Name: Bir Klinik öncesi Hasta Türetilmiş Tümör Roman Anti-Kanser Tedaviler Soruşturma Xenograftlarında Modeli Geliştirilmesi ve Bakımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Keşfedin hasta türetilmiş tümör xenograft modeli geliştirme ve bakım yöntemlerini, anti-kanser tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için. Bu teknik, tümör heterojenitesini koruyarak klinik öncesi araştırmalarda değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma 1R01CA152303-01 hibesi ile desteklenmiştir.

Etik Beyanı: Hasta kaynaklı kolorektal adenokarsinom tümör örnekleri Colorado Çoklu Kurumsal Değerlendirme Kurulu (08-0439) tarafından onaylanmış bir protokol uyarınca Colorado Üniversitesi Hastanesi hastaları rıza elde edilmiştir. Tüm hayvan çalışmaları Colorado Denver Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi Üniversitesi tarafından onaylanan hayvan protokol çerçevesinde gerçekleştirildi (IACUC, Protokol # 51412 (06) 1E ve 96813 (04) 1E). 1. Alma ve Hasta Kan hazırlanması <ol><li> 1 toplayın - 2 sodyum sitrat içeren bir kan / hücre ayırma tüp kan ml (plazma, lenfosit ve monosit bandı, yoğunluk gradyan sıvı, jel bariyer, ve eritrositler ve nötrofiller dahil boru aşamalarını vardır). Dikkat, kan ya da doku ile kan Bazlı Patojen yönergeleri izleyin. Not: PBMC&#39;ler ve plazma içerebilir gelecek çalışmalar için kullanılan olabilir: tümör mutasyonları ile germline genetik varyasyonu karşılaştıran, dolaşımına izolevb hücre serbest DNA (cfDNA) incelenmesi proteinler ve microRNA, değerlendirilmesi ting tümör hücreleri. </li><li> Oda sıcaklığında hiçbir frenli 15 dakika 2500 xg&#39;de kan / hücre ayırma tüp santrifüj. </li><li> periferal kan tek-çekirdekli hücreleri (lenfosit ve borunun monosit bandında PBMC&#39;ler) toplayın ve 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü (net, otoklav, DNase, RNase ve pirojen serbest) koymak ve steril fosfat-tamponlu tüpün üst dolgu tuz (PBS). <ol><li> Oda sıcaklığında 3 dakika boyunca 2300 x g&#39;de santrifüj tüpünün dibinde PBMC&#39;ler bir tablet oluşturulur. Sonra, dikkatle süpernatant kaldırmak. 30 saniye boyunca 3.000 xg&#39;de pelet ve santrifüj yıkamak için steril PBS 1 ml ekleyin ve sonra süpernatant kaldırmak. </li></ol></li><li> 1.5 ml steril kriyojenik şişede (tüp plazma aşamasında) kan / hücre ayırma tüpten plazma toplamak için bir pipet kullanın (DNaz ve RNaz ücretsiz, hiçbir insan DNA&#39;sı, endotoksin ücretsiz) ve bir içine PMBV en ve plazma ve pelet koymak -80 ° C Fdepolama reezer. </li></ol> 2. Alma ve Hasta Tümör Numune Hazırlama <ol><li> Hazırlama RPMI ya da DMEM ortamı 1 ya da: Penisilin-Streptomisin ve temel olmayan amino asitler, 100 (% 10), 1: 1000 (1%) Plasmocin, ve% 10 cenin öküz serumu inaktifleştirilmiş, (tam ortam) ve ekleme 20-25 tümör örnek için steril bir toplama kabına ml. </li><li> Buz üzerinde tam bir ortam ihtiva eden bir steril kap içinde, tümör örneğinin almak ya da 4 ° C&#39;de tutun. Not: Tümör örneği, bir cerrah ile ayrılmış bir patolog tarafından işlenir ve tam ortam steril bir toplama kabına yerleştirilir fazla hastanın tümör dokusu parçası. Dikkat, kan ya da doku ile kan Bazlı Patojen yönergeleri izleyin. Ayrıca, ideal olarak, beş fare enjekte tümör, yaklaşık 1 cm³ olmalıdır. </li><li> immün bozukluk farelere enjekte edilmesi için bir hayvan tesisine, tümör örneğinin getirin. Not: en kısa sürede tümör örneği işlemek için en iyisidir. <ol><li> bir laminar akış başlığı içinde, tümör fincan steril plastik kesme kabı içine, tümör numuneyi. jelatinimsi Protein karışımı çözeltisi 300 ul ile dolu bir otoklava 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 12 yaklaşık 3 x 3 x 3 mm parçalar ve yeri - 10 kesmek için otoklav küçük makas ve forseps. buz üzerinde tüp tutun. </li><li> Öncelikli olarak farelere tümörü enjekte ancak arta kalan herhangi bir tümör, varsa flaş dondurulmuş şişeleri (FF), formalin ile sabitlenmiş parafine gömülü (FFPE) bardak ve canlı tümör şişe toplamak. </li><li> FF, bu tür bir protein, RNA ya da DNA izolasyonu, daha fazla analiz için steril kriyojenik şişeden tümör dokularında küçük parçaları toplamak. sıvı azot Dewar içine hemen FF yerleştirin ve uzun vadeli saklamak -80 ° C derin dondurucuda. </li><li> FFPE için yeterli tümör, yer tümör en az 24 saat süreyle formalin olmuştur kez parafin bloklar halinde 10 ml% 10 formalin fincan ve sürecine 3 küçük parçalar varsa. Not: 24 saat dayanırBizim Histoloji Çekirdek önerileri 11 kapatır. </li><li> Son olarak, çok düşük bir tüp içine, geri kalan tümör yerleştirin. ortamı tamamlamak için% 10 dimetil sülfoksit (DMSO) eklenerek uygulanabilir Ortamın. Daha sonra, bir kriyojenik tüpüne 1 ml ilave edilir ve buz üzerinde muhafaza edin. Not: uzun süre boyunca buz üzerinde tutmayın. <ol><li> 10 tümörleri gelecek 5 fareye enjekte edilmesi için ideal yeterli olacaktır küçük parçalar halinde herhangi bir artık tümör kesin. bir İzopropil Alkol dondurma kabının (yavaş bir defada tümör 1 ° C donar) yerleştirilir ve -80 ° C derin dondurucuda içine konabilir kadar Sonra, tümörler sırasında ölme emin olmak için buz üzerinde canlı tümör tüp yeri dondurma işlemi. Not: Uzun süreli saklama için tümörler çıkarılır (2 sonra - 3 gün) ve büyük bir sıvı azot Dewar yerleştirilir. canlı tüpler o farelere enjekte dışarı atılıyor sürece çözülmeye izin verilmemesi gerektiğini lütfen unutmayın. </li></ol></li></ol></li></ol> 3..Hasta elde edilen tümör ksenograftlarının Enjeksiyon <ol><li> her bir ayrı hastanın edilen tümör 8 haftalık erkek ve / veya dişi atimik çıplak fare (eksikliği T-hücresi) - Beş 6 kullanın. 10 tümörlerin toplam (fare başına 2 enjeksiyon) subkütan (SQ) enjekte edilir. Not: Orijinal insan tümör F0 olarak belirlenmiş ve daha sonra bir kez nesil F1 farelere enjekte edilir. Ayrıca, her benzersiz eksplant için otoklavlanmış forseps, makas, ve trokarları kullanın. </li><li> otoklavlanmış 12 G trokarlardan içine jelatinimsi bir protein karışımı çözeltisinden tümörün yük parçaları ve tümör tamamen delici içine itilir emin olun. <ol><li> (Anestezi bakımı için% 3 İsofluranın - -% 4 oksijen ve 2% 5 başlangıç ​​hızı İsofluranın başladı, 3) steril bir laminer akış kaputu, bir İsofluranın anestezi makinesine bağlı bir anestezi kutunun içine 5 fareler yerleştirin ve karbon filtre (aşırı gaz emer). Not: deneyimli bir teknisyen üzerindeki tüm yordamı gerçekleştirmek gerekirYaklaşık 5 dakika toplam (fare başına yaklaşık 30 sn) içinde 5 farelerin bir kafes. Bu nedenle, ek termal destek ve göz yağlama genellikle kullanılmaz. Daha az deneyimli kişiler için veya eğitim sırasında, son derece bireylerin tek seferde daha az hayvanlar üzerinde yordamı gerçekleştirmek ve / veya hayvan 5 dakika daha uzun anestezi olması durumunda işlem sırasında bir ısınma ped / göz yağlama kullanmak ya önerilir. Prosedür Üniversitemizde IACUC standartlarına dayanmaktadır. </li></ol></li><li> fare artık duyarlı olmasını sağlamak için bir fare ayak tutup İsofluranın kutudan fareyi alır. yan bölge otoklavlanmış 12 G trokarlardan ile ulaşılana kadar orta sırt boyun bölgesinde ve aşağı subkutan trokar sürgülü tümörleri enjekte etmek için temiz bir alan üzerine fare yerleştirin. <ol><li> Farenin kanadını her tarafında bir tümör subkutan sunun. trokar tümör istenen yan bölgede kalmasını sağlar, çekildiğinde tümörü sıkıştırın. gelatinous protein karışımı farenin vücut sıcaklığı ile sertleşir ve tümör büyümesine yardımcı ve SQ bağ dokusu sabitlemek için yaklaşık 1 hafta tümörü kapsüller. trokar tarafından yapılan lezyon 4 mm daha büyük ve zımba ile cilt kapatmak için gerek yoktur. Not: Bizim veterinerler hiçbir kapatma lezyonun çok küçük boyutuna göre gerektiğinde bellidir hızlı iyileşme süresi, bu süre zarfında, not hiçbir zaman enfeksiyon ve hayvanların yakından izlenmesini (orta dorsal boyun bölgesinde herhangi bir cilt gerginliği ya da lezyonun tımar