Farelerde Ateroskleroz Karşı miyointimal hiperplazide uyaran: İki Geçerli Modellerinin An Introduction

Aşağıdaki deneyin genel amacı, farklı mekanizmalar aracılığıyla aort daralmasına yol açan iki geçerli hayvan modelini tanıtmaktır. İlk model, miyointimal hiperplazi gelişimini oluşturmak için aortun balon kateterizasyonudur. İlk olarak, infrarenal abdominal aort açığa çıkarılır ve klemplenir.

Ardından aorta transvers bir insizyonla açılır ve balon kateter yerleştirilir. Daha sonra aortanın endotelyumu şişirilen kateter ile soyulur ve cerrahi işlem tamamlanır. İkinci model, aterosklerotik plaklar oluşturmak için transgenik APOE null farelerin diyetsel manipülasyonudur.

Bu fareler standart koşullar altında barındırılmış ve dört ila altı ay boyunca yüksek lipidli batı tipi diyetle beslenmiştir. Nihayetinde, cerrahi olarak tetiklenen miyointimal hiperplazinin ve diyet kısıtlama modelinin histolojik analizi, bunların farklı lüminal daralmalarla sonuçlandığını göstermektedir. Bugün size lüminal daralmayı tetiklemek için kullanılan iki farklı modeli; damar hasarını tetiklemek için balon kateter kullanılan fare modelini ve arteriyoskleroz modelini göstereceğiz.

Batı diyeti uygulanan transgenik farelerin kullanıldığı balon kateter modeli, stenoz alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Aterosklerozun patofizyolojisini incelemek için transgenik homozigot üst E mutant fare modeli kullanılır. İntimal hiperplazi modeli için yaklaşık 25 gram ağırlığında C 57 black six J fareleri temin edin.

Normal bir diyetle normal koşullar altında tutun. Fareyi %2 isofloran ile anestezi ettikten sonra karın bölgesindeki tüyleri tıraş edin ve analjezi için deri altına karprofen enjekte edin. Ardından, sırasıyla Proviodin ve %80 etanol ile cildi iki döngü halinde dezenfekte edin.

Şimdi ayak parmaklarını sıkarak reflekslerin yokluğunu kontrol edin. Cildi ve kası linea alba boyunca ayırarak cerrahi işleme başlayın. Ardından, bağırsakları salinle nemlendirilmiş bir eldivene sarın ve dikkatlice, abdominal aortayı açığa çıkararak yağlı dokuları temizleyin.

Şimdi infrarenal aortayı bifurkasyonuna kadar açığa çıkarın. Herhangi bir dal damara zarar vermemeye dikkat edin. Şimdi aortayı klempleyiniz.

İlk olarak, kan akışını kesmek için proksimal infrarenal aortaya bir mikrocerrahi klempleme yapın. İkinci olarak, aort bifurkasyonunun yanına ikinci bir distal klem yerleştirin. Kan akışı kesildiğinde, proksimal klempe yakın bir noktadan aortada küçük bir insizyon yapın.

Endotelyal yaralanma oluşturmak için kateteri aortun distal klembine doğru yerleştirin. Kateter balonunu şişirerek ve kateteri dikkatle, yavaşça proksimal klembin yönünde çekerek aortu denüde edin. Toplamda üç aort şişirmesi olacak şekilde bu manevrayı iki kez daha tekrarlayın.

Şimdi kateteri çıkarın ve aortik insizyonu 10 au proline sürekli dikişler kullanarak kapatın. Dikişler yerindeyken, AOR ototomi bölgesinde kanama varsa distal klempi dikkatlice açın. Klempi tekrar kapatın, kanama noktasını belirleyin ve ek kesikli dikişlerle kanamayı durdurun.

Kanama olmadığında, proksimal klempi yavaşça açın. İnsizyonun distalinde aortik nabız görünür olmalıdır. Şimdi bağırsakları C twos şeklinde düzenleyin.

Ardından, kas tabakasından başlayarak abdominal duvarı altı adet OTT prolen sürekli dikişle kapatın. Daha sonra cildi beş adet OTT dikişle kapatın ve fareyi kafesine geri transfer edin. Postoperatif ilk üç gün boyunca, ağrı kontrolü için içme suyuna metrazol ekleyin.

Hayvanın yaklaşık 28 gün süren iyileşme süreci boyunca takibini yapın. Ateroskleroz modeli için, dört haftalık APOE eksik fareler temin edin. Bu fareleri, dört ila altı ay boyunca yüksek lipidli batı tarzı diyetle standart koşullar altında besleyin.

Deney boyunca bu diyeti sürdürün. Aortu hasat etmeden altı saat önce, yiyecek erişimini kesin. Ardından, fareyi önceki bölümde açıklandığı şekilde cerrahi işleme hazırlayın.

Göğüs kafesini açarak cerrahi işleme başlayın. Ardından, kalbin apeksini kesin ve aortayı sabitlemek için aort kökü üzerinden üç mililitre %4 Paraform aldehit ile hafif basınç altında perfüzyon yapın. Daha sonra aortayı, kökten bifurkasyonuna kadar serbest hale getirin.

Mümkün olduğunca fazla yağlı dokuyu uzaklaştırmaya çalışın. Ardından, aortik arkı kesin ve %4 paraformaldehit içinde saklayın. Şimdi kalbi ve aort ağacını, içinde PBS bulunan silikon kaplı bir kaba aktarın.

Aort ağacının bir ucunu kesin ve ince iğnelerle silikon tabakaya sabitleyin. Aortu boylamasına açın ve aort dokusunun oda sıcaklığındaki PBS içinde birkaç dakika beklemesine izin verin. Ardından dokuyu bir kez %50 etanol ile durulayın ve Sudan banyosuna daldırın.

Üçincü adım, yaklaşık 15 dakika boyunca boyama solüsyonunda bekletme. Boyamadan sonra, yalnızca fazla Sudan boyasını uzaklaştırmak için dokuyu birkaç saniye boyunca %50 etanol ile hızlıca durulayın. Aşırı durulama çok fazla boyanın uzaklaşmasına neden olacaktır; dokuyu hemen distile su ile durulayın ve görüntüleme aşamasına geçin. Miyointimal hiperplazi modeli için, denüde edilmiş fare aortları toplandı, parafine gömüldü ve trikrom ile boyandı. Trikrom boyalı kesitlerde intima ve media kalınlıkları ölçülerek oranlar hesaplandı.

Bilgisayar analizi ve ardından oran hesaplaması kullanılarak, maksimum plak kalınlığı, bilgisayarlı morfo ağaç (computer morpho tree) ile lümendeki maksimum intimal kalınlık olarak ölçüldü. Lümen tıkanıklık yüzdesi, yeni iç lümenin eski lümene oranı olarak hesaplandı. Plak alanı, yeni iç lümenin eski lümenden çıkarılmasıyla hesaplandı.

Aynı analizler, yalnızca ateroskleroz modeli için aort kapakta, aort arkında ve inen aortta trikrom boyalı kesitler üzerinde gerçekleştirilmiştir. İnen aort boylamasına açılmış ve Sudan red ile boyanmıştır. Her iki modelin analizi için plak alanı ve toplam aort alanı bilgisayar yardımıyla ölçülmüştür.

Lüminal obliterasyon, morfoloji ve hücre yoğunluğu gibi soruları yanıtlamak için histopatoloji ve konfokal immünofloresan mikroskopi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.