En tallrik konkurrens analys som en snabb preliminär bedömning av sjukdom dämpning

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor som rör biologisk kontroll av jordburna växtpatogener. Guldmyntfoten för att testa material som kompost är att ha en växt bioassay att testa om det är giftigt för växterna. Men det tar tre veckor.

Denna metod kan göras i ungefär två till tre dagar. Den största fördelen med denna teknik är att det är enkelt, prisvärd, och effektiv. Denna analys är en snabb screening av specifik kompost för att undertrycka tillväxten av Rhizoctonia solani.

Emellertid, Denna halt kan också användas mot andra soilborne växt patogener, såsom Fusariums, Pythiums, och Phytophthoras. Visuell demonstration av denna metod är kritisk eftersom den tar hand om att isolera och upprätthålla en ren kultur av en svamp samtidigt som man undviker kontaminering. Demonstrera isolering förfarandet kommer att Taylor Readyhough, en doktorand från mitt laboratorium.

Emma Wright, en grundutbildning student från mitt laboratorium, kommer att visa tävlingen analysen. Till att börja, så röd rädisa frön i jord kända för att ha en historia av sjukdom som orsakas av R.solani. Efter tre till fyra veckor, ta bort plantorna från jorden och skölj dem med kranvatten.

Med hjälp av ett rakblad, skär en centimeter segment av hypocotyl och rot som har en brun färg. Använd sedan flamsteriliserade tyfningar för att doppa segmenten i 10%blekmedelslösning i en minut. Efter detta, skölj segmenten i sterilt vatten.

Därefter använder flamma-steriliserade tyfningar för att överföra segmenten till en pappershandduk. Klappa segmenten torra, och överföra dem till en petriskål med vattenagar. Placera petriskålen inuti en behållare med lock och inkubera segmenten i rumstemperatur.

För att etablera en dotterkultur, överför en av segmenten till mitten av en färsk tallrik potatis dextros agar. Efter detta autoklav 25-milliliter provrör som innehåller 10 milliliter vatten. Tillsätt två 0,5-gramsprover av varje provprov till ett par autoklaverade provrör med 10 milliliter sterilt vatten, och skaka provrören över natten.

Efter 24 timmar, tillsätt 1,5 gram vanlig agar och 90 milliliter destillerat vatten till ett par koniska kolvar. Efter autoklavering av kolvarna, placera dem i en 45-graders Celsius vattenbad i 30 minuter. Därefter häller du det autoklaverade referensprovet och det levande provet i den smälta agaren.

Häll blandningarna från varje kolv i fem petriskålar. För att skydda de inhemska mikroberna är det viktigt att inte lägga till komposten medan agarn är för varm. Låt därför agaren svalna till 45 grader Celsius innan du lägger till komposten.

Med hjälp av aseptisk teknik överför du bitar av R.solani till varje par av provplattor. Därefter, inkubera plattorna i rumstemperatur i en till två dagar. Slutligen, använd en klar, platt linjal och ett stereomikroskop för att mäta mycelets radie i varje platta till närmaste millimeter.

I detta protokoll, extrakt från levande komposter undertryckt R.solani tillväxt betydligt mer än autoklaverade prover, visar att effekten var mikrobiell och inte näringsbaserade. Suppressivitet mäts som en minskning av tillväxten jämfört med den autoklaverade kontrollen. Tillväxten påverkades inte av varaktigheten av mognad eller härdning av komposten.

Tillväxten påverkades avsevärt av kompostmetod och ingredienser recept, särskilt med vermicompost, windrow processer, och recept med lövträ bark. Efter dess utveckling, denna teknik kan vara en kandidat för kommersiell certifiering av kompost för sjukdomsdämpande egenskaper.