Name: Ön Talamusun Çekirdek Derin Beyin Stimülasyon sonra Sıçan Hippocampus Gen İfade Değişim Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda ön talamus derin beyin stimülasyonu sonrası hipokampus gen ifade değişimlerini analiz etme yöntemini. Bu protokol, BDNF ve GABRD genlerindeki düzenlemeleri inceleyerek epilepsi tedavisindeki moleküler mekanizmaları ortaya koyar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NREF vakfının desteği için minnettarız.

NOT: Etik Açıklama: Bu yazıda ele tüm işlemler (Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu için) Hayvan Araştırma NIH kurallarına uygun ve Harvard Tıp Fakültesi IACUC Komitesi tarafından onaylanmıştır. 1. Ön cerrahi hazırlanması <ol><li> Tüm cerrahi aletler ya otoklav ile veya gerektiğinde antiseptik solüsyon ve / veya etanol ile temizlik sterilize emin olun. Mümkünse, bu tür neşter, iğne ve şırıngalar gibi steril tek kullanımlık ekipman kullanın. </li><li> Cerrahi örtüler ile tezgah Kapak ve mevcut bir biyolojik tehlikeli atık bertaraf var olduğundan emin olun. </li><li> Sıçan tartılır ve anestezi dozu hesaplamak. Fareler uyutmak için Ketamin / Ksilazin karışımı (Ketamin 75 mg / kg ve Xylazine 10 mg / kg) kullanın. Not: 200-250 gr stereotaktik çerçeve içinde hayvanın uygun sabitleme için hem de ATN tam bir hedeflemenin yapılması için en uygun ağırlık arasında. Isoflurane da anestezi maddesi olarak kullanılabilir. </li><li> Dağı ve güvenli iki steril elektrotlar elektrot tutucu üzerine (otoklav veya etilen oksit ile sterilize) stereotaktik cerrahi çerçeve ve bir mikroskop (10-40X büyütme) yardımı ile (Şekil 2), düzgün için elektrodun ipuçları incelemek hizalama. İki elektrotlar arayla 3,0 mm sabitleyin. NOT: sert yüzeylere dokunarak elektrot ucu zarar vermemek için özen gösterin. </li></ol> 2. DBS Cerrahisi <ol><li> Ketamin / Xylazine hayvana intraperitoneal karıştırın ve hayvan (ayak-tutam refleks, solunum hızı ve derinliği ve solunum düzenliliği kontrol ederek) anestezi cerrahi uçağı ulaştığını teyit enjekte. Çizi edilecek kafa derisi bölgesinden saç çıkarın ve her Betadin ve alkol ya da steril serum fizyolojik ya 3 alternatif scrubs ile kafa derisi dezenfekte edin. Güvenli ve stereotaktik Fram üzerinde hayvan yerleştirinör. </li><li> Optimal düzeyde hayvanın vücut ısısını korumak için dolaşan sıcak su yastıkları kullanın. Aşırı kurumasını korumak için hayvanın gözlerine göz yağlayıcı. </li><li> Anterioposterior -1.6 mm, mediyolateral 1,5 mm ve 5,2 mm 1 dorsoventral aşağıdaki stereotaktik ATN (anterior talamik çekirdek) hedefleme için koordinat kullanın. NOT: stereotaktik koordinatlar Paxinos ve Watson (6 th edition) sıçan beyin atlas 36 dayanmaktadır. </li><li> Kafa derisi bir kesi sagittally kafatasını ortaya olun. Retraktörler bir çift kazıma derisi güvenceye kullanma kafatası ortaya çıkarmak. Kesi temizlemek için steril tuzlu su kullanın. Kesi çok ıslak ise, kurumaya steril pamuklu bezlerden kullanın. Bregma bulun ve siyah marker ile işaretleyin. Coron sagital sütür ve 1,6 mm posterior mediolaterally her iki tarafta yaklaşık 1.5 mm iki işaretleri yapmak, çapak delik konumunu rehberlik etmekal sütür. </li><li> Çapak delik yapmak için bir el matkabı kullanın. Çapak delik ucu etanol ile sterilize steril olduğundan emin olun. Delerken kafatası yüzeyine 45 ° yaklaşık bir açıyla matkap tutun. Sıkça herhangi bir çapak delik yerde aşırı ısı önlemek için iki çapak delik arasındaki geçiş. </li><li> Dura maruz kadar sondaj devam edin. Ucu bükülmüş bir &#39;L&#39; şeklini andıran bir iğne kullanarak, elektrot ekleme engel olur kemik herhangi bir kırık parçalarını çıkartın. Bükülmüş bir iğne kullanılarak kemik parçaları çıkarırken yatan dura ve / veya beyin dokusu zarar vermemek için özen gösterin. NOT: Bir körleşmiş iğne veya ince künt forseps kullanarak da bir seçenektir. </li><li> Stereotaktik çerçeve dönen sapa çift elektrot düzeneğini Fix ve 90 ° açıyla kolu sabitleyin. Stereotaktik çerçeve ayarlamaları kullanarak, tam bregmadan yukarıda sol elektrot yerleştirin. </li><li> Stereo kullanmataktik ayarlamalar mediyolateral konumlandırma için, tam şimdi mükemmel koronal sütür boyunca hizalanmış iki elektrot vardır ama bregmadan mediolaterally 1,5 mm aralıklı şekilde bregmadan sol tarafına sol elektroda 1.5 mm hareket. </li><li> Anterioposterior stereotaktik ayarlamalar kullanarak, koronal sütür elektrotlar 1,6 mm posterior taşıyın. </li><li> Çapak çapak delik delik kaba kenarları dokunmadan, elektrotlar kolaylıkla eklenebilir böyle doğru yerde yapılmış ise ilk onay için elektrotlar düşürmek için dorsoventral ayarlamaları kullanın. Bu durumda, kafatasının yüzeyine 5.2 mm derinliğe kadar elektrotlar yerleştirin. </li><li> 130 Hz ayarlanmış bir uyarıcısı, 2.5 V ve 90 mikro saniye pulsewidth 1 açar aracılığıyla elektrotlar bağlayın. </li><li> Bir saat süre ile yüksek frekans uyarımı teslim (veya deney sisteminde göre istenen bir zaman periyodu için). Stimülasyon sırasında, s sağlamak unutmayındüzenli bir ayak tutam yanıt olarak ayak çekilmesi yokluğu kontrol ederek roper anestezi derinliği. Anestezi ikna etmek için kullanılan yaklaşık yarısı ilk dozu ile anestezi Supplement. Anestezi derinliği kontrol ederken senin steril eldiven kirlenmesini önlemek ve gerekirse bunları değiştirin. Kişinin deneysel ihtiyaçlarına göre tek veya çift taraflı uyarımı gerçekleştirin. Gibi düşük frekanslı stimülasyon gibi kontrolleri (eg., 10 Hz) ve (sonradan stimülasyon ile elektrotlar yerleştirerek) uyarılmamış hayvanlar dahil. </li><li> Stimülasyon yapıldıktan sonra, dikkatlice elektrotlar kaldırmak ve 3-0 dikiş ile veya steril cerrahi zımba ile kesi dikiş. </li><li> Deri altına analjezi olarak buprenorfin (0.05 mg / kg) uygulayınız. Normal aktiviteye dönene kadar hayvan Monitör ve ardından konut tesisine geri. </li><li> Deneysel tasarım dayalı zaman belirli bir süre sonra (örneğin, 0, 3, 6 veya 12 saat sonrası DBS cerrahisi), Anestezi doz aşımı ile hayvan euthanize. Vital bulguların yokluğu onayladıktan sonra, hayvan başını kesmek. </li><li> İlk makas kullanılarak cilt kaldırarak beyin parçalara ayır. Diseksiyon makas kullanarak sagital sütür boyunca kemik kesti. Her iki yan tarafta kemik yoluyla iki kesiler (yaklaşık bir inç her) yapın. Forseps kullanarak, beyin maruz kafatasının üst kemik kısmen kopmuş parça kaldırın. </li><li> Ince makas veya forseps kullanarak, kafatası beyni yerinden ve buz üzerinde soğuk PBS ile bir Petri kabı transfer. NOT: kemiğin içinden kesiler yaparken beyne zarar vermemek için özen gösterin. </li></ol> 3. Hippocampus İzolasyon NOT: buz üzerinde bu bölümdeki tüm sonraki adımları uygulayın. <ol><li> Buz üzerinde önceden soğutulmuş bir akrilik beyin matrisi üzerinde beyin yerleştirin. Bir jilet kullanarak, ön-çoğu ed gelen koronal yaklaşık 7-8 mm beyin kesmekbeyin ge. Ilk kesme ikinci koronal kesme ve posterior yapmak şekilde yaklaşık 5 mm kalınlığında beyin kesiti çıkarılabilir. </li><li> Buz soğukluğunda PBS ile bir petri tabağına beyin dilim aktarın. Jilet kullanarak, iki yarım küre bölümleri sever ve sırasıyla sol ve sağ taraflarına karşılık gelen hemisfer dikkat etmeye özen gösterin. Tek taraflı uyarılmalara yaparken bu özellikle önemlidir. </li><li> Ince forseps ve makas kullanılarak dikkatli bir şekilde hipokampus çıkarın. </li><li> Flaş sonraki RNA ekstraksiyon adımlar için hazır olana kadar -20 ° C derin dondurucuda kuru buz ve mağaza hipokampal doku dondurma. NOT: Uzun süreli depolama için, -80 ° C derin dondurucuda saklamak doku önerilir. </li></ol> 4. RNA Ekstraksiyon ve Kantitatif PCR <ol><li> Doku homojenizasyon için hazır olana kadar kuru buz dondurulmuş kalır emin olun. </li><li> NOT: kaputu bu adımı gerçekleştirin. <ol><li> Hipp Tri reaktif 1 ml ekleyinDoku küçük parçalar halinde kırılır kadar 1,5 ml santrifüj tüpü içinde ocampal doku ve birinci pipetleme birden çok kez de homojen hale getirilir. Ayrıca görünür hiçbir kırılmamış doku kalmayıncaya kadar bir 25 G iğne ile bir şırınga geçerek doku homojenize. Buz üzerinde homojenleştirme adımları uygulayın. </li><li> Doku homojenize edildikten sonra, hücre parçalanmasını sağlamak için hücre süspansiyonu, 5 dakika boyunca oda sıcaklığında bekletin. NOT: Bu noktadan sonra, hücre süspansiyonu dondurulmuş ve daha sonra işlenene kadar -70 ° C&#39;de saklanır hızlı olabilir. </li></ol></li><li> 0.2 mi kloroform eklenir ve 20 saniye boyunca vorteks ile karıştırın ve 15 dakika için oda sıcaklığında çözelti dinlendirin. </li><li> 4 ° C&#39;de 15 dakika boyunca 12,000 x g&#39;de örnekleri santrifüjleyin. Santrifüj işleminden sonra, görünür olacak üç ayrı katmanları bozmadan dikkatlice tüpleri çıkarın. NOT: Alt (kırmızı) faz proteinleri içeren, orta bulutlu faz DNA içerir ve üst berrak faz R içeriyorNA. </li><li> Yeni bir 1.5 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne, berrak fazı (RNA) aktarın (tipik olarak faz ihtiva eden RNA, 500 ul elde edilir). Buna, 0.5 ml izopropanol ilave edildi ve vorteks yoluyla karıştırılır. Buna RNA için taşıyıcı olarak 2-3 ul glikojen (20 mg / ml) ilave edilmektedir. Örnek 10 dakika süreyle oda sıcaklığında masaya dinlenmeye bırakın. </li><li> 4 ° C&#39;de 1 saat süre ile 12,000 x g&#39;de santrifüjleyin. RNA pelet tüpün alt kısmında görünür olduğundan emin olun. </li><li> Süpernatantı atın ve% 75 etanol 1 ml ekleyerek RNA pelet yıkayın (nukleaz ücretsiz su ile yapılan). Topak, tüp altından boşaltır ve çözelti içinde yüzer kadar örneği, birden çok kez ters yüz edin. 