Name: Yetiştirme İlk Besleme Zebra balığı için komple ve Güncelleme Rotifer Polikültür Metodu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Öğrenin tuzlu su rotiferleriyle Danio rerio larvalarının yetiştirilmesi için Rotifer Polikültür Metodu. Bu teknik, araştırma amaçlı büyük ölçekli üretimde zaman ve alan tasarrufu sağlayarak yüksek büyüme oranları ve sağkalım elde edilmesine yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bakım ve bu protokolü açıklanan temsilcisi sonuçları için oluşturulan balık kullanım Boston Çocuk Hastanesi&#39;nde, protokol # 14-05-2673R Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara tam uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Rotifer Kültürü <ol><li> 100 L Kültür Gemi kullanarak Kültür Sisteminin Temel Bileşenleri <ol><li> Rotifer kültür kurulumu için tüm bileşenleri toplayın. Rotifer kültür kurulum rotifer büyümek için bir kültür kabına (CV) oluşur; Benzer bir kap çıktıya da rotatorların (çıktıya da kültür kabı, FCV) korumak; yuvarlak dipli bir kuluçka kavanoz yosun yem karışımı (AFM) depolanması için (Reservoir, FR Yem); bir hava beslemesi (AS) CV, FCV&#39;nin ve FR havalandırmak için; CV ve FCV içine yosun yem verilmesini kontrol etmek için bir ölçüm zamanlayıcısı (PMT) ile bir peristaltik pompa; ve CV içinde oturur bir ipi partikül filtresi (FPF). NOT: malzeme ve bileşenlerinin tam listesi Malzeme Listesi&#39;nde sağlanmaktadır. </li></ol></li><li> Yapılandırma <ol><li> Kültürler kolayca toplama cont içine uydurma bir drenaj yoluyla hasat edilebilir ve böylece bir stand veya masa üzerinde CV ve FCV ElevateAiner (Şekil 1). Her bir kültür kabı içinde sert bir boru uzunluğu konusundaki bağlamak için esnek bir hava besleme hortumu kullanın. Boru CV veya FCV altına hava sağlamak için yeterince uzun olduğundan emin olun. </li><li> AFM içeren FR altına uzanan sert bir boru uzunluğu AS bağlanmak için bir küçük kapasiteli hava hattı kullanın. Hava akışını düzenleyen, her hava hattına bir valf takın. Besleme boru ile PMT ile FR bağlayın ve üstüne yakın, CV / FCV&#39;nin tarafına açılan bir deliğe PMT hortumunu çalıştırın. Şekil 1. </li></ol></li><li> Başlamak <ol><li> Ters osmoz, su (RO) ile birlikte kullanılabilir hacmi% 90 kültür kabı doldurun. RO mevcut değilse, temiz, dechlorinated belediye su kullanın; Bununla birlikte, bir biyo-güvenlik risk değerlendirmesi herhangi bir potansiyel olarak patojenik organizmalar kaynağı, su içinde mevcut olmasını sağlamak için gerçekleştirilmelidir. NOT: Bu tür bir analiz gerçekleştirilebilirHerhangi bir yetkili su test laboratuarı tarafından. </li><li> 15 g / L tuzluluk ulaşmak için akvaryum tuz ile kültür gemi su Doz. Bir &quot;yuvarlanan kaynama&quot; korur, böylece teknenin içine hava akışını alan ve tamamen havalandırma ile eriyene kadar yavaşça kültür teknesine tuz ölçülen miktarını ekleyin. Tam oksijen sağlamak için&gt; 1 saat boyunca su havalandırma devam edin. </li><li> Yosun yem karışımı olun. Temiz 3 L için taze (0 ppm) suda NaHCO 3 100 g ve amonyak nötrleştirici (sodyum hydroxymethylsulfonate) 100 g ilave kloru giderilmiş. Bu son reajanı kültürü ekipman sterilize musluk suyu ya da ağartma kalıntılarından herhangi bir kalıntı klor nötrleştirme edilmesi ilave yararını sağlarlar. Bu bileşiklerin tamamen eriyene olduğundan emin olmak için önemlidir. Daha sonra yosun konsantresi (biyokütle kuru ağırlık ~% 15) 1 L ilave edin. 4 ° C &#39;de FR ve saklamak için besleme karışımı ekleyin. </li><li> 10 milyon - 5 marş kültürü ekle <em&gt; havalandırılmış 15 g / L tuzluluk su içeren CV Brachionus plicatilis rotifer. Rotiferler nakliye ya da depolama sırasında soğutulmuş, bunlar olmalıdır yavaş yavaş kültür kabı içinde suyun sıcaklığına alıştırıldı (30 dakika ya da daha uzun sırasında) (25-27 ° C). </li><li> PMT açın ve rotifer kültürü kabına yosun besleme pompalamaya başlar. PMT zamanlayıcı özelliğini kullanarak, o ~ yosun yem karışımı 1.6 ml günde, kültürde milyon rotifer başına teslim edilir, böylece yosun besleme karışımının doğum hızını ayarlamak. 24 saatlik bir süre boyunca düzenli aralıklarla küçük porsiyonlar halinde beslenmeye dağıtın; besleme daha sık, daha iyi. </li><li> El belirli bir süre (örneğin, 1 dakika) için PMT açarak pompanın teslim oranını kalibre ve bir silindire veya behere bu aralık sırasında pompalar yosun toplamak. Örneğin, PMT dozlarının alg 5 ml 1 dakika içinde, o doz hızı olurdu5 ml yosun / dakika. </li><li> 1.6 ml, milyonlarca, mevcut rotifer sayısı çarpılarak gerekli günlük beslenme oranını hesaplayın. Örneğin, 100,000,000 rotifer bir popülasyon ile Rotifer kültürü ~ gün (100 x 1.6 mi) başına besleme 160 ml gerektirecektir. </li><li> 24 saatlik bir süre boyunca düzenli aralıklarla günlük toplam yem ihtiyacını doz PMT ayarlayın. Örneğin, 160 ml&#39;lik bir toplam günlük besleme miktarı teslim kısımlar halinde teslim edilebilmektedir kez 8 kez günlük 4 dakika boyunca 5 ml / dk&#39;lık bir dozlama pompası oranı ile bir PMT seti kullanılarak bir 24 saatlik bir süre boyunca her 3 st (5 ml / dakika x 4 dak = 20 ml x 8 besleme = 160 ml) eklenmiştir. </li><li> Hasat öncesi, 72 saat - bu gerekli nüfus üretir kadar kültür 48, tipik, büyümeye izin verin. 24 saatte, yukarı post-başlatmak kültür kabına ipi parçacık filtreleri eklemek ve normal bakım başlar. </li></ol></li><li> Bakım NOT: Kültür sürekli olarak çalışır ve rutin gerektirirİdeal aşağıdaki sırayla, her gün aynı saatte yapılmalıdır e bakım. <ol><li> Temiz mevcut hacmin% 90 FCV&#39;nin doldurun, 10 g / L akvaryum tuzları ile dozda tatlı su, kloru giderilmiş. Su kuyusu karışık olduğunu ve tuz hepsi tamamen çözülür emin olun. Bir &quot;yuvarlanan kaynatın&quot; korur, böylece damar içine hava akışını ayarlayın. Bir refraktometre ile tuzluluk ölçün ve tuzluluk 10 g / L olduğundan emin olun. Bunu aşmak için bu hedefe ulaşmak değil, kritik öneme sahiptir. </li><li> Kültür farklı bölgelerinden gelen, 3 ml bir transfer pipet veya autopipettor kullanarak her - daha sonra 2 3 örnekleri toplamak, kültür, iyi karışmış olduğundan emin olun: CV rotifer tadına bakın. Bir tüp içinde, bu örnekleri birleştirin ve uygun boyutu (örneğin, 10 mi) şişesine yerleştirilir. </li><li> Aktarım 1 - bir petri kabı üzerine birleştirilen numunenin 2 ml bir tahlil mikroskobu altında görüntülendi böylece. Kültür kalitesini kontrol edin (davranışını yüzmerotiferler, müstakil yumurta varlığı, kirletici protozoa). </li><li> Örnek 50% Lugols iyot solüsyonu 100 ul ekleyerek kalan Birleştirilen numunede rotatorların hareketsiz. Saniyeler içinde Lugols eklenmesinden sonra, yüzme durdurmak için rotifer gözlemlemek. Şimdi, kolayca rotifer saymak. Not: Etanol, seyreltik ağartma ya da sirke Lugols yerine kullanılabilir. Sirke (2 damla / 10 ml) olmanın avantajları vardır tehlikesiz, ve rotifer sözleşme yapma olamaz ağartıcı ve iyot çözümleri gibi depolama gücünü kaybetme, böylece kirpikler corona ve &quot;ayak&quot; genişletilmiş kalır ve hayvanlar daha doğal görünüyor. </li><li> Daha sonra hızlı bir plastik pipet bir ~ 2 ml&#39;lik alt örnek almak, (hareketsiz rotiferler hızla yerleşmek) numune iyice karıştırılır olduğundan emin olun ve bir Sedgewick-Mertek sayma slayt içine 1 ml dağıtmak (20 x 50 1 mm kareler) (Şekil 2 ). Diseksiyon veya bileşik mikroskop kullanarak, bozulmamış rotifer ve t saymakBu rotifer bağlı yumurta otal numarası (Şekil 2). ~ 100 rotifer saymak için gerekli olarak slayt alanının kadar sayın. Ml başına rotifer sayısını hesaplayın ve bir elektronik tablo veya defterine bu kaydedin. </li><li> Hasat ~ CV rotifer hacminin% 30: yavaşça CV altındaki vanayı açın, hava temini ve diş ipi filtresini çıkarın ve su 53 mikron elek ile birlikte bir plankton toplayıcıya akmasını sağlayın. Bir kova ya da drenaja filtreleme sonra kolektör altından dışarı akan suyu toplamak. Rotifer zarar görmesini önlemek için orta akışına nazik kullanın. Rotifer ekranda kurumasına izin vermeyin. </li><li> Tutarlılık nedenlerden dolayı, rotiferler standart bir sayıda, her gün FCV oluşturulması tavsiye edilir. Bu nedenle, bilinen CV rotifer yoğunluğu ve hasat hacmine göre, tutarlı bir nihai yoğunluk elde etmek FCV toplam hacmini ayarlamak (örn., 1500 rotiferler / ml). Hasat roti ekleFCV için fers: (- 15 g / L 10) yavaşça temiz tuzlu su dolu bir yıkama şişesi kullanılarak tahsilat ekranından rotifer aktarın. FCV üzerinde ekranı ters çevirin ve tuzlu su hafif bir akım ile FCV&#39;nin içine rotifer yıkayın. FCV için (~ günde milyon rotifer başına 1.57 ml) beslemeyi sağlamak için PMT başlatın. </li><li> Temiz, yumuşak bir naylon fırça veya ovma pad ile CV tüm içini fırçalayın. </li><li> Suyun hacmi, hasat kaybı karşılamak üzere, bir 5 galonluk bir kova temiz RO su ölçülü bir miktarda tuz, uygun miktarının ilave edilmesi ile 15 g / L su için yeni bir karışımını yapın. Kova su tuz ekleyin ve tamamen eriyene kadar kuvvetlice karıştırın ve sonra CV ekleyin. </li><li> Bir lavaboda bir yüksek basınçlı püskürtme kullanarak, enkaz serbest kalıncaya kadar ipi filtreyi durulayın ve ardından CV iade. </li><li> Rotifer / ml günlük sayımına göre, her dozlama olayın süresini değiştirerek CV teslim alglerin yem oranlarını ayarlayın.Teslim edilecek besleme uygun miktarını belirlemek için, yukarıdaki aşama 1.3.8 verilen hesaplamalar kullanın. </li><li> Yaklaşık 24 saat sonra, işlemi tekrarlayın. Yukarıda tarif edilen (- 1.4.10 1.4.2 adımları) ile aynı şekilde (bir önceki gün için gerekli değil) FCV kalan rotatorların hasat başlayın. Taze ve temiz kloru giderilmiş su (5 g / L tuz) 2 L bunları konsantre edin. Bu yedek kaynağı olarak 4 ° C&#39;de saklandı veya bu protokolde tarif edilenin ötesinde, balık sonraki aşamalarını beslemek için de kullanılabilir. NOT: Bu protokol 2 kadar izin - CV rotifer ciddi sonuçları olmadan hasat atlandığını tahammül çünkü, (normal otomatik besleme) ile azaltılmış kültür bakımı 3 gün. </li></ol></li></ol> 2. Polikültür <ol><li> Kurmak <ol><li> Nazikçe steril fis ile durulama ardından çay-süzgecinden kökenli embriyolar dökülmesi ve bir yumurtlama olayı Zebra balığı embriyolar toplayınh su (veya uygun koşullu çözümün herhangi diğer non-kontamine kaynak; örneğin, embriyo orta, E3, vb) petri kutularının içine bir yıkama şişesinden. </li><li> 5 gün süre ile çanak başına 50 embriyo - 40 arasında bir yoğunlukta petri kaplarına 28 ° C - 25 ° embriyolar inkübe edin. </li><li> 5 gün sonrası fertilizasyon veya yumurtadan larva% 90 daha aktif su kolonunda kadar yüzme üzerindeki polikültür fazı başlayın. </li></ol></li><li> Aşılama <ol><li> Doğrudan 3.5 L kreş tankına FCV&#39;nin gelen rotifer kültürü 500 ml ekleyin; Rotifer kültür suyun dahil polyculture sırasında rotifer besin içeriği tutar alg besleme sağlar. </li><li> Yavaşça kreş tankına tek petri larvaları dökün. Hiçbir larvalar çanak kalmadığından emin olun. </li><li> 1 L&#39;lik bir son hacim ve son bir s ulaşmak için tanka bir sirkülasyon sisteminde veya özel su kaynağından, temiz durumunu balık suyu 500 ml ilave edilir5 g / L alinity. NOT: Bu tuzluluk Zebra balığı larvaları hayatta olumsuz tuzluluk olumsuz etkiledi olacak&gt; 7 g / L ve rotifer hayatta ise etkilenecek çünkü kritik tuzluluk &lt;2 g / L ise. </li></ol></li><li> Polikültür aşaması NOT: polikültür fazı (gün 5-9 sonrası fertilizasyon karşılık, 5 gün toplam) en fazla 4 gün sonrası aşılama için sürmelidir. <ol><li> Rotifer ve balık mevcut ve büyüyen olduğundan emin olmak için, bu dönemde en az bir kez günde polikültür tankı gözlemleyin. Rotifer su kolonu boyunca görünür olduğundan emin olun. Fishs rotifer arasında yüzme, su sütunu içinde de görünür olduğundan emin olun. </li><li> Tanktan normal su akışını başlatın. Bir ekran yerleştirin veya tankın dışarı atılır olmadığını larvaların sağlamak için drenaj portu üzerinden bölme. NOT: Bu fazın sonunda, balık, Artemia gibi daha büyük avlarını tüketmek için yeterince büyük olacak125 mikron - 75 boyut aralığında nauplii veya işlenmiş yem öğeler. Not: Örnek polyculture tankı içindeki rotiferin popülasyon dinamikleri adımları 1.4.2 tarif edildiği gibi aynı şekilde tanktan rotatorların / sayma örnekleme ile ölçüldü - 1.4.5. Tamamlanana kadar bu polyculture aşamasının başından itibaren günde bir kez yapılmıştır. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ribas, L., Piferrer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+%28Danio+rerio%29+as+a+model+organism%2C+with+emphasis+on+applications+for+finfish+aquaculture+research%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+Aquaculture%22%5BJournal%5D)">The zebrafish (Danio rerio) as a model organism, with emphasis on applications for finfish aquaculture research.</a> Reviews in Aquaculture. 6, 209-240 (2014).</li>
<li>Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+tissue+regenerative+capacity+and+mechanisms+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding tissue regenerative capacity and mechanisms in animals.</a> Nature reviews. Genetics. 11, 710-722 (2010).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+genetics+TIG%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends in genetics TIG. 29, 611-620 (2013).</li>
<li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hooked%21+modeling+human+disease+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Hooked! modeling human disease in zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 122, 2337-2343 (2012).</li>
<li>Selderslaghs, I. W. T., Blust, R., Witters, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feasibility+study+of+the+zebrafish+assay+as+an+alternative+method+to+screen+for+developmental+toxicity+and+embryotoxicity+using+a+training+set+of+27+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Feasibility study of the zebrafish assay as an alternative method to screen for developmental toxicity and embryotoxicity using a training set of 27 compounds.</a> Reproductive Toxicology. 33 (2), 142-154 (2012).</li>
<li>Lawrence, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+husbandry+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">The husbandry of zebrafish (Danio rerio): A review.</a> Aquaculture. 269, 1-20 (2007).</li>
<li>Harper, C., Lawrence, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarper%2C+C+%22The+Laboratory+Zebrafish+%28Laboratory+Animal+Pocket+Reference%29%22">The Laboratory Zebrafish (Laboratory Animal Pocket Reference)</a>. , CRC Press. (2010).</li>
<li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNusslein-Volhard%2C+C+%22Zebrafish%2C+A+Practical+Approach%22">Zebrafish, A Practical Approach</a>. , Oxford University Press. (2002).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book.+A+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish%22">The Zebrafish Book. A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish</a>. , University of Oregon Press. (2007).</li>
<li>Carvalho, P., Arau, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+zebrafish+%28Danio+rerio%29+larvae+without+live+food%3A+evaluation+of+a+commercial%2C+a+practical+and+a+purified+starter+diet+on+larval+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture+Research%22%5BJournal%5D)">Rearing zebrafish (Danio rerio) larvae without live food: evaluation of a commercial, a practical and a purified starter diet on larval performance.</a> Aquaculture Research. 37, 1107-1111 (2006).</li>
<li>Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+behaviour+and+ecology+of+the+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Rev+Camb+Philos+Soc%22%5BJournal%5D)">The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio.</a> Biol Rev Camb Philos Soc. 83 (1), 13-34 (2008).</li>
<li>Best, J., Adatto, I., Cockington, J., James, A., Lawrence, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+rearing+first-feeding+larval+zebrafish%3A+polyculture+with+Type+L+saltwater+rotifers+%28Brachionus+plicatilis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A novel method for rearing first-feeding larval zebrafish: polyculture with Type L saltwater rotifers (Brachionus plicatilis).</a> Zebrafish. 7 (3), 289-295 (2010).</li>
<li>Lawrence, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+zebrafish+husbandry+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Advances in zebrafish husbandry and management.</a> Methods in Cell Biology. 104, 429-451 (2011).</li>
<li>Lawrence, C., Sanders, E., Henry, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+culturing+saltwater+rotifers+%28Brachionus+plicatilis%29+for+rearing+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Methods for culturing saltwater rotifers (Brachionus plicatilis) for rearing larval zebrafish.</a> Zebrafish. 9, 140-146 (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biology+and+Culture+of+Channel+Catfish%22">Biology and Culture of Channel Catfish</a>. Tucker, C. S., Hargreaves, J. A. 34, 634-657 (2004).</li>
</ol>

AK Henry Reed kültür balıkçılığı, Inc., su ürünleri yetiştiriciliği ve balık hobisi pazarlara rotifer, alg konsantreleri ve diğer malzemeleri sağlayan bir şirket tarafından istihdam edilmektedir.

Aynı tankta rotifer birlikte Zebra balığı larvaları ilk besleme balık beslemek için sürekli rotifer kültürü sisteminin kurulması ve bakımı ve kültüre: erken larva zebrafish beslenmesi için rotifer polikültür yönteminin başarılı bir şekilde uygulanması etkili iki görevler için protokoller gerektirir. İlk Lawrence ve yazarları 14 tarafından açıklanan Zebra balığı laboratuvarlar için sürekli bir tuzlu su rotifer üretim sistemi kurulum değiştirilmiş ve uygulamada hem daha sağlam ve ev...

Zebra balığı (Danio rerio), bilimsel disiplinlerin giderek artan sayıda kullanılan bir seçkin laboratuvar hayvanları da dahil olmak üzere, ancak gelişim genetiği, toksikoloji, davranış, yetiştiricilik, rejeneratif biyoloji ve birçok insan bozukluklarının 1 modellenmesi ile sınırlı değildir - 5. Türlerin laboratuarda bakımı nispeten kolay olmasına rağmen, kendi kültürlerine 6 ile ilgili yönetim zorlukları bir dizi vardır. Bunların en göze çarpan balık ilk gaz mesane enflasyon 7 sonraki beslemeye başlar, özellikle larva yetiştiriciliği olduğunu. Büyüme 5 gün özellikle kritik 7 olmak - Normal, kontrollü koşullar altında, bu gelişimsel olay aşağıdaki 3 5 ~ at gün sonrası döllenme (dpf) oluşur. Yem öğeleri, Diges uygun büyüklükte olmalıdır - bu aşamada merkezi teknik zorluk yeterince birinci besleme larvaların beslenme ihtiyaçlarını karşılamak içinkültür tankları aşırı atık oluşturmadan neredeyse sürekli olarak cazip ve uygun ludur,. Tarihsel bu rutin su değişimi 8,9 ile birlikte, tanklarda balık yem sayısız küçük miktarlarda sunarak genellikle elde edilmiştir. Bu yöntemler, bir dereceye kadar başarılı olsa da, bunlar, verimsiz yüksek işçilik girdileri gerektirir ve sadece değişken ve büyüme ve hayatta kalma 10 sınırlı fiyat döndürür. Doğada, Zebra balığı larvaları muhtemelen su kolonu 11 bol küçük zooplankton mevcut beslenirler. Bu nedenle, bu tür Paramecium, rotifer ve Artemia olarak canlı yayınları dahil larva protokolleri genellikle 7 en verimli. 2010 yılında, En İyi ve ortak yazarlar bu eksojen beslenme 12 ilk 5 gün tuzlu su rotifer ile birlikte statik, tuzlu suda larva zebrafish büyümek mümkün olduğunu gösterdi. Koşum Bu yaklaşım,es rotifer kültürlerin doğal yüksek verimlilik, düşük emek girdisi 12,13 ile larva büyüme ve hayatta kalma verimleri çok yüksek fiyatlar, su kirletmeden bol, oldukça besleyici av sağlamak. Son yıllarda, tüm dünyada laboratuvarlar giderek artan sayıda, bu protokolün varyasyonlarını benimsemiş ve birçok şimdi yetiştirme sistemlerinin 14 desteklemek için sürekli bir şekilde rotifer kültüre edilir. Geçtiğimiz birkaç yıl içinde, rotifer / Zebra balığı polyculture ve rotifer üretimi hem yöntemleri rafine ve daha standart ve kolayca ölçeklenebilir olma geliştirilmiştir. Bu makalede, 1 için adım adım yönergeler) sürekli ve sağlam rotifer üretimi ve 2) eksojen beslenmenin ilk 5 gün balık sağlam büyümeyi desteklemek için kullanılan rotifer / Zebra balığı polikültür sisteminin kurulmasını sağlar.

