Overview
Bu video, biyoaktif bileşiklerin bağırsak alımını değerlendirmek için bağırsağı izole etme tekniğini açıklar. Bu örnekte, immünostimülanların alımını analiz etmek için bağırsağı yetişkin bir zebra balığından izole edeceğiz.
Protocol
1. Zebra Balığı Bağırsak Diseksiyonu
- Entübasyon sonrası(örneğin, 5 h ve/veya 24 h) belirli bir süre sonra, bir ağ kullanarak balıkları ötanazi için 300 mg/L etil 3-aminobenzoat metansülfonat (MS-222) çözeltisine yerleştirin. Operculum'un hareket etmeyi bıraktığından ve kuyruk sıkışma refleksi olmadığından emin olun. Normalde beş dakika yeterlidir.
- Ötenazili hayvanı bir ağ ile alın ve bir filtre kağıdına yerleştirin.
NOT: Filtre kağıdı, bağırsak boyunca yapışkan dokuyu çıkarmak için çok yararlıdır. - Keskin diseksiyon makası kullanarak, anüsten operculum'a yarı dairesel bir kesi yapın ve ince cımbız kullanarak açık kesi yapın. Bağırsağın her iki ucını kesin, tüm iç organları alın ve filtre kağıdına yerleştirin.
DİkKAT: Hücre metabolizmasını ve ölümü azaltmak için hızlı bir şekilde çalışın.
NOT: Alternatif olarak, yapışkan dokuyu PBS'de ve buzda çıkarın. - Bağırsağı iç organlardan ayırın, oryantasyonunu koruduğundan emin olun (ön bağırsak segmentine) ve uzatın. Genellikle, bağırsağın ön segmenti posterior segmentten daha geniştir. Parçalara ayırırken tüm bağırsağı elde etmeye dikkat edin.
NOT: Arka uç küçük balıklarda oldukça ince ve kırılgandır ve özellikle <0.7 g hayvanlarda kopabilir. - Yapışkan dokuyu bağırsaktan ayırmak için bağırsağı filtre kağıdına cımbızla yuvarlayın.
- Bağırsağı çeşitli aşağı akış analizlerine hazırlamaya devam edin
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
| 10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
| Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |
