçeneğini belirleyin. Bu, hesaplama sisteminize bağlı olarak biraz zaman alabilen başka bir zaman noktasıdır.İşlem tamamlandığında, topografik haritanızda bir sinyal göreceksiniz. Ardından 3D tools (3D araçlar) kısmına tıklayın, registration (kayıt), organ atlas ve ardından female dorsal orientation (dişi dorsal yönelim) seçeneğine tıklayın. Daha sonra, organların opaklığını değiştirebiliriz; topografik haritayı dijital organ setine uydurmak için linear fit (doğrusal sığdırma) seçeneğine tıklıyoruz.US beyin sinyali ile gerçekten tanımlamak istediğimiz organlar dışındaki tüm organları çıkarabiliriz. Bu teknolojiyle, döndürmemize, opaklığı değiştirmemize, görünümü değiştirmemize, yakınlaştırmamıza, organları çıkarmamıza ve son olarak uzaklaştırmamıza olanak tanıyan üç boyutlu bir video da oluşturabiliyoruz. Görüntüleme tamamlandığında, izofloran buharlaştırıcısını kapatın ve XI C3 muhafaza kutusunu ayırın.Mühürlü kutuyu biyogüvenlik kabinine geri yerleştirin ve fareleri elektrik bandından nazikçe ayırın. Daha uzun görüntüleme süreleri için, fareler ABS L iki içerisinde uygun eldivenli işlemle ısıtılabilir.Hayvanların anesteziden tamamen uyandığından emin olmak için onları yakından gözlemleriz. Bu projeye katkıda bulunan Dr. Pessler'e ve laboratuvardaki herkese teşekkür ederiz. Ayrıca, tesisleri ve ekipmanları sağlayan Galveston Ulusal Laboratuvarı'na ve bu araştırma için finansman sağlayan Translasyonel Bilimler Enstitüsü'ne teşekkür ederiz.

in-vivo-imaging-systems-ivis-detection-neuro-invasive-encephalitic

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Nanoparçacıkların hücre biodistribution değerlendirmek için kullanılan bio-görüntüleme yöntemleri, nanoformulated bileşikler tedavi ve teşhis izleme için geçerlidir. Burada açıklanan yöntemler, histolojik coregistration tarafından değerlendirilir, hassas ve özeldir. Metodolojileri kemirgen insan uygulamaları bir translasyonel yol sağlar.

Teşhis ve Tedavi İzleme Nanomalzemelerin Kayıtlı bio

Yenidoğanların İnsan Sitomegalovirüs (HCMV) enfeksiyonu zeka geriliği önemli bir nedeni temsil, henüz virüs kaynaklı patogenezinde yol açan moleküler olayların hala tam olarak anlaşılamamıştır. Beyin enfeksiyon dinamiğini incelemek için, bütün hayvan...

Kullanımı<em&gt; In vivo</em&gt; Görüntüleme Yenidoğanlar Deneysel Fare Sitomegalovirüs Enfeksiyon ilerleme Monitör

Burada, adeno-ilişkili virüsün yenidoğan fare beynine intraventriküler enjeksiyonu ile yaygın nöronal transdüksiyon için bir teknik gösteriyoruz.  Bu yöntem, viral olarak verilen transgenlerin yaşam boyu ekspresyonunu elde etmek için hızlı ve kolay bir yol sağlar.

Kalıcı ve yaygın Nöronal İletim için Yenidoğan Fare Beyin intraserooroventriküler Viral Enjeksiyon

Burada, viral partiküllerin veya floresan mikroboncukların yenidoğan fare beynine intraserebroventriküler ve intravasküler enjeksiyonu için basit bir yöntemi açıklıyoruz. Virüs ve nanopartiküllerin lokalizasyon paterni, mikroskobik değerlendirme veya in situ hibridizasyon ile tespit edilebilir.

Yenidoğan Beyin içine Viral Parçacıklar ve Floresan mikro boncuklar intraserebroventriküler ve İntravasküler Enjeksiyon

Deneysel serebral sıtmanın bir fare modelini tarif ediyoruz ve manyetik rezonans görüntüleme kullanılarak inflamatuar ve mikrovasküler patolojinin in vivo olarak nasıl izlenebileceğini gösteriyoruz.

Manyetik Rezonans Görüntüleme Kullanarak Deneysel Serebral Sıtma Bir Modelinde Ödem Gelişimi ve Mikrovasküler Patolojinin İn Vivo Takibi

Burada, nöropati gelişimini görüntülemek için bir immünopetik ıCR (Kanser Araştırma Enstitüsü) merkezi sinir sistemi enfeksiyonu murine modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Akut viral ensefalitik bozuklukların aynı hastalık puanları ile izlenmesi, Dang virüse bağlı nöropati içinde vivo göstermek için gerçekleştirilebilir.

Dang humması virüs kaynaklı akut viral Ensefalitis-benzeri hastalık bir Murine modeli

Burada, nörovasküler birim bozulma deneysel otoimmun ensefalomiyelit içinde vivo sırasında araştırmak için protokolleri mevcut. Biz özellikle kan - beyin bariyerini geçirgenliği ve gelatinase etkinlik lökosit göç dahil glia limitans belirlemek nasıl adres.

Nörovasküler biriminin endotel ve gliyal engelleri bozulma Vivo deneysel otoimmun ensefalomiyelit sırasında görüntülenmesi

Yeni, immünostasyon uyumlu doku Temizleme teknikleri gibi solvent temizlenmiş organların nihai 3D görüntüleme kuduz virüsü beyin enfeksiyonu ve karmaşık hücresel çevre 3D görselleştirme sağlar. Kalın, antikor etiketli beyin dokusu dilimleri, görüntüleme derinliğini artırmak ve konfetik lazer tarama mikroskobu ile 3D analizini sağlamak için optik olarak şeffaf hale gelmiştir.

Solvent-temizlenmiş beyin dokusu kuduz virüs enfeksiyonu yüksek çözünürlüklü 3D görüntüleme

Bu protokol, beyinde AAV tabanlı bir viral sistem ve hücre tanımlaması ve daha fazla analiz için izin veren bir FLEX synapsin odaklı GFP muhabiri kullanarak doğrudan yeniden programlanmış internöronlar içinde vivo üretmeye yönelik hedefler.

In vivo doğrudan reprogramming Resident glial hücreler Interneurons viral vektörler ıntracerebral enjeksiyon ile

Miniskop in vivo kalsiyum görüntüleme, serbestçe davranan farelerde nöronal dinamikleri ve mikro devreleri incelemek için güçlü bir tekniktir. Bu protokol, bir miniskop kullanarak iyi in vivo kalsiyum görüntüleme elde etmek için beyin ameliyatları yapmayı açıklar.

Derin Beyin In Vivo Kalsiyum Görüntüleme için Stereotaksik Viral Enjeksiyon ve Degrade İndeks Lens İmplantasyonu

Bir fare modelinde floresan etiketli demir oksit nanopartiküllerinin glioblastoma tümör iletiminin iki foton mikroskobu için yeni bir yaklaşım sunuyoruz.

Bir Murin Modelinde Glioblastomun İki Fotonlu İntravital Mikroskobu

Öğrenin, biyolüminesan teknoloji ve IVIS kullanarak merkezi sinir sistemi enfeksiyonlarını canlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik, viral yayılımı gerçek zamanlı izleyerek aşı ve antiviral tedavi etkinliğini değerlendirmeyi sağlar.

Bir Nöro-İnvazif encephalitic Virüs Vivo Görüntüleme Sistemleri (IVIS) Algılama

Daha fazla video keşfet