17 Ocak 2016
Larva zebra balıkları zooplanktonlarla beslenmeye adapte edilmiştir. Laboratuvarda bu doğal özellikten yararlanmak, ilk beslenen balıkları canlı tuzlu su rotiferleri ile aynı sistemde birlikte yetiştirerek mümkündür. Bu "polikültür" stratejisi, minimum emek ve larvalara rahatsızlık vererek yüksek büyüme ve hayatta kalmayı teşvik eder.
Rotifer Polikültür Yönteminin genel amacı, hızlı büyümeyi ve ilk beslenen larva zebra balığının maksimum hayatta kalmasını destekleyen bir ortam yaratmak için tuzlu su rotiferlerinin doğal üretkenliğinden ve biyolojik özelliklerinden yararlanmaktır. Bu tekniğin birincil avantajı, araştırma deneylerinde kullanılmak üzere çok sayıda zebra balığı larvasını başarılı bir şekilde yetiştirmek için gereken zaman ve alan miktarını önemli ölçüde azaltmasıdır. Besleme kültürü kabını veya FCV'yi, litre başına 10 gram akvaryum tuzu ile dozlanmış temiz, klorsuz tatlı su ile yüzde 90 kapasiteye kadar doldurarak rotifer kültürü bakımına başlayın.
Suyun iyice karıştığından ve tuzun tamamının tamamen çözüldüğünden emin olun. Ardından, hava akışını, yuvarlanan bir kaynama noktası sağlayacak şekilde kabın içine ayarlayın. Sıvının tuzluluğunu bir refraktometre ile ölçün.
Daha sonra, kültür kabındaki rotiferleri örnekleyin veya CV.Kültürün iyi karıştırıldığından emin olun. Ardından, kültürün farklı kısımlarından bir transfer pipeti kullanarak iki ila üç mililitrelik üç numune toplayın ve numuneleri bir tüpte birleştirin. Birleştirilmiş numunenin bir ila iki mililitresini bir petri kabına aktarın.
Numuneyi diseksiyon mikroskobu altında görselleştirin ve kültürün kalitesini kontrol edin. Rotiferleri hareketsiz hale getirmek ve saymak için numuneye 100 mikrolitre yüzde 50 Lugol iyot çözeltisi ekleyin. Hemen plastik bir pipetle iki mililitrelik bir alt numune alın ve bir mililitreyi bir Sedgewick Rafter sayma slaytına dağıtın.
Diseksiyon mikroskobunu kullanarak, 100'e kadar sağlam rotiferi ve rotiferlere bağlı toplam yumurta sayısını saymak için slayt alanının gerektiği kadarını sayın. Ardından, daha sonra kullanmak üzere mililitre başına rotifer sayısını hesaplayın. Hava beslemesini ve diş ipi filtresini çıkararak hasadı başlatın.
CV'nin altındaki vanayı yavaşça açın ve suyun 53 mikron gözenekli bir elek ile bir plankton toplayıcıya nazikçe akmasına izin verin. Bir kovaya süzüldükten veya boşalttıktan sonra kollektörün altından akan suyu toplayın. Daha sonra, bir şişeyi litre başına 10 ila 15 gram temiz tuzlu su ile doldurun.
Ekranı FCV üzerinde ters çevirin ve rotiferleri hafif bir tuzlu su akışıyla FCV'ye yıkayın. FCV'ye besleme sağlamak için programlanabilir ölçüm zamanlayıcısını veya PMT'yi başlatın. Ardından, CV'nin tüm içini temiz bir ovma pedi ile ovalayın.
Hasat için kaybedilen su hacmini değiştirmek için beş galonluk bir kovada litre başına 15 gram yeni bir karışım oluşturun. Karışım tamamen eriyene kadar çözeltiyi kuvvetlice karıştırın. Ardından, diş ipi filtresini yüksek basınçlı bir sprey ile durulayın.
Diş ipi filtresinde kalıntı kalmadığında, filtreyi CV'ye geri koyun.Her dozlama olayının süresini değiştirerek CV'ye verilen alglerin besleme hızlarını ayarlayın. 24 saat sonra, FCV'de kalan rotiferlerin hasadına başlayarak işlemi tekrarlayın. Rotiferleri iki litre taze, temiz, klorsuz suda litre başına beş gram tuz ile konsantre edin.
