Overview
Este vídeo descreve a técnica de isolar o intestino para avaliar a absorção intestinal de compostos bioativos. Nesta amostra, isolaremos o intestino de um zebrafish adulto para analisar a absorção de imunoestimulantes.
Protocol
1. Dissecção do intestino de zebrafish
- Após um período especificado de intubação pós-intubação pós(por exemplo, 5 h e/ou 24 h), coloque o peixe utilizando uma rede em 300 mg/L etil 3-aminobenzoate metanosulfonato (MS-222) solução para eutanásia. Certifique-se de que o operculum pare de se mover e não haja reflexo de pinça da cauda. Cinco minutos normalmente é suficiente.
- Pegue o animal eutanizado com uma rede e coloque-o em um papel filtro.
NOTA: O papel filtro é muito útil para remover o tecido adesivo ao longo do intestino. - Usando uma tesoura de dissecção afiada, faça uma incisão semi-circular do ânus até o operículo e incisão aberta usando pinças finas. Corte as duas extremidades do intestino, tire todos os órgãos internos e coloque-os no papel do filtro.
ATENÇÃO: Trabalhe rapidamente para reduzir o metabolismo celular e a morte.
NOTA: Alternativamente, remova o tecido adesivo na PBS e no gelo. - Separe o intestino dos órgãos internos certificando-se de manter sua orientação (segmento intestinal anterior ao posterior) e esticá-lo. Normalmente, o segmento anterior do intestino é mais amplo que o segmento posterior. Tome cuidado para obter todo o intestino ao dissecar.
NOTA: A extremidade posterior é bastante fina e frágil em peixes pequenos e pode quebrar, particularmente em animais <0,7 g. - Enrole o intestino no papel do filtro com pinças, a fim de separar o tecido adesivo do intestino.
- Prossiga para preparar o intestino para várias análises a jusante
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |