Name: Yetişkin Farelerde Orta beyin dopamin Nöronlar Sayısının Çevre Modülleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Keşfedin yetişkin farelerde orta beyin dopamin nöronları üzerinde çevresel zenginleştirmenin etkilerini. Bu yöntem, nöroplastisite ve davranışsal değişiklikleri incelemek için cinsiyet eşleştirme ve ilaç uygulamalarını kullanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Avustralya Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC) Projesi hibe 1022839 tarafından desteklenmiştir. AJH, Avustralya Araştırma Konseyi (ARC) FT3 Gelecek Üyesidir (FT100100835). Florey Sinirbilim ve Ruh Sağlığı Enstitüsü, Victoria Hükümeti'nin Operasyonel Altyapı Destek Hibesi'nden destek aldığını kabul ediyor.

NOT: Tüm hayvanlar üzerinde deney prosedürleri Nörobilim &amp; Ruh Sağlığı Hayvan Etik Kurulu Florey Enstitüsü tarafından onaylanmış ve Avustralya&#39;nın Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi uygun edildi bilimsel amaçlar için hayvanların bakımı ve kullanımı için uygulama kodu (7. sürümü yayınlandı 2004). 1. Çevre İşlemler <ol><li> Cinsiyet Eşleştirme <ol><li> Cinsel olgun (&gt; 8 haftalık), yaştaki erkek ve dişi fareler kullanın. NOT: Biz genellikle C57BL / 6 fareler kullanın, ancak bu protokol İsviçre fareleri kullanarak aynı sonuçları vardı. Bu, tipik olarak, n = (n = 4 erkek), n = 2 erkek-erkek çiftler halinde ayrılır, her bir deney için, n = 8 erkek ve n = 8 kadın kullanımı 2 dişi-erkek çiftleri (n = 4 kadın), ve n = 4 erkek-dişi çiftleri (n = 4 erkek ve n = 4 kadın). </li><li> Hayvan tutma tesisi, grup içi içine girişte&gt; 3 gün boyunca cinsiyete göre fareler iklime alıştırmak için. Burada ve Throughout cinsiyet eşleştirme, yabancı çevre uyaranlara tutmak (örneğin ortam sıcaklığı, ışığı: karanlık döngüsü, gıda, su, taşıma ve temizlik) sabit veya tüm farelere eşit dağıtın. </li><li> Rasgele bir erkek-erkek çifti, bir dişi-erkek çifti ya da bir erkek-dişi çifti her bir fare atar. Yiyecek ve su ad libitum giriş ile izole temiz bir kafes (2 fare / kafes) her bir çifti yerleştirin ve sadece 7 gün boyunca sürekli olarak bu şekilde yerleştiren. NOT: Rutin hayvancılık bu dönemde Tamam ama tüm farelere eşit dağıtılmalıdır. Erkek ve kadın littermates eşleştirme önlemek için dikkat edin. </li></ol></li><li> Çevre Zenginleştirme <ol><li> Cinsel olgun (&gt; 8 haftalık), yaştaki erkek ya da dişi farelerin kullanın. NOT: Biz genellikle n = 6 / tedavi grubuna ayrıldı her bir deney için n = 18 fare, kullanın. </li><li> Grup ev sahipliği özdeş standart içinde yer tutmak hayvan tutma tesis haline girişte (SH) (örn </em&gt; 3 gün iklime alıştırmak için&gt; bu aşamada) aşağıdaki koşulları görmek. Burada ve deney boyunca, yabancı çevre uyaranlara tutmak (örneğin ortam sıcaklığı, ışığı: karanlık döngüsü, gıda, su, taşıma ve temizlik) sabit veya tüm farelere eşit dağıtın. </li><li> Çevre zenginleştirme başlamak için, rastgele 3 gruba birine her fare atamak: SH; çalışma tekerleği (RW), ya da ortam olarak zenginleştirilmiş (DT) ve bir araya yiyecek ve su ad libitum giriş ile aynı temiz bir kafes içine, farelerin her bir grubu yerleştirin. NOT: Tüm gruplar için Burada, büyük sıçan tutan kafesleri, 42 cm uzunluğunda, geniş 27 cm boyutlarında, ve derin 16 cm kullanıldı. <ol><li> Buna ek olarak, aşağıdaki çevresel her grup için koşulları sağlamak: katta sadece çöp içeren SH (kağıt pelet ya da talaş); RW içeren SH artı 2 çalışan tekerlekler; EE (halatlar, merdivenler, tüneller ve boş kağıt havlu ruloları ve doku kağıt parçaları gibi nesneleri) RW artı oyuncaklar içeren hangi explore, oyun, tırmanma, gizlemek, ve yuva. </li><li> 14 gün boyunca sürekli bu şekilde onları ev. NOT: Rutin hayvancılık bu dönemde Tamam ama tüm farelere eşit dağıtılmalıdır. </li></ol></li><li> 1 saat / gün (aynı saatte her gün), 5days / hafta yeni oyuncaklar içeren daha geniş bir kafese araya koyarak ek &#39;süper-zenginleştirme&#39; (SE) tabi EE fareler. NOT: Burada, 46 cm genişliğinde 69 cm uzunluğunda ve 40 cm derinliğinde plastik küvet kullanıldı. <ol><li> Oyuncakların farklı bir dizi her oturum sunarak yenilik koruyun. Temiz oyuncaklar sabunlu su ve kokular kaldırmak için% 80 etanol ile farelere yeniden sunulmak üzere. </li><li> Her SE oturumunu takiben, kendi EE kafesine fareler dönün. Kolu SH ve RW fareler bu dönem boyunca (SE kendisi hariç) SE fareler aynı (örneğin kaldırmak ve gelen ve kafesine her SH ve RW fareyi dönüş). </li></ol></li></ol></li></ol><ol><li> Hazırlık <ol><li> Piyasada mevcut olan steril ozmotik pompalar ve beyin infüzyon kitleri kullanın. implantasyon gün önce, aseptik teknik kullanılarak, her bir pompa dolum (pompalar birlikte verilen talimatlara açıklandığı gibi), steril ilaç veya araç solüsyonu ile tüp ve kanül bağlayarak Başbakan implantlar. Birbirine geç ve 37 ° C&#39;de gece boyunca steril tuzlu su içinde inkübe edilir. Çapraz bulaşmayı önlemek için ayrı ayrı ilaç ve araç-dolu implantlar inkübe. </li></ol></li><li> Cerrahi. NOT: deneyci ülkeye bağlı olarak, özel hayvan deneyleri izin veya ödenekleri cerrahi ve ameliyat sonrası deneyler bu tip sürdürmeye gerekmektedir. <ol><li> Tüm cerrahi ekipman sterilize ve aseptik boyunca teknik kullanır. (Örneğin havada% 1-2 isofluorane kullanarak) bir fare anestezisi ve bir stere yerleştirinotaxic Headframe. Prosedür boyunca anestezi derinliğini kontrol edin ve gerekirse daha fazla anestezi yönetmek (zararlı pençe tutam bacak çekilmesi örneğin yokluğu yeterli anestezi göstergesidir). Emin olun gözler yağlayıcı göz merhemi ile kuruma karşı korumalıdır ve farenin vücut ısısı prosedürü boyunca normal kalmasını edilir. </li><li> Cm kafatasının arka kenarına posterior 2 gözü arasında ve bitirme başlayarak deri yoluyla orta hat kesi yapmak. Rahat pompayı ve kanül (bağlantı tüpü bitiminde bükük olmamalı) implante bir kez bağlantı tüpü sığacak kadar büyük bir subkutan &#39;cep&#39; oluşturmak için uzak fare arka aşağı yatan fasya cilt teşrih künt. Kafatasının dorsal yerinden fasya temizlemek kazıyın. </li><li> , Yaklaşık 1.5 mm çapında diş çapak kullanarak uygun stereotaksik u koordinatları kafatası içine detayantil kemik ince, esnek bir tabaka kalır. Peel uzakta ince forseps kullanarak bu katman (bu diş çapak ile yatan dura mater ve beyin zarar önler). Emin olun kafatası herhangi bir kan ve kemik parçalarının temizlenmesi ve olduğunu başka kanıyor. </li><li> Bir kanül sahibi tarafından düzenlenen kanül ile, farenin sırtını örten deri altı &#39;cebine&#39; içine pompa ve bağlantı tüpü yerleştirin. Sonraki uygun stereotaksik koordinatlarda ve beynin yüzeyinde kanül ucu yerleştirin. Dikkatle beyin içine kanül düşük ama gerekli derinlik kısa yaklaşık 1 mm durdurun. NOT: Kalan derinliği diş akrilik ilk katman uygulanması aşağıdaki müzakere edilecektir. </li><li> Kafatasının yüzeyi temiz ve kuru olduğundan emin olun tekrar, daha sonra diş akrilik küçük bir hacim hazırlamak ve th etrafında kafatası yoluyla çapak-deliğe dahil, kafatası tüm maruz alanın üzerine düzeltmek için bir kürdan kullanınE kanül. Akrilik sertleşir önce, kanül hedef haline kalan derinliğini ucu düşük. </li><li> Yerinde kanül düzeltmek için, kanül beyaz plastik desteği üzerinde yanı sıra, diş akrilik başka küçük hacimli hazırlayın ve ilk aşkın bu katmanı. Gerektiğinde akrilik ilave tabakalar ile tekrarlayın. </li><li> Akrilik sertleştikten sonra, dikkatle kanül tutucusunu çıkarın ve bir bütan alev ile ısıtılan bir neşter bıçak kullanarak beyaz plastik çıkarılabilir kanül sekmesini kesti. Son olarak, tüm implant üzerinde kapalı cilt sütür. </li></ol></li><li> Hayvanların Post-cerrahi Tedavi <ol><li> Cilt marjları antiseptik merhem sürün ve fare bir anti-inflamatuar yönetmek (örn Meloksikam, 3 mg / kg sc). , Çerçeve fareyi çıkarın ısı lambası altında yerleştirin, ve bilinç kavuşur kadar gözlemlemek. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir fare iade etmeyin. NOT: Uzmcinsiyet eşleştirme ve çevre zenginleştirme gibi erimental manipülasyonlar başlatılan veya erken ameliyat ertesi gün devam edilebilir. </li><li> Kendi vücut ağırlığı, günlük genel davranış ve görünüm izleyin. Topikal antiseptik merhem cerrahi kesiler etrafında enfeksiyon belirtileri (örn şişlik, kızarıklık, irin) davranın. Gerektiğinde sistemik analjezikler ve / veya antibiyotik ile herhangi bir belirti hastalık, ağrı, stres veya rahatsızlık (&gt;% 10 vücut ağırlığı, sosyal geri çekilme, damat eksikliği örneğin kaybı, &quot;kabartmak&quot;, hareket disfonksiyon, nöbetler) davranın. </li><li> &gt;% 15 kilo kaybı ya da hastalık, ağrı, stres veya rahatsızlık belirtileri iyileştirici tedavi 1 hafta içinde olmayan geri kazanılabilir ise fareler Euthanize. </li></ol></li></ol> 3. Beyin Doku Hazırlama, İşleme İmmunohistokimyasal ve Stereoloji <ol><li> Serpilme <ol><li> Hemen çevre / ilaç manipülasyonlar takip, çalışma için beyin hazırlamak. <br/&gt; Not: Burada bildirilen deneylerde SNc TH + nöron sayısı ölçülmüş ve farklı tedavi gruplarının her karşılaştırıldı. </li><li> İlk (örneğin 100 mg / kg ip sodyum pentobarbiton) fareler öldürmek için anestezik aşırı dozda yönetmek. Bir kez anestezi ancak kalp yenerek durur önce, sırtında fare yatıyordu ve kravat ya da her iki ön ayakları aşağı pin. </li><li> Bir neşter kullanılarak toraks sonra karın boşluğuna sadece göğüs kafesinin altındaki kas yoluyla insizyon örten cilt kesip. Göğüs kafesi kılıç şeklinde süreci bir kelepçe yerleştirin ve diyaframı açığa karaciğer yukarı ve uzağa göğüs kafesi kaldırın. </li><li> Diyafram yoluyla ve yanal göğüs kafesi geri akciğerler ve kalbi maruz başının üzerinde katlanabilir kadar büyük makas kullanarak her iki tarafta kaburga kesti. İnce makas bir çıkış kan nokta ve perfüze çözümleri gibi sağ atrium küçük bir kesi yapmak kullanarak, daha sonra sol grupların sol ventrikül tabanı kesticle ve sol ventrikül, sol atrium aracılığıyla bir kanül yerleştirin ve aort içine. </li><li> Heparinize sıcak (37 ° C) pompa sonra yerinde kanül Kelepçe ve sağ atrium çıkan çözelti kadar damar yoluyla 0.1 M fosfat tamponlu fizyolojik tuzlu su (PBS) kan tamamen ücretsizdir. Tüm fare de sabit kadar sonra, damar yoluyla soğuk (4 ° C) sabitleştirici solüsyonu (PBS gibi% 4 paraformaldehid) pompa. Beyin lavabolar kadar 2-3 gün süreyle% 30 sakaroz ile PBS beyin ve yer çıkarın. Not: Doku hazırlanması için daha başka türlü ilgili laboratuarda uzmanlık bağlı olarak tatbik edilebilir. </li></ol></li><li> Serbest yüzen kriyokesitler hazırlanması <ol><li> Ilgi beyin bölgeleri ile seri bölümleri kesin ve PBS bu toplamak. NOT: Bir sirostat kullanılarak 40 mikron kalınlığında kesitler kesti. Doku kesit diğer tipleri correspondi uzmanlık bağlı olarak uygulanabilecekng laboratuvar. </li></ol></li><li> İmmünohistokimya <ol><li> Ilgi proteinlerin için standart immunohistokimyasal gerçekleştirin. 48 saat süre ile 4 ° C&#39;de (400 1) sonra, poliklonal biyotinlenmiş keçi anti-poliklonal tavşan anti-TH ile, daha sonra 30 dakika için immüno-reaksiyona girme oda sıcaklığında PBS içinde% 5 normal keçi serumu ve% 0.3 Triton X-100 bölümleri inkübe 2 saat süre ile, oda sıcaklığında: -rabbit (1.000 1). </li><li> 18-20 dakika boyunca oda sıcaklığında ve daha sonra, kobalt ve nikel yoğun diamino-benzidin (0.5 mg / ml) &#39;de, 1 saat boyunca oda sıcaklığında;: Daha sonra, avidin peroksidazı (1: 500) inkübe diamino-benzidin inkübasyon son 3-5 dakika boyunca Chromagen çökelmesini katalize etmek üzere hidrojen peroksit (% 0.01) ilave edin. Önce, sonra ve yukarıdaki adımların her biri arasında PBS bölümleri 10 dakika süreyle üç kez her yıkayın. </li><li> Daha sonra, hava onları kurutun, jelatinize mikroskop slaytlar üzerinde Nissl leke (nötr kırmızı) bölümleri monte, alkol, berrak (X-3B) ve lamel içinde kurutmak. </li></ol></li><li&gt; Stereoloji <ol><li> Tarafsız stereolojik yöntemlerle TH + ve TH- SNc (ve VTA ve LC) nöronların toplam sayısını tahmin edin. Stereologist alınan tedaviye kör olduğundan emin olun. Soma çapı &lt;5 mikron bazında glia Dışlama ve görünür bir çekirdeğin yalnızca bu hücreleri saymak. </li><li> TH + hücreleri ve Paxinos ve Watson 7 beyin atlası göre anatomik noktalar / sınırları mekansal konumlara göre SNC (ve VTA ve LC) tanımlayın. (X = 100 mm, y = VTA ve LC 100 mm x = y 140 mikron = SNc için 140 mikron) düzenli önceden belirlenmiş aralıklarla sayma çerçevesinde TH + hücreler (55 x 55 mm = 3025 mm 2) Sayım Her Dördüncü bölümde her çekirdeğin boyunca. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Aumann, T., Horne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-dependent+regulation+of+the+dopamine+phenotype+in+substantia+nigra+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Activity-dependent regulation of the dopamine phenotype in substantia nigra neurons.</a> Journal of neurochemistry. 121, 497-515 (2012).</li>
<li>Sauer, H., Oertel, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+degeneration+of+nigrostriatal+dopamine+neurons+following+intrastriatal+terminal+lesions+with+6-hydroxydopamine%3A+a+combined+retrograde+tracing+and+immunocytochemical+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Progressive degeneration of nigrostriatal dopamine neurons following intrastriatal terminal lesions with 6-hydroxydopamine: a combined retrograde tracing and immunocytochemical study in the rat.</a> Neuroscience. 59, 401-415 (1994).</li>
<li>Stanic, D., Finkelstein, D. I., Bourke, D. W., Drago, J., Horne, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timecourse+of+striatal+re-innervation+following+lesions+of+dopaminergic+SNpc+neurons+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Timecourse of striatal re-innervation following lesions of dopaminergic SNpc neurons of the rat.</a> The European journal of neuroscience. 18, 1175-1188 (2003).</li>
<li>Aumann, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity+regulates+expression+of+tyrosine+hydroxylase+in+adult+mouse+substantia+nigra+pars+compacta+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity regulates expression of tyrosine hydroxylase in adult mouse substantia nigra pars compacta neurons.</a> Journal of neurochemistry. 116, 646-658 (2011).</li>
<li>Aumann, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SK+channel+function+regulates+the+dopamine+phenotype+of+neurons+in+the+substantia+nigra+pars+compacta%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">SK channel function regulates the dopamine phenotype of neurons in the substantia nigra pars compacta.</a> Experimental neurology. 213, 419-430 (2008).</li>
<li>Aumann, T. D., Tomas, D., Horne, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+behavioral+modulation+of+the+number+of+substantia+nigra+dopamine+neurons+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Environmental and behavioral modulation of the number of substantia nigra dopamine neurons in adult mice.</a> Brain and behavior. 3, 617-625 (2013).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , 2nd, Academic Press. (2001).</li>
<li>Schultz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+dopamine+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Behavioral dopamine signals.</a> Trends in neurosciences. 30, 203-210 (2007).</li>
<li>Sun, P., Smith, A. S., Lei, K., Liu, Y., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+bonds+in+male+prairie+vole%3A+long-term+effects+on+emotional+and+social+behavior%2C+physiology%2C+and+neurochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Breaking bonds in male prairie vole: long-term effects on emotional and social behavior, physiology, and neurochemistry.</a> Behavioural brain research. 265, 22-31 (2014).</li>
<li>Aponso, P. M., Faull, R. L., Connor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+progenitor+cell+proliferation+and+astrogenesis+in+the+partial+progressive+6-hydroxydopamine+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Increased progenitor cell proliferation and astrogenesis in the partial progressive 6-hydroxydopamine model of Parkinson's disease.</a> Neuroscience. 151, 1142-1153 (2008).</li>
<li>Frielingsdorf, H., Schwarz, K., Brundin, P., Mohapel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((No+evidence+for+new+dopaminergic+neurons+in+the+adult+mammalian+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">No evidence for new dopaminergic neurons in the adult mammalian substantia nigra.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 10177-10182 (2004).</li>
<li>Lie, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+substantia+nigra+contains+progenitor+cells+with+neurogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The adult substantia nigra contains progenitor cells with neurogenic potential.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 6639-6649 (2002).</li>
<li>Chen, Y., Ai, Y., Slevin, J. R., Maley, B. E., Gash, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+proliferation+in+the+adult+hippocampus+and+substantia+nigra+induced+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">Progenitor proliferation in the adult hippocampus and substantia nigra induced by glial cell line-derived neurotrophic factor.</a> Experimental neurology. 196, 87-95 (2005).</li>
<li>Yoshimi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possibility+for+neurogenesis+in+substantia+nigra+of+parkinsonian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Possibility for neurogenesis in substantia nigra of parkinsonian brain.</a> Ann Neurol. 58, 31-40 (2005).</li>
<li>Shan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+de+novo+neurogenesis+and+dopaminergic+neurogenesis+in+the+substantia+nigra+of+1-methyl-4-phenyl-1%2C2%2C3%2C6-tetrahydropyridine-induced+Parkinson%27s+disease-like+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced de novo neurogenesis and dopaminergic neurogenesis in the substantia nigra of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced Parkinson's disease-like mice.</a> Stem Cells. 24, 1280-1287 (2006).</li>
<li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+neurogenesis+in+the+adult+mammalian+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Evidence for neurogenesis in the adult mammalian substantia nigra.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7925-7930 (2003).</li>
<li>Baker, H., Kawano, T., Margolis, F. L., Joh, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transneuronal+regulation+of+tyrosine+hydroxylase+expression+in+olfactory+bulb+of+mouse+and+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Transneuronal regulation of tyrosine hydroxylase expression in olfactory bulb of mouse and rat.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 3, 69-78 (1983).</li>
<li>Black, I. B., Chikaraishi, D. M., Lewis, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-synaptic+increase+in+RNA+coding+for+tyrosine+hydroxylase+in+a+rat+sympathetic+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Trans-synaptic increase in RNA coding for tyrosine hydroxylase in a rat sympathetic ganglion.</a> Brain research. 339, 151-153 (1985).</li>
<li>Zigmond, R. E., Chalazonitis, A., Joh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preganglionic+nerve+stimulation+increases+the+amount+of+tyrosine+hydroxylase+in+the+rat+superior+cervical+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Preganglionic nerve stimulation increases the amount of tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion.</a> Neuroscience letters. 20, 61-65 (1980).</li>
<li>Biguet, N. F., Rittenhouse, A. R., Mallet, J., Zigmond, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preganglionic+nerve+stimulation+increases+mRNA+levels+for+tyrosine+hydroxylase+in+the+rat+superior+cervical+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Preganglionic nerve stimulation increases mRNA levels for tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion.</a> Neuroscience letters. 104, 189-194 (1989).</li>
<li>Richard, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+tyrosine+hydroxylase+gene+expression+in+rat+brain+and+adrenals+by+exposure+to+cold%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+research%22%5BJournal%5D)">Modulation of tyrosine hydroxylase gene expression in rat brain and adrenals by exposure to cold.</a> Journal of neuroscience research. 20, 32-37 (1988).</li>
<li>Schalling, M., Stieg, P. E., Lindquist, C., Goldstein, M., Hokfelt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+increase+in+enzyme+and+peptide+mRNA+in+sympathetic+ganglia+after+electrical+stimulation+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Rapid increase in enzyme and peptide mRNA in sympathetic ganglia after electrical stimulation in humans.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 86, 4302-4305 (1989).</li>
<li>Liaw, J. J., He, J. R., Barraclough, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+tyrosine+hydroxylase+mRNA+levels+in+A1%2C+A2+and+locus+ceruleus+neurons+following+electrical+stimulation+of+A1+noradrenergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research.+Molecular+brain+research%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in tyrosine hydroxylase mRNA levels in A1, A2 and locus ceruleus neurons following electrical stimulation of A1 noradrenergic neurons.</a> Brain research. Molecular brain research. 13, 171-174 (1992).</li>
<li>Watabe-Uchida, M., Zhu, L., Ogawa, S. K., Vamanrao, A., Uchida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-brain+mapping+of+direct+inputs+to+midbrain+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Whole-brain mapping of direct inputs to midbrain dopamine neurons.</a> Neuron. 74, 858-873 (2012).</li>
<li>Tepper, J. M., Lee, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+control+of+substantia+nigra+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">GABAergic control of substantia nigra dopaminergic neurons.</a> Progress in brain research. 160, 189-208 (2007).</li>
<li>Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+and+brain+repair%3A+harnessing+the+therapeutic+effects+of+cognitive+stimulation+and+physical+activity+to+enhance+experience-dependent+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathology+and+applied+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment and brain repair: harnessing the therapeutic effects of cognitive stimulation and physical activity to enhance experience-dependent plasticity.</a> Neuropathology and applied neurobiology. 40, 13-25 (2014).</li>
<li>Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environments%2C+experience-dependent+plasticity+and+disorders+of+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system.</a> Nature reviews. Neuroscience. 7, 697-709 (2006).</li>
<li>Chmiel, D. J., Noonan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preference+of+laboratory+rats+for+potentially+enriching+stimulus+objects%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Preference of laboratory rats for potentially enriching stimulus objects.</a> Laboratory animals. 30, 97-101 (1996).</li>
<li>Hanmer, L. A., Riddell, P. M., Williams, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+a+runway+paradigm+to+assess+the+relative+strength+of+rats%27+motivations+for+enrichment+objects%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior+research+methods%22%5BJournal%5D)">Using a runway paradigm to assess the relative strength of rats' motivations for enrichment objects.</a> Behavior research methods. 42, 517-524 (2010).</li>
<li>Burrows, E. L., McOmish, C. E., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene-environment+interactions+and+construct+validity+in+preclinical+models+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+neuro-psychopharmacology+%26+biological+psychiatry%22%5BJournal%5D)">Gene-environment interactions and construct validity in preclinical models of psychiatric disorders.</a> Progress in neuro-psychopharmacology & biological psychiatry. 35, 1376-1382 (2011).</li>
<li>Van de Weerd, H. A., Van Loo, P. L. P., Van Zutphen, L. F. M., Koolhaas, J. M., Baumans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strength+of+preference+for+nesting+material+as+environmental+enrichment+for+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Strength of preference for nesting material as environmental enrichment for laboratory mice.</a> Applied Animal Behaviour Science. 55, 369-382 (1998).</li>
<li>Rampon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+environmental+enrichment+on+gene+expression+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Effects of environmental enrichment on gene expression in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12880-12884 (2000).</li>
<li>Eckert, M. J., Abraham, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+environmental+enrichment+exposure+on+synaptic+transmission+and+plasticity+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Current+topics+in+behavioral+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Effects of environmental enrichment exposure on synaptic transmission and plasticity in the hippocampus.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 15, 165-187 (2013).</li>
<li>Sztainberg, Y., Chen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+environmental+enrichment+model+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">An environmental enrichment model for mice.</a> Nature protocols. 5, 1535-1539 (2010).</li>
<li>Sale, A., Berardi, N., Maffei, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+and+brain+plasticity%3A+towards+an+endogenous+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">Environment and brain plasticity: towards an endogenous pharmacotherapy.</a> Physiological reviews. 94, 189-234 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Çevre manipülasyonlar Bu çevresel manipülasyonlar (cinsiyet eşleştirme ve çevresel zenginleştirme) tasarım arkasındaki motivasyon ortamına olup olmadığını belirlemek için, ve / veya çevre tarafından istendiğinde davranış, orta beyin DA nöronların sayısında değişiklikler ile ilişkilidir. Odak ortamları sağlanması ve orta beyin DA sinyal meşgul muhtemel davranışları uyarıcı nedenle oldu. Bu karşı cinse dahil eşleştirme, ve,, oyun keşfetmek tırmanmaya gizlemek için jantlar, halatlar, m...

Ortabeyin ventral tegmental alan (VTA) ve substantia nigra pars compactadaki (SNc) nöronların tarafından DArgic sinyal ödül motive bilişsel, duygusal ve motor davranışlar için önemli olduğu düşünülmektedir. Ancak, çok fazla veya çok az orta beyin DA sinyal birçok devre dışı nörolojik bozukluklar çeşitli belirtileri (örneğin Parkinson hastalığı, dikkat eksikliği ve hiperaktivite bozukluğu, şizofreni, ve uyuşturucu bağımlılığı) neden olur. Artırmak veya DA bu belirtileri hafifletmek sinyalizasyon azaltan ilaçlar, ancak onlar da düzensiz sinyal atfedilebilecek yan etkileri ve hedef dışı etkiler üretmek. İlaç etkinliği, aynı zamanda, beynin telafi tepkiler zamanla azalır. Bu bakımdan, bir daha hedefli ve fizyolojik şekilde normal orta beyin DA sinyal geri ve bir tercih yaklaşım artan ya da orta beyin DA nöron sayısını azaltarak gereğidir. Kanıt sev için biriken edilmiştir(1 gözden) olgun yetişkin hücrelerde metabolize ve ticareti DA ve diğer katekolaminlerin yer alan genlerin ve proteinlerin ifadesi değiştirilebilir olduğunu eral yıl. TH immunonegative (TH-) nöron sayısı karşısında modelini gösterir iken orta beyin, tirozin hidroksilaz immünopozitif sayısı (TH + DA sentezi, oran-sınırlayıcı enzim) nöron sonra, (örneğin, bir artış nörotoksin verilmesini 2,3 aşağıdaki da artar sonra) 3 azalır. Bu daha sonra bazı hücreler tarafından &#39;DA fenotip&#39; bir kazanç kaybı ile tutarlıdır. TH + ve TH- SNc nöronların sayısı da bu hücrelerin 4,5 elektrik aktivitesini değiştirmeyen farklı tedavilerin ardından eşit fakat ters yönde değiştirmek için gösterilmiştir. Örneğin, 2 hafta boyunca orta beyin içine küçük iletkenlik enfüzyon, kalsiyum ile aktive edilen potasyum (SK) kanalı antagonisti apamin (aynı miktarda) nu TH + ve artar sayısını azaltmaktadırTH- SNc ve mber 4,5 nöronlar. Buna karşılık, SK kanal agonisti 1-EBIO infüzyon TH + sayısını artırır ve (aynı tutarda) TH- SNc nöronlar 4,5 sayısını azaltır. Benzer değişiklikler, afferent girişi 4 hedef olan de dahil olmak üzere SNc nöronal aktivitenin, hedefleme çeşitli uygulamalar aşağıdaki görüldü. Nöronal aktivitenin ve afferent tarafından SNc DArgic nöronların sayısının bu bariz düzenleme ortamı veya davranış SNc nöron sayısını etkileyebilir olasılığını yükseltir. Farklı ortamlara maruz kalan Gerçekten de, yetişkin fareler daha az ya da orta beyin (SNc VTA) TH + nöronlar ve bu ortam ile endüklenen değişikliklerin en azından bir orta beyin 6 sinaptik giriş eşzamanlı ablukası ile ortadan kaldırılamaz sahiptir. (1) çevresel manipülasyonlar ve ilaç infüzyonu nasıl uygulanacağı konusunda daha fazla ayrıntı sağlamak;: Bu iletişim amaçları vardır ve (2) e bizim çekişme destekleyen daha fazla veri sağlamakbütünlüklü afferent yoluyla, orta beyin DA nöron sayısını düzenler.

<table><tbody><tr><td>İzofloran</td><td>Baxter Healthcare Pty Ltd, Baxter Drive, NSW 2146, Avustralya</td><td>AHN3640</td><td></td></tr><tr><td>ALZET Ozmotik pompa 1002</td><td>DURECT Corporation, Posta Kutusu 530 Cupertino, CA 95015-0530</td><td>0004317</td><td></td></tr><tr><td>ALZET Beyin infüzyon kiti 1</td><td>DURECT Şirketi, Posta Kutusu 530 Cupertino, CA 95015-0530</td><td>0004760</td><td></td></tr><tr><td>ALZET kanül tutucu 1</td><td>DURECT Şirketi, Posta Kutusu 530 Cupertino, CA 95015-0530</td><td>0008860</td><td></td></tr><tr><td>Vertex Monomer Kendiliğinden kürlenen (dental akrilik solvent)</td><td>Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, Hollanda</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Vertex Self Curing (dental akrilik toz)</td><td>Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, Hollanda</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>METACAM (Meloxicam)</td><td>Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 Avustralya</td><td>L10100</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Pentobarbiton</td><td>Lethabarb, Virbac, Milperra, NSW, Avustralya</td><td>571177</td><td></td></tr><tr><td>Normal keçi serumu</td><td>Chemicon-Temecula, CA</td><td>S26-Litre</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Merck Millipore Genel Merkezi&nbsp;, 290 Concord yolu, Billerica, MA 01821</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td>Poliklonal tavşan anti-tirozin hidroksilaz</td><td>Merck Millipore Genel Merkezi&nbsp;, 290 Concord yolu, Billerica, MA 01821</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Poliklonal biyotinile keçi anti-tavşan</td><td>Dako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Level 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Avustralya 2060</td><td>EO432</td><td></td></tr><tr><td>Avidin peroksidaz</td><td>Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU</td><td>A3151-1mg</td><td></td></tr><tr><td>Diamino-benzidin</td><td>Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU</td><td>D-5637</td><td></td></tr><tr><td>Stereo Araştırmacı</td><td>MicroBrightField Biyobilim, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495</td><td>yok</td><td></td></tr></tbody></table>

yetişkin farelerde orta beyin dopamin nöronlar sayısının Çevre modülleri

Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice

Beyin veya beyin plastisite &#39;Uzun süreli değişiklikler hastalık ya da yaralanma aşağıdaki uyarlamalı davranış ve beyin onarımı altında yatan. Ayrıca, bizim çevre ile etkileşimleri beyin plastisite neden olabilir. Giderek, araştırma beyin ve davranış bozuklukları tedavisinde yararlı beyin plastisite teşvik hangi ortamlar belirlemek için çalışıyor. İki çevresel manipülasyonlar açıklanan hangi artırmak veya yetişkin fare orta beyindeki nöronlar tirozin hidroksilaz immünopozitif sayısını (TH +, dopamin (DA) sentezinde hız kısıtlayıcı enzim) azaltın. İlk eşleştirme erkek ve birlikte sürekli erkeklerde yaklaşık% 12 oranında orta beyin TH + nöronlar artar 1 hafta için dişi farelerin içermektedir, ancak kadınlarda yaklaşık% 12 oranında orta beyin TH + nöronlar azaltır. İkinci vb çalışan tekerlekleri, oyuncaklar, halatlar, yuvalama malzeme, içeren &#39;zenginleştirilmiş ortamlarda&#39; (EE) 2 hafta boyunca sürekli konut fareler içermektedir ierkeklerde yaklaşık% 14 oranında orta beyin TH + nöronlar ncreases. Ayrıca, bir protokol eş zamanlı çevre kaynaklı beyin plastisite altında yatan mekanizmaları belirlemek yardımcı olmak için bu çevresel manipülasyonlar sırasında doğrudan orta beyin içine uyuşturucu beslerken için tarif edilmiştir. Örneğin, daha orta beyin TH + nöronların EE-indüksiyon orta beyin nöronlar üzerine sinaptik girdi eşzamanlı ablukası tarafından kaldırılmıştır. Birlikte, bu veriler çevre ile ilgili bilgiler veya &#39;DA&#39; genlerin ifadesi kapatmak için orta beyin nöronların sinaptik giriş üzerinden geçirilen olduğunu göstermektedir. Böylece, altta yatan mekanizmaların hedef uygun çevresel stimülasyon ya da ilaç, orta beyin DA dengesizliklerin ile ilişkili beyin ve davranış bozuklukları tedavisinde yararlı olabilir (örn Parkinson hastalığı, dikkat eksikliği ve hiperaktivite bozukluğu, şizofreni, ve uyuşturucu bağımlılığı).

Bu çevresel manipülasyonlara maruz Yetişkin fareler orta beyin numaralarını (SNc ve VTA), ancak LC değiştirmiştir, TH + nöronlar, EE artı pikrotoksin veya bicuculline ya eşzamanlı orta beyin infüzyon (GABA A reseptör antagonistleri) ve EE-indüksiyon ortadan kaldıran daha SNc TH + nöronlar. Bu veriler, daha önce 6 yayınlandı. Mevcut veriler bir önceki çalışmanın bir parçası olarak gerçekleştirilen tekrarlanan deneylerde derlendi, ama başka bir yerde yayınlanmamış olması. ...

Bu protokol, yetişkin farelerde adaptif davranış ve beyin onarımının altında yatan çevresel kaynaklı beyin değişikliklerini incelemek için iki farklı çevresel manipülasyonu ve eşzamanlı bir beyin infüzyon protokolünü tanımlar.

Yetişkin Farelerde Orta beyin dopamin Nöronlar Sayısının Çevre Modülleri

Long-lasting changes in the brain or &#8216;brain plasticity&#8217; underlie adaptive behavior and brain repair following disease or injury. Furthermore, ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, farelerde beyin plastisitesini ve davranışsal değişiklikleri uyaran kontrollü çevresel durumlar sağlamaktır. Bu, uzun süreli cinsiyet eşleşmesinin beyin üzerindeki etkilerini incelemek için farelerin erkek-dişi çiftler halinde, erkek-erkek ve dişi-dişi kontrol çiftlerine karşı konaklatılmasıyla gerçekleştirilir; alternatif olarak, çevre zenginleştirmesinin beyin üzerindeki etkilerini incelemek için fareler, standart kafesler yerine keşif ve oyun için farklı nesnelerle doldurulmuş kafeslerde birlikte konaklatılabilir. Gözlemlenen beyin ve davranışsal değişikliklerin arkasındaki mekanizmaların belirlenmesine yardımcı olmak için bu çevresel stimülasyonlara ilaç uygulaması gibi diğer tedaviler eklenebilir.Sonuçlar, bu çevresel zenginleştirmelerin ve uygulamaların, orta beyindeki GABAergik sinaptik iletime bağlı olarak orta beyin dopaminerjik nöronların sayısında değişikliklere yol açtığını göstermektedir. Çevresel zenginleştirme, fareler için somatosensoriyel motor ve bilişsel stimülasyonu artıran bir paradigmadır. Bu yaklaşımı kullanan çalışmalar, birçok hastalık modelinde nöroplastisitenin arttığını ve ayrıca öğrenme ile bellekte iyileşmeler olduğunu göstermiştir.Bu tekniğin doğurguları, çevresel etkilerin yol açtığı yetişkin beyin plastisitesi mekanizmalarının anlaşılmasına yöneliktir. Bu durum, beyin ve zihnin birçok hastalığının tedavisi için önem taşımaktadır. Sinaptik girdilerin tetiklediği orta beyin nöronal aktivitesindeki bozulmalara yanıt olarak, orta beyin dopamin nöronlarının sayısının değiştiğini ilk fark ettiğimizde bu yöntemle ilgili ilk fikrimiz oluşmuştu.Prosedürlerin öğrenilmesi oldukça zor olabileceği için ozmotik pompanın ve beyin infüzyon kanülünün görsel gösterimi kritik olabilir. Cinsiyet eşleştirmesi için yazılı açıklamalar. Cinsel olarak olgun, yaşları eşleştirilmiş erkek ve dişi fareleri, aynı batından gelmediklerine dikkat ederek cinsiyetlerine göre gruplandırın; her fareyi rastgele bir erkek-erkek çiftine, bir dişi-dişi çiftine veya bir erkek-dişi çiftine, temiz bir kafese, yiyecek ve suya serbest erişimi olacak şekilde izole ederek yerleştirin; bu durum cinsiyet eşleştirmesi boyunca devam etmelidir.Tüm dışsal çevresel uyaranları sabit tutun veya tüm farelere eşit şekilde dağıtın ve hayvanları yedi gün boyunca kesintisiz olarak barındırın. Çevresel zenginleştirme için, cinsel olarak olgun, yaşları eşleştirilmiş erkek veya dişi fareleri rastgele üç gruptan birine atayın: standart barındırma, koşu tekerleği veya en az üç gün boyunca çevresel olarak zenginleştirilmiş ortam. Fareleri bu şekilde tutun.14 gün boyunca yiyecek ve suya serbest erişim sağlanmıştır. Standart kafesle barındırma sırasında, kafeste yalnızca altlık bulunmalıdır. Koşu tekerleği grubundaki kafeslerde altlığa ek olarak iki adet koşu tekerleği bulunmalı; çevresel olarak zenginleştirilmiş gruptaki kafeslerde ise altlık, iki adet koşu tekerleği ve oyuncaklar bulunmalıdır.Çevresel olarak zenginleştirilmiş fareleri, günde bir saat boyunca yeni oyuncaklar içeren daha büyük bir kafese birlikte yerleştirerek ek süper zenginleştirmeye tabi tutun. Haftada beş gün boyunca, her gün aynı saatte fareleri çevresel olarak zenginleştirilmiş kafeslerine geri koyun. Her oturumdan sonra, her seferinde farklı bir oyuncak seti sunarak yeniliği koruyun.Farelere sunulacak tüm oyuncakların sabunlu su ve %80 etanol ile temizlenmesi. Herhangi bir kokuyu gidermek için, implantasyonun bir gün öncesinde, standart barındırma ve koşu tekerleği gruplarının da benzer şekilde ve her gün benzer sürelerle değiştirilmesi, ancak süper zenginleştirme materyallerinin eklenmemesi gerekir. Aseptik teknik kullanarak; her bir steril ozmotik pompayı, bağlantı tüpünü ve kanülü, üretici talimatlarına uygun olarak steril ilaç veya taşıyıcı solüsyonla doldurun.Ardından parçaları birbirine bağlayın ve cerrahi gününde, steril salin içinde 37 °C'de gece boyunca inkübe edin. Ayak parmağı sıkıştırma testiyle sedasyonun onaylanmasının ardından, hayvana göz pomadı uygulayın ve onu bir ısıtıcı ped üzerine sırtüstü yerleştirin. Daha sonra, aseptik teknik kullanarak, kafatasının arka kenarının iki santimetre posteriorundan başlayıp gözlerin arasında sona eren bir orta hat deri insizyonu yapın; deriyi, farenin sırtı boyunca alttaki fasyadan küt diseksiyonla ayırarak, pompayı ve bağlantı tüpünü rahatça yerleştirecek kadar geniş bir subkütan cep oluşturun.Ardından, kafatasının dorsal yüzeyindeki fasyayı temizleyin ve uygun stereotaksik koordinatlarda, ince ve esnek bir kemik tabakası kalana kadar yaklaşık 1,5 milimetre çapında bir dental frez kullanarak kafatasını delin; bu tabakayı ince bir pensle soyarak kaldırın. Kafatası kan ve kemik parçalarından temizlendiğinde ve kanama durduğunda, pompayı ve bağlantı tüpünü yeni oluşturulan cebe yerleştirmek için bir kanül tutucu kullanın. Şimdi kanülün ucunu beynin yüzeyindeki uygun stereotaksik koordinatlara konumlandırın ve ardından tüpü, gereken derinliğin bir milimetre üzerinde kalacak şekilde dikkatlice beynin içine indirin.Kafatası yüzeyinin bir kez daha temiz ve kuru olduğundan emin olun, ardından akrilik sertleşmeden önce, kanül etrafındaki burr deliği de dahil olmak üzere kafatasının tüm açıkta kalan alanına taze hazırlanmış dental akrilik yaymak için bir kürdan kullanın. Kanül ucunu hedef bölgeye kalan derinliğe kadar indirin. Kanül yerleştiğinde, taze hazırlanmış dental akriğin ikinci bir katmanını dikkatlice kafatasına ve kanülü sabitleyen beyaz plastik destek üzerine uygulayarak kanülü yerinde sabitleyin.Akrilik sertleştikten sonra kanül tutucuyu dikkatlice çıkarın ve plastik kanül sekmesini eritmek için ısıtılmış bir skalpel bıçağı kullanın. Ardından, tüm implantın üzerindeki cildi sütürle kapatın. Cilt kenarlarına antiseptik merhem uygulayın ve hayvana anti-inflamatuar ilaç uygulayın.Son olarak, fareyi çerçeveden çıkarın. Bir ısı lambasının altına yerleştirin ve hayvan tamamen iyileşene kadar gözlemleyin. Yedi gün boyunca yetişkin dişi farelerle eşleştirilen yetişkin erkek fareler, erkeklerle eşleştirilen erkek farelere göre yaklaşık %12 daha fazla orta beyin th pozitif SNC alan nöronuna sahiptir.Buna karşılık, erkeklerle eşleştirilen dişilerde, dişilerle eşleştirilen dişilere göre yaklaşık %12 daha az TH pozitif SNC nöronu bulunmaktadır. TH pozitif SNC ve ventral tegmental alan nöronlarının sayısı, 14 gün boyunca çevreyle zenginleştirilmiş eşleştirme artı süper zenginleştirmeye tabi tutulan yetişkin erkek farelerde de artış göstermektedir. Araç infüzyonu ile çevreyle zenginleştirilmiş artı süper zenginleştirme uygulanan hayvanlarda ise yaklaşık %14 daha fazla TH pozitif SNC nöronu görülmektedir.Ardından, araç infüzyonu yapılan standart kafes hayvanları ile çevresel zenginleştirme artı süper zenginleştirme konutlandırmasına tabi tutulup gabaa reseptör antagonisti infüzyonu yapılan hayvanlar ise bu artışı göstermezler. Çevresel manipülasyonlar uygulanırken, gürültüyü en aza indirmek ve kafes değişimlerinden kaçınmak gibi, hayvanlara yönelik her türlü rahatsızlığın minimum düzeyde tutulması gerektiğini hatırlamak önemlidir. Zenginleştirilmiş bir ortam kurulurken, hayvanlarınız için stresi en aza indirmek adına çeşitli yuva malzemeleri eklemek ve yuva yerini sabit tutmak kritik önem taşır.Bu videoyu izledikten sonra, beyin ve davranışta değişiklikler meydana getirmek amacıyla yetişkin farelerin çevresinin nasıl manipüle edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. İlaçlarla çalışırken, bunların son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın; bu nedenle osmotik pompaları hazırlarken her zaman koruyucu kıyafetler giyin.

environmental-modulations-number-midbrain-dopamine-neurons-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

İlköğretim ayrışmış orta beyin dopamin hücre kültürleri dopamin nöronların presinaptik özellikleri çalışma için izin verir. Onlar gerçek zamanlı dopamin salınımını kinetik ve dopamin ekzositoz düzenleyicilerin protein / mRNA seviyeleri izlemek için kullanılabilir. Burada, biz kemirgen yenidoğanlarda bu kültürlerin nasıl oluşturmak göstermektedir.

