Glioblastomun Lazer İnterstisyel Termal Tedavisi için İmmünkompetan Bir Murin Modeli

Araştırmamız erişkin beyin tümörlerine odaklanmaktadır. Buna glioblastoma, primer glioma ve beyin metastazı dahildir. Bu ölümcül koşullara sahip hastalar için daha etkili tedavileri belirlemek için beyin tümörü fare modelleri geliştirdik.

Glioblastoma en şiddetli ve en sık görülen primer beyin tümörüdür. Glioblastoma hastalarının %20'den fazlasında bu beyin tümörü cerrahi olarak çıkarılamaz. Bu durumlarda, Lazer İnterstisyel Termal Terapi, kısaca LITT, bu agresif beyin tümörlerini hedeflemek için klinik olarak kullanılır.

LITT, cerrahi olarak erişilemeyen beyin tümörleri için klinik olarak uygulanan bir termal doku ablasyon teknolojisidir. LITT fare modellerini kullanarak yaptığımız araştırma, tümör ve çevresindeki beyin dokusunda ısıl işleme verilen doku ve hücre tepkileri hakkında önemli bilgiler sağlayacaktır. LITT'nin beyinde neden olduğu moleküler ve hücresel değişikliklerin daha iyi anlaşılması, beyin tümörü hastalarının sonuçlarını iyileştirmek için LITT'yi daha etkili bir şekilde kullanmamızı sağlayacaktır.

En kritik deneysel zorluk, tümörün doğru hedeflenmesi ve tedavisidir. İnsan hastalarda klinik olarak kullanılan LITT cerrahisinin aksine, çoğu model gerçek zamanlı MRI görüntülemesine sahip değildir, bu da herhangi bir görsel yardım olmadan tümörü hedeflemeyi zorlaştırır. Başlamak için, doğru ilaç dozunu hesaplamak için anestezi uygulanmış farenin ağırlığını kaydedin.

Gözlerden, kulaklardan ve bıyıklardan kaçınarak cerrahi bölgeyi dikkatlice tıraş edin. Farenin kesici dişlerini ısırma çubuğunun deliğine yerleştirin ve stereotaksik çerçevenin burun konisini tam oturana kadar ayarlayın, ardından yerine sabitlemek için tutma vidasını sıkın. Bilateral arka bacak ayak parmağı kıstırma yaparak anestezi derinliğini kontrol edin.

Fare uygun şekilde uyuşturulduktan sonra, kulak iğnelerini kullanarak kafatasını sabitleyin ve kafayı nötr düz bir düzlem konumuna ayarlayın. Kurumayı önlemek için her iki göze de bolca oftalmik merhem sürün. 28 gauge yarım inçlik bir şırınga kullanarak, ağrı kesici ilaç olarak deri altına meloksikam enjekte edin.

Hedef solunum hızını korumak için anestezi oranını azaltın. Ardından, fareyi aseptik olarak örtün. Steril bir pamuklu çubuk kullanarak, medial yoldan başlayarak dışa doğru çalışarak klorheksidin dezenfeksiyon solüsyonu uygulayın.

Daha sonra taze steril bir pamuklu çubuk kullanarak aynı şekilde% 70 etanol uygulayın. Solunum hızını izleyerek anestezik derinliği tekrar kontrol edin. Daha sonra 15 numara bıçaklı bir neşter kullanarak, gözlerin hafifçe arkasından başlayarak 1.0 ila 1.5 santimetre orta sagital insizyon yapın.

Şimdi, steril bir pamuklu çubuk kullanarak, kafatasını görselleştirmek için yara kenarlarını yansıtın. Bölgedeki herhangi bir bağ dokusunu nazikçe ovalayın. Gerekirse, kafatası yüzeyini ortaya çıkarmak ve lambda dikişlerini görselleştirmek için hidrojen peroksite batırılmış steril bir pamuklu çubuk kullanın.

Sol ve sağ kornea sütürlerinin sagital sütür ile buluştuğu yerde bregmayı bulun. İsteğe bağlı olarak, LITT ameliyatı sırasında bregma'nın yerini değiştirmeyi kolaylaştırmak için, toksik olmayan renkli bir akrilik reçine ve steril bir ahşap kürdan kullanın ve bregma üzerine küçük bir işaret yapın. Çerçevedeki mikrolitre şırınga ile, ucu bregmaya değecek şekilde stereotaktik koordinatları sıfırlayın.

X koordinatı medial lateral düzlemdeki hareketi, Y koordinatı anterior posterior hareketi ve Z koordinatı dorsal ventral düzlemi ifade eder. Lambda'nın bregma ile aynı dorsal ventral düzlemde olduğundan emin olun, burada Z her iki yer işaretinde de sıfıra eşittir. Ayarlamalar gerekirse, steril bir çubukla hafif baskı uygulayarak kafatasının hala güvenli bir şekilde sabitlendiğinden emin olun.

İğne ucunu hedef alanın üzerine artı 2.0 milimetre medya yanal ve artı bregmadan 0.5 milimetre ön-arka koordinatlarında konumlandırın. Matkap ucunun ucunu kafatasına temas edene kadar dikkatlice indirin. İğne ucunu hafifçe kaldırın ve steril bir cerrahi işaretleyici kullanarak çapak deliğinin bulunduğu yerde küçük bir nokta yapın.

Ardından, iğneyi yoldan çekilecek şekilde hafifçe kaldırın ve işaretli konumunuzda bir delik açın, altındaki meninkslere zarar vermeden sadece kafatasından çapak almaya dikkat edin. Artı 3.0 milimetre medial lateral ve artı 0.5 milimetre anteroposteriorda ikinci bir çapak deliği oluşturun veya LITT prosedürü sırasında termokupl'u yerleştirmek için orijinal deliği bu koordinata uzatın. Daha sonra, CT2A fare glioma hücrelerini içeren mikro santrifüj tüpünü buzdan çıkarın ve hücreleri yeniden süspanse etmek için tüpü parmak ucunuzla hafifçe vurun.

Beş veya 10 mikrolitrelik bir şırınga kullanarak, hücre süspansiyonunun yaklaşık iki mikrolitresini nazikçe çekin. Havayı çıkarmak için şırıngadan 0,5 mikrolitre ekspresin yapın. Kalan sıvıyı veya hücreleri çıkarmak için iğnenin şaftını alkollü bir bezle silin.

İğneyi yavaşça Z eksi üç milimetreye eşit derinliğe indirin ve bir dakika bekleyin. Daha sonra iğneyi yavaşça 0,5 milimetre geri çekin ve hücreleri dakikada 0,5 mikrolitre hızında enjekte edin. Enjeksiyon tamamlandıktan sonra, şırıngayı üç ila dört dakika boyunca yavaşça geri çekmeden önce iki dakika bekleyin.

100 ila 250 mikrometrelik ilk birkaç aralıktan sonra bir dakikaya kadar duraklamak, hücre yer değiştirmesini önlemeye yardımcı olacaktır. Yara kesisini kapatmak için, kesiğin kenarlarını yeniden yaklaştırın. 50 dikişle üç kesikli dikiş kullanarak, alttaki dermisin temas etmesini sağlamak için yara kenarlarını hafifçe açarken yarayı kapatın.

Povidone iyot solüsyonunu kapalı yaraya uygulayın ve fareyi 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir ısıtma pedi üzerinde kağıt kaplı bir kurtarma kafesine aktarın. Hayvan sternal yaslanma yeteneğini geri kazandıktan sonra, ev kafesine geri transfer edilebilir. CT2A fare glioma hücre süspansiyonu enjekte edildikten dokuz gün sonra, anestezi uygulanmış fareyi stereotaktik çerçeveye sabitleyin.

Orta hat insizyonunu yeniden oluşturun ve bregmayı gizleyen herhangi bir dokuyu çıkarmak için kafatasını temizlemek için steril bir pamuklu çubuk kullanın. Lazer İnterstisyel Termal Terapi veya LITT eki stereotaktik çerçeve üzerinde yerindeyken, lazer fiberinin ucu için bregma'daki koordinatları sıfırlayın. Ardından, lazer fiber ucunu hafifçe kaldırın ve istenen medial lateral ve anterior posterior koordinatlara hareket edin.

Ardından, hedefe ulaşmak için probu yavaşça hedef dorsal ventral koordinata indirin. LITT tedavi parametrelerini sürekli moda ayarlayın ve birine güç verin. Ardından, lazeri bekleme modundan aktif duruma getirin ve ayak pedalını kullanarak lazeri 60 saniye boyunca devreye alın.

Sıcaklık 46 santigrat derecenin üzerine çıkarsa, kısa bir süre duraklayın, ardından sıcaklığı 46 santigrat dereceye yakın tutmayı hedefleyerek yeniden devreye girin. Son olarak, lazer düzeneğini yavaşça geri çekin. Lazer fiberini nazikçe silin ve termokupl alkollü bir bezle temizleyin.

Probların çerçeveye temas etmediğinden emin olarak düzeneği yoldan döndürün. T2 ağırlıklı kornal manyetik rezonans görüntüleri, yaklaşık %100 alım oranları ve tutarlı sferik tümör oluşumu ile başarılı tümör implantasyonu gösterdi. LITT tedavisi, merkezi çekirdekte doku nekrozunu ve perioperatif ödem gösteren çevreleyen hiperintens beyaz alanı gösteren tanımlanmış hiperintens siyah alanlarla tutarlı ablasyonlarla sonuçlandı.