azaltır) . </li></ol></li><li> Fare uzakta tümör enjeksiyon sitesinden tamamen uyanık enjekte Meloksikam 2 mg / kg SQ (ağrı kesici) önce. Sonra, kafesin içine fare koyun ve fare uyanık ve hareketli kadar izler. Not: tamamen uyanık kadar sahipsiz hayvanları kurtarma bırakmayın. Meloksikam dozaj Üniversitemizde IACUC standartlarına dayanmaktadır. <ol><li> Sonraki 4 ile aynı prosedürü tekrarlayınfareler kalan ve nefes izlemek. Not: Bu çok hızlı bir işlemdir ve fareler Meloksikam enjeksiyonundan sonra çok kısa bir süre uyanmak unutmayın ama gerektiği gibi İsofluranın ayarlayın. Fare dışarı alınır her zaman, izofluran aşağı çevirin. Meloksikam 24 saat sürecek ve trokarlardan gelen lezyonlar tamamen 1 hafta içinde iyileşir. </li></ol></li></ol> Hasta Türetilmiş Tümör Xenograftlarında Bankası 4. Bakım <ol><li> En az haftada bir kez farelerin büyüme ve sağlığını izlemek. Tümör boyutları, tümör oluşumunu, tümör enjeksiyonundan tarihini ve farelerin sağlığını izlemek için bir elektronik tablo (veya başka bir izleme sistemi) kullanın. Not: Fareler 15 orijinal vücut ağırlığının%, düşük vücut kondisyon puanları (≥ 2) kaybettiyseniz, tümör ülserleri, tümörleri 2,000 mm 3 veya toplam tümörler 3.000 mm 3 veya eğilmiş (hastalıklı olan, soğuk, uyuşukluk, vb ulaşan var .) herhangi bir şekilde, farenin CO₂ ile ötenazi veya servikal dislokasyon anestezi sağlarüzere ikincil bir yöntem. tümör toplama aksi farenin CO₂ ve servikal dislokasyon ile ötenazi, anestezi ve servikal dislokasyon ile öldürülür. </li><li> Bir tümör yukarıda açıklanan ve daha sonra euthanize servikal dislokasyon gerçekleştirmek yaklaşık olarak 1,500-2,000 mm 3 anestezisi fareler olduğunda. <ol><li> Fare hiçbir kalp atışı olup olmadığını kontrol edin. otoklava makas ve forseps ile SQ tümörü tüketim. NOT: İzin tümörler 1 yıla kadar büyümeye ve tümör görülür ise o zaman ikinci bir yöntem olarak servikal dislokasyon tarafından takip CO 2 üzerinden fareler, euthanize. </li><li> Passage (5 farelerin yeni bir dizi aka) bir sonraki kuşağa iyi büyüyen tümör. geçen 12 tümörler ve ayrıca yukarıda tarif edildiği gibi daha sonra artık tümörün toplamak - Kullanım talimatları yukarıda 10 toplamak için. Not: Çok sayıda canlı tüpler Toplama erken nesillerin (F1 - F8) çok önemlidir; Bu nedenle, pek çok canlı tüpler, FF tüpler ve generat için 1 FFPE toplamakiyon. </li><li> Farelerin yeni nesil yaklaşık 300 mm 3 tümör büyümesini sahip kadar kalan fareler tutun. Geriye kalan farelerin büyük tümörler olduğunda, yukarıda tarif edildiği gibi toplama devam etmektedir. </li></ol></li><li> geçit tümörleri devam edin ve F15 kadar her aşamada toplamak. Bu noktada, sıvı azot dışında en erken nesil uygulanabilir bir tüp alıp buz üzerinde çözülme izin ve yukarıda açıklanan tümör enjekte prosedürlerini izleyin. canlı tüplerden büyümek tümörler nesilden nesile geçen kıyasla farelerde büyümeye daha uzun sürer, bu yüzden planlarken akılda tutmak Not:. Belirli PDTX modeli artık herhangi bir geçit gerekiyorsa, ötenazi ve çok sayıda canlı borular ileride kullanılmak üzere toplanır sağlamak için, tümör toplar. </li></ol> Hasta Türetilmiş tümör ksenograftlarının 5. Developmental Therapeutics Not: F3 nesil Çoğu tümörler iyi büyüme kinetiği (daha hızlı ve daha co büyümek zorundansistent), bu nedenle, ilaç etkinlik çalışmaları PDTX geçin. <ol><li> İstenilen tümör çok büyük olduğunda (1,500 - 2,000 mm 3), farelerin istenilen miktarda haline dönüşmeye tümörün toplamak için yukarıdaki prosedürleri takip edin. <ol><li> hipoteze göre tedavi grubu başına gerekli tümörlerin sayısını belirlemek denenmektedir. Not: jelatinimsi bir protein karışımı, çözeltinin 1 ml farelere enjekte edilmesi için yaklaşık uygun 30 küçük tümör parçaları (tümör morfolojisine bağlı olarak) olabilir. </li></ol></li><li> Haftalık tümörleri ve fareler kontrol çoğu tümörler (50 arasında yaklaşık - 300 mm³) gözle küçük olduğunda tümör hacmini belirlemek için kaliperler ile tümör ölçmek. Tümör hacmi = [width² (küçük ölçümü) x uzunluk (en büyük ölçüm)] 0.52 x. Not: jelatinimsi bir protein karışımı, çözelti, bir haftalık tümör büyümesi doğru ise sonra, bir hafta süreyle enjekte tümör parçaları çevreler. </li><li> 300 mm³ ve - 50 arasında tümör hacimleri kullanınn sol ve sağ tümörleri ortalama. Sonra birbirinden Birkaç sayı içinde bir grup ve bir grup başına ortalama 10 tümörleri tedavi gruplarına rastgele. Sonra, gruplar halinde fareler sıralamak ve arzu edilen tedavi çalışmaya başlar. </li><li> İlaç (ilaca bağlı programa) haftada iki kez, tartmak ve ölçmek (tümör) ile fareler Doz. Çalışmanın sonunda, anestezi ve servikal dislokasyon yoluyla fareler euthanize ve laboratuarda gelecek farmakodinamik analizi için tümör toplamak. Not: Çalışma araç tümör boyutu ve farelerin sağlığına bağlı 30 gün sürer. </li></ol> Bir PDTX bankanın 6. organizasyonu <ol><li> araştırma ve hayvanların uygun kullanım yinelenen önlemek için bir iyi belgelenmiş bir form tutun. NOT: Bu, başarılı bir PDTX bankaya anahtarıdır. <ol><li> PDTX bankada fareler, tedavi, veri, klinikte insan hastada bir tümörün izlemek için elektronik tablolar kullanın ve ne toplanır. Not: Bu dondurucu, sıvı azot Dewars içeriryanı sıra, ve FFPE depolama. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics.+2015%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics. 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+molecular+characterization+of+human+colon+and+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Comprehensive molecular characterization of human colon and rectal cancer.</a> Nature. 487 (7407), 330-337 (2012).</li>
<li>Arcaroli, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumours+with+elevated+levels+of+the+Notch+and+Wnt+pathways+exhibit+efficacy+to+PF-03084014%2C+a+gamma-secretase+inhibitor%2C+in+a+preclinical+colorectal+explant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumours with elevated levels of the Notch and Wnt pathways exhibit efficacy to PF-03084014, a gamma-secretase inhibitor, in a preclinical colorectal explant model.</a> Br J Cancer. 109 (3), 667-675 (2013).</li>
<li>Hubbard, J., Grothey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenesis+agents+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenesis agents in colorectal cancer.</a> Curr Opin Oncol. 22 (4), 374-380 (2010).</li>
<li>van Es, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch%2Fgamma-secretase+inhibition+turns+proliferative+cells+in+intestinal+crypts+and+adenomas+into+goblet+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Notch/gamma-secretase inhibition turns proliferative cells in intestinal crypts and adenomas into goblet cells.</a> Nature. 435 (7044), 959-963 (2005).</li>
<li>Cassidy, J. W., Caldas, C., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+Tumor+Heterogeneity+in+Patient-Derived+Tumor+Xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Maintaining Tumor Heterogeneity in Patient-Derived Tumor Xenografts.</a> Cancer Res. 75 (15), 2963-2968 (2015).</li>
<li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+human+tumour+tissue+xenografts+in+immunodeficient+mice%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived human tumour tissue xenografts in immunodeficient mice: a systematic review.</a> Clin Transl Oncol. 12 (7), 473-480 (2010).</li>
<li>Julien, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+large+panel+of+patient-derived+tumor+xenografts+representing+the+clinical+heterogeneity+of+human+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of a large panel of patient-derived tumor xenografts representing the clinical heterogeneity of human colorectal cancer.</a> Clin Cancer Res. 18 (19), 5314-5328 (2012).</li>
<li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumor+xenografts%3A+transforming+clinical+samples+into+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Res. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li>
<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumour+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development.</a> Nat Rev Clin Oncol. 9 (6), 338-350 (2012).</li>
<li>Carson, F. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarson%2C+FL+%22Histotechnology%3A+A+Self-Assessment+Workbook%22">Histotechnology: A Self-Assessment Workbook</a>. , American Society of Clinical Pathologists Press. Chicago, IL. (1996).</li>
<li>Arcaroli, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+PIK3CA+mutants+and+a+novel+3%27+UTR+mutation+are+associated+with+increased+sensitivity+to+saracatinib%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Common PIK3CA mutants and a novel 3' UTR mutation are associated with increased sensitivity to saracatinib.</a> Clin Cancer Res. 18 (9), 2704-2714 (2012).</li>
<li>Arcaroli, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+NOTCH1+gene+copy+number+gain+is+a+prognostic+indicator+of+worse+survival+and+a+predictive+biomarker+to+a+Notch1+targeting+antibody+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">A NOTCH1 gene copy number gain is a prognostic indicator of worse survival and a predictive biomarker to a Notch1 targeting antibody in colorectal cancer.</a> Int J Cancer. 138 (1), 195-205 (2016).</li>
<li>Arcaroli, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+array+and+fluorescence+in+situ+hybridization+biomarkers+of+activity+of+saracatinib+%28AZD0530%29%2C+a+Src+inhibitor%2C+in+a+preclinical+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Gene array and fluorescence in situ hybridization biomarkers of activity of saracatinib (AZD0530), a Src inhibitor, in a preclinical model of colorectal cancer.</a> Clin Cancer Res. 16 (16), 4165-4177 (2010).</li>
<li>Lieu, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+activity+of+a+potent+MEK+inhibitor%2C+TAK-733%2C+against+colorectal+cancer+cell+lines+and+patient+derived+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Antitumor activity of a potent MEK inhibitor, TAK-733, against colorectal cancer cell lines and patient derived xenografts.</a> Oncotarget. 6 (33), 34561-34572 (2015).</li>
<li>Pitts, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+the+epithelial-to-mesenchymal+transition+phenotype+with+responsiveness+to+the+p21-activated+kinase+inhibitor%2C+PF-3758309%2C+in+colon+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Association of the epithelial-to-mesenchymal transition phenotype with responsiveness to the p21-activated kinase inhibitor, PF-3758309, in colon cancer models.</a> Front Pharmacol. 4, 35(2013).</li>
<li>Song, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+antitumor+activity+of+cabozantinib%2C+a+c-MET+and+VEGFR2+inhibitor%2C+in+a+colorectal+cancer+patient-derived+tumor+explant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Potent antitumor activity of cabozantinib, a c-MET and VEGFR2 inhibitor, in a colorectal cancer patient-derived tumor explant model.</a> Int J Cancer. 136 (8), 1967-1975 (2015).</li>
<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+predictive+markers+of+response+to+the+MEK1%2F2+inhibitor+selumetinib+%28AZD6244%29+in+K-ras-mutated+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Identification of predictive markers of response to the MEK1/2 inhibitor selumetinib (AZD6244) in K-ras-mutated colorectal cancer.</a> Mol Cancer Ther. 9 (12), 3351-3362 (2010).</li>
<li>Bardelli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amplification+of+the+MET+receptor+drives+resistance+to+anti-EGFR+therapies+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Amplification of the MET receptor drives resistance to anti-EGFR therapies in colorectal cancer.</a> Cancer Discov. 3 (6), 658-673 (2013).</li>
<li>Bertotti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecularly+annotated+platform+of+patient-derived+xenografts+%28%22xenopatients%22%29+identifies+HER2+as+an+effective+therapeutic+target+in+cetuximab-resistant+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">A molecularly annotated platform of patient-derived xenografts ("xenopatients") identifies HER2 as an effective therapeutic target in cetuximab-resistant colorectal cancer.</a> Cancer Discov. 1 (6), 508-523 (2011).</li>
<li>Davis, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+inhibition+of+MEK+and+Aurora+A+kinase+in+KRAS%2FPIK3CA+double-mutant+colorectal+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Combined inhibition of MEK and Aurora A kinase in KRAS/PIK3CA double-mutant colorectal cancer models.</a> Front Pharmacol. 6, 120(2015).</li>
<li>Morelli, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+activity+of+the+rational+combination+of+selumetinib+%28AZD6244%29+in+combination+with+vorinostat+in+KRAS-mutant+colorectal+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preclinical activity of the rational combination of selumetinib (AZD6244) in combination with vorinostat in KRAS-mutant colorectal cancer models.</a> Clin Cancer Res. 18 (4), 1051-1062 (2012).</li>
<li>Pitts, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+pharmacological+targeting+of+the+MAP+kinase+and+PI3K%2FmTOR+pathway+in+preclinical+models+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dual pharmacological targeting of the MAP kinase and PI3K/mTOR pathway in preclinical models of colorectal cancer.</a> PLoS One. 9 (11), e113037(2014).</li>
<li>Spreafico, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+combination+of+a+MEK+inhibitor%2C+selumetinib%2C+and+the+Wnt%2Fcalcium+pathway+modulator%2C+cyclosporin+A%2C+in+preclinical+models+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Rational combination of a MEK inhibitor, selumetinib, and the Wnt/calcium pathway modulator, cyclosporin A, in preclinical models of colorectal cancer.</a> Clin Cancer Res. 19 (15), 4149-4162 (2013).</li>
<li>Arcaroli, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALDH%2B+tumor-initiating+cells+exhibiting+gain+in+NOTCH1+gene+copy+number+have+enhanced+regrowth+sensitivity+to+a+gamma-secretase+inhibitor+and+irinotecan+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">ALDH+ tumor-initiating cells exhibiting gain in NOTCH1 gene copy number have enhanced regrowth sensitivity to a gamma-secretase inhibitor and irinotecan in colorectal cancer.</a> Mol Oncol. 6 (3), 370-381 (2012).</li>
<li>Hoey, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DLL4+blockade+inhibits+tumor+growth+and+reduces+tumor-initiating+cell+frequency%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">DLL4 blockade inhibits tumor growth and reduces tumor-initiating cell frequency.</a> Cell Stem Cell. 5 (2), 168-177 (2009).</li>
<li>Ikebuchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+c-Met+phosphotyrosine+sites+in+human+cells+in+response+to+mouse+hepatocyte+growth+factor+but+not+human+hepatocyte+growth+factor%3A+the+possible+roles+of+different+amino+acids+in+different+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochem+Funct%22%5BJournal%5D)">Dissociation of c-Met phosphotyrosine sites in human cells in response to mouse hepatocyte growth factor but not human hepatocyte growth factor: the possible roles of different amino acids in different species.</a> Cell Biochem Funct. 31 (4), 298-304 (2013).</li>
<li>Zhang, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+growth+of+human+met-expressing+xenografts+in+a+new+strain+of+immunocompromised+mice+transgenic+for+human+hepatocyte+growth+factor%2Fscatter+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Enhanced growth of human met-expressing xenografts in a new strain of immunocompromised mice transgenic for human hepatocyte growth factor/scatter factor.</a> Oncogene. 24 (1), 101-106 (2005).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

PDTX ilaç keşif platformu yeni bileşiklerin klinik etkinliğini öngörmede güvenilmez diğer preklinik modellerin eksiklikleri gelişmiş bir model sunuyor. Önemli olarak, bu modelde, tümörler, biyolojik olarak kararlı, metastatik potansiyelini korumak ve kuşaktan içindeki ilaç tepki gösterirler. Bu modelde, hastanın türevli tümörler, atimik çıplak farelere enjekte geçişli ve daha sonra tedavi değerlendirmesinde kullanılır. içeren başarılı bir PDTX banka için birkaç kritik adımlar vardır: 1) uyumlu bir klinik ekip / rıza has...

Kolorektal kanser (KRK) Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde kanser ölümlerinin önemli bir katkıda bulunmaktadır. 2015 yılında, 49.700 ölüm 1 ile ÇHS tahmini 132.700 yeni vaka vardı. lokalize hastalığı olan hastalarda prognoz mükemmel olmasına rağmen, ilerlemiş hastalığı olan hastalarda yeni tedavilerin geliştirilmesinde bu önemli bir öncelik haline kötü sonuçlar var. bakım kemoterapötik rejimleri ve bu hastalığa karşı konuşlandırılmış yeni biyolojik standart olmasına rağmen, genel sağkalım sadece bir artan bir artış olmuştur. Buna göre, bu hastalıkta tümör büyümesini kolaylaştırmak katılan sürücü yollarının anlaşılmasında önemli bir çaba var. Kanser Genom Atlas ağ en son sayıda ana CRC bozukluğunun karıştığı ve bunlar yolları belirlemiştir: WNT, fosfoinositid 3-kinaz (PI3K), RAS, dönüştürücü büyüme faktörü-β (TGF-β) ve TP53 2. Birlikte, araştırmalar ot nitelendirdiCRC büyümeyi güçlendirir onun yollar önemli ölçüde bu hasta popülasyonunda 3-5 sağkalımı iyileştirmeyi amaçlayan yeni tedavilerin gelişimini başlatmıştır. Onkoloji ilaç geliştirilmesinde kullanılması klinik öncesi modellerde, bu yeni bileşiklerin klinik aktivite tahmin bu süreçte temel olmuştur. Çeşitli klinik öncesi modellerde ilaç geliştirme sürecinde kullanılmıştır. Preklinik transgenik hayvan modelleri ve hücre hatları büyük ölçüde insan tümörlerinin karmaşıklığını yansıtacak şekilde yetersizlik, yeni onkoloji tedavilerin klinik etkinliğini belirlemede başarısız olmuştur ölümsüzleştirdi göz önüne alındığında, hasta kaynaklı tümör xenograft (PDTX) modelleri kurulmuştur. Bu modelin en büyük avantajı, tümör heterojen bozulmadan kalır ve yakından menşeli hastanın tümör 6-9 moleküler özelliklerini ve klonalite yansıtır olmasıdır. PDTX modelleri, in vivo bir harikalarını sağlamakpreklinik bir platform yeni ajanlar, ilaç direnci yolları, kombinasyonel stratejileri ve kanser kök hücre biyolojisi 10 incelemek için. PDTX işleminin genel bir bakış, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Bu klinik başlar onların aşırı tümör dokusunun bir kısmı, bu araştırma için kullanılan izin vermek için hasta rızası. Sonraki, ameliyatta tümörün bir parça bir patolog tarafından hasılat ve araştırma personeline taşınacak ortama koydu. Bunun hemen ardından, tümör bölümü, küçük parçalar halinde kesilmiş ve deri altından bağışıklık yetersizliği olan farelere transplante edilir. Tümör büyüdükçe sonra, tümör 10 muhafaza edilmesi amacıyla farelerin farklı kuşaklar içine geçirilerek edilir. Tipik haliyle, F3 nesil sonra tümör yeni bileşikler ve / veya kombinasyonel tedaviler değerlendirilir tedavi çalışmaya genişletilebilir. Kullanan Next Gen Dizi (exome Seq, RNA Seq ve SNP dizi) potansiyel öngörü biyolojik belirteçler keşfetmek vardırBelirli bir tedaviden fayda görebilecek hastaların seçiminde yardımcı ed. 1) tek ajan olarak veya kombinasyon halinde yeni tedavilerin etkinliğini değerlendirmek ve 2) öncesinde klinik araştırma duyarlılık veya direnç tahmin biyobelirteçlerini tespit: PDTX modelleri kullanarak kapsayıcı hedefleri şunlardır. Bu yazıda, bir CRC PDTX bankanın başlatılması ve bakım metodoloji sağlamak ve ilaç geliştirme keşfi bu modelin avantajları ve sınırlamaları sağlamaktadır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54393/54393fig1.jpg" /> CRC PDTX Modeli Protokolü Şekil 1. Genel. Hasta edilen tümör cerrahisi alınan hemen deri altından atimik çıplak farelere enjekte edilir. Tümör büyüdükçe kez sonraki nesillere genişletilir ve sonuçta tedavi çalışmaları için genişletilir. Tedavi RESPOnses değerlendirilir ve tahmini biyomarkerlar. Hasta seçiminde yardımcı olabilir belirlenmiştir <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54393/54393fig1large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

<table><tbody><tr><td>RPMI veya DMEM</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Esansiyel Olmayan Amino Asitler</td><td>Corning</td><td>25-025-CI</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır</td><td>Serumu Corning</td><td>35-010-CV</td><td>-4 ve derece içinde çözülme; C, ardından 30 ° C'de 60 dakika etkinleştirin; C su banyosu</td></tr><tr><td>CPT kan tüpü</td><td>BD vacutainer</td><td>362761</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpü</td><td>Surelock</td><td>A-7002</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Cyroking</td><td></td><td>C0732901</td><td></td></tr><tr><td>Plastik tümör kesme kabı</td><td>Trueline</td><td>TR4001</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Roboz</td><td>RS-5881</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel (jelatinimsi protein karışımı)</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>-20 veya -80 °C'de saklayın; C, daha sonra buz üzerinde çözdürün, RT%</td></tr><tr><td>10 Formalin bardaklarında</td> bırakmayın <td>Protokol</td><td>032-059</td><td></td></tr><tr><td>Sıvı Azot Dewar Depolama</td><td>Termolin</td><td>CY50900</td><td></td></tr><tr><td>Taşınabilir sıvı nitrojen dewar</td><td>Nalgene</td><td>4150-2000</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit</td><td>Fischer</td><td>67-68-5</td><td></td></tr><tr><td>Dondurma kabı: Bay Frosty</td><td>Nalgene</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>İzopropil Alkol Decon</td><td></td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Trokarlar</td><td>Amerika'nın Yenilikçi Araştırması</td><td>MP-182</td><td></td></tr><tr><td>Anestezi makinesi</td><td>Patterson Veteriner</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anestezi kutusu</td><td>Patterson Veteriner</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Veteriner bir</td><td>1038005</td><td></td></tr><tr><td>F-Hava Kabı</td><td>Bickford Omnicon</td><td>80120</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Vet one</td><td>5182-90C</td><td></td></tr><tr><td>Kaliperler</td><td>Fowler</td><td>54-100-167</td><td></td></tr><tr><td>Tartı</td><td>Ohaus</td><td>Scout Pro SP601</td><td></td></tr></tbody></table>

bir klinik öncesi hasta türetilmiş tümör roman anti-kanser tedaviler soruşturma xenograftlarında modeli geliştirilmesi ve bakımı

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Hasta kaynaklı tümör ksenogreft (PDTX) modelleri, insan denemelerinden önce anti-kanser ilaç geliştirmeyi kolaylaştırmada gerekli bir platform sağlar. İnsan tümör parçaları, bir tümör bankası oluşturmak için atimik çıplak farelere (bağışıklığı baskılanmış, T hücresi eksik) deri altından enjekte edilir ve daha sonra bu tümörleri hastalardan korumak için farklı nesil farelere geçirilir. Daha da önemlisi, orijinal tümörün hücresel heterojenliği, ilaç etkinliği çalışmalarının (tek ajan ve kombinasyon), biyobelirteç analizinin, dirençli yolakların ve kanser kök hücre biyolojisinin değerlendirilmesi için klinik olarak daha ilgili bir model sağlayan bu modelde yakından taklit edilmektedir. PDTX modelinin bazı sınırlamaları arasında farelerde ilk nesilden sonra insan stromasının fare stroması ile yer değiştirmesi, tümörlerin deri altı enjeksiyonlarına bağlı metastaz üzerindeki tedavi etkilerinin araştırılamaması ve immün sistemi baskılanmış farelerin kullanımına bağlı immünoterapilerin değerlendirilmemesi yer almaktadır. Bununla birlikte, bu sınırlamalarla bile, PDTX modeli ilaç keşif sürecinde güçlü bir klinik öncesi platform sağlar.

CRC PDTX Modelleri ve TCGA Ortak Mutasyonlarının Benzerlikler Biz CRC PDTX bankada ortak mutasyonlar (KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA, APC, CTNNB1 ve TP53) yüzdesi CRC hasta popülasyonunda görülen mutasyon sıklığı temsilcisi olup olmadığını araştırdık. Şekil 2A (TCGA) ve B (CRC PDTX Bankası) &#39;de gösterildiği gibi, bu genlerdeki mutasyonların sıklığı TCGA (n = 276 hasta) ...

deri altı klinik öncesi modelde hasta kaynaklı tümörler kullanarak yeni tedavilerin, öngörü biyomarker keşif ve ilaca dirençli yolların etkinliğini incelemek için mükemmel bir yoldur. Bu model, ilaç geliştirme sürecinde, klinik araştırma önce birçok yeni anti-kanser terapisi kaderini belirlemede önemlidir.

Bir Klinik öncesi Hasta Türetilmiş Tümör Roman Anti-Kanser Tedaviler Soruşturma Xenograftlarında Modeli Geliştirilmesi ve Bakımı

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Bu deri altı Hasta Kaynaklı Tümör Ksenogreft prosedürünün genel amacı, tümörlerdeki yeni tedavilerin etkinliğini, öngörücü biyobelirteç keşfini ve ilaca dirençli yolları incelemektir. Bu yöntem, onkoloji alanında belirli bir ilacın belirli bir tümör tipine karşı aktivite gösterip göstermediğine dair temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, Hasta Kaynaklı Tümör Ksenogreftlerinin, köken tümörlere özgü moleküler, genetik ve histolojik heterojenliği korumasıyla modeli klinik olarak daha ilgili hale getirmesidir.Prosedürü, laboratuvarımızdan profesyonel bir araştırma asistanı ve sertifikalı veteriner teknikeri olan Stacey Bagby gerçekleştirecek. Sodyum sitrat içeren bir kan hücresi ayırma tüpüne bir ila iki mililitre kan topladıktan sonra, örnekleri santrifüjleyin ve periferik kan mononükleer hücre tabakasını 1,5 mililitrelik bir mikro-santrifüj tüpüne aktarın. Tüpü steril PBS ile ağzına kadar doldurun.Ardından, hücreleri tekrar santrifüjle çöktürün. Bunu, PBMC peletini dağıtmamaya dikkat ederek bir mililitre PBS ile hızlı bir yıkama ile takip edin. Daha sonra, bir pipet kullanarak plazmayı kan hücresi toplama tüpünden 1,5 mililitrelik steril kriyojenik bir viale aktarın ve plazma ile PBMC peletini -80 °C'de saklayın.İnsan tümör dokusunu, içerisinde tam besiyeri bulunan steril bir kapla hayvan tesisine nakledin ve kabı laminar akışlı kabine yerleştirin. Hasat işleminden hemen sonra, dokuyu geri kazanma besiyerinin küçük bir miktarı ile birlikte steril plastik bir kesim kabına aktarın. Ardından, otoklavda sterilize edilmiş küçük makas ve pensler kullanarak dokuyu yaklaşık üç çarpı üç çarpı üç milimetrelik parçalara bölün ve implantasyon için buz üzerinde 300 µL jelatinöz protein karışımı çözeltisi içeren otoklavda sterilize edilmiş 1,5 mL'lik bir mikro santrifüj tüpüne 10 ila 12 parça yerleştirin.Şok dondurarak saklama işlemi için, uygun sayıda tümör parçasını yeni bir 1,5 mililitre mikro santrifüj tüpüne aktarın ve tüpü sıvı azot donatıcısına yerleştirin. Ardından, -80 °C dondurucuya koyun. Formalinle sabitleme ve parafin gömme işlemi için, üç küçük tümör parçasını 24 saat boyunca 10 mililitre %10'luk formalin içeren bir kaba yerleştirin.Dokular parafin gömülü bloklar haline getirildikten sonra, kalan doku parçalarını kriyojenik tüpe aktarın. Ardından, dokuya %10 DMSO ile desteklenmiş bir mililitre tam besiyeri ekleyin ve tüpleri, izopropil alkol dondurma kabına aktarılana kadar buz üzerinde saklayın. Bu kabı -80 °C dondurucuya yerleştirin.Tümör dokusunu enjekte etmek için, jelatinimsi protein karışımı çözeltisinde saklanan tümör parçalarını, her bir tümör parçasının trokar içine tamamen yerleştirildiğinden emin olarak otoklavlanmış 12 gauge trokarlara yükleyin. Ardından, altı ila sekiz haftalık atimik, nude bir farede ayak parmağı sıkıştırma testine yanıt olmadığını doğrulayın ve fareyi steril bir laminar akışlı kabindeki temiz bir alana aktarın. F0 tümörünü dorsal boyun bölgesine ve farenin yan tarafındaki her iki flanka subkütan olarak uygulayın; ardından, tümör enjeksiyonu yapılan flank bölgelerinden birinin distal kısmına subkütan analjezik uygulayın.Ardından, fareyi tamamen iyileşene kadar izlemek üzere kafesine geri yerleştirin. Xenograft nakledilen farelerin büyümesini ve sağlığını haftada en az bir kez takip ederek tümör boyutlarını, tümör neslini, tümör enjeksiyon tarihini ve farelerin sağlık durumunu uygun bir takip sistemine kaydedin. Bir tümör yaklaşık 1.500 ila 2.000 mm³ boyuta ulaştığında, tümörü çıkarmak için otoklavlanmış makas ve pens kullanın ve az önce gösterildiği gibi F1 tümörünü bir sonraki nesil beş hayvana aktarın; bu sırada her tümör için gösterildiği üzere şok dondurulmuş formalinde sabitlenmiş ve canlı tümör örneklerini toplamaya dikkat edin.F0 tümör grubundan kalan farelerdeki tümörler yaklaşık 1.500 ila 2.000 kübik milimetre boyuta ulaştığında, bu tümörleri az önce gösterilen toplama yöntemiyle toplayın. F15 tümör üretimi aşamasına gelindiğinde, bir sonraki tümör enjeksiyon serisi için sıvı azot deposunda bulunan mevcut en erken nesil canlı tümör parçalarını kullanın. İstenen tümör çok büyük olduğunda (1.500 ila 2.000 kübik milimetre), tümörü toplamak ve istenen sayıda fareye yaymak için yukarıdaki prosedürleri izleyin.Farelere ilaç dozlarını uygulayın; haftada iki kez tartım ve ölçüm yapın. Fareleri, grup başına 10 tümör düşecek şekilde ve grup tümör hacmi ortalaması birbirine yakın birkaç standart sapma dahilinde 100 ile 300 cubic millimeters arasında olacak şekilde tedavi gruplarına rastgele ayırın. Ardından, fareleri tedavi için uygun gruplara sınıflandırın.İnsan ve fare yakalanmış tek DNA için çift renkli floresan in situ hibridizasyon, F0 tümöründeki insan stromal hücrelerinin F1 tümöründeki fare stromal hücreleri ile yer değiştirdiğini göstermektedir. F0 neslindeki insan kaynaklı hepatosit büyüme faktörünün tamamı F1 neslinde fare hepatosit büyüme faktörü ile yer değiştirirken, vasküler endotelyal büyüme faktörü ligandı F1 neslinde hem insan hem de fare proteininden oluşmaktadır. Aynı tümörün farklı nesillerinin tedavisi, tedavi yanıtını değiştirmez.Tümörün direnci veya duyarlılığı, tümör neslinden ziyade tümör suşuna özgü görünmektedir. Ayrıca, bu yaygın mutasyona uğrayan genlerdeki mutasyon sıklığı, Kanser Genom Atlası ile kolorektal hasta kaynaklı tümör ksenogreft bankası arasında oldukça benzerdir. Bu durum, kolorektal hasta popülasyonunda gözlemlenen yaygın mutasyonların, kolorektal hasta kaynaklı ksenotransplant modelinde iyi temsil edildiğini göstermektedir.Bu teknik ustalığa erişildiğinde, uygun şekilde uygulandığı takdirde bir ila iki saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü gerçekleştirirken, kanser hastalarının belirlenmesi ve onamlarının alınması ile tümör dokusunun çıkarılması ve makroskobik incelemesi için uyumlu bir klinik ekibe sahip olmak önemlidir. Bu prosedürün ardından, belirli bir tümör tipine sahip hastalar için bu stratejilerin uygulanabilirliğine dair ek soruları yanıtlamak amacıyla, tekli veya kombinasyon ajanlar olarak anti-kanser bileşiklerin araştırılması gibi diğer yöntemler uygulanabilir.Geliştirilmesinin ardından bu teknik, onkoloji alanındaki araştırmacıların yeni kanser terapilerini, tümör heterojenitesini, tedaviye direnç mekanizmalarını, kanser kök hücre biyolojisini ve tümör stromal etkileşimlerini keşfetmelerinin yolunu açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, yeni kanser terapötiklerini değerlendirmek için hasta kaynaklı tümör ksenogreft modelinin nasıl geliştirileceği ve sürdürüleceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmanız gerekir.

