Dissecção do intestino de zebrafish adulto: uma técnica para analisar a absorção de compostos

Overview

Este vídeo descreve a técnica de isolar o intestino para avaliar a absorção intestinal de compostos bioativos. Nesta amostra, isolaremos o intestino de um zebrafish adulto para analisar a absorção de imunoestimulantes.

Protocol

1. Dissecção do intestino de zebrafish

1. Após um período especificado de intubação pós-intubação pós(por exemplo, 5 h e/ou 24 h), coloque o peixe utilizando uma rede em 300 mg/L etil 3-aminobenzoate metanosulfonato (MS-222) solução para eutanásia. Certifique-se de que o operculum pare de se mover e não haja reflexo de pinça da cauda. Cinco minutos normalmente é suficiente.
2. Pegue o animal eutanizado com uma rede e coloque-o em um papel filtro.
   NOTA: O papel filtro é muito útil para remover o tecido adesivo ao longo do intestino.
3. Usando uma tesoura de dissecção afiada, faça uma incisão semi-circular do ânus até o operículo e incisão aberta usando pinças finas. Corte as duas extremidades do intestino, tire todos os órgãos internos e coloque-os no papel do filtro.
   ATENÇÃO: Trabalhe rapidamente para reduzir o metabolismo celular e a morte.
   NOTA: Alternativamente, remova o tecido adesivo na PBS e no gelo.
4. Separe o intestino dos órgãos internos certificando-se de manter sua orientação (segmento intestinal anterior ao posterior) e esticá-lo. Normalmente, o segmento anterior do intestino é mais amplo que o segmento posterior. Tome cuidado para obter todo o intestino ao dissecar.
   NOTA: A extremidade posterior é bastante fina e frágil em peixes pequenos e pode quebrar, particularmente em animais <0,7 g.
5. Enrole o intestino no papel do filtro com pinças, a fim de separar o tecido adesivo do intestino.
6. Prossiga para preparar o intestino para várias análises a jusante

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	powder
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Filter paper	Filter-Lab	RM14034252