Abstract
Dictyostelium discoideum амебы встречаются в почве, питаются бактериями. Когда источники питания становятся редкими, они секретируют факторы , чтобы инициировать многоклеточный программу развития, в ходе которой отдельные клетки chemotax по отношению к агрегации центров 1-4. Этот процесс зависит от высвобождения циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) 5. цАМФ вырабатывается в волнах через согласованные действия аденилатциклазы и фосфодиэстеразы, и связывается с G-белком рецепторов цАМФ 6,7. Широко используемый анализ для анализа механизмов , участвующих в цикле развития нижнего эукариот Dictyostelium discoideum основан на наблюдении агрегацией клеток в условиях затопленных 8,9. Этот протокол описывает анализ роли coronin А в цикле развития голоданием в тканевой культуре пластин , погруженных в сбалансированном солевом растворе (ПБС) 10. Coronin А является членом широко законсервированного прotein семейство coronins , которые были вовлечены в самых разнообразных мероприятиях 11,12. Dictyostelium клетки , лишенные coronin А не способны образовывать многоклеточные агрегаты, и этот дефект может быть спасен путем подачи импульсов цАМФ, предполагая , что coronin А действует выше по потоку от цАМФ каскад 10. Методы , описанные в этих исследованиях , обеспечивают надежные инструменты для исследования функции белков на начальных стадиях цикла развития Dictyostelium discoideum вверх по течению от цАМФ каскада. Поэтому, используя этот анализ агрегации может позволить дальнейшее изучение coronin функции и улучшения нашего понимания coronin биологии.
Introduction
Coronin семейство белков высоко законсервирован на протяжении эукариот. Эти белки характеризуются наличием амино-концевой триптофан-аспартата (WD) повторяют , содержащие область, уникального региона , подключенного к карбокси-концевой домен биспиральных 13,14 (рисунок 1). Coronins участвуют в различных клеточных функций, включая регулирование цитоскелета и сигнальной трансдукции 12. У млекопитающих, вплоть до шести коротких coronin молекул (coronin 1-6), а также 'тандем' coronin 7, могут быть совместно выражены 12,15. Coronin 1 является наиболее широко изучены член семьи, и было показано, участвует в разрушении болезнетворных микроорганизмов, выживание Т-клеток и нейронного сигнала. Как именно, coronin 1 осуществляет эту деятельность, остается неясным. В то время как coronin 1 было показано, регулирует Ca 2+ и цАМФ-зависимого сигнализации, а также F-актин цитоскелета модуляции 16-18 потенциал сотрудничества-expression до 7 членов семьи у млекопитающих сделало его сложным для изучения молекулярной функции coronins в этих системах, из-за возможных увольнений. В отличие от млекопитающих организмов, нижняя эукариот Dictyostelium discoideum выражает только два coronin членов семьи (coronin A, ортологом млекопитающих coronin 1 и coronin B, ортологом coronin млекопитающих 7) , по- видимому , не избыточных функций 15,19,20. Этот факт делает Dictyostelium discoideum мощную модель для изучения функции coronins.
Изучить роль coronin А в Dictyostelium discoideum, мы побудила цикл развития от голода в тканевых культуральных планшетах , содержащих сбалансированный солевой раствор (BSS) буфер , используя либо клетки дикого типа или клетки , лишенные coronin A 10. Мы обнаружили, что клетки, лишенные coronin К оказались не в состоянии сформировать многоклеточные агрегаты при голодании. Для точного количественной оценки этого фенотипаавтоматизированный клеток изображений живых описано в данном протоколе, является жизненно важным инструментом. Дефект в инициации раннего ответа голодном в клетках, лишенных coronin А может быть спасен путем подачи импульсов цАМФ, предполагая, что coronin А действует вверх по течению от цАМФ каскада. Экзогенные применение цАМФ импульсов для имитации инициации развития была использована несколько лабораторий в прошлом 8,9. Тем не менее, эта процедура также известно, сильно зависит от плотности клеток и времени. Таким образом, протокол, описанный здесь, имеет целью уменьшить эти изменчивости, чтобы гарантировать высокую степень воспроизводимости. Взятые вместе, методы , используемые в этих исследованиях , обеспечивают надежные инструменты для исследования функции белков на ранних стадиях цикла развития Dictyostelium discoideum и имеют потенциал , чтобы определить вверх, а также вниз по течению эффекторов coronin функции.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
- Обратите внимание на ранний ответ голоданию Dictyostelium discoideum путем покадровой микроскопии.
- Grow DH1.10 клетки или Cora дефицитных клеток в колбе , содержащей Эрленмейером HL-5 среде (1 л: 5 г протеоза пептон, 5 г thiotone E пептон, 10 г глюкозы, 5 г дрожжевого экстракта, 0,35 г Na 2 HPO 4 * 7H 2 O, 0,35 г КН 2 РО 4, 0,05 г Дигидрострептомицин-сульфат, рН 6,6) при 22 ° C в инкубаторном шейкере с вращением 160 оборотов в минуту. Держите клетки при плотности в интервале от 0,01 × 10 6 клеток / мл и 2 × 10 6 клеток / мл.
- Изучение агрегации клеток, путем сбора лог-фаза растущей DH1.10 клеток 21 или Cora дефицитных клеток 10 генерируется в фоновом режиме DH1.10, выращенных в культуре с встряхивании HL-5 среде при температуре 22 ° C. Для этого принимают соответствующее количество клеток (как правило, от 10 до 50 мл), центрифуге в течение 3 мин при 400 мкг и промыть клетки дважды в ПБС (10 мМ NaCl, 10 мМ KCl, 2,5 мМ CaCl 2, рН 6,5).
- Граф клеток с использованием гемоцитометра. Затем клетки планшет при плотности (5, 10, 20, или 40) х 10 4 клеток / см 2 в 24-луночного планшета. Дайте им придерживаться в течение 1 часа при 22 ° С в ПБС.
- Визуализируйте агрегации покадровой микроскопии , как описано выше 10, принимая изображения каждые 135 сек. с использованием изображений живых клеток создать оборудованный с целью 5X и камеры устройства электронно-умножая зарядовой связью автоматизирован с помощью соответствующего программного обеспечения (см Материалы таблицу).
- цАМФ пульсацию discoideum клеток Dictyostelium во время голодания.
- Изучить влияние внешних приложенных импульсов цАМФ на развитие DH1.10 клеток 21 или DH1.10 Cora дефицитных клеток 10, путем сбора клеток. Для этого, возьмите соответствующее количество клеток (обычно от 10 до 50 мл), центрифуги в течение 3 мин при 400 мкг и мыть дважды в ПБС.
- CouКлетки нт с помощью гемоцитометра и ресуспендирования клеток до плотности 1 х 10 7 клеток / мл в ПБС. Взболтать культур (160 оборотов в минуту) при 22 ° С в течение 2 ч до применения импульсов. Добавить импульсы цАМФ с помощью таймера контролируется перистальтического насоса. Программировать насос, чтобы поставить 5 сек импульс каждый 6,5 мин 15 мкл 50 нМ цАМФ (конечная концентрация) в течение 5 часов.
- Граф клеток с использованием гемоцитометра. Затем пластины клетки при плотности (5, 10, 20, или 40) х 10 4 клеток / см 2 в 24-луночный планшет. Разрешить придерживаться в течение 1 часа в ПБС.
- Визуализируйте агрегации после 16 часов при 22 ° С в ярко-микроскопии с использованием объектива 5X.
- Индукция Dictyostelium discoideum развития путем воздействия кондиционированной среды.
- Подготовьте свежую кондиционированную среду , как описано 22. Собирают клетки DH1.10 лог-фазы 21 или DH1.10 Cora дефицитных клеток 10, от тряски культУРЭС с HL-5 среде при 22 ° С с использованием пипетки, центрифуги в течение 3 мин при 400 мкг и мыть клетки три раза в PBM (0,02 М фосфата калия, 10 мкМ CaCl 2 и 1 мМ MgCl 2, рН 6,1).
- Граф клеток с использованием гемоцитометра, ресуспендируют их в РВМ при плотности 1 х 10 7 клеток / мл и встряхивают в течение 20 часов при 110 оборотах в минуту / 22 ° C.
- Собирают кондиционированной среды после центрифугирования при 400 × г в течение 3 мин и уточнить центрифугированием при 8000 х г в течение 15 мин при температуре 4 ° С.
- Фильтр кондиционированной среды через фильтр 0,45 мкм (см Материалы таблицу) и развести три раза в РВМ.
- Граф клеток с использованием гемоцитометра и пластины с плотностью (5, 10, 20, или 40) · 10 4 клеток / см 2 в 24-луночный планшет. Дайте им придерживаться в течение 1 часа при 22 ° С.
- Обмен супернатанта клеток с предварительно приготовленным кондиционированной среды.
- Визуализируйте агрегациюосле 16 ч с помощью ярко-микроскопии с использованием объектива 5X.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Клетки , дефицитные по coronin поднятием дефект на ранней стадии разработки (рисунок 2). При отсутствии coronin А клетки не способны образовывать многоклеточные агрегаты, что является первым шагом в процессе цикла развития Dictyostelium discoideum. Поэтому coronin-видимому, играет определенную роль в процессе раннего реагирования голодания и / или передачи сигналов цАМФ. Действительно, отсутствие многоклеточного образования агрегатов в отсутствие coronin А сопровождается снижением цАМФ сигнализации 10. Тем не менее, применение экзогенных импульсов цАМФ полностью восстанавливает дикого типа фенотипа (рисунок 3). Это подразумевает , что coronin А, вместо того , чтобы непосредственно участвовать в цАМФ сигнализации, функции вверх по течению от цАМФ каскада (рисунок 5). Когда клетки Dictyostelium подвергаются голодающим условиях они вызывают секрецию раннего голода факторов 22,23. Один из лучших чараcterized факторы , участвующие в начале реакции голодания обусловлена средой фактора (CMF) 22. На основании полученных результатов, мы предположили, что coronin А либо регулирует секрецию этих ранних факторов голодном или участвует в передаче сигнала, вызванного этими факторами. Для того, чтобы иметь возможность различать между этими двумя эффектами мы провели эксперименты обусловленных средой. Дикого типа или Cora дефицитных клетки подвергали воздействию супернатанатах либо голодали дикого типа или Cora дефицитных клеток 10 (рисунок 4). Эти супернатанты являются мощными инициаторами многоклеточного образования агрегатов и, следовательно, содержат факторы, которые инициируют вниз по течению развития сигнальных путей, в том числе сигналов цАМФ. Наши результаты показывают , что супернатант от Cora дефицитных клеток в равной степени способны вызвать развитие как это имело место для супернатанта от клеток дикого типа (Рисунок 4). Это подразумевает , что Cora -дефицитные клетки способны производить и выделять ранние факторы голодание на том же уровне до их контроля дикого типа. Тем не менее, Cora дефицитных клетки ни в состоянии реагировать на их собственной супернатанта , ни супернатанта , представленной из клеток дикого типа (Рисунок 4). Поэтому coronin по- видимому, участвует в сигнальных путей , вызванных факторами ранних голодном, а не их экспрессии / секреции 10 (рисунок 5).
В общем, чтобы иметь возможность дополнительно исследовать сигналы , выделяемые голодают клетки Dictyostelium , которые вызывают цикл развития, анализ агрегации при погруженных условиях является мощным считыванием. Клетки высевают при более высоких плотностях спонтанно агрегатный из-за обилия всех необходимых сигналов. Тем не менее, при более низких плотностей только добавление кондиционированной среды будет индуцировать клеточную агрегацию (рис 4) 22,24
Рисунок 1: Coronin белки , присутствующие в организме млекопитающих и Dictyostelium discoideum coronin семейство характеризуется наличием N-концевых областей WD-повтора , за которым следует уникального домена и свернутой области катушки С-концевым.. В то время как млекопитающие выражают 7 coronin белки (А) Dictyostelium discoideum содержит только два члена семьи (B), что делает риск избыточности менее вероятно , при изучении их функции. Coronin А ортологом coronin млекопитающих 1 и coronin B показывает подобную структуру, как и домен coronin 7. Сокращения: CC, биспиральный домен; UD, уникальный домен; WD повторяет, триптофан -аспартата повторяется. Длина задается для последовательностей мыши (А) аминокислоты (аа). Измененный Питерс и др., 2013 12. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2:. Cora - Dictyostelium discoideum не могут агрегировать в ранний ответ голодном дикого типа (А) или Cora дефицитных (В) Dictyostelium клетки высевают в луночные планшеты при плотности 2 х 10 5 клеток / см 2, голодали в ПБС, и отображены в течение 20 часов. Шкала бар = 100 мкм..jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3: внешнеприкладываемого цАМФ импульсы спасти ранний дефект процесс развития Cora - Dictyostelium discoideum Вегетативный дикого типа (А и В) и Cora дефицитных клеток (C и D) были промыты и голодали в течение 2 часов перед тем , как в импульсном режиме с (В. и D) , или без него (а и с) 50 нМ цАМФ в течение 5 ч каждые 6,5 мин в виде суспензии. Затем клетки промывали, ресуспендировали в ПБС, и помещают на чашку Петри при плотности 10 х 10 4 клеток / см 2. Изображения были взяты 20 ч после посева клеток. Шкала бар = 100 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 4: Cora дефицитных Dictyostelium discoideum способны производить все необходимые факторы для индукции развития , но не в состоянии реагировать на них Экспоненциально растущие дикого типа и Cora дефицитных клетки отмывали в РВМ и высевают в луночные планшеты при плотности (. 5, 10, 20, или 40) х 10 4 клеток / см 2, инкубируют в кондиционированной среде , полученной из образцов дикого типа (А) или Cora дефицитных голодающих клеток (в). Изображения были взяты 16 ч после посева клеток. Шкала бар = 100 мкм.tp_upload / 53972 / 53972fig4large.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 5:. Текущая модель Coronin Функция в Dictyostelium discoideum Coronin А участвует в трансдукции сигнала фактора (ов) , секретируемого в течение раннего ответа голодной приводящей к индукции цАМФ каскада и прогрессии через цикла развития. Модифицированный из Vinet и др., 2014 10. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В coronin белки встречаются в большинстве таксонов эукариотических клады. Dictyostelium discoideum coronin А, гомолог coronin млекопитающих 1, участвует в ранней реакции голодной, так как coronin А-дефицитные клетки не способны образовывать агрегации центров во время раннего развития цикл 10. Для того, чтобы иметь возможность количественно и точно оценить задержку в развитии между штаммами, микроскоп изображений живых клеток настройки с автоматизированным контроллером стадии является важным инструментом.
D. discoideum использует цАМФ в качестве существенной сигнальной молекулы в течение нескольких стадий своего жизненного цикла 1-4. Одна из контрольных точек, в течение которого требуется цАМФ является переход от одной клетки к формированию многоклеточных структур. Возникновение цАМФ волн после ~ 6 ч голодания ощущается клетками и обеспечивает сигнал хемотаксиса двигаться к центру агрегации 5. Эти цАМФволны могут быть экспериментально имитируется пульсирует голодающим D. discoideum клетки с цАМФ каждые 6,5 мин в течение 5 ч. 8,9 С помощью этой процедуры важно, чтобы голодать клеток в течение до 2ч перед подачей импульсов цАМФ, чтобы получить достоверные результаты. Используя этот экспериментальной установки мы смогли показать , что coronin А действует вверх по течению сигнализации цАМФ, так как эти импульсы извне спасли развитие в Cora дефицитных клеток (рисунок 3 и 5). Эти результаты также показывают , что в то время как coronin по- видимому, играют существенную роль в почуяв ранний ответ голодание, это несущественный для таких процессов, как хемотаксис и агрегацию клеток само по себе 10.
Анализ агрегации сама по себе является надежным методом для изучения раннего развития Dictyostelium discoideum. Тем не менее, есть несколько подводных камней, которые могут влиять на воспроизводимость этих еxperiments, и, следовательно , важно , что несколько факторов принимаются во внимание: возраст клеток играет важную роль при анализе Cora дефицитных клеток. Эти клетки, как правило, компенсируют фенотип и повторно агрегат примерно через 2 недели с момента их оттаивают. Плотность клеток является решающим фактором, а также, как клетки, которые показывают сигнализации дефекта, а не дефекта эозинофилов может иметь тенденцию к агрегации при более высоких плотностей в связи с увеличением концентрации ранних факторов голодания. Важность точного подсчета и разведения клеток в этих анализах не может быть преувеличена. Для различных штаммов, корректировка нескольких переменных анализа, таких, как плотность клеток, время присоединения, времени развития, потребуется. Анализ агрегации, как описано здесь, представляет собой универсальный метод, который может быть изменен, чтобы удовлетворить различные запросы: клетки могут быть голодным и развитие может быть стимулировано или угнетается с использованием различных соединений, всеблагодаря для определенной модуляции агрегации. Приведенные здесь настройки также позволяет Непредвзятость идентифицировать штаммы с ранними дефектами развития, а также для идентификации генов или факторов, которые имеют важное значение для раннего развития. Это также главный недостаток этого метода: анализ агрегации представляет собой сокращенный вариант полного цикла развития. Следовательно, он не подходит для анализа фенотипов, влияющих на последующие этапы цикла развития. Основным преимуществом является возможность принять анализа агрегации в больших масштабах и автоматизированный формат: в 48-луночные планшеты и с 16 ч развития, записанной во время автоматического визуализации, анализ агрегации оказывается больше времени и эффективное использование ресурсов, чем развитие на агаром.
В экспериментах, в которых мы обходили ранний ответ голодание, используя извне импульсы цАМФ, мы показали, что coronin А участвует в зондировании секретируемых факторов с помощью <EM> Dictyostelium клетки Upon голодания. Точный механизм coronin A-опосредованной передаче сигналов во время раннего ответа голодном остается неясным. Несколько факторов , участвующих на этой стадии развития были изучены, в частности среднего условного фактора (CMF) 25,26. Тем не менее, действует ли ЦМФ самостоятельно или с кофакторов остается неясным, и его сигнальный каскад лишь частично понял. Используя способность к агрегации клеток Dictyostelium под затопленные условия здесь описаны как положительный считывани для развития позволяет проводить широкомасштабный скрининг экспериментов по времени эффективным способом по сравнению с агрегацией анализов на агаре поверхностях. Однако, агрегация анализы под погруженных условиях имеют тот недостаток, что не выполняет полный цикл развития, как клетки будут арестованы в начальной стадии агрегации. Таким образом, способ, описанный здесь, не подходит для изучения последующего развития процеГСЭС. Таким образом, экспериментальный подход, описываемая здесь может позволить дальнейшую характеристику потенциального фактора раннего голодания (ы), которые индуцируют coronin A-зависимый вход в начале реакции голодания.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HL-5 media (for 1 L: 5 g proteose peptone, 5 g thiotone E peptone, 10 g glucose, 5 g yeast extract, 0.35 g Na2HPO4*2H2O, 0.35 g KH2PO4, 0.05 g dihydrostreptomycin-sulfate, pH 6.6) | |||
| Proteose peptone | BD Bioscience | 211693 | |
| Thiotone E peptone | BD Bioscience | 211684 | |
| Yeast extract | BD Bioscience | 212750 | |
| Glucose | AppliChem | A3666 | |
| Na2HPO4*2H2O | Fluka | 71643 | |
| KH2PO4 | AppliChem | A1043 | |
| dihydrostreptomycin-sulfate | Sigma-Aldrich | D1954000 | |
| PBM (0.02 M potassium phosphate, 10 μM CaCl2, and l mM MgCl2, pH 6.1) | self made | ||
| BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, pH 6.5) | self made | ||
| 0.45-μm Filtropure S filter | Sarstedt | 83.1826 | |
| Falcon 24-well Tissue culture plate | Fisher Scientific | 08-772-1H | |
| Cellobserver microscope | Zeiss | custom built | |
| AxioVision software | Zeiss | ||
| IPC Microprocessor–controlled dispensing pump | ISMATEC | ISM 931 | |
| Axiovert 135M microscope | Zeiss | 491237-0001-000 | |
| Incubation Shaker | Inforst HT Minitron |
References
- Weijer, C. J.
- Devreotes, P. Dictyostelium discoideum: a model system for cell-cell interactions in development. Science. 245, 1054-1058 (1989).
- Kimmel, A. R., Firtel, R. A. cAMP signal transduction pathways regulating development of Dictyostelium discoideum. Curr Opin Genet Dev. 1, 383-390 (1991).
- Clarke, M., Gomer, R. H. PSF and CMF, autocrine factors that regulate gene expression during growth and early development of Dictyostelium. Experientia. 51, 1124-1134 (1995).
- Robertson, A., Drage, D. J., Cohen, M. H. Control of Aggregation in Dictyostelium discoideum by an External Periodic Pulse of Cyclic Adenosine Monophosphate. Science. 175, 333-335 (1972).
- Konijn, T. M., Chang, Y. Y., Bonner, J. T. Synthesis of cyclic AMP in Dictyostelium discoideum and Polysphondylium pallidum. Nature. 224, 1211-1212 (1969).
- Iranfar, N., Fuller, D., Loomis, W. F. Genome-wide expression analyses of gene regulation during early development of Dictyostelium discoideum. Eukaryot Cell. 2, 664-670 (2003).
- Darmon, M., Brachet, P., Da Silva, L. H. Chemotactic signals induce cell differentiation in Dictyostelium discoideum. Proc Natl Acad Sci U S A. 72, 3163-3166 (1975).
- Mann, S. K., Firtel, R. A. Cyclic AMP regulation of early gene expression in Dictyostelium discoideum: mediation via the cell surface cyclic AMP receptor. Mol Cell Biol. 7, 458-469 (1987).
- Vinet, A. F., et al. Initiation of multicellular differentiation in Dictyostelium discoideum is regulated by coronin A. Mol Biol Cell. 25, 688-701 (2014).
- Eckert, C., Hammesfahr, B., Kollmar, M. A holistic phylogeny of the coronin gene family reveals an ancient origin of the tandem-coronin, defines a new subfamily, and predicts protein function. BMC Evol Biol. 11, 268 (2011).
- Pieters, J., Muller, P., Jayachandran, R. On guard: coronin proteins in innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol. 13, 510-518 (2013).
- Gatfield, J., Albrecht, I., Zanolari, B., Steinmetz, M. O., Pieters, J. Association of the Leukocyte Plasma Membrane with the Actin Cytoskeleton through Coiled Coil-mediated Trimeric Coronin 1 Molecules. Mol Biol Cell. 16, 2786-2798 (2005).
- Kammerer, R. A., et al. A conserved trimerization motif controls the topology of short coiled coils. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13891-13896 (2005).
- Uetrecht, A. C., Bear, J. E.
- Jayachandran, R., et al. Coronin 1 Regulates Cognition and Behavior through Modulation of cAMP/Protein Kinase A Signaling. PLoS Biol. 12, e1001820 (2014).
- Suo, D., et al. Coronin-1 is a neurotrophin endosomal effector that is required for developmental competition for survival. Nat Neurosci. 17, 36-45 (2014).
- Mueller, P., et al. Regulation of T cell survival through coronin-1-mediated generation of inositol-1,4,5-trisphosphate and calcium mobilization after T cell receptor triggering. Nat Immunol. 9, 424-431 (2008).
- de Hostos, E. L., Bradtke, B., Lottspeich, F., Guggenheim, R., Gerisch, G. Coronin, an actin binding protein of Dictyostelium discoideum localized to cell surface projections, has sequence similarities to G protein beta subunits. EMBO J. 10, 4097-4104 (1991).
- Shina, M. C., et al. Redundant and unique roles of coronin proteins in Dictyostelium. Cell Mol Life Sci. 68, 303-313 (2011).
- Cornillon, S., et al. Phg1p is a nine-transmembrane protein superfamily member involved in dictyostelium adhesion and phagocytosis. J Biol Chem. 275, 34287-34292 (2000).
- Gomer, R. H., Yuen, I. S., Firtel, R. A. A secreted 80 x 10(3) Mr protein mediates sensing of cell density and the onset of development in Dictyostelium. Development. (112), 269-278 (1991).
- Iijima, N., Takagi, T., Maeda, Y. A proteinous factor mediating intercellular communication during the transition of Dictyostelium cells from growth to differentiation. Zoological science. 12, 61-69 (1995).
- Mehdy, M. C., Firtel, R. A. A secreted factor and cyclic AMP jointly regulate cell-type-specific gene expression in Dictyostelium discoideum. Mol Cell Biol. 5, 705-713 (1985).
- Jain, R., Yuen, I. S., Taphouse, C. R., Gomer, R. H. A density-sensing factor controls development in Dictyostelium. Genes Dev. 6, 390-400 (1992).
- Loomis, W. F. Cell signaling during development of Dictyostelium. Dev Biol. 391, 1-16 (2014).
