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Medicine

साहस, आक्रामकता, और Shoaling Zebrafish व्यवहार सिंड्रोम के लिए Assays

Published: August 29, 2016 doi: 10.3791/54049
Automatic Translation
1,2, 1, 1
1Department of Biology, Saint Joseph’s University, 2Genomics and Computational Biology, University of Pennsylvania

Abstract

एक व्यवहार सिंड्रोम मौजूद है जब विशिष्ट व्यवहार अलग अलग संदर्भों के तहत बातचीत। Zebrafish हाल ही के अध्ययन में परीक्षण विषयों से किया गया है और यह प्रोटोकॉल का मानकीकरण करने के लिए उचित विश्लेषण और व्याख्याएं सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है। हमारे पिछले अध्ययनों में, हम एक 1.5 एल समलम्बाकार टैंक में व्यवहार (सतह के पास समय, संक्रमण में विलंबता, संक्रमण की संख्या, और डार्ट्स) की एक श्रृंखला की निगरानी के द्वारा साहस मापा जाता है। इसी तरह, हम एक आयताकार 19 एल टैंक में अवलोकन के काटने, पार्श्व प्रदर्शित करता है, डार्ट्स, और समय एक झुका दर्पण के पास से आक्रामकता मात्रा। तिहाई में एक 76 एल टैंक विभाजित करके, हम भी shoaling वरीयताओं की जांच की। shoaling परख एक उच्च अनुकूलन परख है और विशिष्ट परिकल्पना के लिए सिलवाया जा सकता है। हालांकि, इस परख के लिए प्रोटोकॉल भी मानकीकृत, अभी तक अनुकूलन के लिए काफी लचीला होना चाहिए। पिछले अध्ययनों में, अंत कक्षों थे या तो खाली है, निहित 5 या 10 zebrafish, या 5 मोती danios (डी albolineatus)। fol मेंपांडुलिपि lowing, हम एक विस्तृत प्रोटोकॉल और प्रतिनिधि डेटा है कि प्रोटोकॉल है, जो व्यवहार सिंड्रोम प्रयोगों की प्रतिकृति के लिए अनुमति देगा के सफल आवेदन के साथ प्रस्तुत करते हैं।

Introduction

वहाँ एक दिया आबादी से अलग-अलग जानवरों के भीतर अलग-अलग व्यवहार के बीच संघों की जांच साहित्य के एक बढ़ती शरीर है। इन संगठनों व्यवहार सिंड्रोम कहा जाता है, और माप आम तौर पर साहस, आक्रामकता, खोजपूर्ण व्यवहार, और सुशीलता 1-5 शामिल हैं। व्यवहार सिंड्रोम दोनों प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष कारणों के लिए मूल्यवान हैं। सीधे, व्यवहार सिंड्रोम के ज्ञान के विकासवादी सिद्धांत, जनसंख्या संरचना, और जनसंख्या गतिशीलता 3 की एक और पूरी दृश्य प्रदान कर सकते हैं। परोक्ष रूप से, व्यवहार संघों के बारे में ज्ञान क्षेत्रों है कि इस तरह के औषध विज्ञान 6, 7 विष विज्ञान, व्यवहार आनुवंशिकी 8,9, और Endocrinology 10 के रूप में व्यवहार यों सूचित कर सकते हैं। क्योंकि इन प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष लाभ की, व्यवहार सिंड्रोम का एक बढ़ा ज्ञान इस तरह के zebrafish के रूप में आमतौर पर इस्तेमाल किया मॉडल जीवों में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। zebrafish का उपयोग कर रहे हैं अध्ययन ने पाया मैंव्यवहार सिंड्रोम 11-13 का विश्लेषण सहित विषयों की विविधता na। व्यवहार सिंड्रोम अनुसंधान के क्षेत्र में ज्ञान अग्रिम करने के लिए, और क्योंकि अन्य विषयों को भी परिकल्पना परीक्षण, के लिए व्यवहार माप का उपयोग व्यवहार के विश्वसनीय और संक्षिप्त विवरण वैध विश्लेषण और व्याख्याएं और मानकीकृत प्रोटोकॉल के लिए आवश्यक हैं प्रजाति के भीतर अंतर-अध्ययन तुलना की सुविधा होगी। हमारी प्रोटोकॉल प्रयोगशाला पाला zebrafish 14 की आबादी में एक साहस-आक्रामकता-shoaling व्यवहार सिंड्रोम को मापने के लिए विकसित किया गया था। हालांकि, प्रोटोकॉल के आधार (व्यक्तिगत मछली ट्रैकिंग, उचित randomization, और उचित विश्लेषण सुनिश्चित कर सकते हैं) आसानी से वैकल्पिक व्यवहार उपायों की एक किस्म के लिए संशोधित किया। इसके अतिरिक्त, साहस, आक्रामकता, या shoaling assays अलग परिकल्पना के परीक्षण के लिए व्यक्तिगत रूप से चलाया जा सकता है। इसलिए, कैसे एक व्यवहार सिंड्रोम अध्ययन और सफल व्यक्ति एल के लिए प्रोटोकॉल का संचालन करने का वर्णन करने के लिए है, जबकि यह हमारा लक्ष्य हैevel व्यवहार माप, इस प्रक्रिया के प्रत्येक पहलू अकेले खड़े हो सकते हैं।

व्यवहार सिंड्रोम पर साहित्य कई वर्गीकरण समूहों तक फैला है और मनुष्यों से 4 arthropods से, क्रम में एक व्यवहार सिंड्रोम मापने के लिए, कम से कम दो व्यवहार संदर्भों मात्रा निर्धारित किया जाना चाहिए। दुर्भाग्य से, वहाँ assays कि व्यवहार की कुल्हाड़ियों भर में व्यवहार माप यों इस्तेमाल कर रहे हैं में अक्सर छोटी निरंतरता है। उदाहरण के लिए, मछली में, साहस टी भूलभुलैया assays, खुले क्षेत्र assays, या एक उपन्यास या विदेशी प्रोत्साहन 15 की शुरूआत का उपयोग करके मापा जा सकता है। मछली में आक्रामकता के अध्ययन युग्म बातचीत, वीडियो प्रोत्साहन assays, या मिट्टी मॉडल assays 12,16,17 शामिल हो सकता है। इसी तरह, shoaling व्यवहार है, जो आम तौर पर shoalmate वरीयता की माप शामिल है के विश्लेषण, टैंक के विभिन्न प्रकारों में, अलग-अलग तरीकों के साथ प्रदर्शन किया जा सकता एसोसिएशन समय 21-23 निर्धारित करने के लिए। इस प्रोटोकॉल में Overa के एक विशिष्ट सबसेटडालूँगा व्यवहार परख प्रदर्शनों की सूची प्रस्तुत किया है। विशेष रूप से, इस प्रोटोकॉल एक तरीका है कि व्यक्तियों के भीतर तुलना की सुविधा निर्धारित करने के लिए कि क्या तुलना की आबादी के भीतर सभी व्यक्तियों भर में लगातार कर रहे हैं में साहस, आक्रामकता, और shoaling assays के माध्यम से व्यक्तियों को ट्रैक करने की एक पद्धति प्रस्तुत करता है। हम पिछले अध्ययनों 14,18 में zebrafish और दोषी चिचिल्ड (Amatitlania nigrofasciata) के साथ इस प्रोटोकॉल प्रदर्शन किया है, और यह किसी भी समान आकार मीठे पानी में मछली के साथ काम करेंगे।

साहस assays टैंक के ऊपरी और निचले भागों में बराबर आकार के क्षेत्रों का वर्णन एक क्षैतिज रेखा है कि एक 1.5 एल समलम्बाकार टैंक में आयोजित की जाती हैं। मात्रा निर्धारित व्यवहार टैंक के ऊपरी और निचले हिस्से, समय प्रत्येक भाग, डार्ट्स की संख्या में खर्च के बीच परीक्षण मछली द्वारा संक्रमण की संख्या, और विलंबता ऊपरी भाग में प्रवेश करने के लिए शामिल हैं। आक्रामकता परख एक 19L आयताकार टैंक भी शामिल है कि में किया जाता हैएक 3 इंच एक्स 5 इंच दर्पण टैंक 19 के निचले बाएँ कोने में स्थित के बारे में 22 डिग्री पर झुका। परीक्षण मछली और अपनी परछाई के बीच काटने की संख्या, पार्श्व प्रदर्शित करता है, डार्ट्स - मात्रा निर्धारित व्यवहार समय की कुल राशि लक्ष्य मछली दर्पण 20 के साथ बातचीत के द्वारा खर्च किए गए, विशिष्ट आक्रामक संकेतक के साथ शामिल हैं। इन विशिष्ट संकेतक के लिए, काटने एक खुले मुंह के साथ दर्पण की ओर त्वरित lunges के रूप में परिभाषित कर रहे हैं, पार्श्व प्रदर्शित करता है दर्पण की दिशा में पार्श्व, कवच, गुदा और पृष्ठीय पंख के जगमगाता हुआ के रूप में परिभाषित कर रहे हैं, और डार्ट्स किसी भी अनिश्चित हैं कि आंदोलनों हैं दर्पण की ओर निर्देशित नहीं। अन्त में, shoaling परख एक सप्ताह में तीन संभाग टैंक के केंद्र कक्ष में एक परीक्षण मछली के व्यवहार quantifies। टैंक की ओर कक्षों या तो खाली हैं, या मछली की एक "लक्ष्य रेती" होते हैं, और समय परीक्षण मछली प्रत्येक पक्ष चैम्बर के पास खर्च करता 21-23 मापा जाता है। एक समग्र स्कोर, ताकत के रूप में भेजाShoaling की GTH (एसओएस), प्रत्येक व्यक्ति के परीक्षण मछली, उत्तेजनाओं को विशेष के लिए गणना की है, का विश्लेषण करती है और नीचे की ओर 14 में इस्तेमाल किया जा सकता है। सभी व्यवहार एक भी दर्शक, या कई दर्शकों मुक्त व्यवहार मात्रा का ठहराव JWatcher 24 के रूप में जाना जाता सॉफ्टवेयर का उपयोग करके रन बनाए हैं।

एक व्यवहार सिंड्रोम की उपस्थिति का परीक्षण मुख्य रूप से एक सांख्यिकीय प्रयास है, और यह दिशा निर्देशों का पालन करने के लिए उचित रूप Budeav 2010 तक प्रस्तुत किया है 25। विशेष रूप से, यह केंद्रित है और normed डेटा पर एक प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) प्रदर्शन करने की सिफारिश की है, जिसमें आदानों एकाधिक व्यवहार माप (यानी, साहस और आक्रामकता) के साथ assays में एक व्यक्ति के व्यवहार की वैक्टर हैं। पीसीए, एक संबंध मैट्रिक्स पर प्रदर्शन, व्यवहार माप के dimensionality कम कर देता है, और इस तरह सबसे महत्वपूर्ण ज्ञान है कि बदलाव की एक बहुमत बताते निकालता है। निकाले घटकों तो बस व्याख्या की जा सकतीब्याज और प्रतिगमन स्कोर के अलग-अलग व्यवहार के लिए उच्च कारक लोडिंग पर एड व्याख्यात्मक घटकों के आधार पर प्रत्येक व्यक्ति के लिए निकाला जा सकता है। ये प्रतिगमन स्कोर तो मुसीबत का इशारा माप और अन्य विभिन्न गैर-व्यवहार की ऐसी मछली के आकार या सेक्स के रूप में माप की तुलना में हो सकता है।

इस कार्यप्रवाह zebrafish व्यवहार सिंड्रोम, जिसमें एक सेक्स विशिष्ट व्यवहार सिंड्रोम है कि साहस और shoaling 14 के बीच मौजूद है की खोज की थी के एक अध्ययन में लागू किया गया है। इस स्थिति में, बिंदास zebrafish पुरुषों अधिक एक बड़े, अधिक आक्रामक प्रजातियों (डी albolineatus) के साथ संबद्ध करने की संभावना है, लेकिन इस एसोसिएशन महिलाओं में खो जाती है। इस कार्यप्रवाह भी किशोर दोषी cichlid परिजन (Amatitlania nigrofasciata) 18, जिसमें एक व्यवहार सिंड्रोम पता नहीं था, संभावित प्रजातियों के व्यवहार प्लास्टिसिटी का संकेत के एक अध्ययन में लागू किया गया था। इसलिए, निम्नलिखित प्रोटोकॉल डब्ल्यू प्रस्तुत किया हैएक व्यक्तिगत स्तर व्यवहार सिंड्रोम का अध्ययन कर के ढांचे में तीन विशिष्ट assays (साहस, आक्रामकता, और shoaling) की प्रकृति का वर्णन करने का एक लक्ष्य ith।

