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복잡한 생물 학적 샘플에서 선택적으로 - glycosylated 펩티드을 풍요롭게하는 렉틴 HPLC 방법


JoVE 1398 10/01/2009

1Obstetrics, Gynecology and Reproductive Sciences, University of California, San Francisco - UCSF, 2Buck Institute for Age Research, 3Department of Chemistry, Purdue University

렉틴 - 복합 POROS 비즈는 HPLC를 위해 고용되었다. 당펩타이드 기준은 긍정적이고 부정적인 컨트롤을 역임 하였다. MARS - 14 고갈, 트립신 - 소화 인간의 플라즈마는 chromatographed와 흐름 -을 통해 (FT)와 바운드 분수는 ESI-LC-MS/MS 분석을 위해 수집되었다. FT에 비해 Glycopeptides는 바운드 분수에 풍부했다.

Other articles by Eric Johansen on PubMed

분자 생명 공학의 시대에 음식에 대 한 제품 개발 전략

과학 및 기술에 획기적인 영향을 미치는 우리의 규제 시스템 신제품 개발을 가속 있습니다. 유전자 변형 또는 생명 공학 식물 품종 미국에서 특히 전세계적으로 식량 공급 입력 미국 식품 및 의약품 안전 청 '실질적 동등성'을 전제로 규제와 premarket 신고 절차 및 자발적인 라벨 지침을 개발 했다. 일본의 보건 장관, 노동, 복지 생명 공학 제품을 규제 하 고 생명 공학 라벨링 규정을 부과 했다. 그러나, 유럽 연합 회원국 간의 규제 시작 해 계속 하 고 제안 된 엄격한 추적 및 라벨링 지침. 이러한 요구 사항은 현재 bioengineered 식품의 수입을 제한 하 고 국제적인 논쟁을 만들 수 있습니다. 우리의 지식 bioengineered 식물 품종 달리 아무의 변종 젖 산 박테리아 초보 문화 시장에서 Rdna를 포함 하는 있다. 대부분 종자의 선택과 mutagenesis 통해 향상 되었습니다. 그러나, 활용 및 electroporation 네이티브 lactococcal 살 균 소 저항 플라스 미드 산업 계통에 전송에 사용 되었습니다. 또한, plasmids 다양 한 특정 특성에 대 한 수 있도록 도입 되었습니다 다음 치료에 의해 제거 되었습니다. Bioengineered 식품의 잠재적인 혜택까지 도달 하 고이 세기의 가장 중요 한 기회 중 하나입니다. 그러나 bioengineered 식품 세계 무역에 영향을 주지는 감정적인 토론을 유지.

Lactococcus Lactis 감염 두 Prolate 향하고 페이지의 호스트 행렬식의 식별

호스트 결정에 대 한 책임이 유전자 Lactococcus lactis의 c2 종 감염 종자의 두 prolate 향하고 bacteriophages에서 확인 되었다. 호스트 결정 유전자의 id는 다른 호스트 범위 prolate 향하고 페이지 사이의 특정 열려있는 독서 프레임 (ORF)에서 낮은 DNA 시퀀스 homology를 기반으로 합니다. 호스트를 플라스 미드에 대 한 살 균 소 로부터이 ORF 들고 다른 살 균 소 감염 되었다, 우리는 10(-7)에 10(-6)의 주파수 범위에서 변경 된 호스트 페이지 얻은. 살 균 소의 시퀀싱 DNA 10 독립적인 단일 플 라크에서 발생 하는 확인 하는 유전자 재조합 플라스 미드에 ORF와 감염 살 균 소 간에 다양 한 위치에 자리를 차지 했다. 그들의 세균성 호스트에 재조합 형 페이지의 흡착 또한 일치 하는 ORF의 살 균 소 원산지를 변경 했다. 따라서, 그것은이 ORF 호스트 범위 결정에 대 한 코드 결론 이다.

과제 때 산업 긴장에 Lactococcus 실험실 긴장에서 전송 하는 기술

많은 유전자 변형된 Lactococcus 종자 연구소는 세계 각국에서 건설 되었습니다. 대부분의 실험실 종자에서 유래 하 고 따라서 여러 장벽을 산업 환경에서 사용 하는. 실험실 긴장 되며 종종 플라스 미드 무료 결과적으로 락 및 Prt, 우유에 성장할 수 없습니다 그들을 렌더링 합니다. 자주 사용 하는 기술의 많은 실험실 변종에 대 한 최적화 되었습니다 및 산업 계통에 자신의 응용 프로그램 많은 노력을 요구할 수 있습니다. 종종 유전자 변형된 생물체는 실험실에서 생산 ' 음식 등급 ' (요한센, 1999, 식품 미생물학, 아카데미 프레스, 런던, 페이지 917-921 백과 사전)의 게시 된 정의 적합 하지 않다 이며 많은 노력 바람직하지 않은 DNA 시퀀스를 제거 하는 데 필요한. 그 결과, 그것은 종종 과학 문헌에서 설명 하는 혁신 실제 낙농 산업에 적용할 수 있습니다 전에 산업 배경에서 긴장을 재현 하는 데 필요한.

길고 구 불 구 불도 연구 실험실에서 유산 균의 산업 응용 프로그램에

연구 혁신 대학, 연구 기관 및 산업 연구소에서 끊임없이 일어나 고 있다. 이들은 과학 문헌에 보고 하 고 직접적인 접촉과 협력을 통해 뿐만 아니라 다양 한 학술 대회 및 심포지엄에서 과학계를 제시. 그러나 이러한 연구 결과의 산업 상 유용한 혁신 변환은,, 상당히 더 복잡 한 보다는 일반적으로 감사 합니다. 대 한 센/S에서 두 최근의 사례와 산업 응용을 연구 실험실에서 길고 구불구불한도 그림 것입니다: Lactococcus lactis 및 L. lactis 변종 재조합 DNA 기술을 사용 하 여 건설의 시장에 소개 하 여 호흡에 따라 새로운 생산 기술의 산업 규모에 구현 합니다.

재조합 낙 타 Chymosin의 소 하 고 낙 타 우유의 응고에 대 한 우수한 속성을 보여준다

치즈 제조에 대 한 효소 우유 응고 aspartic 산 성 단백질에 의해 카파 카 세 인에서 scissile 결합의 절단을 포함 한다. 소 chymosin 일반 단백질 저조와 강한 응고 활동을 결합 하 여 원하는 효소입니다. 현재의 연구에 우리 보고서 식 및 누 니제르에 표현 된 재조합 낙 타 chymosin의 효소 속성. 낙 타 chymosin 소 chymosin 보다 다른 특성을가지고 표시 했다. 낙 타 chymosin 소 우유 70% 더 높은 응고 활동을 전시 하 고 있으며 소 chymosin에 대 한 불특정 프로 테아 제 활동의 20%. 그 결과 일반 단백질 활동에 응고의 칠 배로 높은 비율. 효소는 소 chymosin 보다 더 내. 운동 분석 반-채도 소 chymosin에 필요한 기판의 50% 미만으로 이루어집니다 그리고 이직 률 낮은 보였다. 소 chymosin와 원시 낙 타 우유를 응고 수 없습니다, 하는 동안 높은 응고 활동 낙 타 chymosin와 함께 발견 됐다.

점점 높은 Heme에 (OD)

적응 및 응답 Bifidobacterium Animalis 나무 Lactis의 담 즙: Proteomic 및 생리 적 접근

담 즙 염은 소화와 다이어트의 소수 성 구성 요소의 흡수를 촉진 하는 천연 세제. 그러나, 그들의 amphiphilic 자연 박테리아에 대 한 매우 억제 하 게 하 고 강력 하 게 위 장병 요로에 세균 생존에 영향을 미칩니다. 그러므로 적응 하 고 담 즙 스트레스의 내성 박테리아 인간의 저 승의 틈새 시장에서의 지 속성에 대 한 결정적 이다. Bifidobacterium animalis 나무 lactis, 문서화 된 건강 혜택, probiotic 박테리아 발효 유제품에 주로 적용 됩니다. 이 연구, B. animalis 나무 lactis IPLA 4549의 proteomes에 담 즙 염의 효과와 그것의 담 즙 내성 파생 2. 담 즙 소금 응답 및 B. animalis 나무 lactis에 적응 대상을 나타내는 단백질의 식별으로 이어지는 animalis 나무 lactis 4549dOx 분석 했다. 야생-타입 및 담 즙 저항 스트레인 응답의 비교 및 B. animalis 나무 lactis에서 담 즙 소금 응답 파생 저항 하는 긴장에 의해 인수 저항 메커니즘에 대 한 가설을 수 있었습니다. 또한, 상당한 차이가 bifid 션트의 대사 최종 제품의 수준 및 세포의 redox 상태 또한 검색 된, 하는 약간의 차이 proteomes 사이 관찰을 연관. 이러한 결과 적응 및 B. animalis 나무 lactis에 담 즙에 대 한 응답 셀의 생리학에 담 즙의 해로운 영향을 줄이기 위해 전용 공동으로 여러 가지 생리 적 메커니즘을 포함을 나타냅니다.

연쇄 상 구 균 Thermophilus 코어 게놈: 47 종자의 비교 게놈 교 잡 연구

공개적으로 사용 가능한 시퀀스에서 2200 유전자를 기반으로 하는 DNA microarray 플랫폼 연쇄 상 구 균 thermophilus 위한 것 이었다. 우리 65-75 메 oligonucleotide 조사에 어떻게 단일 뉴클레오티드 polymorphisms 결정 시퀀스에 영향을 교 잡 신호. Microarrays는 다음 47 낙농 S. thermophilus 긴장의 비교 게놈 교 잡 (CGH)에 사용 되었다. 각 스트레인에 exopolysaccharide 유전자의 분석 확인 이전 연구 결과 유전자의이 클래스는 실제로 매우 변수입니다. Phylogenetic 트리 CGH 데이터를 기반으로 비슷한 거리 S. thermophilus 내에서 자주 재조합 하거나 유전자 전송을 나타내는 대부분의 변종에 대 한 보였다. Microarrays 펄스 분야 젤 전기 이동 법에서 추정 하는 게놈 크기를 비교 하 여 각 스트레인에 알 수 없는 DNA의 양을 추정 되었다. 모든 47 변종에서 1271 유전자로 구성 된 핵심 게놈 확인 되었다. 마찬가지로, 집합 noncore 유전자만 일부 변종에 감지 확인 되었다. 산업 핵심 게놈의 개념을 제안 했다. 이 코어 게놈에서 유전자 플러스 적용 산업 컨텍스트에서 필요한 유전자 구성 됩니다.

프로 Plasmodium Falciparum 시스테인 테아 Falcipain 2, Falcipain 3의 헤모글로빈 분열 Site-specificity

프로 Plasmodium falciparum 시스테인 테아 falcipain 2, falcipain 3 기생충 단백질 합성에 대 한 무료 아미노산을 제공 하기 위해 호스트 헤모글로빈 저하. 헤모글로빈 가수분해 aspartic 프로 테아 제에 의해 시작 순서가 지정 된 과정을 설명 했다 하지만 시스테인 프로 테아 제 저 해제 완전히 차단 프로세스를 제안 하는 시스테인 프로 테아 헤모글로빈 가수분해를 시작할 수도 있습니다. Falcipains의 특정 역할의 특성, 세 가지 방법을 사용 하 고. 첫째, 임의 P(1)-를 사용 하 여 P(4) 아미노산 기판 라이브러리, falcipain 2, falcipain 3 시연 분열 사이트 P(2) 위치에 레 우에 대 한 강한 선호. 둘째, 펩 티 드를 겹치는 알파 및 beta globin 및 베이스 종속 (18) O 라벨링가 수 분해 분열 사이트에서 본는 스패닝. 셋째, 그대로 헤모글로빈과 수많은 분열 제품 확인 되었다. 우리의 결과 헤모글로빈 제안 말라리아 기생충에 의해 가수분해 되지 매우 정렬 된 과정 이지만 오히려 신속 하 게 분열 된 여러 사이트에서 falcipains에 의해 진행 됩니다. 그러나, falcipain 2, falcipain 3 미리 확인 하는 최적화 된 작은 분자 억제제에 특이성 동의 작은 펩 티 드 기판에서 P(2) 레 우에 대 한 강한 특이성을 보여준다. 이러한 결과 일치 falcipain 2의 주 역할 및 falcipain-3, P. falciparum 및 말라리아 요원으로 최적화 된 특이성으로 작은 분자 억제제 개발의 가능성과 함께 헤모글로빈의 가수분해에서.

7SK SnRNP/P-TEFb 커플 대체 접합으로 전사 신장 및 척추 개발을 위해 필수적 이다

진 핵 유전자 발현은 일반적으로 RNA 중 합 효소 II (RNAPII)의 하 전사 개시 이후에 일시 중지 수준에서 제어 됩니다. 전사 신장 7SK 작은 핵 ribonucleoprotein (7SK snRNP) 내에서 억제 하는 긍정적인 전사 신장 인자 b (P TEFb) 니 하 여 자극 이다. 그러나, 속 고 7SK Snrnp의 기능적 중요성 제대로 이해 남아 있다. 여기에서, 우리는 LARP7, BCDIN3, 및 noncoding 7SK 작은 핵 RNA (7SK)은 형성 및 세포 스트레스 방지 코어 7SK Snrnp의 안정성에 대 한 중요 한 보고 합니다. 우리의 기능 연구 보여 그 7SK Snrnp만 뿐만 아니라 사전 Mrnas의 대체 접합 규제에 대 한 전사 율을 제어 하기 위한 중요 하지 않습니다. 과도 식 접합 분석 결과 사용 하 여, 우리는 7SK snRNP 해체 촉진 P TEFb, Ser2 phosphorylated (Ser2 P) RNAPII를 minigene에 접합 계수 SF2/ASF의 증가 인을 통해 대체 exon의 포함 찾으십시오. 중요 한 것은, zebrafish 태아에 있는 larp7 또는 bcdin3 orthologues 최저의 7SK destabilizes 그리고 심각한 발달 결함의 원인 및 성적 분석의 탈 접합. 이러한 연구 결과 대체 접합으로 전사 신장 커플링에 P Tefb에 대 한 중요 한 역할을 계시 하 고 유지 하는 핵심 7SK snRNP 척추 개발을 위해 필수적 이다는 것이 좋습니다.

다중 사이트 평가 정밀도 및 플라즈마에 단백질의 여러 반응 모니터링 기반 측정의 재현성

후보 바이오 마커의 확인 대상 단백질의 선택적인 검출을 위한 최적화 된 특정, 양적 분석 실험에 의존 하 고 점점 발견에 중요 한 단계 파이프라인 전 임상 유효성 검사를 그 다리 편견된 biomarker 발견으로 볼. 비록 여러 반응 모니터링 (MRM) 동위 원소 희석 질량 분석으로 결합 된 개별 실험실 입증 후보 단백질 바이오 마커의 플라즈마, 재현성 및 연구소 간의 이러한 분석 실험의 양도 증명 되지 계량 수 있습니다. 재현성, 복구, 선형 동적 범위와 감지의 한계를 평가 하기 위해 multilaboratory 연구를 설명 하 고 정량화의 다중화, MRM 기반 분석 실험, NCI CPTAC에 의해 실시. 일반 자료 및 표준화 된 프로토콜을 사용 하 여 보여 줍니다 이러한 분석 실험 실험실 및 악기 플랫폼에 걸쳐 높은 재현 될 수 있으며 unfractionated 플라즈마 낮은 낯 짝/ml 단백질 농도에 민감합니다. 데이터 및 벤치 마크는 개별 실험실 수 그들의 성능을 비교 하 고 플라즈마의 biomarker 검증에 대 한 새로운 기술을 평가 하 게 해 드립니다.

Osteocalcin 발기인의 진압으로 TRPS1 GATA 요소의 Id입니다

단백질 osteocalcin 마우스 osteocalcin 발기인의 OSE2 시퀀스에 바인딩된 proteomic 분석 osteocalcin 전사의 레 귤 레이 터로 trps1를 확인. TRPS1 유전자의 변이 골격과 craniofacial 이상이 특징입니다 인간의 tricho rhino 골 증후군에 대 한 책임. TRPS1 규제 발기인 시퀀스 GATA 합의 바인딩 사이트에 포함 된 바인딩 및 chondrocyte 분화에 관련 된 유전자의 전사를 주체 할 수 표시 되었습니다. 여기 우리는 TRPS1 runx2의 존재 유무에 osteocalcin 발기인을 바인딩할 직접 수 보여줍니다. TRPS1 osteocalcin 유전자의 근 위 발기인에 GATA 바인딩 순서를 통해 바인딩합니다. GATA 바인딩 사이트 위치 및 방향을 하지는 않지만 쥐 인간과 쥐에 보존 됩니다. 마우스 또는 인간의 GATA 바인딩 시퀀스의 돌연변이 되어있는 osteocalcin 발기인에 trps1의 바인딩. 우리 trps1은 다리 셀 및 기본 마우스 골 수 기질 세포에서 osteoblast 분화의 유도 따라 표현 되 고 TRPS1 osteocalcin 두 셀 형식에 표현 규제를 보여줍니다. TRPS1 식 변조 osteoblast 세포 분화에 mineralized 뼈 매트릭스 형성. 이러한 데이터 역할을 위한 제안 TRPS1 osteoblast 분화에 또한 chondrogenesis에는 앞에서 설명한 역할과.

냄비 감미료: Glycosylation Biomarker 검색 방정식에 추가 합니다

암 셀의 glycosylation 기계를 포함 하 여 유전자 발현에 지대한 효과가 있다. 따라서, 종양 oligosaccharides 현저 하 게 다른 정상 세포에 의해 생산 하는 동일한 단백질 구조를 전달 하는 glycoproteins를 생성 합니다. 단일 단백질 단백질 백본에 그들에 비해 생성 신호를 크게 증폭 많은 glycosylation 사이트를 가질 수 있습니다.

Bifidobacterium Animalis 나무 Lactis BB-12, 널리 이용 된 Probiotic 스트레인의 게놈 시퀀스를 완료 합니다

Bifidobacterium animalis 나무 lactis BB 12은 다양 한 기능성 식품의 세계에 걸쳐 사용 되는 상업적으로 유효한 probiotic 스트레인 및 식이 보조 제. BB 12 혜택 다양 한 독립 임상 시험에서에서 문서화 되었습니다. 완전 한 게놈 시퀀스의 보여준다 1,942,198의 단일 원형 염색체 1642 예측된 단백질 인코딩 유전자, operons, rRNA 4, 52 tRNA 유전자와 혈압. 지식의이 시퀀스는 줄이 긴장 probiotic 속성을 특정 기능에 대 한 통찰력으로 이어질 것입니다.

심문 Exogenous Glycosyltransferase 유전자 적 접근에서의 기질 특이성을 대장균 O-항 원 Lipopolysaccharide 생 합성 통로 활용 하 여

이전 작품에서 우리의 실험실 exogenous lipooligosaccharide 합성 유전자 (lsg) Haemophilus 형에서를 포함 하는 플라스 미드와 변형 대장균 소설 chimeric lipopolysaccharides (LPS)을 생성 합니다. 이러한 소설 올리고 당 LPS 키메라의 분석 lsg 로커 스 내에서 여러 가지 상 glycosyltransferase 유전자에 의해 생성 된 탄수화물 구조 특성 허용. 여기, 우리가 구성 개별 glycosyltransferases 단독 및 조합 합성 속성 공부 모듈식 접근 하이 전략 적응. 이 위해 식 집합이 벡터 lsg 로커 스에서 1 ~ 4 상 glycosyltransferase 유전자를 포함 lsgC F 대장균 k12로 변모 했다 (XL-1)는 LPS O-항 원 생 합성에 결함이 있는 것입니다. 이 전략은 헤 형 유전자 제품 lsgG uridine diphosphate-undecaprenyl N-아 세 틸-글루코사민 (GlcNAc)와 WecA 종속 O-항 원 합성 경로에서 못쓰게 하 여 E. 콜라가 LPS 생 합성 결함을 부분적으로 구출 모든 플라스 미드 구문에 포함에 의존 했다. 이 GlcNAc undecaprenyl 다음 변환 된 glycosyltransferases에 의해 더 탄수화물 확장 수락자 기판 역임. 결과 LPS 연결 chimeric glycans 그들의 대장균 구문 으로부터 격리 되었고 특징 질량 분석, 메 틸 화 분석 및 효소 연결 된 immunosorbent 분석 실험. 이러한 구조적 데이터 개별 유전자에 명확 하 게 할당 될 다양 한 glycosyltransferases의 특이성을 허용. LsgF 터미널 GlcNAc galactose (Gal)을 전송 발견 됐다. Lsge는 Gal GlcNAc GlcNAc 전송 발견 하 고 LsgF 및 LsgD GlcNAc Gal GlcNAc 지만 서로 다른 결합 특이성 Gal 전송을 발견 했다. 이 방법은 일반화 하 고 쉽게 공부 상 또는 새롭거나 다른 glycosyltransferases의 기질 특이성에 맞게 수 있습니다.

Lectin 선호도 워크플로 인간의 플라즈마 트립 신 소화에서 Glycosite 관련, 암 관련 탄수화물 구조를 대상으로 합니다

Glycans는 발달 하는 동안 변조 셀 유형별, posttranslational 단백질 수정 및 질병 프로세스. 이와 같이, glycoproteins는 매력적인 biomarker 후보. 여기, 우리가 특정 glycan 구조를 전달 하는 단백질을 풍부 하 게 lectin 친화성 크로마토그래피 통합 질량 분석 기반 워크플로 설명 합니다. Sialylation 및 fucosylation의 증가 암 관련 수정 중 눈에 띄는, 우리 Sambucus nigra agglutinin (SNA) 및 Aleuria (AAL) aurantia lectin sialic 산 고 fucose 포함 된 구조를 각각 바인딩할 lectins에 초점을 맞춘. 인간의 lactoferrin 긍정적인 컨트롤 및 효 모 당화 부정적인 컨트롤 역임에서 높은 스 구조에서에서 Fucosylated 및 sialylated glycopeptides. 표준 건강 한 기증자 로부터 여러 선호도 제거 시스템 (화성) 14 고갈, 트립 신 소화 인간의 플라즈마로 아군 했다. 샘플 lectin 열에 로드 된 HPLC에 의해 구분 하는 흐름을 통해 하 고 바운드 분수에 및 펩 티 드로 치료: N glycosidase F glycans N 연결을 제거 합니다. Deglycosylated 펩 티 드 분수 ESI HPLC-MS/MS에 의해 심문을 했다. 우리 총 122 인간의 플라즈마 glycoproteins 247 고유한 glycosites를 포함 하는 확인. 중요 한 것은, 관찰 된 glycoproteins (예를 들어, cadherin 5와 호 gelatinase 연결 lipocalin)의 몇 가지 일반적으로 밀리 레벨 당 낮은 나노 그램에서 플라즈마에서 순환. 함께, 이러한 결과 암 biomarker 검색 파이프라인으로 lectin 분리 플랫폼을 통합의 유틸리티의 질량 분석 기반 증거를 제공 합니다.

항균 성 저항 유전자와 게놈 시퀀싱을 통해 독성 요인에 대 한 심사

2 세대 게놈 시퀀싱 및 맞춤 silico 유전자를 포함 하는 항균 성 저항 및 독성 인자 유전자에 게 결과 읽기 사용 했던 28 변종 인간 영양 학에 사용 될 수 있는 원하지 않는 유전자에 대 한 화면으로. 여러 격리 항균 성 저항 유전자를 포함 하는 동안 아무런 독성 인자 유전자 발견 되었습니다.

