Farelerde Ateroskleroz Karşı miyointimal hiperplazide uyaran: İki Geçerli Modellerinin An Introduction

Aşağıdaki deneyin genel amacı, farklı mekanizmalarla aortun daralmasına yol açan iki geçerli hayvan modelini tanıtmaktır. İlk model, miyo intimal hiperplazi gelişimini oluşturmak için aortun balon kateterizasyonudur. İlk olarak, karın altı aortu açığa çıkarılır ve klemplenir.

Daha sonra enine bir kesi ile aort damarı açılır ve balon kateter yerleştirilir. Aort damarının endotelyumu daha sonra şişirilmiş kateter ile demüle edilir ve ameliyat tamamlanır. İkinci model, aterosklerotik plaklar oluşturmak için transgenik APOE boş farelerin diyet manipülasyonudur.

Bu fareler standart koşullar altında barındırılır ve dört ila altı ay boyunca yüksek lipidli bir batı diyeti ile beslenir. Sonuç olarak, cerrahi olarak indüklenen miyointimal hiperplazinin histolojik analizi ve diyet kısıtlama modeli, bunların farklı luminal daralma ile sonuçlandığını göstermektedir. Bugün size luminal daralmayı indüklemek için iki farklı model göstereceğiz: damar yaralanmasını indüklemek için bir balon kateter kullanan fare modeli ve arteriyel skleroz modeli.

Batı diyetinde transgenik farelerin kullanılması, Balon kateter modeli, darlık alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Transgenik homozigot üst E mutant fare modeli, aterosklerozun patofizyolojisini incelemek için kullanılır. İntimal hiperplazi modeli için, yaklaşık 25 gram ağırlığında C 57 siyah altı J faresi elde edin.

Normal şartlar altında normal bir diyetle bakımını yapın. Fareyi% 2 flor ile uyuşturduktan sonra, karın kıllarını kesin, analjezi için deri altı enjeksiyonu ile carprofen sağlayın. Daha sonra, alternatif olarak, cildi iki döngüde Provo iyot ve% 80 etanol ile dezenfekte edin.

Şimdi bir ayak parmağı çimdikleme kullanarak refleks yokluğunu kontrol edin. Cildi ve kası lineer alba boyunca ayırarak ameliyata başlayın. Daha sonra, bağırsakları tuzlu suyla nemlendirilmiş bir eldivene sarın, daha sonra dikkatlice, yağ dokusunu temizleyin ve abdominal aortu kaplayın.

Şimdi infrarenal aortu çatallanmasına kadar açığa çıkarın. Herhangi bir dal gemisine zarar vermemeye dikkat edin. Şimdi aortu kelepçeleyin.

İlk olarak, kan akışını durdurmak için proksimal infrarenal aort üzerine bir mikrocerrahi kelepçe yerleştirin. İkinci olarak, aort bifurkasyonunun yanına ikinci bir distal klemp uygulayın. Kan akışı kesildiğinde, proksimal klemp'e yakın aort içine küçük bir kesi yapın.

Endotel yaralanması yapmak için kateteri aortun distal klempine doğru yerleştirin. Kateter balonunu dikkatlice şişirerek ve kateteri proksimal klemp yönüne yavaşça çekerek aortu denül edin. Bunu tekrarlayın, toplam üç aort şişirmesi için iki kez manevra yapın.

Şimdi kateteri çıkarın ve 10 au prolin koşu sütürü kullanarak aort insizyonunu kapatın. Dikişler yerindeyken, AOR ototomi bölgesinde kanama varsa distal klempi dikkatlice açın. Kelepçeyi tekrar kapatın, kanamayı bulun ve ek kesintili dikişlerle durdurun.

Kanama olmadığında, proksimal klempi yavaşça açın. Aort nabzı, insizyonun distalinde görünür olmalıdır. Şimdi bağırsakları C iki'de düzenleyin.

Daha sonra, altı OTT prolin koşu sütürü kullanarak kas tabakasından başlayarak karın duvarını kapatın. Ardından cildi beş OTT dikişle kapatın ve fareyi kafesine geri aktarın. Ameliyat sonrası ilk üç gün boyunca, ağrı kontrolü için içme suyuna metrazol verin.

Hayvanı yaklaşık 28 gün süren iyileşmesi boyunca izleyin. Ateroskleroz modeli için, dört haftalık A POE eksikliği olan fareler edinin. Bu fareleri standart koşullar altında dört ila altı ay boyunca yüksek lipidli bir batı diyeti ile barındırın.

Bu diyeti deney boyunca sürdürmek. Aortu toplamadan altı saat önce, yiyeceğe erişimi ortadan kaldırın. Ardından, fareyi önceki bölümde anlatıldığı gibi ameliyat için hazırlayın.

Göğsü açarak ameliyata başlayın. Daha sonra, kalbin tepesini kesin ve aortu sabitlemek için aort kökünden üç mililitre% 4 Paraform aldehit ile hafif basınç altında perfüze edin. Sonra aortu kökten çatallanmasına kadar serbest bırakın.

Mümkün olduğu kadar çok yağ dokusunu çıkarmaya çalışın. Daha sonra, aort arkını kesin ve% 4 para formaldehit içinde saklayın. Şimdi kalbi ve aort ağacını, tabakta PBS bulunan silikon bir hat kabına aktarın.

Aort ağacının bir ucunu kesin ve ince pimlerle silikon tabakaya sabitleyin. Aortu uzunlamasına açın ve aort dokusunun birkaç dakika oda sıcaklığında PBS'de kalmasına izin verin. Daha sonra dokuyu bir kez% 50 etanol ile durulayın ve bir Sudan banyosuna daldırın.

Üç, yaklaşık 15 dakika boyama çözeltisi. Boyamadan sonra, sadece fazla Sudan'ı çıkarmak için dokuyu birkaç saniye boyunca% 50 etanol ile hızlıca durulayın. Üç kez durulama çok fazla lekeyi çıkaracak, dokuyu hemen distile su ile durulayın ve görüntülemeye devam edin Miyointimal hiperplazi modeli için, denuded fare aortları çıkarıldı, parafin gömüldü ve krom ile boyandı, intima ve ortam kalınlığı ölçülerek trikrom leke kesitlerinden Im oranları hesaplandı.

Bilgisayar analizi ve ardından oranın hesaplanması kullanılarak, maksimum plak kalınlığı bilgisayar morfo ağacı ile lümendeki maksimum intimal kalınlık olarak ölçüldü. Luminal obliterasyon yüzdesi, eski lümenden yeni iç lümenin oranı olarak hesaplandı. Plak alanı, yeni iç lümenin eski lümenden çıkarılmasıyla hesaplandı.

Aynı analizler, sadece ateroskleroz modeli için aort kapağı, aort arkı ve inen aorttaki ateroskleroz modelinin trikrom boyalı kesitleri üzerinde de gerçekleştirildi. İnen aort uzunlamasına açıldı ve Sudan kırmızısı ile boyandı. Her iki modelin analizi için plak alanı ve toplam aort alanı bilgisayar yardımıyla ölçüldü.

Luminal oblasyon, morfoloji ve hücresellik gibi soruları yanıtlamak için histopatoloji ve konfokal immünofloresan mikroskobu gibi diğer yöntemler de uygulanabilir. İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve deneylerinizde iyi şanslar.