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Articles by Felix Ellett in JoVE
JoVE Immunology and Infection
L'infezione di embrioni di zebrafish con batteri patogeni intracellulari
1Department of Molecular Cell Biology, Institute of Biology, Leiden University, 2Department of Medical Microbiology and Infection Control, VU University Medical Center, 3Australian Regenerative Medicine Institute, Monash University
Embrioni di zebrafish trasparente si sono dimostrati padroni di casa modello utile per la visualizzazione e lo studio delle interazioni funzionali tra cellule immunitarie innate e batteri patogeni intracellulari, come ad esempio
Other articles by Felix Ellett on PubMed
Il Ruolo Dell'erg Fattore ETS in Zebrafish Vasculogenesi
Erg, un membro della famiglia di fattori di trascrizione ETS è stata coinvolta da precedenti studi in endoteliale e sviluppo ematopoietica. Deregolamentazione del locus ERG umano è associato con la leucemia mieloide acuta, il cancro alla prostata e sarcoma di Ewing. Per comprendere meglio il ruolo di Erg durante lo sviluppo iniziale, abbiamo utilizzate il zebrafish come modello assoggettabile a studi descrittivi e funzionali in vivo. Zebrafish hanno un gene unico erg che si esprime nel mesoderma e suoi derivati vascolari durante la migrazione angioblast, vasculogenesi e angiogenesi precoce. Analisi di espressione mutante e morphant collocati erg in un percorso genetico a valle della cloche, tal1/scl ed etsrp durante la migrazione di angioblast precoce. Inoltre, una combinazione di studi guadagno di funzione e di perdita della funzione ha suggerito un ruolo specifico ancora ridondante per erg angioblast specifica/proliferazione sia l'angiogenesi precoce e un'interazione sinergica con l'ETS critico fattore etsrp.
Zebrafish Come Modello Per Vertebrati Ematopoiesi
Il Danio zebrato (Danio rerio) è un organismo modello contributi utili in molti settori della ricerca biologica. Zebrafish si sono dimostrati particolarmente adatti per studiare lo sviluppo precoce. La trasparenza ed ex vivo sviluppo di embrioni di zebrafish significa che presto embriologia può essere facilmente visualizzato, soprattutto utilizzando ceppi transgenici che esprimono fluorofori marcatura tessuti di interesse. Alta fecondità e tolleranza di mutagenesi densa hanno reso un modello pratico per screening genetico avanti e la creazione di librerie mutagenized da cui stabili alleli mutanti possono essere recuperati. Manipolazione genetica transitoria dal microinjection di mRNA (iperespressione) o oligonucleotidi antisense oligonucleotides (atterramento) forniscono metodi convenienti per la valutazione funzionale genetiche vie regolarici senza la necessità di strategie di allevamento estesa. Un esempio di standout dell'utilità di questo modello è stata l'applicazione di modellazione delle prime fasi dell'emopoiesi. Zebrafish ematopoiesi developmental Mostra stretta corrispondenza con lo sviluppo dei mammiferi, del sistema ematopoietico e viene regolata da conservato pathways molecolari. Questa recensione mette in evidenza chiavi recenti studi che hanno utilizzato questo modello per fornire intuizioni vertebrato sviluppo ematopoietico e l'immunità innata.
MPEG1 Promotore Transgeni Diretta Espressione Dei Macrofagi-lineage in Zebrafish
Macrofagi e neutrofili svolgono un ruolo importante durante la risposta immunitaria innata, invadendo i microbi phagocytosing e consegna composti antimicrobici per il sito di lesione. Analisi funzionale della risposta immunitaria innata cellulare in modelli di infezione/infiammazione di zebrafish sono state aiutate da linee transgeniche con neutrofili fluorophore-contrassegnato. Tuttavia, non è possibile studiare comportamenti dei macrofagi e neutrofili/macrofagi interazioni in vivo direttamente perché non c' non è stata nessuna linea reporter solo macrofago. Per rimuovere questo ostacolo, un marcatore specifico del macrofago è stato identificato (mpeg1) e relativo promotore utilizzato in mpeg1-driven transgeni. MPEG1-driven transgeni sono espressi nelle cellule di macrofago-lignaggio che non esprimono transgeni neutrofili-marcatura. Usando queste linee, i diversi comportamenti dinamici di neutrofili e macrofagi dopo ferendo erano rispetto side-by-side in composti transgenica. Interazioni di neutrofili/macrofagi, come la fagocitosi dei neutrofili senescenti, prontamente sono state osservate in tempo reale. Questi transgeni zebrafish forniscono una nuova risorsa che contribuirà ai campi dell'infiammazione, infezione e biologia dei leucociti.
Visualizzazione in Vivo E L'attenuazione Dell'accumulo Di Lipidi Ossidati in Zebrafish Normocolesterolemici
Modifica ossidativa di LDL è un evento patologico precoce nello sviluppo dell'aterosclerosi. Gli eventi di ossidazione come formazione di malondialdeide (MDA) possono produrre gli epitopi specifici, immunogenici. Infatti, anticorpi anti-epitopi MDA-derivati sono ampiamente utilizzati nella ricerca di aterosclerosi e hanno dimostrato di consentire imaging cardiovascolare. In questo studio, abbiamo progettato un zebrafish transgenici con temperatura-inducible espressione di un marcato EGFP catena singola umano anticorpo monoclonale, IK17, che si lega a MDA-LDL e utilizzate le larve di zebrafish otticamente trasparente per studi di imaging. Alimentazione una dieta ad alto colesterolo (HCD) integrata con un rosso marcatore fluorescente dei lipidi per il Danio transgenico ha portato nell'accumulo di lipidi vascolari, quantificati in animali vivi mediante microscopia confocale. Dopo heat shock-indotta espressione IK17-EGFP, abbiamo misurato il corso tempo di accumulo vascolare di epitopi specifici IK17 MDA. Trattamento con una dieta di regressione o un antiossidante ha provocato riduzione IK17 associazione a lesioni vascolari. È interessante notare, omogeneati del IK17-EGFP-esprimendo le larve associato a MDA-LDL e inibiscono associazione MDA-LDL ai macrofagi. Inoltre, sostenuta espressione di IK17-EGFP efficacemente prevenute accumulo di lipidi HCD-indotta della parete vascolare, suggerendo che l'anticorpo stesso può avere effetti terapeutici. Pertanto, possiamo concludere che le larve di zebrafish HCD-alimentato con espressione condizionale di anticorpi specifici per ossidazione con etichetta EGFP permettersi un efficiente metodo di test strategie dietetiche e/o altri antiossidanti terapeutiche che in ultima analisi possono essere applicati agli esseri umani.
Morfogenesi E Patterning Contorno Mesencefalo-hindbrain Sono Regolati Da Diversi Percorsi Di 2-dipendente Testa-come Granulose
L'Organizzatore istmica che si trova presso il confine del mesencefalo-hindbrain (MHB) è il centro segnalazione cruciale dello sviluppo responsabile per la creazione di serie di regioni mesencefaliche e metencephalic del cervello vertebrato. Formazione e manutenzione il MHB è caratterizzata da un programma gerarchico dell'espressione genica iniziata dal fattore di crescita dei fibroblasti 8 (Fgf8), accoppiato con morfogenesi cellulare, che si conclude con la formazione delle strutture tectal-isthmo-cerebellare. Qui, vi mostriamo in zebrafish che uno orthologue della trascrizione fattore sgranate testa-come 2 (Grhl2), grhl2b di zebrafish svolge un ruolo centrale nella manutenzione MHB sia pieghevole regolando due percorsi distinti, non-lineare. Perdita di espressione grhl2b induce apoptosi neuronale e l'estinzione dei marcatori MHB, che vengono salvati dal riespressione della 2a engrailed (eng2a), un bersaglio evolutivamente conservato della famiglia Grhl. Co-iniezione di dosi sub-phenotypic di grhl2b ed eng2a morpholinos riproduce l'apoptosi e la perdita di marcatore MHB, ma non riesce a disturbare sostanzialmente la formazione della costrizione istmica. Al contrario, un romanzo diretto grhl2b target, spec1, identificato dall'analisi filogenetica e confermato dal ChIP, funzionalmente collabora con grhl2b per indurre la morfogenesi MHB, ma non svolge alcun ruolo nell'apoptosi o manutenzione dei marcatori MHB. Collettivamente, questi dati mostrano che la morfogenesi e manutenzione MHB sono dissociabili eventi regolati da grhl2b attraverso diversi obiettivi di transcriptional.
Computational Quantificazione Dei Numeri Del Leucocita Fluorescente in Embrioni Di Zebrafish
Transgeni fluorescenti con espressione ristretta dei leucociti sono stati essenziali per gli studi recenti, utilizzando modelli di zebrafish dell'infiammazione e della risposta immunitaria innata. Molti degli esperimenti eseguiti utilizzando questi modelli coinvolgono quantificare i cambiamenti del numero di leucociti fluorescenti. Qui, descriviamo un tool per la derivazione di una variabile quantitativa e proporzionale ai numeri del leucocita fluorescente da singolo-aereo fluorescente immagini digitali di embrioni tutto dal vivo. Il parametro, chiamato "Unità del leucocita," fornisce valori affidabili linearmente proporzionali ai numeri effettivi dei leucociti nell'intervallo 50-400 leucociti/embrione, e le sue prestazioni a più alta densità di leucocita rimane lineare. La sua utilità è dimostrato segnando cambiamenti nei numeri del leucocita seguendo la perturbazione di una via specifica dei leucociti caratterizzato.