 K/Cdk12 복잡 한 DNA 손상 반응 유전자의 표현 규제를 통해 게놈 안정성을 유지합니다

다양 한  종속 키 (Cdk) 단지 필 사 규정에 연루 되어. 이 연구에서 우리는 70 kDa  K (CycK) Cdk12 및 Cdk13 인간 셀에서 두 개의 다른 단지 (CycK/Cdk12 또는 CycK/Cdk13)를 형성 하는 식별. CycK/Cdk12 복잡 한 식 microarrays 공개 Ser2 RNA 중 합 효소 II의 C-터미널 도메인 및 인간 유전자의 작은 하위 집합의 표현의 인 산화를 조절 합니다. CycK/cdk12의 고갈 exons의 높은 숫자와 함께 주로 긴 유전자의 감소 식에서 발생합니다. 아래로 유전자의 가장 눈에 띄는 그룹은 게놈 안정성의 중요 한 레 귤 레이 터를 포함 한 DNA 손상 반응 유전자: BRCA1 (유방암 및 난소 암 1 민감성 단백질 1 입력), ATR (운동 실 조 증 telangiectasia Rad3 관련), FANCI, 및 FANCD2. 우리는 CycK/Cdk13, 보다는 오히려 그 CycK/cdk12는 그들의 식에 대 한 필요를 보여줍니다. 핵 실행 분석 실험 및 RNA 중 합 효소 II BRCA1 및 FANCI 유전자와 chromatin immunoprecipitations 제안 CycK 부재의 transcriptional 결함 / CycK/Cdk12 자발적인 DNA 손상을 유발 하 고 다양 한 DNA 손상 에이전트에 민감 하지 않고 Cdk12. 이러한 연구 결과와 일관 된 세포. 우리는 DNA 손상 반응 유전자의 표현 규제를 통해 CycK/Cdk12 genomic 불안정성에서 셀 보호는 결론. 생물 생체 조건에 대 한 Cyck의 필수적인 역할은 추가 지원 결과 의해 쥐에서 Cyck의 그 유전 비활성화 하면 초기 배아 치 사 율.

Lectin 크로마토그래피/질량 분석 검색 워크플로 공격적인 유방암의 상 Biomarkers를 식별합니다

화면 조절 lectin 크로마토그래피/MS 기반 접근을 사용 하는 우리 (덜 공격적) luminal 패널에서 매체와 트리플 음수 (공격적인) 유 방 암 세포 라인 (n = 5/하위 형식). 샘플은 fractionated lectins Aleuria aurantia (AAL) 그리고 Sambucus nigra agglutinin (SNA)를 사용 하 여 각각 fucose와 sialic 산을 인식 하는. 바운드 분수 enzymatically N deglycosylated 되었고, LC-MS/MS로 분석 했다. 총에서 533 glycoproteins ~ 90%는 했다 셀의 구성 요소 식별 표면 또는 세포 외 매트릭스. 1011 독특한 glycosites는 100 ≥3 트리플 부정적인 라인에서 발견 된 전적으로 관찰 합니다. 통계 분석 이러한 glycosites 수 트리플 부정 관련 하 고 따라서이 종양 하위 형식에 대 한 잠재적인 바이오 마커의 했다 제안 했다. RNAseq 데이터의 분석 약 트리플 luminal 셀 라인, 대 음수에 upregulated 있 었 절반 잠재적인 biomarker glycosites 운반 단백질 건설 기계 임대 인코딩 mRNAs 인코딩 fucosyl 또는 sialyltransferases 유전자의 수 변경 glycosylation 후보 식별을 구동할 수 있습니다 제안 하는 두 하위 사이 차동 표현 했다 밝혔다. 특히, 이러한 상 biomarker 후보 파생 된 glycoproteins 암 관련 프로세스에 관련 된. 따라서, 그들은이 공격적인 종양 하위에 대 한 새로운 치료 목표를 나타낼 수 있습니다.

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