<table><tbody><tr><td>Rotifer Kültür Altyapısı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>100 L Kültür Kabı</td><td>Aquaneering</td><td>Özel</td><td>Polikarbonat kültür kabı, konik tabanlı, tahliye vanalı</td></tr><tr><td>5 Galon Kültür Kovası Kiti</td><td>Reed Mariculture</td><td>CCS Başlangıç Kiti</td><td>Küçük tesisler için küçük hacimli kültür kabı</td></tr><tr><td>Sert Şeffaf Boru 1/2 "OD, 36 inç</td><td>Pentair Aquatic Ecosystems</td><td>16025</td><td>Hava dağıtımı için sert şeffaf boru</td></tr><tr><td>Mesh tüp</td><td>Pentair Aquatic Ecosystems</td><td>RT444X</td><td>Diş ipi filtresi için örgü tüp desteği</td></tr><tr><td>Rotifer Diş İpi</td><td>Kamış Marikültür</td><td>Rotifer diş ipi 12 "x 42"</td><td>Partikül atık tuzağı</td></tr><tr><td>Peristaltik Ölçüm Zamanlayıcı Pompası, 5 GPD</td><td>Grainger</td><td>38M003&nbsp;</td><td>Rotiferlere besleme dozajlamak için zamanlayıcılı ölçüm pompası</td></tr><tr><td>Peristaltik Ölçüm Zamanlayıcı Pompası, 1-100 mL/saat (daha küçük ölçekli kültür için)</td> <td>Coral Vue</td><td>SKU: IC-LQD-DSR</td><td>Rotiferlere besleme dozajlamak için zamanlayıcılı ölçüm pompası</td></tr><tr><td>Silikon Boru&nbsp;</td><td>Rotifer kabına yosun iletimi için</td> <td>Cole Parmer</td><td></td> Boru</tr><tr><td>Sert Şeffaf Boru "OD, 36"</td><td>Pentair Aquatic Ecosystems</td><td>16025</td><td>Yosun macununa hava dağıtımı için sert şeffaf boru</td></tr><tr><td>Sert Şeffaf Boru OD, 36"</td><td>Pentair Aquatic Ecosystems</td><td>16025</td><td>Yosun dağıtımı için sert şeffaf boru</td></tr><tr><td>Rotifers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Live Rotiferler Brachionus plicatilis Tip L</td><td>Kamış Deniz Ürünleri</td><td>Yetiştiriciliği Tip L Sistem</td><td>başlatma için 5 milyon Rotifer stok kültürü</td></tr><tr><td>Rotifer Feed</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksimetilsülfonat</td><td>Kamış Deniz Ürünleri Yetiştiriciliği</td><td>ClorAm-X&reg; 1 lb küvet</td><td>Yosun besleme karışımı için amonyak azaltıcı</td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat</td><td>Fisher Scientific</td><td>S25533B</td><td>Yosun yem karışımı için pH tamponu</td></tr><tr><td>Mikroalg konsantresi</td><td>Kamış Deniz Ürünleri</td><td>Yetiştiriciliği Rotigrow Plus&reg; 1 litrelik torba</td><td>Besinsel olarak optimize edilmiş rotifer yemi</td></tr><tr><td>RG Komple</td><td>Kamış Deniz Ürünleri Yetiştiriciliği</td><td>RG Komple 6 oz şişe</td><td>Küçük ölçekli kültürler için hepsi bir arada mikroalg bazlı yem</td></tr><tr><td>Water Hazırlama</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Reef Crystals Reef Salt</td><td>That Fish Place</td><td>198210</td><td>Kültür suyu yapmak için tuz (NOT: bu öğe yalnızca bir örnektir; herhangi bir kirletici içermeyen tuz formülasyonu kullanılabilir).&nbsp;</td></tr><tr><td>Refraktometre</td><td>Pentair Sucul Ekosistemler</td><td>SR6</td><td>tuzluluk</td></tr> <tr><td>ölçümü < güçlü > Rotifer Kültür Ekipmanları</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Plankton Kollektörleri 12" Çap, 53 mikron</td><td>Pentair Su Ekosistemleri</td><td>BBPC20</td><td>Rotiferleri toplamak için örgü elek</td></tr><tr><td>Ovma Pedleri</td><td>Pentair Su Ekosistemleri</td><td>SCR-58</td><td>Kültür gemilerinin içini temizlemek için ovma pedi</td></tr><tr><td>Ovma Fırçası</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kovası</td><td>Grainger Kaynağı&nbsp;</td><td>43Y530</td><td>Kültür suyunu karıştırmak için dereceli kova</td></tr><tr><td>Kuluçka Kavanozu</td><td>Pentair Su Ekosistemleri</td><td>J30</td><td>Yosun yem karışımının depolanması</td></tr><tr><td>Lugol' s Çözelti, Seyreltik</td><td>Fisher Scientific</td><td>S99481</td> Ajan, ızgara ile Sedgewick-Rafter plankton sayma slaytını <td>saymak için canlı rotiferleri hareketsiz hale getirmek için kullanılır</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Pentair Aquatic Eco-Systems</td><td>M415</td><td>Sayma rotiferleri</td></tr><tr><td><güçlü>Çeşitli</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Çay Süzgeci</td><td>Mutfak İşleri</td><td>971972</td><td>Yumurtlamadan sonra zebra balığı embriyolarını toplamak için kullanılır</td></tr></tbody></table>

yetiştirme İlk besleme zebra balığı için komple ve güncelleme &quot;rotifer polikültür metodu&quot;

The Complete and Updated "Rotifer Polyculture Method" for Rearing First Feeding Zebrafish

Zebra balığı (Danio rerio), bilimin birçok alanında önemi giderek artan bir model organizmadır. Bu türün laboratuvarda yetiştirilmesinin en zorlu teknik yönlerinden biri, ilk beslenen larvaların yüksek büyüme ve hayatta kalma oranları ile gençlik aşamasına yetiştirilmesidir. Bu gelişim döneminin merkezi yönetim zorluğu, su kalitesinden ödün vermeden balıklara neredeyse sürekli olarak son derece besleyici yem maddeleri sağlama etrafında dönmektedir. Larva zebra balığı, su sütunundaki küçük zooplanktonlarla beslenmeye iyi adapte olduklarından, brachionid rotiferler, Artemia ve Paramecium gibi canlı av öğeleri, en azından balıklar gençlik aşamasına ulaşana ve işlenmiş diyetlerle verimli bir şekilde beslenebilene kadar, tercih edilen yemler olarak yaygın olarak kabul edilmektedir. Bu protokol, yumurtadan yeni çıkmış zebra balığı larvalarının aynı sistemde canlı tuzlu su rotiferleri (Brachionus plicatilis) ile birlikte kültürlendiği bir yöntemi tanımlar. Bu polikültür yaklaşımı, balıklara, aksi takdirde performansı sınırlayacak seviyelerde kimyasal atık üretmeden "talep üzerine", besin açısından zengin bir canlı besin kaynağı sağlar. Daha da önemlisi, sistem hem rotiferlerin doğal yüksek üretkenliğini hem de balıkların davranışsal tercihlerini kullandığından, bakımla ilgili işçilik düşüktür. Aşağıdaki protokol, dışsal beslemenin ilk 5 günü boyunca maksimum performansı destekleyen zebra balığı larvaları ve rotiferlerinin bir polikültüründe kullanılmak üzere rotifer üretimini (istenen herhangi bir seviyeye ölçeklenebilir) içeren güncellenmiş, adım adım bir prosedürü detaylandırmaktadır.

Burada açıklanan sürekli rotifer kültürü sistemi dinamik ve günlük beslenme ve hasat oranlarında farklılıklar varsa rotifer numaraları zamanla küçük bir ölçüde dalgalanması için normaldir. Boston Çocuk Hastanesi su tesislerinde aktif kültürlerin bir rotiferler nüfusu, yukarıda tarif edilen şekilde hazırlanmış, 30 gün (Şekil 3) izlendi. Bu süre içinde ortalama kültür yoğunluğu 1.330 rotiferler / ml&#39;lik bir maksimum ve 510 rotiferler / ml&#39;lik bir m...

Larva zebra balıkları zooplanktonlarla beslenmeye adapte edilmiştir. Laboratuvarda bu doğal özellikten yararlanmak, ilk beslenen balıkları canlı tuzlu su rotiferleri ile aynı sistemde birlikte yetiştirerek mümkündür. Bu "polikültür" stratejisi, minimum emek ve larvalara rahatsızlık vererek yüksek büyüme ve hayatta kalmayı teşvik eder.

Yetiştirme İlk Besleme Zebra balığı için komple ve Güncelleme &quot;Rotifer Polikültür Metodu&quot;

The zebrafish (Danio rerio) is a model organism of increasing importance in many fields of science.  One of the most demanding technical aspects of ...