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 12,000 x g&#39;de çözeltisi santrifüjleyin. Not:% 75 etanol içinde topak daha başka aşamalar kadar -20 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca açık tüpler bırakarak kuru hava RNA pelet izin verir. Ove önlemek için önlem alınBu sonraki aşamada su içinde çözülmesini etkileyebilecek olarak Pelet kurutulduktan r. </li></ol> 5. RNA Hazırlık DNA Çıkarma <ol><li> RNA pelet nükleaz ücretsiz su 9 ul ekleyin ve pelet tüp hafifçe karıştırın geçmeden önce çözülür emin olun. Bu 10x Dnaz i Tampon 1 ul, 1 ul (DNase I kit) yeniden birleştirici DNase eklemek için, kısa bir süre için, hafifçe tüpler hafifçe vurarak karıştırın tüpleri spin ve 30 dakika için bir su banyosu içinde 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Örnek (DNase I kit) 2 ul DNaz inaktivasyonu reaktif ilave edin ve 2 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edilir ve tüp hafifçe iterek genellikle karıştırın. Yeni bir 1.5 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne, 10 dakika ve Üstte yüzen berrak madde içinde yaklaşık 10 ul transfer için 12,000 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Bir Nanodrop veya spektrofotometre kullanılarak RNA konsantrasyonu ölçün. </li></ol> 6. RNA&#39;dan cDNA yapmak <ol><li> Gerekli hacim th ekleRNA 1 ug içerir ve nükleaz ücretsiz su ekleyerek 8 ul toplam hacmi getirmek de. Buna 1 ul 10 mM dNTP karışımı Superscrıpt içine First Strand Synthesis Kit rasgele heksamerlerin 1 ul ekle. Yavaşça karıştırın ve ya bir su banyosunda ya da bir önceden-programlanmış bir ısıl üzerinde 5 dakika boyunca 65 ° C sıcaklıkta inkübe edilir. </li><li> 10x RT tampon maddesi, 25 uM MgCl2, 0.1 M DTT ve 2 ul RNaz OUT 1 ul (40 U / ul), 4 ul 2 ul: Aşağıdaki reaktifler içeren bir ön-karışım hazırlanması. NOT: Verilen Birimleri reaksiyon başına, kullanıcı kişinin deneysel ihtiyaçlarına göre büyütmek gerekir. </li><li> 65 ° C ila örneğini içeren RNA çıkardıktan sonra, bir dakika süre ile, oda sıcaklığında tüp ayarlayın. 9 ul ön-karışım çözeltisi ilave edin ve 2 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. Superscript II ters transkriptaz enzimi ve 1 ul (50 U / ul) ilave edilir ve daha sonra 10 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> 50 için 42 ° C&#39;de inkübe edinen az bir ters transkripsiyon gerçekleşmesi için. </li><li> 15 dakika reaksiyonu sona erdirmek için 70 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Buz örnekleri kısaca yerleştirin ve 1 ul RNaseH (2 U / ml) ekleyin ve 20 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Kısaca yoğuşma sıvı aşağı dönmeye 3.000 xg&#39;de tüpler santrifüj. NOT: Bu kantitatif PCR için kullanılacak cDNA&#39;dır. cDNA kurulumu kadar -20 ° C&#39;de derin dondurucuda saklanabilir. cDNA, PCR ile devam etmeden önce, nükleaz içermeyen su ile seyreltilebilir. </li></ol> 7. Kantitatif PCR <ol><li> Takip eden maddeler içeren bir ana karışım (verilen miktarlar reaksiyon başına olan) İmalat: 2x SYBR Yeşil Mix 6.3 ul ileri primer (10 uM), 0.6 ul ters Primer (10 uM), 0.6 ul Nükleaz serbest su, 0.5 ul . NOT: Primer tasarımı kullanılarak yapıldı ilgi geni için NCBI nükleotid dizisi sayfasında seçeneği &#39;Primer seçin&#39;. </li><li> 96 iyi-PCR plakanın her oyuğuna 10 ul Mastermix ekleyin. Daha önce de MasterMix içeren yapılan cDNA 2.5 ul ekleyin. Her bir numune için üç PCR reaksiyonları kurmak için emin olun. </li><li> Master ve cDNA eklenmesi tamamladıktan sonra, kuyu mühür bir optik yapışkan sayfasını kullanarak PCR plaka kapsamaktadır. Kuyunun dibine tüm sıvı yerleşmek için bir masaüstü santrifüj 500 xg&#39;de 5 dakika boyunca kısaca plaka Spin. </li><li> Önceden programlanmış RT-PCR makine üzerine PCR plakasını yükleyin. Tablo 1&#39;de verilmiştir PCR parametrelerini kullanın. </li><li> Veri analizi: diğer hesaplamalar için qPCR çıkışından Cı t değerleri kullanın. İç kontrol genleri için PCR reaksiyonları ayarlanmış test geni ile birlikte, 18S rRNA ve β-aktin (negatif kontrol) (eşit giriş temin etmek üzere). ΔΔCt yöntemi 37 göre kat değişiklik hesaplayın. </li></ol>

Yazarların herhangi bir açıklaması yoktur.

Benabid ark dönüm çalışmanın ardından. Parkinson hastalığı ve esansiyel tremor tedavisi için derin beyin stimülasyonu kullanarak, DBS cerrahi teknik, birçok nörolojik bozukluklar 6,10,43 tedavisinde son on yılda çok ilgi ile incelenmiştir. Beyin devrelerinin çeşitli nöro-anatomik bölgeleri hedefleyen DBS çalışmalar halen büyük bir sinirsel hastalıklar ele için birçok gruplar tarafından gerçekleştirilen ve klinik çalışmaların çeşitli aşamalarında içindedirler. Subtalamik çekirdek (STN) veya g...

elektriksel beyin devrelerini uyarıcı olasılığı 2 araştırılmıştır zaman nöroşirürji tekniği olarak Derin Beyin Uyarım gelişiminin arkasındaki geçmişi 1870&#39;lerin kadar uzanmaktadır. sinirsel bozuklukların tedavisi gibi kronik yüksek frekanslı stimülasyon kullanılması 1960&#39;lı 3 başlamıştır. Daha sonra kronik implantasyonu DBS elektrotlar 4-6 gelişine 1990&#39;larda, DBS tarafından tedavi edildi sinirsel bozuklukların sayısı artmaya devam etmiştir. Derin Beyin Stimülasyonu ilk esansiyel tremor 6 için bir tedavi olarak Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde kullanıldı. Bugün ameliyat halen farmakolojik müdahale ile tedavi edilemez olan nöronal bozuklukların tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. DBS anda, Parkinson hastalığı ve distoni 7-9 hareketi bozuklukları tedavi etmek için kullanılmıştır. Alzheimer tipi demans, Huntington hastalığı, epilepsi, ağrı ve nöropsikiyatrik hastalıklar, depresyon, obsesif kompulsif bozukluk, Tourette sendromu,7 sendromu ve bağımlılık DBS 10-12 ile tedaviye uygun koşullar bazılarıdır. DBS cerrahi FDA Parkinson hastalığı, distoni ve temel titreme tedavisi için onaylanmıştır birlikte, yukarıda sözü edilen diğer durumların tedavisi için DBS kullanılması, hastaların 13,14 çok umut vermektedir laboratuar çeşitli aşamalarında ve klinik çalışmalar bulunmaktadır. Klinik, DBS cerrahi iki aşamada yapılır. Birinci aşama cerrahi radyolojik konumlandırma bir arada kullanarak hedeflenen anatomik konumda DBS elektrotlar konumlandırma içerir, CT, MRI yanı sıra gelişmiş hassasiyet için mikroelektrot okumaları. İkinci aşama, hastanın üst göğüste bir darbe jeneratörü implante içerir ve yükleme uzatma darbe jeneratör derisi açar. Nörolojik durumuna göre, darbe üreteci için birçok programlama düzenleri standardize edilmiş ve istenen gerilim teslim kullanılacaktır. Son volMinimal gerilimi 15 ile en iyi klinik yanıt alacak şekilde tage kademeli bir şekilde ulaşılır. Ancak, bizim çalışmalarda, kronik DBS implantların aksine basitlik uğruna, klinik olarak kullanılan, bizim hayvan modellerinde (1 saat), bir defalık yüksek frekanslı stimülasyon okuyan başvurdular. Bizim grubun araştırma Parça tedaviye dirençli epilepsi için DBS cerrahisi kullanımını araştıran üzerinde duruluyor. Yüksek frekanslı stimülasyon ile Stereotaktik cerrahi yaklaşımlar epilepsi 10,16,17 tüm insidansı yaklaşık% 30&#39;unu oluşturmaktadır medikal-dirençli epilepsi tedavisi için etkili bir seçenek olarak diğerleri tarafından incelenmiştir. Derin serebellar çekirdekler hem de kortikal yüzey hedefleme serebellar uyarım epilepsi 10,18,19 tedavisi için hedef olarak geçmişte kullanılmıştır. Buna ek olarak, hipokampus uyarımı da denedim ama karışık sonuçlar 20,21 ile olmuştur. Diğer Bazı incelenmiştirEpilepsi için DBS hedefleri serebral korteks, talamus, subtalamik nukleus ve vagus siniri 8 bulunmaktadır. Ancak, son birkaç yıl içinde çeşitli çalışmalar aşağıdaki sonuçları, ön talamik nükleus (ATN) epilepsi tedavisi 10,22 için en yaygın DBS hedef olarak ortaya çıkmıştır. Nöroanatomik devresi ve hayvan modellerinde elde edilen bulgular hakkında bilgilere dayanarak, çeşitli çalışmalar epilepsi 23-26 tedavisinde ATN derin beyin stimülasyonu tedavi edici etkisi üzerinde yoğunlaşmıştır. ATN limbik devrenin parçasıdır ve nöbet sıklığı etki beyin bölgesinde yer almaktadır. Tarafından Hamani ark. Çalışmalar, bir pilokarpin kaynaklı epilepsi modelinde ATN-DBS etkinliğini test edilmiş ve ikili ATN stimülasyon pilokarpin kaynaklı nöbetler ve status epileptikus 24 gecikmeleri uzamış bulduk. Ayrıca, ATN yüksek frekanslı stimülasyon ep bir Pentilentetrazol (PTZ) modelinde nöbet sıklığını azaltmak için bulunmuştur25,27-29 ilepsy. Lee ve ark., Geçmeyen kısmi epilepsi 30 iyileştirilmesinde ATN kronik derin beyin uyarımı üzerine yaklaşık% 75 nöbet sıklığında ortalama azalma bildirilmiştir. Tedaviye dirençli epilepsi üzerine yeni bir klinik çalışmada ön talamik nükleus (ATN) 22 hedef DBS ameliyat sonrası umut verici sonuçlar göstermiştir. Tedaviye dirençli epilepsi (SANTE deneme) için ATN ikili DBS uygulanan 110 hasta ile bir çok merkezli randomize klinik çalışma yaklaşık% 40 31 kadar nöbet sıklığında bir düşüş göstermiştir. Bu çalışmanın sonuçları da 2-3 ay sonra ameliyat gözlenen gecikmiş optimum bir anti-epileptik etkisi ima etti. Toda ve arkadaşları tarafından ileri çalışmalar., Onlar hayvan modellerinde 1 bir sonraki zaman sonrası DBS (gün 3-5) oluyor nörogenezi gösterdi nerede bu bulgular ile doğrulanmıştır. Buna ek olarak, Encinas ve diğ., Hipokampal neurogene bildirmiştirATN 32 yüksek frekanslı stimülasyon sonra erişkin fare dentat girus sis. Önceki çalışmalar 33-35 gibi kronik temporal lob epilepsisi ve öğrenme açıkları ile bir dernek, hafıza bozukluğu ve spontan tekrarlayan nöbetler motorlu gibi bazı epileptik durumlarda hipokampal nöron düşüş bildirdi. Ayrıca, bu tür hayvan modelleri 33 kronik epileptik hipokampus FGF2 ve IGF-1 nöral kök hücre progenitör faktörleri bir azalma oldu. Bu göz önüne alındığında, dentat girus nöron bir büyüklüğe göstermek gibi DBS gibi girişimsel stratejileri araştırma için heyecan verici yollar vardır. Bu bulgular epilepsi mekanizması altında yatan nöron sonrası DBS tedaviye daha derinden keşfetmek için bizi teşvik etmiştir. Biz (temsilci sonuçlarında) (veri rapor değil) yanı sıra ikili hem tek taraflı ATN hedefli ve sıçan dentat girus görülen yüksek nörotrofın (BDNF) ifadesi var. Bizim ceçerli hipotezi BDNF ifadesi DBS cerrahi anti-epileptik etkisi çevirir nöron ile sonuçlanacak bir gen ifadesi zincirini başlatır olmasıdır. Bu yazıda, DBS faydalarını altında yatan mekanizma çalışmak için cazip bir yaklaşım olarak gen ifadesi analizi ile takip sıçanlarda ATN hedefleyen DBS ameliyat için bizim yöntemleri sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>Derin Beyin Stimülasyonu Cerrahisi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktik çerçeve</td><td>Kopf Instruments Model</td><td>900</td><td></td></tr><tr><td>Matkap&nbsp;</td><td>Dremmel</td><td>7700, 7.2 V</td><td></td></tr><tr><td>Neşter</td><td>BD</td><td>372610</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Patterson Veteriner</td><td>07-803-6637</td><td>Çizelge III Kurumsal kurallara göre kontrollü madde, tedarik, kullanım ve depolama</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Patterson Veteriner</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td>Patterson Veteriner</td><td>07-850-2280</td><td>Çizelge III Kurumsal kurallara göre kontrollü madde, tedarik, kullanım ve depolama</td></tr><tr><td>Cerrahi zımbalar</td><td>ConMed Corporation</td><td>8035</td><td></td></tr><tr><td>Sütürler (3-0)&nbsp;</td><td>Harvard Aparatı</td><td>72-3333</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga (1 ml, 29 1/2 G)</td><td>BD</td><td>329464</td><td>Steril, intraperitoneal anestezi uygulaması için kullanın</td></tr><tr><td>Şırınga (3 ml, 25 G)</td><td>BD</td><td>309570</td><td>Steril, deri altından Analjezi uygulaması için kullanın</td></tr><tr><td>İğneler</td><td>BD</td><td>305761</td><td>Steril, çapak deliklerinden kırık kemik parçalarını temizlemek için kullanın</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Balıkçısı Bilimsel</td><td>S25309B</td><td>Genel sterilizasyon için kullanın&nbsp;</td></tr><tr><td>Göz Yağlayıcı</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-898-350</td><td></td></tr><tr><td>Stimülatör</td><td>Medtronic</td><td>Model 3628</td><td></td></tr><tr><td>DBS elektrotlar</td><td>Rhodes Medical Instruments, CA</td><td>SNEX100x-100 mm</td><td>Elektrotlar platin, konsantrik ve bipolar</td></tr><tr><td>Betadin (Povidon-İyot)&nbsp;</td><td>PDI</td><td>S23125</td><td>Tek kullanımlık swabsticks, insizyon yapmadan önce kafa derisini sterilize etmek için kullanın&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp; Beyin Diseksiyonu ve Hipokampal doku izolasyonu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Akrilik Kemirgen Beyin Matrisi Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>175-300</td><td>www.emsdiasum.com</td></tr><tr><td>Tıraş Bıçağı</td><td>V W R</td><td>55411-050</td><td></td></tr><tr><td>Giyotin Makas</td><td>Clauss</td><td>18039</td><td>Kafa kesme için bu makasların temiz ve çalışır durumda tutulduğundan emin olun</td></tr><tr><td>Makas</td><td>Codman Klasik</td><td>34-4098</td><td>Beyni kafatasından çıkarmak için kullanın</td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>72957-06</td><td>Beyni kafatasından çıkarmak ve diseksiyon sırasında kullanmak için kullanın</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin&nbsp;</td><td>Boston Biyo Ürünleri</td><td>BM-220</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; RNA Ekstraksiyonu ve cDNA Hazırlama</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tri Reaktif</td><td>Sigma</td><td>T9424</td><td>Daima çeker ocakta kullanın ve kullanım sırasında koruyucu gözlük takın; cilt ile temasından kaçının</td></tr><tr><td>Şırınga (3 ml, 25 G)</td><td>BD</td><td>309570</td><td>Doku homojenizasyonu için kullanın</td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1145-1</td><td>Daima çeker ocakta kullanın ve kullanırken koruyucu gözlük takın; ile temastan kaçının cilt</td></tr><tr><td>İzopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A416-1</td><td></td></tr><tr><td>Glikojen</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0561</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I Kiti</td><td>Ambion</td><td>AM1906</td><td></td></tr><tr><td>Üst Simge İlk İplik Sentez Kiti</td><td>Invitrogen</td><td>11904-018</td><td></td></tr><tr><td>Masaüstü Mikrosantrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5415D</td><td></td></tr> <tr><td>ve nbsp; Kantitatif PCR</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYBR Yeşil PCR Kiti</td><td>Qiagen</td><td>204143</td><td></td></tr><tr><td>Özel Oligos</td><td>Invitrogen</td><td>10668051</td><td></td></tr><tr><td>PCR Plakaları (96 kuyu)</td><td>Denville Scientific</td><td>C18080-10</td><td></td></tr><tr><td>Optik Yapışkan Levhalar</td><td>Thermo Scientific</td><td>AB1170</td><td></td></tr><tr><td>Nükleaz içermeyen Su</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH30538-02</td><td></td></tr><tr><td>Gerçek Zaman PCR</td><td>Makinesi Uygulamalı Biyosistemler</td><td>7500</td><td></td></tr></tbody></table>

Ön talamusun Çekirdek derin beyin stimülasyon sonra sıçan hippocampus gen İfade değişim analizi

Analysis of Gene Expression Changes in the Rat Hippocampus After Deep Brain Stimulation of the Anterior Thalamic Nucleus

Derin beyin stimülasyonu (DBS) cerrahisi, örneğin bazal ganglionlar, talamus ve subtalamik bölgeler gibi beynin çeşitli bölgelerini hedefleyen, ilaca yanıt vermeyen birkaç hareket bozuklukları için etkili bir tedavidir. DBS cerrahisi alanında son gelişmeler morbid obezite, depresyon ve obsesif kompulsif bozukluk gibi çeşitli diğer koşullara bu cerrahi tekniğin uygulama genişletmek başladı. Bu genişleyen endikasyonlar rağmen, küçük DBS cerrahi yararlı etkilerini kolaylaştıran altta yatan fizyolojik mekanizmalar hakkında bilinmektedir. Bu sorunun bir yaklaşım, elektriksel stimülasyon almak nöronlarda gen ekspresyonu analiz etmektir. Daha önce yapılan çalışmalar, sıçan dentat girus bu nöron talamus 1 ön çekirdeğin hedef DBS ortaya olduğunu göstermiştir. ATN hedefleyen DBS cerrahi tedaviye dirençli epilepsi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu nedenle çok interes aitBizim için t elektriksel ATN uyararak bağlı transkripsiyonel değişiklikleri keşfetmek için. Bu yazıda, erişkin erkek Wistar sıçanlarda ATN hedefleyen stereotaksi-güdümlü DBS cerrahisi için metodolojileri tarif. Ayrıca gen ekspresyonu değişimlerinin ölçülmesi için doku diseksiyon, RNA izolasyonu cDNA hazırlanması ve nicel RT-PCR için takip eden adımları tartışır. Bu yöntem, uygulanan ve yaygın olarak klinik olarak hedef bazal gangliyonlar ve beynin diğer bölgelere uyarılması için modifiye edilebilir. Burada tarif edilen gen ifadesi çalışması DBS mekanizması yönetmenlik olabilir moleküler oyuncular keşfetmek için bir aday hedef gen yaklaşımı varsayar.

Şekil 1A ve 1B, kontrol geni β-aktin için BDNF ve GABRD izafi ifadesi olduğunu gösterir. BDNF, bir nörotrofinin genellikle birçok nöronal hastalıklar 38-41 nöroprotektif etkileri ile ilişkilidir. Epileptik hastalara terapötik fayda sağlar ATN uyarılmaya yanıt olarak BDNF tanımlama profili analiz etmek ilginçtir. Belirtilen zaman noktalarında BDNF gen ifadesi profilini gösterir Şekil 1A DBS stimülasyon sonrası, BDNF up-regülasyonu 3 saatte (uyarılmamış kat dah...

Derin Beyin Stimülasyonu (DBS) cerrahisinin terapötik etkilerinin altında yatan mekanizmanın araştırılması gerekiyor. Bu yazıda sunulan yöntemler, DBS cerrahisi sonrası nörojenezi kolaylaştırabilecek aday genlerin gen ekspresyon profilini analiz ederek DBS tarafından tetiklenen hücresel olayları incelemek için deneysel bir yaklaşımı tanımlamaktadır.

Ön Talamusun Çekirdek Derin Beyin Stimülasyon sonra Sıçan Hippocampus Gen İfade Değişim Analizi

Deep brain stimulation (DBS) surgery, targeting various regions of the brain such as the basal ganglia, thalamus, and subthalamic regions, is an effective ...

Bu prosedürün genel amacı, anterior talamik çekirdeğe derin beyin stimülasyonu uygulamak ve sıçan hippokampusundaki gen ekspresyon değişikliklerini incelemektir. Bu işlem, öncelikle hayvanın anestezi edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, hayvan cerrahiye hazırlanır.Kafa derisinde bir insizyon yapılır ve kafatası açığa çıkarılır. Ardından bgma'ya göre doğru konumda, bur delikleri açılır. DBS elektrotları yerleştirilir ve stimülasyon gerçekleştirilir.Son olarak, hayvan ötanize edilir ve beyin diseke edilir. Hipokampüsü çıkarmak için doku, RNA ekstraksiyonu ve cDNA hazırlığı için işlenir ve qPCR gerçekleştirilir. Nihayetinde sonuçlar, derin beyin stimülasyonunun sıçan hipokampüsünde gen ekspresyonunu etkilediğini göstermektedir.Bu yöntem, derin beyin stimülasyonu cerrahisinin terapötik etkisinin altında yatan moleküler mekanizmalar nelerdir gibi, derin beyin stimülasyonu cerrahisindeki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin etkileri yalnızca epilepsi tedavisine değil, aynı zamanda Parkinson hastalığı, Alzheimer hastalığı ve distoni gibi diğer nöronal durumların tedavisine de uzanmaktadır. DPS, birçok nöronal bozukluğu tedavi etmek için gelişen cerrahi bir yaklaşım olduğundan, cerrahiye hazırlanmak için çalışma tezgahını örtmek üzere cerrahi pedler kullanın ve biyotehlike atık bertaraf ünitesinin mevcut olduğundan emin olun.Sıçağı tartın ve anestezi dozunu metin protokolüne göre hesaplayın; bir stereotaktik cerrahi çerçevenin elektrot tutucusuna iki elektrot yerleştirip sabitleyin ve bir mikroskop yardımıyla elektrot uçlarının düzgün hizalanıp hizalanmadığını kontrol edin. Elektrot uçlarının sert yüzeylere değmemesine dikkat ederek, elektrotları üç milimetre aralıkla sabitleyin. Ketamin ksilazin enjekte edin.Hayvanın intraperitoneal bölgesine uygulayın ve ayak parmak sıkıştırma refleksini, solunum hızını, solunumun derinliğini ve düzenliliğini kontrol ederek hayvanın cerrahi anestezi düzlemine ulaştığını doğrulayın. Hayvanı stereotaktik çerçeveye sabitleyin ve konumlandırın. Aşırı kurumayı önlemek için hayvanın gözlerine göz kayganlaştırıcısı uygulayın ve kafa derisini, her biri Betadine ve alkol veya steril salin kullanılarak yapılan üç ardışık temizleme işlemiyle dezenfekte edin.Hayvanın vücut sıcaklığını optimal düzeyde tutmak için hayvanı dolaşımlı sıcak su pedine yerleştirin veya ısıtıcı lambalar kullanın. Paxos ve Watson sıçan beyin atlasına dayanarak, anterior talamik çekirdeği hedeflemek için şu stereotaktik koordinatları kullanın: anterior-posterior -1,6 mm, medya-lateral 1,5 mm ve dorso-ventral 5,2 mm.Ardından, kafatasını açığa çıkarmak için kafa derisinde sagital bir insizyon yapın. İnsize edilen kafa derisini, kafatasını ortaya çıkarmak için bir çiftle ekartör yardımıyla sabitleyin. Daha sonra, etanolle ıslatılmış steril pamuklu çubuklarla, süturları net bir şekilde görmek için insizyon bölgesini temizleyin. Bregma'yı (bgma) bulun ve trepanasyon deliklerinin konumuna rehberlik etmek için siyah bir markörle işaretleyin.Sagittal sütürün her iki yanındaki medial bölgeye ve koronal sütürün 1,6 milimetre posterioruna yaklaşık 1,5 milimetrelik iki işaret daha koyun. Şimdi iki adet bur deliği açmak için, matkap ucunu dezenfekte etmek amacıyla etanol kullanın.45 derecelik açıyla tutulan bir matkap kullanarak, her bir bur deliğinin merkezinde aşırı ısı oluşmasını önlemek için iki delik arasında sık sık geçiş yaparak delikler açın. Dura açığa çıkana kadar delme işlemine devam edin. Ucu L şeklinde bükülmüş bir iğne kullanarak, elektrot yerleşimini engelleyebilecek tüm kırık kemik parçalarını temizleyin.Kemik parçalarını çıkarırken alttaki dura ve/veya beyin dokusuna zarar vermemeye özen gösterin. Çift elektrot düzeneğini stereotaktik çerçevenin döner koluna sabitleyin ve kolu 90 derecelik bir açıyla sabitleyin. Stereotaktik çerçevedeki ayarlamaları kullanarak sol elektrodu tam olarak bgma üzerine konumlandırın.Ortam için stereotaktik ayarlamalar kullanılmıştır. Lateral konumlandırma ile sol elektrot, bgma'nın sol tarafına tam olarak 1,5 milimetre kaydırılmış; böylece artık koronal sütür boyunca mükemmel şekilde hizalanmış ancak birbirinden ayrı iki elektrot bulunmaktadır. bgma'dan lateral olarak 1,5 milimetre uzaklıkta.Ardından, anterior-posterior stereotaktik ayarlamalarla, elektrotları koronal sütürün 1,6 mm posterioruna taşıyın. Daha sonra, dorsal-ventral ayarlamalarla elektrotları aşağı indirin ve öncelikle, elektrotların bur deliklerinin pürüzlü kenarlarına temas etmeden kolayca yerleştirilebilmesi için deliklerin doğru konuma yapılıp yapılmadığını kontrol edin. Eğer öyleyse, elektrotları kafatası yüzeyinden 5,2 mm derinliğe kadar yerleştirin.Elektrotları, 130 hertz, 2.5 volt ve 90 µs darbe genişliğine ayarlanmış bir stimülatöre iletken kablolar aracılığıyla bağlayın. İstenen süre boyunca yüksek frekanslı stimülasyon uygulayın. Unilateral veya bilateral stimülasyon gerçekleştirin.Stimülasyon tamamlandıktan sonra elektrotları dikkatlice çıkarın ve üç adet sıfır numara sütür veya steril cerrahi zımbalar ile insizyonu dikin, deri altına buprenorfin uygulayın ve hayvan normal aktivitesine dönene kadar gözlemleyin, ardından hayvanı barınma tesisine geri götürün. Beyni, bir jilet kullanarak buz üzerinde önceden soğutulmuş akrilik beyin matrisine yerleştirin. Beyni, beynin en ön kenarından yaklaşık yedi ila sekiz milimetre uzaklıktan koronal olarak kesin.Yaklaşık beş milimetre kalınlığında bir beyin dilimi çıkarılabilecek şekilde, ilk kesiyle paralel ve posteriorda ikinci bir kesi yapın. Beyin dilimini bir jilet yardımıyla buz gibi soğuk PBS içeren bir Petri kabına aktarın, iki hemisferik bölümü ayırın ve hangi bölümün sırasıyla sol ve sağ tarafa karşılık geldiğini not etmeye dikkat edin. İnce pens ve makas kullanarak hipokampüsü dikkatlice çıkarın, dokuyu kuru buz üzerinde dondurun ve burada gösterilen metin protokolüne göre gerçekleştirilecek sonraki RNA basamaklarına hazır olana kadar -20 °C'de saklayın; belirtilen zaman noktalarında kontrol geni beta aktine kıyasla BDNF'nin göreceli ekspresyon seviyeleri şöyledir.DBS stimülasyonu sonrası. BDNF yukarı düzenlemesi, DBS cerrahisinin hemen ardından gözlemlenmekte ve stimülasyondan üç saat sonra pik ekspresyona ulaşmaktadır. Bu gözlem, artan BDNF ekspresyonunun ve bunun sonucunda ortaya çıkan nöroproteksiyonun, epileptik hastalarda DBS'nin terapötik faydasına katkıda bulunabileceğini göstermektedir.Bu panel, DBS sonrası üçüncü saatte, uyarılmış hayvanlarda uyarılmamış kontrollere kıyasla artmış ekspresyon gösteren GABA reseptörü G-A-B-R-D'nin ekspresyonunu göstermektedir. GABA agonistlerinin etkili nöbet baskılayıcılar olarak kullanıldığı göz önüne alındığında, DBS sonrası artmış G-A-B-R-D ekspresyonunun gözlemlenmesi, GABA'nın ve DBS'nin antiepileptik etkisinin olası bir rolüne işaret etmesi açısından ilgi çekicidir. Bu prosedürün ardından.Western blot, kromatin immünopresipitasyonu ve diğer birçok standart moleküler biyolojik analiz gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu, protein ekspresyonundaki değişiklikler, translasyon sonrası modifikasyonlar, spesifik gen promotör bölgelerindeki transkripsiyon faktörü doluluğu vb. ile ilgili soruların yanıtlanmasına yardımcı olur. Bu videoyu izledikten sonra, sıçanlarda derin beyin stimülasyon cerrahisinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Hipokampal dokuyu izole edin ve gen ekspresyon değişiklikleri açısından analiz edin.

analysis-gene-expression-changes-rat-hippocampus-after-deep-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kaynak: Casquero-Veiga, M. et al. Sıçanlarda Derin Beyin Stimülasyonunun İndüklediği Aktivite Modellerini Ortaya Çıkarmak için İn vivo Pozitron Emisyon Tomografisi. J. Vis. Uzm. (2022).Bu video, bir sıçan modelinde FDG-PET görüntüleme kullanılarak derin beyin stimülasyonunun (DBS) metabolik etkilerini göstermektedir. Artmış veya baskılanmış metabolik aktiviteye sahip beyin bölgelerini haritalamak için FDG uygulaması, DBS uygulaması ve PET/CT görüntülemede yer alan adımları ana hatlarıyla...

Sıçanlarda Akut Derin Beyin Stimülasyonunun İndüklediği Metabolik Nöromodülasyonun In Vivo FDG-PET Kullanılarak Değerlendirilmesi

Kaynak: Selvakumar, T., et al., Anterior Talamik Çekirdeğin Derin Beyin Stimülasyonundan Sonra Sıçan Hipokampüsündeki Gen İfadesi Değişikliklerinin Analizi. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, nöronal aktiviteyi modüle eden ve hipokampus ile iletişimi geliştiren, nöronal sağkalımı ve nörojenezi destekleyen derin beyin stimülasyonunu (DBS) uygulamak için sıçan beynine elektrot yerleştirme prosedürünü göstermektedir.

Bir Sıçan Modelinde Derin Beyin Stimülasyonunun Hipokampal Nöronal Aktivite Üzerine Etkileri

Bu video, serotonin sendromundan etkilenen sıçan beyin dokusunda oligonükleotid probları kullanılarak serotonin reseptörü RNA sentezinin tespitini göstermektedir. Protokol, mikroskop altında serotonin reseptörü RNA ekspresyonunu görselleştirmek ve ölçmek için doku ön işlemi, prob hibridizasyonu, enzimatik tespiti içerir.

Sıçan Beyin Bölümlerinde RNA Ekspresyonunu İncelemek için Oligonükleotid Probları Kullanılarak Yerinde Hibridizasyon

Biz kantitatif gerçek zamanlı PCR ve / veya tüm genom mikroarrayler kullanan sonraki gen ekspresyon analizi için yaralı sıçan beyinlerinin frozen adlı hipokampal nöronlar veya tek nöronların zenginleştirilmiş popülasyonları elde etmek için lazer yakalama mikrodiseksiyon (LCM) nasıl kullanılacağı açıklanmıştır.

Travmatik Beyin Hasarı Sonrası Nöronlar veya gen ekspresyon analizi için Tek Nöron zenginleştirilmiştir Populasyonlarının Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon

Bu protokol kemirgen eşzamanlı fonksiyonel manyetik rezonans görüntüleme ve derin beyin stimülasyonu için standart bir yöntem açıklanır. Bu deneysel araçların kombine kullanımı hemen hemen herhangi bir beyin hedefe elektriksel uyarıya tepki olarak küresel alt aktivitesinin araştırılması için izin verir.

Kemirgenler Eşzamanlı fMRI ile derin beyin stimülasyonu

Sıçanların subtalamik çekirdeğine (STN) elektrotların implante edilmesi için bir yöntem açıklanmıştır. STN'nin daha iyi lokalizasyonu, bir mikro kayıt sistemi kullanılarak sağlandı. Ayrıca, hayvanın başı ile stimülatör arasında uzun süreli bağlantılar ile karakterize edilen bir stimülasyon kurulumu sunulmaktadır.

Mikroelektrod Uzun vadeli Derin Beyin Stimülasyonu için Sıçan Subtalamik Nucleus içine elektrotlar implantasyonu Rehberli

Derin beyin stimülasyonu (DBS), Parkinson hastalığı için etkili bir tedavi seçeneğidir. Sıçanlarda yeni stimülasyon paradigmalarını taramak için bir çalışma tasarımı oluşturduk. Protokol, DBS ile tedavi edilen hemiparkinson sıçanlarında motor sonuç değerlendirmesi için merdiven testinin ve silindir testinin kullanımını açıklar.

Merdiven ve Silindir Testi: Yeni Bir Yaklaşım Hemiparkinsonian Rat Derin beyin stimülasyonu Etkileri Motor Sonuçlarını Değerlendirmek için

Sıçan beyninin tek taraflı hemisferine, biauriküler çizginin tepe noktasına 1 cm yanal 25 mm'lik şekil-8 bobini yerleştirerek ve bobini 45° açıyla açılandırarak tekrarlayan transkraniyal manyetik stimülasyon (rTMS) uyguladık. rTMS için 20 dakikadan fazla bir süre boyunca şirket içi bir su soğutma sistemi kullanıldı.

Sıçan Beyin Tek Taraflı Yarımküre için Transkraniyal Manyetik Uyarım

Bu iletişim kuralı, farelerde güvenilir bir HFS yöntemi ayarlamak gösterilmiştir. Hipokampal dentat gyrus boyunca nöronların elektriksel olarak HFS doğrudan ve dolaylı olarak içinde vivotarafından uyarılır. Nöronal aktivite ve moleküler sinyal c-fos ve Notch1 immünfloresan boyama, sırasıyla incelenir; neurogenesis tarafından bromodeoxyuridine tahlil etiketleme sayılabilir.

Yüksek frekanslı stimülasyon tarafından fare dentat Gyrus aktivasyonu için invaziv bir yöntem

Transkraniyal doğru akım stimülasyon (tDCS) psikiyatrik hastalıkları tedavi etmek için önerilen tedavi edici bir tekniktir. TDCS tarafından uyarılmış belirli biyolojik değişiklikler anlamak için gerekli hayvan bir modeldir. Bu iletişim kuralı bir kronik implante elektrot kullanan bir tDCS fare modeli açıklar.

Farelerde Transkraniyal doğru akım stimülasyon (tDCS)

Bu çalışmada, in vivo FDG-PET ile akut derin beyin stimülasyonunun neden olduğu metabolik nöromodülasyonu değerlendirmek için klinik öncesi deneysel bir yöntem tanımlanmıştır. Bu makale, stereotaksik cerrahiden stimülasyon tedavisinin uygulanmasına ve PET görüntülerinin elde edilmesi, işlenmesi ve analizine kadar tüm deneysel adımları içermektedir.

İn vivo Sıçanlarda Derin Beyin Stimülasyonunun İndüklediği Aktivite Kalıplarını Ortaya Çıkarmak için Pozitron Emisyon Tomografisi

Öğrenin, sıçanlarda ön talamus derin beyin stimülasyonu sonrası hipokampus gen ifade değişimlerini analiz etme yöntemini. Bu protokol, BDNF ve GABRD genlerindeki düzenlemeleri inceleyerek epilepsi tedavisindeki moleküler mekanizmaları ortaya koyar.

Ön Talamusun Çekirdek Derin Beyin Stimülasyon sonra Sıçan Hippocampus Gen İfade Değişim Analizi

Daha fazla video keşfet