Summary
Latex agglutinasjon testing er en enkel, rask og billig metode for Serotypebestemmelse Streptococcus pneumoniae, og har også vært mye brukt i diagnostisk mikrobiologi. Dette manuskriptet beskriver in-house produksjon av latex agglutinasjon reagenser, kvalitetskontrollen og anvendelsen av denne teknikken til pneumokokk serotyping.
Introduction
Streptococcus pneumoniae (den pneumokokker) er en viktig årsak til sykelighet og dødelighet hos barn under fem år på verdensbasis, spesielt i ressursfattige innstillinger 1,2. Pneumokokksykdom varierer fra lokaliserte infeksjoner til livstruende tilstander som lungebetennelse, sepsis og meningitt 1,2.
Mer enn 90 serotyper av pneumokokker er identifisert basert på forskjeller i deres kapselpolysakkarid tre. Gjeldende vaksiner målrette kapselpolysakkarid og gi beskyttelse mot de store serotyper forårsaker invasiv sykdom fire. Serotypebestemmelse pneumokokk isolater er viktig for å vurdere effekten av vaksinering på vogn og sykdom samt gi bredere epidemiologisk informasjon 5,6. Den nåværende "gullstandard" metode for pneumokokk serotyping er Quellung test, men det er tidkrevende og krever litt dyktighet til perform 7. Latex agglutinasjon er et alternativ serotyping metoden anbefalt av Verdens helseorganisasjon 7. Latex agglutinasjon er rask og enkel å utføre, og er ansatt i mange laboratorier verden over 8-11. Viktigere, har latex agglutinasjon vist tilsvarende nøyaktighet til Quellung test for pneumokokk serotyping 10,12-14. Totalt sett er denne metoden ideell for ressursfattige innstillinger samt høy gjennomstrømning laboratorier.
Latex agglutinasjon reagenser ('latex reagenser') er laget av festingen av antistoffer til latekspartikler 15. I en positiv reaksjon, disse merkede partikler agglutinerer i nærvær av spesifikt antigen. Kommersielle latex reagenser er tilgjengelig for et begrenset utvalg av serotyper. Latex reagenser kan også være forberedt på huset ved hjelp av kommersielt tilgjengelig antisera 10. Blandinger av antisera ('pools') samt spesifikke antisera mot pneumokokk serogroups (f.eks gruppe 19), individuelle serotyper (f.eks serotype 5), og til spesifikke antigener ("faktorer", f.eks., faktor 19c erkjenner serotype 19A) for videre å definere serotyper innenfor grupper er tilgjengelige 16.
Denne manuskriptet de viktigste trinnene i fremstilling av lateks ved hjelp av reagenser passive feste av kommersielt tilgjengelige antisera til latekspartikler. De kvalitetskontroll (QC) aspekter ved denne fremgangsmåte er beskrevet, og en protokoll for anvendelse av lateks-reagenser for pneumokokk serotyping er inkludert.
Protocol
1. Utarbeidelse av in-house Latex Reagenser
- Fremstilling av glycin-bufret saltløsning (GBS)
- Tilsett 1,5 g glycin, 11,7 g natriumklorid og 100 ml destillert vann i et 200 ml begerglass.
- Bland for å løse opp ved hjelp av en magnetrører.
- Overfør blandingen til en 500 ml målesylinder og tilsett destillert vann for å lage en total på 200 ml.
- Overfør løsningen tilbake til 200 ml begerglass, kontrollere og justere pH til 8,2 med 5 M natriumhydroksyd. MERK: Natriumhydroksid er etsende, bruk personlig verneutstyr.
- Filter sterilisere løsningen ved hjelp av 0,22 uM filtere og flere 60 ml sprøyter i en 250 ml preautoclaved skruelukket glassflaske.
- Oppbevar ved RT.
- Fremstilling av GBS med 0,2% bovint serumalbumin
- Legg 0,2 g bovint serumalbumin (BSA) pulver og 100 ml GBS til et 200 ml begerglass og bland for å oppløse ved hjelp av en magnetrører.
- FilterSteriliser oppløsningen gjennom 0,22 pM filter ved hjelp av flere 60 ml sprøyter i en 250 ml preautoclaved skruelukket glassflaske.
- Oppbevar ved 4 ° C.
- Latex reagensklargjøring
- Merke en 2 ml rundbunnet micro tube.