Rotifer Polikültür Yönteminin genel amacı, hızlı büyümeyi ve ilk beslenen larva zebra balığının maksimum hayatta kalmasını destekleyen bir ortam yaratmak için tuzlu su rotiferlerinin doğal üretkenliğinden ve biyolojik özelliklerinden yararlanmaktır. Bu tekniğin birincil avantajı, araştırma deneylerinde kullanılmak üzere çok sayıda zebra balığı larvasını başarılı bir şekilde yetiştirmek için gereken zaman ve alan miktarını önemli ölçüde azaltmasıdır. Besleme kültürü kabını veya FCV'yi, litre başına 10 gram akvaryum tuzu ile dozlanmış temiz, klorsuz tatlı su ile yüzde 90 kapasiteye kadar doldurarak rotifer kültürü bakımına başlayın.Suyun iyice karıştığından ve tuzun tamamının tamamen çözüldüğünden emin olun. Ardından, hava akışını, yuvarlanan bir kaynama noktası sağlayacak şekilde kabın içine ayarlayın. Sıvının tuzluluğunu bir refraktometre ile ölçün.Daha sonra, kültür kabındaki rotiferleri örnekleyin veya CV.Kültürün iyi karıştırıldığından emin olun. Ardından, kültürün farklı kısımlarından bir transfer pipeti kullanarak iki ila üç mililitrelik üç numune toplayın ve numuneleri bir tüpte birleştirin. Birleştirilmiş numunenin bir ila iki mililitresini bir petri kabına aktarın.Numuneyi diseksiyon mikroskobu altında görselleştirin ve kültürün kalitesini kontrol edin. Rotiferleri hareketsiz hale getirmek ve saymak için numuneye 100 mikrolitre yüzde 50 Lugol iyot çözeltisi ekleyin. Hemen plastik bir pipetle iki mililitrelik bir alt numune alın ve bir mililitreyi bir Sedgewick Rafter sayma slaytına dağıtın.Diseksiyon mikroskobunu kullanarak, 100'e kadar sağlam rotiferi ve rotiferlere bağlı toplam yumurta sayısını saymak için slayt alanının gerektiği kadarını sayın. Ardından, daha sonra kullanmak üzere mililitre başına rotifer sayısını hesaplayın. Hava beslemesini ve diş ipi filtresini çıkararak hasadı başlatın.CV'nin altındaki vanayı yavaşça açın ve suyun 53 mikron gözenekli bir elek ile bir plankton toplayıcıya nazikçe akmasına izin verin. Bir kovaya süzüldükten veya boşalttıktan sonra kollektörün altından akan suyu toplayın. Daha sonra, bir şişeyi litre başına 10 ila 15 gram temiz tuzlu su ile doldurun.Ekranı FCV üzerinde ters çevirin ve rotiferleri hafif bir tuzlu su akışıyla FCV'ye yıkayın. FCV'ye besleme sağlamak için programlanabilir ölçüm zamanlayıcısını veya PMT'yi başlatın. Ardından, CV'nin tüm içini temiz bir ovma pedi ile ovalayın.Hasat için kaybedilen su hacmini değiştirmek için beş galonluk bir kovada litre başına 15 gram yeni bir karışım oluşturun. Karışım tamamen eriyene kadar çözeltiyi kuvvetlice karıştırın. Ardından, diş ipi filtresini yüksek basınçlı bir sprey ile durulayın.Diş ipi filtresinde kalıntı kalmadığında, filtreyi CV'ye geri koyun.Her dozlama olayının süresini değiştirerek CV'ye verilen alglerin besleme hızlarını ayarlayın. 24 saat sonra, FCV'de kalan rotiferlerin hasadına başlayarak işlemi tekrarlayın. Rotiferleri iki litre taze, temiz, klorsuz suda litre başına beş gram tuz ile konsantre edin.Bunlar, yedek bir kaynak olarak dört santigrat derecede saklanabilir veya bu protokolde açıklananın ötesinde balıkların sonraki aşamalarını beslemek için kullanılabilir. Yumurtlayan embriyoları bir çay süzgecinden geçirerek yumurtlama olayından zebra balığı embriyolarını toplayın. Ardından, steril balık suyuyla bir yıkama şişesinden petri kaplarına nazikçe durulayın.Tüm embriyolar toplandıktan sonra onları kuluçkaya yatırın. Yumurtadan çıkan larvaların yüzde 90'ından fazlası aktif olarak su sütununda yüzdüğünde polikültür aşamasına başlayın. 500 mililitre rotifer kültürünü doğrudan FCV'den 3,5 litrelik bir fidanlık tankına ekleyin.Daha sonra, larvaları bir petri kabından yavaşça fidanlık tankına dökün. Tabakta larva kalmadığından emin olun. Özel bir su kaynağından tanka 500 mililitre temiz, şartlandırılmış balık suyu ekleyin, bir litrelik son hacme ve litre başına 5 gram nihai tuzluluğa kadar.Rotiferlerin ve balıkların mevcut olduğundan ve büyüdüğünden emin olmak için polikültür tankını günde en az bir kez gözlemleyin. Döndürücülerin su sütunu boyunca görünür olup olmadığını kontrol edin. Balıkların su sütunu içinde de görünür olduğundan ve rotiferler arasında yüzdüklerinden emin olun.Canlı olduklarından ve tüm balık larvaları için mevcut rotiferlerle yüzdüklerinden emin olmak için her tankın durumunu günlük olarak değerlendirmek çok önemlidir. Rotiferlerin ve balıkların büyüdüğüne dair sigorta yapıldıktan sonra, tanktan normal su akışını başlatın. Son olarak, larvaların tanktan dışarı atılmamasını sağlamak için boşaltma portunun üzerine bir ekran yerleştirin.Bir rotifer kültürünün tipik performansı 30 günlük bir süre boyunca izlendi ve mililitre başına 932 rotiferlik bir ortalama kültür yoğunluğu verdi. Ve mililitre başına maksimum 1.330 rotifer. Zebra balığı içeren bir polikültür tankındaki rotifer popülasyonu, mililitre başına ortalama 589.4 rotifer yoğunluğuna sahiptir.Mililitre başına minimum 481 rotifer değeri, daha önce yayınlanmış çalışmalardan 10 kat daha iyidir. Zebra balığı, beş günlük süre boyunca her gün ortalama toplam uzunluğu 3,9 milimetreden 5,4 milimetreye kadar istikrarlı bir büyüme gösterdi. Bu videoyu izledikten sonra, ilk beslenen zebra balıklarının beslenme taleplerini karşılamak için tasarlanmış bir polikültür sisteminde kullanılmak üzere rotiferlerin nasıl kültürleneceğini iyi anlamış olmalısınız.

the-complete-updated-rotifer-polyculture-method-for-rearing-first

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu protokol zebrafish yetiştiriciliği için en uygun koşulları sağlamak için düzenli bakım ve bakım özetliyor. Video sistemi bakımı, düzenli barınma, beslenme, üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme için protokol göstermektedir.

Bir Zebra balığı Düzenli Bakım ve Onarım (<em&gt; Br.rerio</em&gt;) Laboratuvar: An Introduction

Üreme ve in vivo araştırmalara uygun bir Zebra balığı tesisi kolay ve ekonomik bir şekilde inşa edilmiştir. Bakım minimumdur. Bu tesis, öğrenci katılımı ve bağımsız araştırma için idealdir.

Bir Ekonomik ve Kolay oluşturun Zebra balığı Tesisi İnşaatı

Aşırı ekstraselüler matriks proteinlerinin birikmesi ile sürekli fibroz siroza yol açar. Alkol kötüye kullanımı, ciddi karaciğer hastalığının ana nedenlerinden biridir. Alkolün neden olduğu yaralanma üzerine hepatosit rejenerasyonunu teşvik etme mekanizmalarını ve stratejilerini incelemek için etanolün neden olduğu bir zebra balığı fibrotik karaciğer modeli oluşturduk.

Zebra balığı bir Etanol kaynaklı Fibrotik Karaciğer Modelinin Geliştirilmesi progenitör hücre-aracılı Hepatosit Rejenerasyon Eğitim

Zebra balığı son kullanılan bir vivo içinde modeli sistemi olarak DNA çoğaltma zamanlaması geliştirme sırasında çalışmaya. İşte Zebra balığı embriyo profili çoğaltma zamanlaması için kullanarak iletişim kurallarını ayrıntılı. Bu iletişim kuralı kolayca çoğaltma zamanlaması mutantlar, tek hücre türleri, hastalık modelleri ve diğer türler çalışmaya adapte edilebilir.

Zebra balığı bir Vivo içinde Model sistemi olarak kullanarak DNA çoğaltma zamanlaması profil oluşturma

Biz birincil hücre kültürleri zebra balığı embriyo transfection ve canlı hücre görüntüleme gibi primer hücre--dan yetişkin zebra balığı beyin hazırlamak için bir protokol için hazırlanması için etkili ve kullanımı kolay bir protokol mevcut.

Kültür ve zebra balığı primer hücre Transfection

Bu iletişim kuralı fluorescently etiketli gıda yüksek üretilen iş moda larva zebra balığı bağırsak yoluyla transit süresini ölçmek için hedeftir.

Yüksek işlem hacmi ölçüm larva zebra balığı kullanarak Gut Transit süre

Bu çalışma, zebra balığı embriyolarına transgenik yapılar oluşturmak ve enjekte etmek için ağ geçidi tabanlı bir klonlama yöntemi olan modüler Tol2 transgenez sistemi için bir protokolü açıklamaktadır.

Zebra Balığı Tol2 Sistemi: Modüler ve Esnek Ağ Geçidi Tabanlı Transgenez Yaklaşımı

Bu protokol, mikropsuz (GF) balık embriyoları elde etmek ve bunları larvalardan gençlik aşamasına kadar korumak için, örnekleme ve steril durumlarını tespit etme dahil olmak üzere birincil adımları özetlemektedir. Enfeksiyonlu GF modellerinin kullanılması, mikropların konak sağlığındaki rolünü anlamak için önemlidir.

Larvalardan Gençlik Dönemlerine Kadar Mikropsuz Zebra Balığı Modellerinin Üretimi, Bakımı ve Tanımlanması

Burada, zebrafish kovanlarının yeniden dolaşımı için yeni, kolay inşa edilebilir ve düşük maliyetli bir protokol sunuyoruz.

Özel Yapım Bir Döner Zebrafish Konut Sistemi

Preneoplastik hücre ilerlemesi ve doğuştan gelen bağışıklık hücre etkileşim erken olayları incelenmesi anlamak ve kanser tedavisinde çok önemlidir. Burada şartlı epitel hücre dönüşümleri ve HRAS G12V zebra balığı larvası deri hücreleri ile doğuştan gelen bağışıklık hücre etkileşiminin daha sonra canlı görüntüleme uyarılması için bir yöntem tarif eder.

Larva Zebra balığı Skin bir İndüklenebilir Gal4 / UAS İfade Sisteminin Kullanılması doğuştan gelen bağışıklık ve preneoplastik Hücre Etkileşimleri Canlı Görüntüleme

Öğrenin tuzlu su rotiferleriyle Danio rerio larvalarının yetiştirilmesi için Rotifer Polikültür Metodu. Bu teknik, araştırma amaçlı büyük ölçekli üretimde zaman ve alan tasarrufu sağlayarak yüksek büyüme oranları ve sağkalım elde edilmesine yardımcı olur.

Yetiştirme İlk Besleme Zebra balığı için komple ve Güncelleme "Rotifer Polikültür Metodu"

Daha fazla video keşfet