Abstract
Dictyostelium discoideum amøbe findes i jord, fodring på bakterier. Når fødekilder bliver knappe, de udskiller faktorer til at indlede en multicellulær udviklingsprogram, hvor enkelte celler chemotax mod sammenlægning centre 1-4. Denne proces er afhængig af frigivelse af cyklisk adenosinmonophosphat (cAMP) 5. cAMP er produceret i bølger gennem samordningen af adenylatcyclase og phosphodiesteraser, og binder sig til G-protein-koblede cAMP receptorer 6,7. Et almindeligt anvendt assay til at analysere de mekanismer, der er involveret i den udviklingsmæssige cyklus af den lavere eukaryot Dictyostelium discoideum er baseret på observation af celle aggregering i neddykkede forhold 8,9. Denne protokol beskriver analyse af den rolle, coronin A i den udviklingsmæssige cyklus af sult i tissue-dyrkningsplader nedsænket i balanceret saltopløsning (BSS) 10. Coronin A er et medlem af det bredt konserverede protein familie af coronins der er blevet impliceret i en lang række aktiviteter 11,12. Dictyostelium celler, der mangler coronin A ikke er i stand til at danne multicellulære aggregater, og denne defekt kan reddes ved at tilføre pulser af cAMP, hvilket antyder, at coronin A virker opstrøms for cAMP kaskade 10. De i disse undersøgelser teknikker tilvejebringer robuste værktøjer til at undersøge funktioner af proteiner under de indledende stadier af den udviklingsmæssige cyklus af Dictyostelium discoideum opstrøms for cAMP kaskade. Derfor udnytter denne sammenlægning assay kan tillade yderligere undersøgelse af coronin En funktion og fremme vores forståelse af coronin biologi.
Introduction
Den coronin familie af proteiner er stærkt bevaret i hele eukaryoter. Disse proteiner er kendetegnet ved tilstedeværelsen af et aminoterminalt tryptophan-aspartat (WD) gentag-holdig region efterfulgt af en unikke region forbundet til en carboxyterminal coiled-coil domæne 13,14 (figur 1). Coronins har været impliceret i en række forskellige cellulære funktioner, herunder cytoskeletal regulering og signaltransduktion 12. I pattedyr op til seks korte coronin molekyler (coronin 1-6) samt en "tandem" coronin 7, kan co-udtrykkes 12,15. Coronin 1 er den mest omfattende undersøgt familiemedlem, og blev vist at være involveret i patogen ødelæggelse, T-celle overlevelse og neuronal signalering. Hvordan præcis, coronin 1 udfører disse aktiviteter fortsat uklart. Mens coronin 1 blev vist at regulere Ca2 + og cAMP-afhængig signalering samt F-actin cytoskeleton modulation 16-18, den potentielle co-expression på op til 7 familiemedlemmer i pattedyr har gjort det udfordrende at studere molekylære funktion coronins i disse systemer, på grund af potentielle afskedigelser. I modsætning til pattedyr organismer, jo lavere eukaryot Dictyostelium discoideum udtrykker kun to coronin familiemedlemmer (coronin A, den ortholog af pattedyr coronin 1 og coronin B, den ortholog af pattedyr coronin 7) med tilsyneladende ikke-redundante funktioner 15,19,20. Dette faktum gør Dictyostelium discoideum en potent model til at studere funktionen af coronins.
For at undersøge rollen af coronin A i Dictyostelium discoideum, vi inducerede den udviklingsmæssige cyklus af sult i cellekultur plader indeholdende balanceret saltopløsning (BSS) puffer under anvendelse af enten vildtypeceller eller celler, der mangler coronin En 10. Vi fandt, at celler, der mangler coronin A var ude af stand til at danne multicellulære aggregater upon sult. For en nøjagtig kvantitativ vurdering af denne fænotype denautomatiseret levende celler er beskrevet i denne protokol er et vigtigt redskab. Defekten i indledningen af den tidlige sult respons i celler mangler coronin A kan reddes ved at levere pulser af cAMP, hvilket tyder på, at coronin A handlinger opstrøms af cAMP kaskade. Den exogene anvendelse af cAMP impulser til at simulere indledningen af udviklingen er blevet udnyttet af flere laboratorier i fortiden 8,9. Imidlertid er denne fremgangsmåde også kendt for at være meget afhængig af celletætheder og timing. Derfor er den her beskrevne protokol er at reducere disse variabiliteter for at sikre en høj grad af reproducerbarhed. Tilsammen de anvendes i disse undersøgelser teknikker tilvejebringer robuste værktøjer til at undersøge funktioner af proteiner i de tidlige stadier af den udviklingsmæssige cyklus af Dictyostelium discoideum og har potentiale til at identificere op- samt nedstrømseffektorer af coronin En funktion.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
- Overhold tidlig sult respons Dictyostelium discoideum af time-lapse mikroskopi.
- Grow DH1.10 celler eller cora deficiente celler i en Erlenmeyerkolbe indeholdende HL-5 medium (1 L: 5 g proteosepepton, 5 g thiotone E pepton, 10 g glucose, 5 g gærekstrakt, 0,35 g Na 2 HPO 4 * 7H 2 O, 0,35 g KH 2 PO 4, 0,05 g dihydrostreptomycin-sulfat, pH 6,6) ved 22 ° C i en rysteinkubator med en rotation på 160 opm. Holde cellerne ved en densitet mellem 0,01 x 10 6 celler / ml og 2 x 10 6 celler / ml.
- Undersøg celleaggregering, ved at høste log-fase-voksende DH1.10 celler 21 eller cora deficiente celler 10 dannet i DH1.10 baggrund, der dyrkes i rystekultur med HL-5 medium ved 22 ° C. For at gøre dette, tage passende mængde celler (som regel mellem 10 og 50 ml), centrifugeres i tre minutter ved 400 xg og vask cellerne to gange i BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2,5 mM CaCl2, pH 6,5).
- Tæl celler under anvendelse af et hæmocytometer. Efterfølgende plade celler ved en densitet på (5, 10, 20, eller 40) x 10 4 celler / cm2 i en 24-brønds plade. Lad dem adhærere i 1 time ved 22 ° C i BSS.
- Visualiser sammenlægning af time-lapse mikroskopi som beskrevet før 10, tage billeder hver 135 sek. ved anvendelse af en levende celler oprettet udstyret med 5X objektiv og en elektron-multiplikation charge-coupled device-kamera automatiseres af passende software (se Materialer tabel).
- cAMP pulsering af Dictyostelium discoideum-celler under sult.
- Undersøge effekten af eksternt anvendte cAMP pulser på udviklingen af DH1.10 celler 21 eller DH1.10 Cora deficiente celler 10, ved at høste celler. For at gøre dette, tage passende mængde celler (normalt mellem 10 og 50 ml), centrifugeres i tre minutter ved 400 xg og vask to gange i BSS.
- Count celler under anvendelse af et hæmocytometer og resuspender cellerne til en tæthed på 1 x 10 7 celler / ml i BSS. Ryst kulturerne (160 rpm) ved 22 ° C i 2 timer før påføring pulser. Tilføj cAMP impulser ved hjælp af en timer styret peristaltisk pumpe. Programmere pumpen til at levere en 5 sek puls hver 6,5 min på 15 pi 50 nM cAMP (slutkoncentration) i løbet af 5 timer.
- Tæl celler under anvendelse af et hæmocytometer. Efterfølgende plade cellerne ved en densitet på (5, 10, 20, eller 40) x 10 4 celler / cm2 i en 24-brønds plade. Tillad at overholde i 1 time i BSS.
- Visualisere aggregering efter 16 timer ved 22 ° C ved lysfeltsbillede mikroskopi under anvendelse af et 5X objektiv.
- Induktion af Dictyostelium discoideum udvikling gennem eksponering for konditioneret medium.
- Forbered frisk konditioneret medium som beskrevet 22. Saml log-fase DH1.10 celler 21 eller DH1.10 Cora deficiente celler 10, fra ryster kultninger med HL-5 medium ved 22 ° C ved hjælp af en pipette, centrifuge i 3 min ved 400 xg og vask celler tre gange i PBM (0,02 M kalium fosfat, 10 uM CaCl2, og 1 mM MgCl2, pH 6,1).
- Tæl celler under anvendelse af et hæmocytometer, resuspendere disse i PBM ved en densitet på 1 x 10 7 celler / ml og omrystes i 20 timer ved 110 rpm / 22 ° C.
- Indsamle konditioneret medium efter centrifugering ved 400 x g i 3 minutter og tydeliggøre ved centrifugering ved 8.000 x g i 15 minutter ved 4 ° C.
- Filter medium gennem et 0,45 um filter (se Materialer tabel) og fortyndet tredoblet i PBM.
- Tæl celler under anvendelse af et hæmocytometer og plade ved en tæthed på (5, 10, 20, eller 40) x 10 4 celler / cm2 i en 24-brønds plade. Lad dem adhærere i 1 time ved 22 ° C.
- Udveksling supernatant af cellerne med den tidligere fremstillede konditionerede medium.
- Visualiser sammenlægning enfter 16 timer ved lyse-field mikroskopi ved hjælp af en 5X mål.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Celler, som mangler coronin Et show en defekt i tidlige udvikling (Figur 2). I fravær af coronin A-celler er ude af stand til at danne multicellulære aggregater, hvilket er det indledende trin i den udviklingsmæssige cyklus af Dictyostelium discoideum. Derfor coronin A synes at spille en rolle i den tidlige sult respons og / eller cAMP-signalering. Faktisk er manglen på flercellede aggregatdannelse i fravær af coronin A ledsaget af nedsat cAMP signalering 10. Anvendelsen af exogene cAMP pulser gendanner fuldt vildtype fænotype (figur 3). Dette implicerer, at coronin A, snarere end at blive direkte involveret i cAMP signalering, funktioner opstrøms for cAMP kaskade (figur 5). Når Dictyostelium celler udsættes for sultende betingelser de fremkalder sekretion af tidlig sult faktorer 22,23. En af de bedste Characterized faktorer involveret i den tidlige sult reaktion er betinget medium faktor (CMF) 22. Baseret på vores resultater, vi den hypotese, at coronin A enten regulerer sekretionen af disse tidlige sult faktorer eller er involveret i signaltransduktion induceret af disse faktorer. For at kunne skelne mellem disse to effekter udførte vi Konditioneret medium eksperimenter. Vildtype eller Cora deficiente celler blev udsat for supernatanter fra enten udsultet vildtype- eller Cora deficiente celler 10 (figur 4). Disse supernatanter er potente initiativtagere til flercellede aggregatdannelse og derfor indeholder faktorer, der initierer nedstrøms udviklingsmæssige signalveje, herunder cAMP signalering. Vores resultater viser, at supernatant fra Cora deficiente celler var lige så stand til at inducere udvikling som det var tilfældet for supernatanten fra vildtypeceller (figur 4). Dette implicerer, at Cora -mangelfuld celler er i stand til at producere og udskille tidlige sult faktorer på lignende niveauer til deres kontrol vildtype. Imidlertid cora deficiente celler er hverken i stand til at reagere på deres egen supernatant eller til supernatant billede fra vildtypeceller (figur 4). Derfor synes coronin A at være involveret i signalveje induceret af tidlige sult faktorer, snarere end deres ekspression / sekretion 10 (figur 5).
Generelt at være i stand til yderligere at undersøge de signaler, der udskilles af udsulte Dictyostelium-celler, der inducerer den udviklingsmæssige cyklus, sammenlægning assayet under submerse betingelser er en potent udlæsning. Celler podet ved højere tætheder vil spontant aggregat grund af en overflod af alle nødvendige signaler. Men ved lavere densiteter kun kræver tilsætning af konditioneret medium vil inducere cellulær aggregering (figur 4) 22,24
Figur 1: Coronin proteiner til stede i pattedyr og Dictyostelium discoideum Den coronin familien er kendetegnet ved tilstedeværelsen af N-terminale WD-repeat-regioner efterfulgt af et unikt domæne og et C-terminalt coiled-coil-region.. Mens pattedyr udtrykker 7 coronin proteiner (A), Dictyostelium discoideum indeholder kun to familiemedlemmer (B), hvilket gør risikoen for redundans mindre sandsynligt, når man studerer deres funktion. Coronin A er ortholog af pattedyr coronin 1 og coronin B viser en lignende domæne struktur som coronin 7. Forkortelser: CC, coiled-coil-domæne; UD, unikke område; WD gentager, tryptophan -aspartate gentagelser. Længde er givet for muse-sekvenser (A) i aminosyrer (aa). Modificeret fra Pieters et al., 2013 12. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2:. Cora - Dictyostelium discoideum er i stand til at aggregere under den tidlige sult respons vildtype (A) eller Cora deficiente (B) Dictyostelium-celler blev podet i flerbrøndsplader ved en densitet på 2 x 10 5 celler / cm2, sultet i BSS, og afbildes over en periode på 20 timer. Scale bar = 100 um..jpg "target =" _ blank "> Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: eksternt anvendt cAMP pulser redde den tidlige udviklingsmæssige defekt Cora - Dictyostelium discoideum Vegetativ vildtype (A og B) og Cora-deficiente celler (C og D) blev vasket og sultet i 2 timer før de blev pulseret med (B. og D) eller uden (A og C) 50 nM cAMP under 5 timer hver 6,5 min i suspension. Celler blev derefter vasket, resuspenderet i BSS, og placeres på en petriskål med en tæthed på 10 x 10 4 celler / cm2. Billeder blev taget 20 timer efter podning af cellerne. Scale bar = 100 um. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Cora deficiente Dictyostelium discoideum er i stand til at producere alle de nødvendige faktorer for udviklingsmæssige induktion, men er ude af stand til at reagere på dem Eksponentielt voksende vildtype og Cora deficiente celler blev vasket i PBM og podet i flerbrøndsplader med en tæthed på (. 5, 10, 20, eller 40) x 10 4 celler / cm2, inkuberet i konditioneret medium opnået fra vildtype (A) eller Cora deficiente sultende celler (B). Billederne blev taget 16 timer efter podning af cellerne. Scale bar = 100 um.tp_upload / 53.972 / 53972fig4large.jpg "target =" _ blank "> Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5:. Nuværende model for Coronin En funktion i Dictyostelium discoideum Coronin A er involveret i signaltransduktion af faktor (er) udskilles under de tidlige sult reaktion, der fører til induktion af cAMP kaskade og progression gennem den udviklingsmæssige cyklus. Modificeret fra Vinet et al., 2014 10. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De coronin proteiner findes i de fleste systematiske enheder af den eukaryote clade. Dictyostelium discoideum coronin A, homologen af pattedyr coronin 1, er involveret i de tidlige sult reaktion, da coronin A-deficiente celler ikke er i stand til at danne aggregation centre under den tidlige udviklingsmæssige cyklus 10. At være i stand til kvantitativt og præcist at vurdere forsinkelsen i udviklingen mellem stammerne, et mikroskop levende celler set-up med den automatiserede fase controlleren er et vigtigt redskab.
D. discoideum benytter cAMP som en væsentlig signalmolekyle under flere stadier af dets livscyklus 1-4. En af de checkpoints hvorunder cAMP der kræves, er overgangen fra en enkelt celle til dannelsen af multicellulære strukturer. Starten af cAMP bølger efter ~ 6 timer af sult registreres af cellerne og giver kemotaktiske signal til at bevæge sig i retning af en sammenlægning center 5. Disse cAMPbølger kan efterlignes eksperimentelt ved pulsering sultende D. discoideum-celler med cAMP hver 6,5 min over et tidsrum på 5 timer 8,9. Under anvendelse af denne procedure er det vigtigt at sulte i cellerne i op til 2h før påføring af cAMP pulser, for at opnå pålidelige resultater. Ved hjælp denne eksperimentelle oprettet var vi i stand til at vise, at coronin A handler opstrøms af cAMP signalering, da disse eksternt anvendte impulser reddet udviklingen i Cora deficiente celler (figur 3 og 5). Disse resultater indikerer også, at mens coronin A synes at have en væsentlig rolle i sensing tidlig sult reaktion, er undværlig for processer såsom kemotaxi og celleaggregering per se 10.
Den sammenlægning assay i sig selv er en robust metode til at studere den tidlige udvikling af Dictyostelium discoideum. Der er imidlertid flere faldgruber, der kan påvirke reproducerbarheden af disse experiments, og det er derfor vigtigt, at der tages hensyn til flere faktorer: alder af cellerne spiller en vigtig rolle, når man analyserer Cora deficiente celler. Disse celler har tendens til at kompensere fænotypen og re-aggregat omtrent efter 2 uger fra det punkt, de optøs. Tætheden af cellerne er en afgørende faktor såvel som celler, der udviser en signalering defekt og ikke et kemotaktisk defekt måske vil være tilbøjelig til at aggregere ved højere densiteter på grund af den forøgede koncentration af tidlige sult faktorer. Betydningen af den præcise optælling og fortynding af celler i disse assays kan ikke overdrives. For forskellige stammer, en tilpasning af flere variabler i assayet, såsom celledensiteter, tid for vedhæftning, tidspunkt for udvikling, vil være påkrævet. Sammenlægning assay som beskrevet her er en alsidig teknik, der kan tilpasses til forskellige forespørgsler: cellerne kan sultet, eller udvikling kan stimuleres eller inhiberes ved hjælp af forskellige forbindelser, allegrund for en specifik modulation af sammenlægning. Den her beskrevne opsætning giver også mulighed for uvildige tilgange til at identificere stammer med tidlige udviklingsmæssige defekter, såvel som til identifikation af gener eller faktorer, der er vigtige for tidlig udvikling. Dette er også metodens væsentlig ulempe: sammenlægning assayet er en reduceret udgave af den komplette udviklingsmæssige cyklus. Derfor er det ikke egnet til analyse af fænotyper påvirker senere stadier af udviklingsmæssige cyklus. Den største fordel er mulighed for at vedtage sammenlægning analysen til en storstilet og automatiseret format: i 48-brønds plader og med 16 timer i udviklingen registreret under automatiseret billedbehandling, sammenlægning analysen viser sig at være mere tid og ressourceeffektive end udviklingen på agarplader.
I eksperimenter, hvor vi udkoblede tidlig sult reaktion, under anvendelse udvendigt påført cAMP pulser, viste vi, at coronin A er involveret i sensing af udskilte faktorer ved <em> Dictyostelium celler efter sult. Den præcise mekanisme af coronin A-medieret signalering i den tidlige sult respons stadig uklar. Involveret i denne fase af udviklingen Flere faktorer har været undersøgt, især konditioneret medium faktor (CMF) 25,26. Men om CMF handler alene eller med co-faktorer er fortsat uklart, og dens signaleringskaskade kun delvist forstået. Brug af aggregeringen kapacitet Dictyostelium-celler under neddykkede betingelser her beskrevet som en positiv read-out for udvikling gør det muligt at gennemføre større screening eksperimenter i en tid-effektiv måde i forhold til sammenlægning assays på agar overflader. Imidlertid aggregeringsassaysene under submerse betingelser har den ulempe ikke at opfylde den komplette udviklingsmæssige cyklus som celler vil blive standset i den indledende aggregering fase. Derfor er den her beskrevne teknik er ikke egnet til undersøgelse af senere udviklingsmæssige proceSSES. Sammenfattende kan den eksperimentelle tilgang dokumenteret her muliggøre yderligere karakterisering af potentielle tidlig sult faktor (er), der inducerer coronin A-afhængige indtræden i tidlig sult respons.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HL-5 media (for 1 L: 5 g proteose peptone, 5 g thiotone E peptone, 10 g glucose, 5 g yeast extract, 0.35 g Na2HPO4*2H2O, 0.35 g KH2PO4, 0.05 g dihydrostreptomycin-sulfate, pH 6.6) | |||
| Proteose peptone | BD Bioscience | 211693 | |
| Thiotone E peptone | BD Bioscience | 211684 | |
| Yeast extract | BD Bioscience | 212750 | |
| Glucose | AppliChem | A3666 | |
| Na2HPO4*2H2O | Fluka | 71643 | |
| KH2PO4 | AppliChem | A1043 | |
| dihydrostreptomycin-sulfate | Sigma-Aldrich | D1954000 | |
| PBM (0.02 M potassium phosphate, 10 μM CaCl2, and l mM MgCl2, pH 6.1) | self made | ||
| BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, pH 6.5) | self made | ||
| 0.45-μm Filtropure S filter | Sarstedt | 83.1826 | |
| Falcon 24-well Tissue culture plate | Fisher Scientific | 08-772-1H | |
| Cellobserver microscope | Zeiss | custom built | |
| AxioVision software | Zeiss | ||
| IPC Microprocessor–controlled dispensing pump | ISMATEC | ISM 931 | |
| Axiovert 135M microscope | Zeiss | 491237-0001-000 | |
| Incubation Shaker | Inforst HT Minitron |
References
- Weijer, C. J.
- Devreotes, P. Dictyostelium discoideum: a model system for cell-cell interactions in development. Science. 245, 1054-1058 (1989).
- Kimmel, A. R., Firtel, R. A. cAMP signal transduction pathways regulating development of Dictyostelium discoideum. Curr Opin Genet Dev. 1, 383-390 (1991).
- Clarke, M., Gomer, R. H. PSF and CMF, autocrine factors that regulate gene expression during growth and early development of Dictyostelium. Experientia. 51, 1124-1134 (1995).