MERK: rund bunn rør brukes for å redusere partikkel bosetting som kan påvirke antistoff vedlegg. - Ved hjelp av en P1000 pipette med sterile tips legge 975 mL av GBS i mikrosentrifugen tube, deretter legge 25 mL av passende pneumokokkantiserum for latex reagent å være forberedt (dvs. basseng, gruppe, type eller faktor). Inverter fem ganger for å blande.
- Fortynn polystyren latex-partikler 01:10 ved tilsetning av 120 pl av latekspartikler til 1080 mikroliter sterilt fysiologisk saltvann.
MERK: Dette kan gjøres i større volumer, men bør gjøres frisk hver gang latex reagenser blir produsert. - Legg 1,000 mL av 01:10 latekssuspensjon (fremstilt i trinn 1.3.3) til 1,000 mL 01:40 antiserum suspensjon (utarbeidet i trinn 1.3.2). Inverter fem ganger for å blande.
- Inkuber ved 37 ° C på et langsomt roterende hjul (f.eks, 4 rpm for et hjul på 38,5 cm i diameter) i 2 timer.
- Sentrifuger i 15 minutter ved 1100 x g. Kast supernatanten og resuspender pelleten forsiktig i 2 ml sterilt saltvann.
- Sentrifuger i 15 minutter ved 1100 x g. Kast supernatanten og tilsett 1 ml av GBS og forsiktig resuspendere pelleten.
- Pipetter lateks-suspensjonen i en merket 5 ml rør med skrukork. Legg til ytterligere 1 ml av GBS.
- Tilsett 2 ml av GBS inneholdende 0,2% BSA (w / v) (pH 8,2) (fremstilt i trinn 1.2). Legg 40 pl av 10% (w / v) løsning av natriumazid som konserveringsmiddel.
MERK: Natriumazid er farlig ved innånding, og er en hud og øyeirriterende. Det er ønskelig å kjøpe en klar 10%-løsning i stedet for den pulverform, da dette minsker risikoen for innånding. Personlig verneutstyr (inkludert hansker end beskyttelsesbriller) bør brukes ved håndtering av dette reagenset. Slå opp i HMS-datablad for detaljer. - Butikken latex reagenser ved 4 ° C.
- Merke en 2 ml rundbunnet micro tube.
- Utarbeidelse av negativ kontroll latex reagens
- Merke en 2 ml rundbunnet micro tube.
MERK: rund bunn rør brukes for å redusere partikkel bosetting som kan påvirke antistoff vedlegg. - Ved hjelp av en P1000 pipette med sterile tips legge 975 mL av GBS i mikrosentrifugen tube, deretter legge 25 pl normal kanin antiserum. Inverter fem ganger for å blande.
- Fortsett som i trinn 1.3.3 til 1.3.10 ovenfor
- Merke en 2 ml rundbunnet micro tube.
2. Quality Control (QC) av Latex Reagenser
- Ta med latex reagens til RT. Umiddelbart før bruk, forsiktig blande latex-reagens ved å snu røret flere ganger.
- Sjekk reagens for autoagglutination ved å pipettere 15 ul på et objektglass og fortsett som i trinn 4.7 og 4.8 nedenfor. Det bør ikke være engglutination av de latekspartikler. Reagensen skal vises hvit og glatt.
- Test reagent mot et panel av lav passasje pneumokokkisolatene. Bruk ferske vokst kulturer forberedt som i trinn 3. Panelet av isolater bør omfatte isolater av "mål" serotype (den spesifikke serotype for reagenset som testes) og "non-target 'serotyper (isolater av andre serotyper som ikke bør normalt krysser reagere med reagens). Omfatte minst ett isolat av hver target og ikke-target-serotype for hver latex-reagens under QC. Hvis det bare er ett mål eller ikke-target serotype, test to ulike isolater av den aktuelle serotype.
MERK: Testingen panel bør omfatte flere isolater av hver serotype, hvorav noen er uvanlig i invasiv sykdom og / eller type kultur samlinger. Det er å foretrekke å inkludere noen vogn isolerer, som de er ofte mer krevende å serotype (data ikke vist), og dermed ytterligere testing kapasiteten of de anvendte reagenser og at reagensene er sannsynligvis i stand til å serotyping både invasiv og vogn-isolater. - Fortsett med testing av lateks reagenser med target og ikke-target-pneumokokk-isolater i henhold til metoden beskrevet i trinn 3 og 4 nedenfor.
- Kvalitetskontroll reagenser ved produksjonstidspunktet og deretter minst deretter årlig.
MERK: Hvis et reagens ikke passerer QC, må sats kastes og en ny preparat laget. Ved gjentakelse QC svikt anbefales reagensene bli produsert ved hjelp av de alternative fremgangsmåter er beskrevet i Ortika et al. 2013 8 og i diskusjonen nedenfor.
3. Utarbeidelse av pneumokokk-kulturer for Serotypebestemmelse
- Ved hjelp av en steril løkke velge en enkelt koloni av pneumokokk Isoler og strek denne ut til en faststoff-selektivt blodagar, slik at den primære inokulum dekker omtrent en tredjedel av plateoverflaten. Streak for enkeltkolonier.
MERK: Plater fremstilt defibrinert hest eller saueblod er egnet; men blodplater tilberedt med humant blod eller citrat dyreblod er ikke. - Inkuber plate O / N ved 37 ° C i en atmosfære av 5% CO2.
- Observer vekst på plate for renhet og vurderer at det er tilstrekkelig vekst for serotyping.
MERK: En ren kultur av pneumokokk isolat er nødvendig for serotyping. Etter vår erfaring konfluent, eller i nærheten av sammenflytende vekst som dekker omtrent en tredjedel av plateoverflaten er vanligvis tilstrekkelig til å fullføre serotyping. Som pneumokokk kulturer kan være utsatt for autolyse, bør kulturer forberedt for serotyping testes innen 24 timer av subkulturen. Ikke ta kultur plate ut av inkubatoren mer enn 15 til 20 min før serotyping starter.
4. Gjennomføre Latex Agglutinasjon Serotypebestemmelse
- Fjern alle latex reagenser fra kjøleskapet og la dem varmes opp til romtemperatur i caimately 30 min. Umiddelbart før bruk, forsiktig invertere rør for å blande reagenser.
- Merke et objektglass.
- Plasser 15 ul negativ kontroll latex reagens på objektglass.
- Ved hjelp av en steril engangs 1 pl sløyfe ta et sveip av pneumokokk kultur slik at løkken er omtrent halvfull.
- Forsiktig smøre podestoffet på overflaten av objektglasset nær dråpe negativ kontroll latex-reagens. Inokulumet skal være synlig på glasset lysbilde.
- Raskt og grundig blande podestoff inn i den negative kontroll latex-reagens ved hjelp av sløyfen. Sørg for at fallet ikke sprer seg lenger enn sin opprinnelige størrelse.
- Plukk opp raset, holde den i begge ender. Rock slide frem og tilbake i 1 min. Vær nøye med å holde væsken beveger seg sakte, og sørge for at størrelsen på fallet ikke øker.
MERK: Alternativt kan du bruke en plate rocker. - Observere for makroskopisk agglutinasjon (dvs. etterblotte øye), og avregning av suspensjonen mot en svart bakgrunn.
- Hvis den negative kontrollen latex reagent viser ingen agglutinasjon eller clearing fortsette å teste kultur, å erstatte test latex reagenser for den negative kontrollen latex reagens i trinn 4.1 til 4.8 ovenfor. En frisk sløyfe må benyttes hver gang. Fortsett med testing av latex reagenser som starter med bassengene.
- Test hver av de "pool" lateks reagenser i rekkefølge inntil en positiv prøve er oppnådd.
MERK:. Rekkefølgen av testing av bassengene kan gjøres i 'runder' for å reflektere den lokale forekomsten av bestemte serotyper (for eksempel ved å teste for de tre mest sannsynlige bassengene på det første lysbildet Hvis en positiv reaksjon ikke er oppnådd, deretter test de neste tre mest sannsynlige av de gjenværende bassenger på den andre glider, og så videre inntil en positiv reaksjon er oppnådd). Dette sikrer at de mest vanlige serotyper testes først, noe som minsker tiden og reagenser nødvendig. - Ved hjelp av antisera produsentens nøkkel bestemme hvilke individuelle antisera er representert i positiv bassenget.
- Test hver av de grupper eller typer som finnes i den positive bassenget individuelt for å bestemme 'gruppe "eller" type' som i trinn 4.1 til 4.8 ovenfor.
- Bestem resultatet med referanse til antisera produsentens nøkkel. Hvis en 'type' bestemmes (f.eks serotype 5), så ingen ytterligere testing er nødvendig, og dette resultatet er registrert.
- Hvis en 'gruppe' bestemmes (f.eks, gruppe 19), deretter referere til produsenter nøkkelen for å fastslå hvilke faktorer som skal testes. Fortsett testing med de enkelte "faktor 'latex reagenser og avgjøre den endelige serotype (f.eks serotype 19B).
Representative Results
En positiv reaksjon inntreffer når latex type-spesifikt antistoff festet til latex partikler bindes til kapselen av pneumokokker, og agglutinering av antistoffmerkede partikler følger 15. Figur 1A viser en positiv reaksjon som er karakterisert ved synlig agglutinasjon og avregning av bakgrunnen suspensjon. En negativ reaksjon er karakterisert ved at lateks-agglutinasjon reagens suspensjon værende jevn og hvit (figur 1B). Reagensene er optimalisert slik at en positiv reaksjon bør observeres før slutten av den ett minutt tidsintervall (vanligvis påvises i omtrent 20 sek). Vi anbefaler ikke å lese reaksjoner etter 1 min tidsintervall. En sjelden gang, reaksjoner vise svak agglutinasjon rundt kanten av dråpen som ikke er ledsaget av clearing av bakgrunnen suspensjon, eller synes "trevlet" med ingen bakgrunn clearing (data ikke vist). Disse er mest lik ly negative reaksjoner. I slike tilfeller anbefaler vi retesting og / eller videre undersøkelser ved hjelp av en annen serotyping metode (for eksempel Quellung reaksjon 17).
Figur 1. Positive og negative latex agglutinasjon reaksjoner. Preparater av et pneumokokk-isolat blandes med latex agglutinering reagens som viser en positiv reaksjon (A), eller en negativ reaksjon (B). Agglutinasjon fulgt av fjerningen av bakgrunnen er sett i positiv reaksjon (A) .Det er ingen synlig agglutinering med det negative kontroll latex-reagens eller i en negativ test reaksjon (B). Fotografier 8 brukes med tillatelse."Target =" _blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Discussion
Latex agglutinasjon er en enkel, rask og billig metode for pneumokokk serotyping. Kommersielle pneumokokk latex agglutinasjon reagenser er tilgjengelige, men de for tiden ikke skille alle kjente pneumokokkserotypene 10,12. Imidlertid kan latex agglutinasjon reagenser være lett produsert i huset ved hjelp kjøpt antiserum mot spesifikke pneumokokkkapsel antigener. I fremgangsmåten som er beskrevet her, blir antistoffer passivt festet til latekspartiklene for å lage et sett av lateks agglutinasjon reagenser.
En positiv latex reaksjon oppstår når spesifikke antistoffer bundet til latekspartikler fester seg til antigener på polysakkaridet kapsel av pneumokokk isolere 18,19. Lateks-partiklene festet til antistoffene tillate det spesifikke antistoff-antigen-reaksjon bli visualisert uten forstørrelse.
Latex agglutinering er en egnet metode for høy gjennomstrømning laboratorier end også for ressursfattige innstillinger. Viktige fordeler ved latex agglutinering metoden er at det ikke spesialutstyr er nødvendig for å utføre testen, reagenser har en lagringstid på minst 2 år når de lagres ved 4 ° C til 8, og at det er billig, enkel og rask å utføre. Serotypebestemmelse en pneumokokk isolat av latex agglutinasjon tar ca 10 min, og opp til fire latex reagenser kan testes parallelt på den ene lysbildet. Videre, hvis prevalens av serotypene som er kjent for den aktuelle epidemiologisk innstilling, testing kan utføres i runder starter med puljer inneholdende de mest vanlige serotyper tilsvarende for Quellung test 17. Denne tilnærmingen reduserer antall tester for å bestemme serotype. Fremgangsmåten er også svært reproduserbare mellom ulike operatører (data ikke vist). En ulempe med latex agglutinering serotyping er at fremstilling av reagensene er tidskrevende, tar omtrent 4 timer; selv om flere reagensNTS kan lett bli produsert parallelt. Videre har en del antigenene er vanlige på tvers av forskjellige pneumokokkserotypene, noe som resulterer i kryssreaksjoner med noen antisera (som serotype 29, 42 og gruppen 35). Imidlertid er disse kryssreaksjoner godt karakterisert ved bruk av kommersielle antisera (som vanligvis preabsorbed å fjerne de mer problematiske kryssreagerende antistoffer) og ytterligere reaksjons tabeller er gitt av produsenten for å skille mellom hvilken serotype er til stede. Latex reagenser kan også kryssreagere hvis antistoffene ikke er skikkelig justert på latex partikler; disse er registrert som QC feil. Vår erfaring er strenge QC sentrale for å lykkes med denne metoden, selv når kommersielt tilgjengelige sera brukes til produksjon. QC tar omtrent 15 minutter per reagens og er avhengig av et sett av hensiktsmessige QC isolater som beskrevet ovenfor.
Metoden som beskrives her resulterer i reagenser som gir en positiv reaksjon godt witynn testperioden. Vår erfaring er falske positiver er sjeldne i praksis (data ikke vist). Sporadiske falske negative reaksjoner er observert; vanligvis disse relaterer seg til kjente problemer med en bestemt antiserum (f.eks, kan serogruppe seks isolater ikke reagere med basseng B antiserum), eller nedregulering av kapsel uttrykk ved isolatet. Bruke Serotypebestemmelse algrorithm levert av produsenten er også viktig, som i de fleste tilfeller en falsk positiv eller negativ reaksjon vil føre til en "blind end 'resultat. I disse tilfeller, og når reaksjoner er vanskelige å tolke, vi gjenta-testing og / eller testing av en alternativ metode som Quellung reaksjonen.
Noen feilsøking er tidvis nødvendig å foreta tilfredsstillende latex reagenser. I fremgangsmåten som er beskrevet her, er antistoffet festet til latekspartikler via passiv adsorpsjon 15,19, slik at en kritisk variabel er den konsentrasjon av antistoff som brukes, som bestemmer hvor godtoverflaten av latekspartiklene er dekket og den etterfølgende justering av antistoff-aktive seter 15,20. Følgelig, dersom utilstrekkelig eller overskytende antistoff er festet til latekspartikler, antistoff-antigen-reaksjoner ikke vil være optimal, og utilfredsstillende reagenser kan fremstilles 15,20,21. Som antistofftitere variere mellom forskjellige partier av antisera, kan et standard sett av fortynninger ikke gi reagenser som gir gode resultater 8. Et nyttig utgangspunkt er å bruke en 1:40 fortynning av antiserum, og hvis dette ikke lykkes, fortynne antiserumet videre. Vår erfaring er dette vanligvis løser problemet åtte. I et lite antall tilfeller reagenser kan vise svak agglutinering som ikke er ledsaget av rydding av suspensjonen når den ble testet med target-isolater. I disse tilfellene fortynne antiserumet ikke forbedrer kvaliteten av reagenset, men tilfredsstillende reagenser kan vanligvis bli produsert ved å utelate sentrifugering og vask trinn 8,22
Antistoff belagt latex partikler brukes ofte i diagnostisk mikrobiologi for deteksjon, identifikasjon eller serotyping av mange ulike mikrober 15,20. Som sådan, kan fremgangsmåten som er beskrevet her være egnet for fremstilling av lateks-reagenser for andre formål, er gitt passende antisera tilgjengelig og tilstrekkelig QC prosedyrene fastsettes.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microparticles based on polystyrene, 800 nm | Sigma | 65984-10 ml-F | Or other volumes as required |
| Normal rabbit serum | Antibodies Australia | NRS-1ml | Or other volumes as required, bring to RT before use |
| Pneumococcus (Neufeld) antisera | SSI Diagnostica | Various | Bring to RT before use http://www.ssi.dk/ssidiagnostica |
| Sterile Bovine Albumin | Sigma | A-4503 | Bring to rRT before use |
| Sodium azide 10% (v/v) solution | VWR International | ROAC3902/100ml | Caution: hazardous if inhaled; skin and eye irritant |
| Eppendorf Safe-Lock tubes, 2 ml | Eppendorf | 0030 120.094 | Round bottom |
| Sodium chloride | Merck | 10241.AP | |
| Calibrated disposable inoculating loops 1 µl | Copan | CD175SO1 | |
| Glass microscope slides 76 mm x 26 mm | Thermo Fisher Scientific | LBS 2950RC | |
| 5 M NaOH | BDH | 10252 | Caution: highly corrosive |
| Glycine | Merck | 10119.05 | |
| Horse Blood Agar (HBA) plates | Thermo Fisher Scientific | PP2001 | Bring to RT before use http://www.thermofisher.com.au |
| Rotating wheel | Wyble Engineering Development Corporation | ||
| Polystyrene flat bottom screw cap tube, 5 ml | Technoplas | S5016SU | |
| 60 ml syringes without needles | Terumo | SS-60L | |
| Millex-GP syringe filter unit, 0.22 µm | Merck Millipore | SLGP033RS | |
| Brochure on Neufeld antisera | Statens Serum Institut | Key to determining serotypes http://www.ssi.dk/ssidiagnostica |
|
| Key to pneumococcal factor serum | Statens Serum Institut | 18058 | For determining serotype within Groups http://www.ssi.dk/ssidiagnostica |
| *alternative sources are available for most materials |
References
- Rudan, I., et al. Epidemiology and etiology of childhood pneumonia in 2010: estimates of incidence, severe morbidity, mortality, underlying risk factors and causative pathogens for 192 countries. J Glob Health. 3 (10401), (2013).
- O'Brien, K. L., et al. Burden of disease caused by Streptococcus pneumoniae in children younger than 5 years: global estimates. Lancet. 374, 893-902 (2009).
- Henrichsen, J. Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae. J Clin Microbiol. 33, 2759-2762 (1995).
- Hausdorff, W. P., Bryant, J., Paradiso, P. R., Siber, G. R. Which pneumococcal serogroups cause the most invasive disease: implications for conjugate vaccine formulation and use, part I. Clin Infect Dis. 30, 100-121 (2000).
- Mulholland, K., Satzke, C. Serotype replacement after pneumococcal vaccination. Lancet. 379, 1388-1389 (2012).
- Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination. Lancet. 378, 1962-1973 (2011).
- Satzke, C., et al. Standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae: Updated recommendations from the World Health Organization Pneumococcal Carriage Working Group. Vaccine. , (2013).
- Ortika, B. D., Habib, M., Dunne, E. M., Porter, B. D., Satzke, C. Production of latex agglutination reagents for pneumococcal serotyping. BMC Res Notes. 6 (49), (2013).
- Adegbola, R. A., et al. Serotype and antimicrobial susceptibility patterns of isolates of Streptococcus pneumoniae causing invasive disease in The Gambia 1996-2003. Trop Med Int Health. 11, 1128-1135 (2006).
- Slotved, H. C., Kaltoft, M., Skovsted, I. C., Kerrn, M. B., Espersen, F. Simple, rapid latex agglutination test for serotyping of pneumococci (Pneumotest-Latex). J Clin Microbiol. 42, 2518-2522 (2004).
- Turner, P., et al. Improved detection of nasopharyngeal cocolonization by multiple pneumococcal serotypes by use of latex agglutination or molecular serotyping by microarray. J Clin Microbiol. 49, 1784-1789 (2011).
- Mudany, M. A., Kikuchi, K., Totsuka, K., Uchiyama, T. Evaluation of a new serotyping kit for Streptococcus pneumoniae. J Med Microbiol. 52, 975-980 (2003).
- Lalitha, M. K., et al. Serotyping of Streptococcus pneumoniae by agglutination assays: a cost-effective technique for developing countries. Bull World Health Organ. 74, 387-390 (1996).
- Shutt, C. K., Samore, M., Carroll, K. C. Comparison of the Denka Seiken slide agglutination method to the quellung test for serogrouping of Streptococcus pneumoniae isolates. J Clin Microbiol. 42, 1274-1276 (2004).
- Gella, F., Serra, J., Gener, J.
- Pneumococcus Key to S. pneumoniae types and pneumococcal diagnostic antisera. SSI Diagnostica. , Available from: http://www.ssi.dk/ssidiagnostica (2013).
- Habib, M., Porter, B. D., Satzke, C. Capsular serotyping of Streptococcus pneumoniae using the Quellung reaction. J. Vis. Exp. (84), (2014).
- Arai, S., et al. Use of antiserum-coated latex particles for serotyping Streptococcus pneumoniae. Microbiol Immunol. 45, 159-162 (2001).
- Lafong, A. C., Crothers, E. Simple latex agglutination method for typing pneumococci. J Clin Pathol. 41, 230-231 (1988).
- Ortega-Vinuesa, J. L., Bastos-Gonzalez, D. A review of factors affecting the performances of latex agglutination tests. J Biomater Sci Polym Ed. 12, 379-408 (2001).
- Yap, K. L. Development of a slide latex agglutination test for rotavirus antigen detection. Malays J Pathol. 16, 49-56 (1994).
- Severin, W. P. Latex agglutination in the diagnosis of meningococcal meningitis. J Clin Pathol. 25, 1079-1082 (1972).