Kemirgen Yenidoğanlar İlköğretim grubuyla orta beyin dopamin Hücre Kültürleri

Bir protokol unilateral 6-OHDA lezyonlar, farelerde medyal önbeyin demet gerçekleştirmek için tarif edilmektedir. Bu yöntem, striatal dopamin ve 90,63&gt;% 95 kaybı gösteren hayatta kalan hayvanların% 89 ile düşük mortalite oranı (% 13.3) ±% -4,02, lezyonun tarafa doğru ipsiversive dönme önyargı vardır.

Parkinson Hastalığının tek taraflı lezyonlanmıştır 6-OHDA Mouse Model Geliştirme

Dopamin belirgin hücre gövdeleri ve dopamin nöron dendritler içeren Ortabeyin çekirdekler, düzenlenmiştir. Burada substantia nigra (SN) ve kemirgenlerde ventral tegmental alan (VTA) ve orta beyin çekirdeklerinde dopamin regülasyonu üzerine, böylece bir diseksiyon ve örnek işleme sonuçları maksimize etmek için yaklaşım, sonuç ve görüşlerini açıklar.

Substantia nigra ve ventral Tegmental Bölgesi Dopamin Yönetmelik Kapsamlı Profilleme

Genel olarak Parkinson hastalığı, hareket bozuklukları, hassas ve güvenilir bir davranış testleri yeni potansiyel terapötikler test etmek için gereklidir. Burada, nigrostriatal sistemine zarar derecelerine ve klinik öncesi çalışmalar için yararlı duyarlı olan fareler için duyu testler yönetilebilir bir pil açıklanmaktadır.

Parkinson Hastalığı Fare Modeller Duyusal Motor Fonksiyon Değerlendirilmesi

NF-KB-bağımlı yetişkin hipokampal nöron manipülasyonu ve analiz için yöntemler tarif edilmiştir. Ayrıntılı bir protokol farelerin bilişsel sonuçların araştırılması için bir dentat girus-bağımlı davranış testi (uzaysal desen ayrılık-Barnes labirent adlandırılır) için sunulmuştur. Bu teknik aynı zamanda, diğer deneysel ortamlarda araştırmaları sağlama yardımcı olmalıdır.

NF-KB-bağımlı yetişkin nöron Modülasyon ve Analiz Yöntemleri

Lipoksijenaz (LOX) izozimler nöroinflamatuarasyonu ve nörodejenerasyonu artırabilecek veya azaltabilecek ürünler üretebilir. Gen-çevre etkileşimi çalışması LOX izozime özgü etkileri tanımlayabilir. İki LOX izozim eksikliği olan transgenik çizgilerde nigrostriatal hasarın 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidromiridin (MPTP) modelinin kullanılması, LOX izozimlerinin dopaminerjik bütünlük ve inflamasyona katkısının karşılaştırılmasını sağlar.

Parkinson Hastalığında Maskeyi Düşürme Duyarlılık Mekanizmalarına Gen-Çevre Etkileşim Modelleri

Dopaminerjik nöronlar beyinde hayati bir düzenleyici rol oynar. Kayıpları Parkinson hastalığı ile ilişkilidir. Bu videoda, embriyonik fare mezensefalondan merkezi dopaminerjik nöronların birincil kültürlerinin nasıl oluşturulacağını gösteriyoruz. Bu tür kültürler, bu nöronların çeşitli streslere karşı aşırı savunmasızlığını incelemek için yararlıdır.

Fare dopaminerjik nöronlar İlköğretim Kültür

Parkinson hastalığı sırasında orta beyin dopaminerjik nöronlarının dejenerasyonunun nedenleri tam olarak anlaşılamamıştır. Hücresel kültür sistemleri, bu nöronların nörofizyolojik özelliklerinin incelenmesi için önemli bir araç sağlar. Burada, nörodejenerasyonun in vitro modellemesi için kullanılabilecek optimize edilmiş bir protokol sunuyoruz.

Embriyonik Kemirgen Brain itibaren İlköğretim Mesensefalik dopaminerjik Nöronlar İzolasyonu, Kültür ve Uzun Vadeli Bakım

Synaptosomal dopamin alımı ve yüksek performanslı sıvı Kromatografi analiz temsil deneysel araçları tarafından değerlendirilmesi dopamin taşıyıcı işlevi ve striatal dokusunda dopamin düzeyleri dopamin homeostazı farelerde araştırmak için anılan sıraya göre. Burada protokolleri dopamin doku içeriği ölçmek ve dopamin taşıyıcı işlevselliğini değerlendirmek için mevcut.

Dopaminerjik Homeostasis farelerde yüksek performanslı sıvı Kromatografi analizi ve Synaptosomal dopamin alımı kullanımı tarafından değerlendirilmesi

Bu eser dopaminerjik nöron hücre sayıları tarafsız stereological tahmini için adım adım bir protokol fare gözlemliyorum standart mikroskobu kullanýlýyor (Yani, bir ışık mikroskobu, bir motorlu nesne tablo (x, y, z nigra içinde sunar. uçak) ve kamuya açık yazılım dijital görüntü analizi için.

Optik Fractionator ve standart mikroskobu ekipmanlar kullanarak fare gözlemliyorum Nigra dopaminerjik nöron sayısının stereological tahmin

Hem erkeklerde hem de kadınlarda çalışan ve ayrı ergenlik dönemlerinde maruz kalmaya izin veren ergen C57BL / 6 fareleri için hızlandırılmış bir sosyal yenilgi stres modeli geliştirdik. Bu modele maruz kalmak, sosyal kaçınmaya neden olur, ancak yalnızca mağlup erkek ve dişi farelerin bir alt kümesinde.

Ergen C57BL/6 Erkek ve Dişi Fareler için Sosyal Yenilgi Stres Modeli

Keşfedin yetişkin farelerde orta beyin dopamin nöronları üzerinde çevresel zenginleştirmenin etkilerini. Bu yöntem, nöroplastisite ve davranışsal değişiklikleri incelemek için cinsiyet eşleştirme ve ilaç uygulamalarını kullanır.

Yetişkin Farelerde Orta beyin dopamin Nöronlar Sayısının Çevre Modülleri

Daha fazla video keşfet