Bunlar, yedek bir kaynak olarak dört santigrat derecede saklanabilir veya bu protokolde açıklananın ötesinde balıkların sonraki aşamalarını beslemek için kullanılabilir. Yumurtlayan embriyoları bir çay süzgecinden geçirerek yumurtlama olayından zebra balığı embriyolarını toplayın. Ardından, steril balık suyuyla bir yıkama şişesinden petri kaplarına nazikçe durulayın.
Tüm embriyolar toplandıktan sonra onları kuluçkaya yatırın. Yumurtadan çıkan larvaların yüzde 90'ından fazlası aktif olarak su sütununda yüzdüğünde polikültür aşamasına başlayın. 500 mililitre rotifer kültürünü doğrudan FCV'den 3,5 litrelik bir fidanlık tankına ekleyin.
Daha sonra, larvaları bir petri kabından yavaşça fidanlık tankına dökün. Tabakta larva kalmadığından emin olun. Özel bir su kaynağından tanka 500 mililitre temiz, şartlandırılmış balık suyu ekleyin, bir litrelik son hacme ve litre başına 5 gram nihai tuzluluğa kadar.
Rotiferlerin ve balıkların mevcut olduğundan ve büyüdüğünden emin olmak için polikültür tankını günde en az bir kez gözlemleyin. Döndürücülerin su sütunu boyunca görünür olup olmadığını kontrol edin. Balıkların su sütunu içinde de görünür olduğundan ve rotiferler arasında yüzdüklerinden emin olun.
Canlı olduklarından ve tüm balık larvaları için mevcut rotiferlerle yüzdüklerinden emin olmak için her tankın durumunu günlük olarak değerlendirmek çok önemlidir. Rotiferlerin ve balıkların büyüdüğüne dair sigorta yapıldıktan sonra, tanktan normal su akışını başlatın. Son olarak, larvaların tanktan dışarı atılmamasını sağlamak için boşaltma portunun üzerine bir ekran yerleştirin.
Bir rotifer kültürünün tipik performansı 30 günlük bir süre boyunca izlendi ve mililitre başına 932 rotiferlik bir ortalama kültür yoğunluğu verdi. Ve mililitre başına maksimum 1.330 rotifer. Zebra balığı içeren bir polikültür tankındaki rotifer popülasyonu, mililitre başına ortalama 589.4 rotifer yoğunluğuna sahiptir.
Mililitre başına minimum 481 rotifer değeri, daha önce yayınlanmış çalışmalardan 10 kat daha iyidir. Zebra balığı, beş günlük süre boyunca her gün ortalama toplam uzunluğu 3,9 milimetreden 5,4 milimetreye kadar istikrarlı bir büyüme gösterdi. Bu videoyu izledikten sonra, ilk beslenen zebra balıklarının beslenme taleplerini karşılamak için tasarlanmış bir polikültür sisteminde kullanılmak üzere rotiferlerin nasıl kültürleneceğini iyi anlamış olmalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Rotifer Polikültür Yöntemi, ilk besleme aşamasındaki zebrafish larvalarının büyümesini ve sağkalımını artırmak için tuzlu su rotiferlerini kullanır. Bu teknik, araştırma amaçlı olarak büyük miktarlarda zebrafish larvası yetiştirmek için gereken kaynakları önemli ölçüde azaltır.
İlk beslemeye başlayan zebrafishların verimli bir şekilde yetiştirilmesi, biyofarma Ar-Ge çalışmalarındaki yüksek kapasiteli in vivo taramalar ve erken aşama hedef doğrulamaları için kritik öneme sahiptir. Rotifer Polikültür Yöntemi, sağlıklı zebrafish larvalarının ölçeklenebilir ve tekrarlanabilir üretimini sağlayarak, keşif ve preklinik iş akışları için güçlü model sistemlerin kullanımını destekler. Bu yaklaşım, zebrafishleri hastalıkla ilgili bir sistem olarak kullanan portföy programlarında kaynak kısıtlamalarını azaltır ve deneysel güvenilirliği artırır.
Bu yöntem, erken keşif ve öncü madde belirleme aşamalarının ara yüzünde yer alarak, sonraki taramalar ve mekanizmik çalışmalar için güvenilir bir zebra balığı larva kaynağı sağlar.