- Robertson, A., Drage, D. J., Cohen, M. H. Control of Aggregation in Dictyostelium discoideum by an External Periodic Pulse of Cyclic Adenosine Monophosphate. Science. 175, 333-335 (1972).
- Konijn, T. M., Chang, Y. Y., Bonner, J. T. Synthesis of cyclic AMP in Dictyostelium discoideum and Polysphondylium pallidum. Nature. 224, 1211-1212 (1969).
- Iranfar, N., Fuller, D., Loomis, W. F. Genome-wide expression analyses of gene regulation during early development of Dictyostelium discoideum. Eukaryot Cell. 2, 664-670 (2003).
- Darmon, M., Brachet, P., Da Silva, L. H. Chemotactic signals induce cell differentiation in Dictyostelium discoideum. Proc Natl Acad Sci U S A. 72, 3163-3166 (1975).
- Mann, S. K., Firtel, R. A. Cyclic AMP regulation of early gene expression in Dictyostelium discoideum: mediation via the cell surface cyclic AMP receptor. Mol Cell Biol. 7, 458-469 (1987).
- Vinet, A. F., et al. Initiation of multicellular differentiation in Dictyostelium discoideum is regulated by coronin A. Mol Biol Cell. 25, 688-701 (2014).
- Eckert, C., Hammesfahr, B., Kollmar, M. A holistic phylogeny of the coronin gene family reveals an ancient origin of the tandem-coronin, defines a new subfamily, and predicts protein function. BMC Evol Biol. 11, 268 (2011).
- Pieters, J., Muller, P., Jayachandran, R. On guard: coronin proteins in innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol. 13, 510-518 (2013).
- Gatfield, J., Albrecht, I., Zanolari, B., Steinmetz, M. O., Pieters, J. Association of the Leukocyte Plasma Membrane with the Actin Cytoskeleton through Coiled Coil-mediated Trimeric Coronin 1 Molecules. Mol Biol Cell. 16, 2786-2798 (2005).
- Kammerer, R. A., et al. A conserved trimerization motif controls the topology of short coiled coils. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13891-13896 (2005).
- Uetrecht, A. C., Bear, J. E.
- Jayachandran, R., et al. Coronin 1 Regulates Cognition and Behavior through Modulation of cAMP/Protein Kinase A Signaling. PLoS Biol. 12, e1001820 (2014).
- Suo, D., et al. Coronin-1 is a neurotrophin endosomal effector that is required for developmental competition for survival. Nat Neurosci. 17, 36-45 (2014).
- Mueller, P., et al. Regulation of T cell survival through coronin-1-mediated generation of inositol-1,4,5-trisphosphate and calcium mobilization after T cell receptor triggering. Nat Immunol. 9, 424-431 (2008).
- de Hostos, E. L., Bradtke, B., Lottspeich, F., Guggenheim, R., Gerisch, G. Coronin, an actin binding protein of Dictyostelium discoideum localized to cell surface projections, has sequence similarities to G protein beta subunits. EMBO J. 10, 4097-4104 (1991).
- Shina, M. C., et al. Redundant and unique roles of coronin proteins in Dictyostelium. Cell Mol Life Sci. 68, 303-313 (2011).
- Cornillon, S., et al. Phg1p is a nine-transmembrane protein superfamily member involved in dictyostelium adhesion and phagocytosis. J Biol Chem. 275, 34287-34292 (2000).
- Gomer, R. H., Yuen, I. S., Firtel, R. A. A secreted 80 x 10(3) Mr protein mediates sensing of cell density and the onset of development in Dictyostelium. Development. (112), 269-278 (1991).
- Iijima, N., Takagi, T., Maeda, Y. A proteinous factor mediating intercellular communication during the transition of Dictyostelium cells from growth to differentiation. Zoological science. 12, 61-69 (1995).
- Mehdy, M. C., Firtel, R. A. A secreted factor and cyclic AMP jointly regulate cell-type-specific gene expression in Dictyostelium discoideum. Mol Cell Biol. 5, 705-713 (1985).
- Jain, R., Yuen, I. S., Taphouse, C. R., Gomer, R. H. A density-sensing factor controls development in Dictyostelium. Genes Dev. 6, 390-400 (1992).
- Loomis, W. F. Cell signaling during development of Dictyostelium. Dev Biol. 391, 1-16 (2014).
