Bir Klinik öncesi Hasta Türetilmiş Tümör Roman Anti-Kanser Tedaviler Soruşturma Xenograftlarında Modeli Geliştirilmesi ve Bakımı

Bu subkutan Hasta Kaynaklı Tümör Ksenogreft prosedürünün genel amacı, tümörlerde yeni tedavilerin, prediktif biyobelirteç keşfinin ve ilaca dirençli yolakların etkinliğini incelemektir. Bu yöntem, belirli bir ilacın belirli bir tümör tipine karşı aktivite gösterip göstermediğine dair onkoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, Hasta Kaynaklı Tümör Ksenograflarının, orijin tümörlere özgü moleküler, genetik ve histolog heterojenliği koruması ve modeli klinik olarak daha anlamlı hale getirmesidir.

Prosedürü göstermek, laboratuvarımızdan profesyonel bir araştırma görevlisi ve sertifikalı veteriner teknisyeni olan Stacey Bagby olacaktır. Sodyum sitrat içeren bir kan hücresi ayırma tüpünde bir ila iki mililitre kan topladıktan sonra, numuneleri santrifüjleyin ve periferik kan mononükleer hücre tabakasını 1.5 mililitrelik bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Tüpü steril PBS ile üstüne kadar doldurun.

Ardından, hücreleri tekrar aşağı döndürün. Ardından, PMBC peletini rahatsız etmemeye dikkat ederek bir mililitre PBS ile hızlı bir yıkama yapın. Ardından, plazmayı kan hücresi toplama tüpünden 1,5 mililitrelik steril kriyojenik bir şişeye aktarmak için bir pipet kullanın ve plazmayı ve PBMC peletini eksi 80 santigrat derecede saklayın.

İnsan tümör dokusunu, tam ortam içeren steril bir kap içinde hayvan tesisine aktarın ve kabı laminer bir akış başlığına yerleştirin. Mümkün olan en kısa sürede, hasattan sonra, dokuyu az miktarda geri alma ortamında steril bir plastik kesme kabına aktarın. Daha sonra, otoklavla sterilize edilmiş küçük makas ve forseps kullanarak, dokuyu yaklaşık üçe üç mililitrelik parçalara kesin ve 10 ila 12 parçayı, 300 mikrolitre jelatinimsi protein karışımı çözeltisi içeren otoklavla sterilize edilmiş 1.5 mililitrelik bir mikro santrifüj tüpüne yerleştirin.

Hızlı donmuş saklama için, uygun sayıda tümör parçasını yeni bir 1.5 mililitrelik mikro santrifüj tüpüne aktarın ve şişeyi sıvı bir nitrojen yapıcıya yerleştirin. Ardından eksi 80 santigrat derecelik bir dondurucuya koyun. Resmi sabitleme ve parafin gömme için, üç küçük tümör parçasını 24 saat boyunca 10 mililitrelik% 10 formalin kabına yerleştirin.

Dokular parafine gömülü bloklar halinde işlendikten sonra, kalan doku parçalarını kriyojenik bir tüpe aktarın. Daha sonra, dokuya% 10 DMSO ile takviye edilmiş bir mililitre tam ortam ekleyin ve tüpleri bir izopropil alkol dondurma kabına aktarılana kadar buz üzerinde saklayın. Ve bu kabı eksi 80 derecelik bir dondurucuya koyun.

Tümör dokusunu enjekte etmek için, jelatinimsi protein karışımı çözeltisinde depolanan tümör parçalarını, her bir tümör parçasının trokara tam olarak yerleştirilmesine dikkat ederek, otoklavlanmış 12 gauge trokarlara yükleyin. Ardından, altı ila sekiz haftalık atimik, çıplak bir farede ayak parmağını sıkıştırmaya yanıt verilmediğini onaylayın ve fareyi steril bir laminer akış başlığında temiz bir alana aktarın. F0 tümörünü deri altından dorsal boyun bölgesine ve farenin yan tarafının her iki tarafına verin, ardından tümör enjeksiyonunun yan bölgelerinden birine distal analjezi deri altı uygulayın.

Ardından, fareyi tamamen iyileşene kadar izlemeli kafesine geri yerleştirin. Ksenograf implante edilmiş farelerin büyümesini ve sağlığını haftada en az bir kez izleyin, tümör boyutlarını, tümör oluşumunu, tümör enjeksiyon tarihini ve farelerin sağlığını uygun bir izleme sistemine kaydedin. Bir tümör yaklaşık 1.500 ila 2.000 milimetre küp boyutuna ulaştığında, tümörü çıkarmak ve F1 tümörünü bir sonraki nesil beş hayvana geçirmek için otoklavlanmış makas ve forseps kullanın, az önce gösterildiği gibi, her tümör için gösterildiği gibi flaş donmuş formalin ve canlı tümör örneklerini toplamaya özen gösterin.

F0 tümör grubundan kalan fareler yaklaşık 1.500 ila 2.000 milimetre küp büyüklüğünde tümörler sergilediğinde, bu tümörleri toplama için gösterildiği gibi toplayın. Evre F15 tümör oluşumuna ulaşıldığında, bir sonraki tümör enjeksiyonları serisi için sıvı nitrojen deposunda bulunan en erken nesil canlı tümör parçalarını kullanın. İstenen tümör çok büyük olduğunda, 1.500 ila 2.000 milimetre küp, tümörü istenen miktarda fareye genişletmek için toplamak için yukarıdaki prosedürleri izleyin.

Fareleri ilaçla dozlayın ve haftada iki kez tartın ve ölçün. Fareleri, grup başına 10 tümör ve birbirinden birkaç standart sapma içinde ortalama 100 ila 300 milimetreküp olan bir grup tümör hacmi ile tedavi gruplarına randomize edin. Ardından, fareleri tedavi için uygun gruplara ayırın.

İnsan ve fare için çift renkli floresan in situ hibridizasyon yakalanan bir DNA, F0 tümöründeki insan stromal hücrelerinin, F1 tümöründeki fare stromal hücreleri ile değiştirildiğini göstermektedir. F0 jenerasyonunda insan kaynaklı hepatosit büyüme faktörünün tamamı, F1 jenerasyonunda fare hepatosit büyüme faktörü ile değiştirilirken, vasküler endotelyal büyüme faktörü ligandı, F1 jenerasyonunda hem insan hem de fare proteininden oluşur. Aynı tümörün farklı kuşaklarının tedavi edilmesi tedavi yanıtını değiştirmez.

Tümörün direnci veya duyarlılığı, tümör oluşumuna özgü olmaktan ziyade tümör suşu gibi görünmektedir. Ayrıca, bu yaygın olarak mutasyona uğramış genlerdeki mutasyonların sıklığı, kanser genom atlası ile kolorektal hasta kaynaklı tümör ksenograf bankası arasında çok benzerdir. Kolorektal hasta popülasyonunda gözlenen yaygın mutasyonların, kolorektal hasta kaynaklı ksenotransplant modelinde iyi temsil edildiğini düşündürmektedir.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa bir ila iki saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, kanser hastalarının tanımlanması ve onam alınması ve tümör dokusunun çıkarılması ve iğrençleştirilmesi için uyumlu bir klinik ekibin olması önemlidir. Bu prosedürü takiben, belirli bir tümör tipine sahip hastalar için bu stratejilerin uygulanabilirliği hakkında ek soruları yanıtlamak için anti-kanser bileşiklerinin tek veya kombinasyon ajanlar olarak araştırılması gibi başka yöntemler de gerçekleştirilebilir.

Geliştirildikten sonra bu teknik, onkoloji alanındaki araştırmacıların yeni kanser terapötiklerini, tümör heterojenliğini, tedaviye dirençli mekanizmaları, kanser kök hücre biyolojisini ve tümör stromal etkileşimlerini keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, yeni kanser terapötiklerini değerlendirmek için hasta kaynaklı bir tümör ksenograf modelinin nasıl geliştirileceği ve sürdürüleceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.