development-maintenance-preclinical-patient-derived-tumor-xenograft

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

İnsan multipl miyeloma (MM) hücreler, mezenkimal hücreler ve hayatta kalma ve proliferasyon için hücre dışı matris bileşenlerinin destek mikro-gerektirir. Biz tümör büyümesi, işgali ve anjiyogenez üzerine kanser ilaçlarının etkilerini incelemek için engrafted insan miyelom ve mezenkimal hücreler ile in vivo tavuk embriyo modelini kurdu.

Chicken İnsan Multipl Miyelom Xenograftlarında Modeli Kurulması Tümör Büyüme, Invasion ve Anjiogenez Eğitim için

Kanser hücrelerinin transplantasyonu, kanser mekanizmalarının ve terapötik tepkilerin tanımlanması için önemli bir araçtır. Mevcut teknikler, bağışıklık yetersiz hayvanlara bağımlıdır. Burada, tümör hücresi davranışının ve in vivo ilaç yanıtlarının uzun vadeli analizi için immün yetkin embriyolara zebra balığı tümör hücrelerini nakletmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Zebra balığı Pediatrik Beyin Tümörlerinin Tümör Hücre Davranışının ve İlaç Yanıtının Uzun Vadeli İncelenmesi için Bağışıklık Yetenekli Ev Sahibi Olarak Transplantasyonu

Burada, biyolojik ilgili sitelerdeki kanser için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için bir protokol ultrason destekli enjeksiyon Nöroblastom (NB) ve Ewing sarkomu (ES) hücre yararlanmak için (hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri kurulu) mevcut araştırma.

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Hasta-türevi xenograft (PDX) modelleri daha sağlam özetlemek Melanom moleküler ve biyolojik özellikleri ve geleneksel plastik doku kültürü tabanlı asder karşılaştırıldığında tedavi tepkisi daha öngörü vardır. Burada, yeni PDX modellerinin kurulması ve mevcut PDX modellerinin karakterizasyonu/denemeleri için standart çalışma protokollerimizi tarif ediyoruz.

Bir melanom hasta-türetilen xenograft model

Biz bir insan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) - çeviriimmün-onkoloji araştırma için insanlaşmış ksenogreft fare modeli dayalı açıklar. Bu protokol, I-O terapi değerlendirmesi için benzer modellerin oluşturulması ve karakterizasyonu için genel bir kılavuz görevi görebılabilir.

Çevirisel İmmüno-onkoloji (I-O) Araştırma için İnsani Periferik Kan Mononükleer Hücre (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Modeli

Geçerli protokol, hasta tarafından türetilen xenograft (PDX) modelleri ve cerrahi mide kanseri örneklerinden primer kanser hücresi hatları oluşturmak için yöntemleri açıklar. Yöntemleri ilaç geliştirme ve kanser Biyoloji araştırma için yararlı bir araç sağlar.

Mide kanseri hasta-türetilen xenograft modelleri ve primer hücre hatları kurulması

Burada bir tümörün genomik yapısına dayalı olarak seçilen hedefe yönelik tedavilerin etkinliğini test etmek için bir protokol sayılacağız. Protokol, yapısal DNA düzenlemelerinin tanımlanması ve doğrulanması, hastaların tümörlerinin farelere engraftasyonu ve ilgili ilaçlara verilen yanıtların test edilmesi olarak tanımlanmaktadır.

Yapısal DNA Alterasyon Analizi ve Hasta Kaynaklı Ksenogreftler Kullanılarak Kanserde Hedefli Tedavilerin Test Edilmesi

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Aşağıdaki çalışmada, kolorektal ve pankreas kanserinden oluşan büyük bir biyobankanın kurulması için gerekli ardışık adımları açıklıyoruz.

Yaşayan Bir Biyobankanın Oluşturulması ve Bakımı - Nasıl Yaparız

Bu protokol, anaplastik tiroid karsinomu (ATC) ve baş boyun skuamöz hücreli karsinomunun (HNSCC) hasta kaynaklı ksenogreft (PDX) modelini oluşturmakta ve karakterize etmektedir, çünkü PDX modelleri translasyonel onkoloji alanında hızla standart hale gelmektedir.

Anaplastik Tiroid Karsinomu ve Baş-Boyun Skuamöz Hücreli Karsinomun Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması ve Karakterizasyonu

Burada, taze melanom dokularından ayrışmış hücre süspansiyonlarını kültürleyerek melanom hastadan türetilmiş organoidler oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Bu organoidler, hastaya özgü tümörleri in vitro olarak aslına uygun olarak özetleyerek, tümör immünosupresif mekanizmalarını, ilaç taramasını, ilaç direnç mekanizmalarını ve kanser sürveyans yaklaşımlarını keşfetmek için yenilikçi bir yaklaşım sunar.

Melanom Hasta Kaynaklı Organoid Modellerle Terapötik Fırsatların Ortaya Çıkarılması

Keşfedin hasta türetilmiş tümör xenograft modeli geliştirme ve bakım yöntemlerini, anti-kanser tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için. Bu teknik, tümör heterojenitesini koruyarak klinik öncesi araştırmalarda değerli bilgiler sunar.

Bir Klinik öncesi Hasta Türetilmiş Tümör Roman Anti-Kanser Tedaviler Soruşturma Xenograftlarında Modeli Geliştirilmesi ve Bakımı (Video) | JoVE Journal

Bir Klinik öncesi Hasta Türetilmiş Tümör Roman Anti-Kanser Tedaviler Soruşturma Xenograftlarında Modeli Geliştirilmesi ve Bakımı

Daha fazla video keşfet