성인 얼룩말 피시 장 해부 : 화합물 흡수를 분석하는 기술

Overview

이 비디오는 생리 활성 화합물의 장 내 섭취를 평가하기 위해 장내를 격리하는 기술을 설명합니다. 이 샘플에서는 면역 자극제의 섭취를 분석하기 위해 성인 얼룩말피에서 내장을 분리합니다.

Protocol

1. 제브라피쉬 장 해부

1. 지정된 기간 동안 지정된 기간 동안 삽관(예를들어, 5h 및/또는 24시간) 그물을 사용하여 물고기를 300 mg/L 에틸 3-아미노벤조네이트 메탄술포네이트(MS-222) 안락사용용용으로 배치한다. 오퍼쿨룸이 움직이지 않고 꼬리 핀치 반사가 없는지 확인하십시오. 일반적으로 5분으로 충분합니다.
2. 그물로 안락사 된 동물을 집어 들고 필터 용지에 놓습니다.
   참고: 필터 용지는 내장을 따라 접착제 조직을 제거하는 데 매우 유용합니다.
3. 날카로운 해부 가위를 사용하여 항문에서 오퍼큘럼으로 반원형 절개를 하고 미세 핀셋을 사용하여 절개를 엽니다. 장의 양쪽 끝을 잘라 모든 내부 장기를 꺼내 필터 용지에 놓습니다.
   주의: 세포 대사와 죽음을 줄이기 위해 신속하게 작동합니다.
   참고: 또는 PBS와 얼음에 접착제 조직을 제거하십시오.
4. 내장을 내부 장기에서 분리하여 방향을 유지하도록 하고(전방에서 후방 장 세그먼트까지) 그것을 펴십시오. 일반적으로 장의 전방 세그먼트는 후방 세그먼트보다 넓습니다. 해부 할 때 모든 내장을 얻기 위해주의하십시오.
   참고: 후방 끝은 작은 물고기에서 매우 잘 깨지기 쉽고 특히 동물 & 0.7 g에서 분리 될 수 있습니다.
5. 내장에서 접착제 조직을 분리하기 위해 핀셋으로 필터 용지에 내장을 굴려.
6. 다양한 다운스트림 분석을 위해 장 내 준비를 진행합니다.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	powder
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Filter paper	Filter-Lab	RM14034252