Overview
Denna video beskriver tekniken att isolera tarmarna för att utvärdera tarmupptaget av bioaktiva föreningar. I detta prov kommer vi att isolera tarmarna från en vuxen zebrafisk för att analysera upptaget av immunstimulantia.
Protocol
1. Zebrafiskens tarm dissekering
- Efter en angiven tidsperiod efter intubering(t.ex. 5 h och/eller 24 timmar) placerar du fisken med ett nät i 300 mg/L etyl 3-aminobensoatmetansulfonatlösning (MS-222) för dödshjälp. Se till att operculum slutar röra sig och det finns ingen svans nyp reflex. Fem minuter är normalt tillräckligt.
- Plocka upp det avlivade djuret med ett nät och placera det på ett filterpapper.
OBS: Filterpapperet är mycket användbart för att ta bort den självhäftande vävnaden längs tarmarna. - Använd vass dissekeringssax, gör ett halvcirkel cirkulärt snitt från anus till operculum och öppet snitt med fina pincett. Skär båda ändarna av tarmarna, ta ut alla inre organ och placera dem på filterpapperet.
VARNING: Arbeta snabbt för att minska cellmetabolism och död.
OBS: Alternativt kan du ta bort den självhäftande vävnaden i PBS och på is. - Separera tarmarna från inre organ och se till att hålla orienteringen (främre till bakre tarmsegmentet) och sträck ut den. Vanligtvis är det främre segmentet av tarmarna bredare än bakre segmentet. Var noga med att få hela tarmen vid dissekering.
OBS: Den bakre änden är ganska fin och bräcklig i små fiskar och kan bryta av, särskilt hos djur <0,7 g. - Rulla tarmarna på filterpapperet med pincett för att lossa den självhäftande vävnaden från tarmarna.
- Fortsätt att förbereda tarmarna för olika nedströmsanalyser
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
| 10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
| Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |