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Protocol

मकान की देखभाल, और zebrafish के अध्ययन के लिए निम्नलिखित तरीके में सेंट जोसेफ विश्वविद्यालय IACUC द्वारा अनुमोदित किया गया है।

1. Zebrafish आवास और देखभाल

  1. विषय zebrafish एक स्थानीय सप्लायर से, या जंगली पकड़ा आबादी से प्राप्त करते हैं। कृपया यह है कि आवास zebrafish आवास जंगली पकड़ा आबादी के लिए आवश्यक हैं IACUC दिशा निर्देशों और अतिरिक्त परमिट के अधीन है ध्यान दें।
  2. पहचानें और अलग zebrafish सेक्स के अनुसार। वैकल्पिक रूप से, इस कदम को छोड़ या अलगाव का एक अलग तरीका अध्ययन परिकल्पना पर आधारित के साथ बदलें।
    नोट: सेक्स विशेषताओं zebrafish में निर्धारित करने के लिए, विशेष रूप से महिलाओं में मुश्किल हो जाता है। सेक्स भेद करने के लिए इन दिशानिर्देशों का 10 या उपयोगी ऑनलाइन मैनुअल को देखें।
  3. बेतरतीब ढंग से फोकल मछली का उचित अनुपात में आगे आबादी को अलग मछली प्रोत्साहन के लिए। नोट: फोकल मछली परीक्षण विषयों behavio की श्रृंखला के माध्यम से पालन कर रहे हैंRAL assays, और प्रोत्साहन मछली व्यक्तियों कि आक्रामकता और shoaling assays में प्रोत्साहन कक्षों पर कब्जा कर रहे हैं।
    नोट: परंपरागत रूप से, 1 और 5 के बीच shoaling assays में फोकल मछली प्रति प्रोत्साहन मछली और एक 1: 1 प्रोत्साहन: आक्रामकता assays 14,17 में फोकल मछली अनुपात इस्तेमाल कर रहे हैं। हालांकि, शोधकर्ता विशेष रूप से ध्यान में परिकल्पना के साथ अध्ययन डिजाइन करने की जरूरत है (यानी, उत्तेजना चाहिए मछली फोकल मछली व्यवहार में निरंतरता बनाए रखने के लिए स्थिर रखा जा सकता है, या उत्तेजना चाहिए मछली प्रत्येक परख के बीच घुमाया जा उचित यादृच्छिकीकरण सुनिश्चित करने के लिए)।
  4. एक सख्त 12:12 / प्रकाश अंधेरे चक्र के तहत zebrafish आवास रैक में सभी मछली (27.5-28.5 डिग्री सेल्सियस) की दुकान। सभी फोकल और प्रोत्साहन मछली परत खाना दैनिक फ़ीड और नमकीन चिंराट साप्ताहिक, गैर अनुसंधान के दिनों में।
  5. सुनिश्चित करें कि सभी परीक्षण ZT1 और ZT5 (zeitgeber समय) के बीच किया जाता है circadian ताल प्रभाव 26 से बचने के लिए किया जाना है।

2. Randomization और टैंक सेटअप

  1. राव्यवहार assays के एक विशेष दृश्य के लिए सभी व्यक्तियों को एक प्राथमिकताओं ndomize। एक ऑनलाइन यादृच्छिक अनुक्रम जनरेटर 27 या एक सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर पैकेज (आर) एक यादृच्छिक अनुक्रम जनरेटर का उपयोग कर एक सुसंगत यादृच्छिकीकरण योजना को निर्धारित करें।
    1. 1 से 3 तक प्रत्येक परख लेबल और इस काम के अनुरूप रखने। प्रत्येक व्यक्ति के लिए एक यादृच्छिक अनुक्रम निरुपित और व्यवहार परख लेबल के अनुसार अनुक्रम नक्शा। उदाहरण के लिए, तीन की कुल assays (1 Shoaling, 2 साहस के लिए मैप करने के लिए मैप, और 3 आक्रमण करने के लिए मैप) के लिए, एक भी व्यक्ति '2,3,1' का एक यादृच्छिक अनुक्रम हो सकता है, जो उन्हें विशिष्ट प्रदर्शन करने की आवश्यकता होगी निर्दिष्ट अनुक्रम में व्यवहार assays।
  2. स्थानों है कि प्रतिकूल बाहरी उत्तेजनाओं के लिए संभावना को कम करने और एक वीडियो camcorder के लिए पर्याप्त जगह पूरे टैंक पर कब्जा करने के लिए सुनिश्चित हो में प्रयोगशाला में परख टैंक (साहस, आक्रामकता, और shoaling) की स्थापना की। सुनिश्चित करें कि Camcorder enoug गया हैज स्पष्टता टैंक लेबल को देखने के साथ ही फोकल मछली और सेटअप इस स्थिति में camcorder के सूक्ष्म व्यवहार भेद करने में सक्षम हो।
  3. अंतर रिकॉर्डिंग का एक परिणाम के रूप में व्यवहार स्कोरिंग में अनायास ही मतभेदों को कम करने के लिए निर्दिष्ट टैंक का एक पूरा दृश्य के साथ एक ही स्थिति में बनाए रखा कैमरा के साथ सभी व्यवहार assays रिकॉर्ड।
    नोट: भारी तस्करी क्षेत्रों में और आंदोलन के रूप में दरवाजे से टैंक रखने से बचें और ध्वनि zebrafish व्यवहार को प्रभावित करेगा।
  4. प्रत्येक व्यवहार परख स्कोरिंग के लिए अद्वितीय JWatcher प्रोटोकॉल 24 स्थापित करना। एकत्र आंकड़ों को संक्षेप में प्रस्तुत करने के लिए कीस्ट्रोक्स और फोकल विश्लेषण फाइल करने के लिए व्यवहार आवंटित करने के लिए फोकल मास्टर फाइल बनाने के लिए कैसे जानने के लिए JWatcher मैनुअल को देखें।
    नोट: JWatcher व्यवहार स्कोरिंग सॉफ्टवेयर है कि विश्वसनीय और repeatable अनुकूलित व्यवहार स्कोरिंग 24 के लिए अनुमति देता है।
  5. तारीख, मछली संख्या, और सब व्यवहार assays के लिए परख नंबर ट्रैक करने के लिए एक लेबलिंग स्कीम को परिभाषित करें (जैसे,'F5-B-123115' जिसका अर्थ है मछली 5, साहस परख, दिसंबर 31, 2015 को) और ध्यान में रखते हुए और कैमरे के फोकस में टेप के साथ टैंक के बाहर लेबल। रखें और त्वरित संदर्भ और भविष्य की गुणवत्ता नियंत्रण के लिए एक प्रयोगशाला नोटबुक में इस जानकारी का रिकॉर्ड है।
  6. एक दशानुकूलन टैंक है कि सभी assays के बीच के रूप में अच्छी तरह से सीधे इस्तेमाल किया जाएगा के बाद व्यक्तियों आवास रैक से हटा रहे हैं सेट करें।
    नोट: दशानुकूलन टैंक और टर्मिनल टैंक छोटे एक्वैरियम बजरी के साथ (40 सेमी x 20 सेमी x 25 सेमी) और एक फिल्टर है कि निकट आवास रैक जैसे लगते हैं।
  7. assays के सभी पूरा कर रहे हैं के बाद, कि सभी का इस्तेमाल किया फोकल व्यक्तियों के लिए अंतिम गंतव्य के टैंक के रूप में काम करेगा एक अलग टर्मिनल टैंक में अलग-अलग हस्तांतरण। एक टैंक है कि काफी बड़ी उनके जीवन (जैसे, 25 गैलन) के शेष के लिए व्यक्तियों का एक समूह के घर में है का प्रयोग करें।
    नोट: यह acros सुसंगत और इसी तरह पानी के तापमान और शर्तों को बनाए रखने के लिए बहुत महत्वपूर्ण हैसब टैंक। इस आवास, दशानुकूलन, और सभी परीक्षण के टैंक भी शामिल है।

3. आक्रामकता परख का आयोजन

  1. एक 19 एल आयताकार 30 सेमी x 15 सेमी x 10 सेमी को मापने के टैंक में आक्रामकता परख आचरण। बाहरी अपारदर्शी आक्रामकता टैंक के तीन पक्षों के आसपास के विभाजन में टैंक संगठन, सामने से देखने के लिए अवगत कराया छोड़ रहा है, अवांछनीय बाहर उत्तेजनाओं को कम करने के लिए। चार बराबर आयताकार quadrants में बाहरी निशान के साथ टैंक फूट डालो और एक दर्पण को स्थायी रूप से निचले बाएँ चक्र के भीतर, 22.5 डिग्री पर झुका टैंक के दूर बाईं ओर के खिलाफ एक सही त्रिकोण के गठन (सिलिकॉन गहनी) के साथ तय कर लो।
  2. सुनिश्चित करें कि दशानुकूलन टैंक और आक्रामकता टैंक में पानी का तापमान आवास रैक के 2 डिग्री सेल्सियस के भीतर है। ऐसा करने के लिए, ताजा, वृद्ध पानी 27.5-28.5 डिग्री सेल्सियस आक्रामकता टैंक में जोड़ने के लिए तैयार करने के लिए पूर्व गरम है। कृपया ध्यान दें कि यह महत्वपूर्ण है कि अनुचित समाप्त करने के लिए प्रत्येक परख के बीच में पानी बदलने के लिएघ्राण cues।
  3. आवास रैक से एक अलग दशानुकूलन टैंक जहां यह 10 मिनट के लिए acclimate जाएगा करने के लिए स्थानांतरण, सिंघी के द्वारा, एक केन्द्र मछली।
    नोट: यह अनुचित हैंडलिंग के माध्यम से मछली के लिए पेश प्रोत्साहन कम करने के लिए महत्वपूर्ण है। स्थानांतरण व्यक्तियों के रूप में पहले 27 में वर्णित है।
    1. विशेष रूप से, मैन्युअल रूप से और ध्यान से ब्याज की टंकी में एक छोटे से, पारदर्शी प्लास्टिक के कप जगह है। मछली में खलल न डालें के रूप में ज्यादा के रूप में एक शुद्ध का उपयोग करके हस्तांतरण के बिना, धीरे धीरे कप में मछली स्कूप।
  4. सुनिश्चित करें कि वीडियो camcorder पुष्टि है कि आक्रामकता परख टैंक (3.1 कदम देखें) ध्यान में है और तुरंत आक्रामकता की टंकी, डिवाइस पर प्रेस रिकार्ड में स्थानांतरित करने से पहले व्यक्ति को रिकॉर्ड करने के लिए तैयार है। दशानुकूलन टैंक से आक्रामकता की टंकी के लिए सिंघी के माध्यम से फोकल मछली स्थानांतरण।
    नोट: यह मछली प्रविष्टि का सही समय ट्रैक करने के लिए आक्रामकता टैंक प्रवेश करने से पहले रिकॉर्ड करने के लिए महत्वपूर्ण है।
  5. aggr रिकॉर्ड10 मिनट और 30 सेकंड और फिर कप दशानुकूलन टैंक में वापस आक्रामकता टैंक से फोकल मछली के लिए ession टैंक।
  6. जब रिकॉर्डिंग देख रहा है, 30 सेकंड के इंतजार के बाद मछली स्कोरिंग व्यवहार से पहले एक अतिरिक्त दशानुकूलन अवधि के रूप में की टंकी के लिए शुरू किया गया है।
  7. JWatcher स्कोरिंग प्रणाली आक्रामक व्यवहार के लिए परिभाषित का उपयोग करना, 10 मिनट के लिए निम्न व्यवहार यों: आईने के पास समय बिताया, दर्पण दृष्टिकोण, डार्ट्स की संख्या का प्रयास काटने (दर्पण की दिशा में मुंह खोलने) की संख्या, और पार्श्व प्रदर्शित की संख्या की संख्या (पृष्ठीय, कवच, गुदा, और दुम फिन निर्माण) 9।
  8. स्कोर एक भी आक्रामकता परख कम से कम दो बार, जब तक परख पुनरावृत्तियों के बीच उच्च समझौते के साथ रन बनाए है।

4. साहस परख का आयोजन

  1. एक छोटे से 1.5 एल समलम्बाकार टैंक में साहस परख आचरण, 15 सेमी x 26.5 सेमी x 22.5 सेमी ऊपर नीचे एक्स 6 सेमी चौड़ाई लंबा मापने। सभी पक्षों के आसपास लपेटें अपारदर्शी कागज ओटैंक च लेकिन सामने से देखने के लिए अवगत कराया छोड़ दें। टंकी के नीचे के हिस्से से शीर्ष हदबंदी के लिए टैंक के लिए टेप बाहरी की एक एकल, पतली टुकड़ा रखें।
  2. यह सुनिश्चित करें कि साहस की टंकी में पानी का तापमान आवास रैक के 2 डिग्री सेल्सियस के भीतर है (3.2 कदम देखें)
  3. दशानुकूलन की टंकी के लिए आवास के रैक से फोकल मछली स्थानांतरण (3.3 कदम देखें) और 10 मिनट के लिए acclimate करते हैं।
  4. सुनिश्चित करें कि Camcorder साहस परख रिकॉर्ड करने के लिए और, एक बार डिवाइस पर फोकल मछली, प्रेस रिकॉर्ड हस्तांतरण के लिए तैयार के लिए तैयार है। 8 मिनट और 30 सेकंड के लिए साहस की टंकी और रिकॉर्ड करने के लिए दशानुकूलन टैंक से फोकल मछली स्थानांतरण।
  5. जब रिकॉर्डिंग देख रहा है, एक अतिरिक्त 30 सेकंड दशानुकूलन अवधि के लिए अनुमति देने के बाद मछली स्कोरिंग से पहले की टंकी के लिए शुरू की है।
  6. JWatcher सॉफ्टवेयर का प्रयोग, 8 मिनट के लिए साहस व्यवहार यों। विशेष रूप से, यों तो निम्न व्यवहार: सतह के पास समय, विलंबता ऊपरी हिस्से, टीआरए की संख्या दर्ज करने के लिएऊपरी हिस्से में nsitions, और अनियमित आंदोलनों (डार्ट्स) की संख्या 29।
  7. स्कोर एक भी साहस परख कम से कम दो बार, जब तक परख पुनरावृत्तियों के बीच उच्च समझौते के साथ रन बनाए है।

5. Shoaling परख का आयोजन

  1. तीन डिब्बों दो गिलास सिलिकॉन गहनी के साथ बंद डिवाइडर से विभाजित किया गया है कि एक 76 एल टैंक में shoaling परख आचरण (जिसके परिणामस्वरूप तीन डिब्बों दो प्रोत्साहन क्षेत्रों और एक फोकल डिब्बे से मिलकर बनता है)। बाह्य, प्रोत्साहन जोन 'कांच विभक्त में से प्रत्येक से 6.35 सेमी नामित दो वरीयता क्षेत्रों, दो शरीर का संकेत लंबाई 30 निशान। बाह्य shoaling टैंक के तीन पक्षों के आसपास अपारदर्शी विभाजन लागू करें, लेकिन सामने से देखने के लिए अवगत कराया छोड़ दें।
    ध्यान दें: यह वरीयता क्षेत्र अलग-अलग आकार की प्रजातियों के लिए विशिष्ट परिकल्पना के लिए परीक्षण करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
  2. अध्ययन की प्रकृति पर निर्भर करता है, का चयन प्रोत्साहन शोल्स में कम से कम 12 घंटा befor के लिए acclimate करने के लिएई परीक्षण और प्रयोग के दौरान पूरे shoaling टैंक में रहते हैं।
    नोट: प्रोत्साहन शोल्स कि आकलन करने के लिए कैसे फोकल मछली उपस्थिति या इन शोल्स के अभाव में बर्ताव करता है उपयोग किया जाता है व्यक्ति मछली का संग्रह कर रहे हैं। विभिन्न प्रोत्साहन रेती संयोजन विविध shoaling परिकल्पना के एक नंबर का परीक्षण करने के लिए चुना जा सकता है। सुनिश्चित करें कि प्रोत्साहन शोल्स प्रत्येक प्रोत्साहन जोन के बीच घुमाया जाता पक्ष पूर्वाग्रह से बचने के लिए और भी परीक्षण से पहले कम से कम 12 घंटे के लिए acclimate करने के लिए अनुमति दी जाती हो।
  3. दशानुकूलन टैंक में फोकल मछली हस्तांतरण के रूप में पहले से वर्णित (3.3 कदम देखें)
  4. स्थानांतरण, shoaling टैंक में केंद्रीय डिब्बे में मध्यवर्ती दशानुकूलन टैंक से सिंघी, फोकल मछली द्वारा।
  5. एक 10 मिनट लाइव स्कोर अवलोकन अवधि से पहले एक 10 मिनट दशानुकूलन अवधि के लिए अनुमति दें। वैकल्पिक रूप से, shoaling assays के रिकॉर्ड और JWatcher का उपयोग कर बाद में स्कोर। मछली shoaling होने के लिए निर्धारित कर रहे हैं जब वे कक्ष में वरीयता क्षेत्र के भीतर हैंलक्ष्य रेती आवास।
  6. प्रत्येक वरीयता क्षेत्र और समय केंद्र मात्रा में खर्च में बिताए समय यों।
  7. एक अतिरिक्त वर्णनात्मक उपाय के रूप में, 'shoaling की ताकत' (एसओएस) की गणना। -1 और +1 के बीच एक मूल्य निर्दिष्ट जहां परिमाण कितनी बार का वर्णन एक व्यक्ति मछली Shoals।
  8. shoaling क्षेत्रों के क्षेत्र से विभाजित समय बिताया shoaling के अनुपात की गणना और समय के अनुपात घटाना shoaling नहीं और गैर-shoaling क्षेत्रों के क्षेत्र में बिताया। प्रत्येक जोन व्यक्तिगत रूप से प्रत्येक क्षेत्र की मात्रा से विभाजित में बिताए समय का योग पर इस मात्रा रखें। इस गणना के बारे में अधिक जानकारी पिछले एक अध्ययन 14 में पाया जा सकता है।

6. डेटा गुणवत्ता नियंत्रण

  1. पारंपरिक डेटा विश्लेषण उपकरणों का उपयोग कर 31-32 डेटा का विश्लेषण।
  2. सभी व्यवहार के लिए nonparametric Levene के परीक्षण का उपयोग विचरण की एकरूपता के लिए टेस्ट। एक व्यवहार गैर सजातीय है, तो एक लॉग-परिवर्तन के लिए प्रदर्शन33।
  3. पुष्टि कोई अनुक्रम प्रभाव देखते हैं कि (यानी, कि यादृच्छिकीकरण आदेश व्यक्तियों के व्यवहार को प्रभावित नहीं किया था) सजातीय डेटा 34 पर एक Kruskal वालिस एनोवा का उपयोग कर।
  4. इस बात की पुष्टि एक निश्चित कारक के रूप में 35 पक्ष के साथ मुसीबत का इशारा सूचकांकों पर univariate सामान्य रेखीय मॉडल बनाने के द्वारा shoaling परख के लिए कोई साइड पूर्वाग्रहों देखते हैं कि।
    नोट: अगर कोई डेटा के साथ कोई मुद्दों को कम कर रहे हैं, नीचे की ओर विश्लेषण का आयोजन किया जा सकता है। मुद्दे हैं, तो, अतिरिक्त परिवर्तनों के साथ सामंजस्य जैविक रूप से प्रशंसनीय स्पष्टीकरण के साथ युक्तिसंगत, और / या नमूना आकार में वृद्धि।

7. डेटा का विश्लेषण करें

  1. गणना दो पूंछ स्पीयरमैन रैंक अलग साहस और आक्रामकता assays के भीतर सभी कार्यों के लिए 36 सहसंबंध।
  2. व्यवहार assays के लिए निरंतरता के साथ एक दो तरह से मिश्रित मॉडल है कि एक से अधिक टिम आयोजित की गई गणना के रूप में intraclass सहसंबंध गुणांक (आईसीसी)एक भी व्यक्ति 36 ई। इस माहौल में, आईसीसी कैसे लगातार एक मछली एक दिया परख में व्यवहार एक से अधिक बार मापा का एक माप है।
  3. एकत्रित करना और Norming सभी व्यवहार से preprocess साहस और आक्रामकता व्यवहार एक प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) 25 के लिए इनपुट के लिए तैयार करने के लिए।
    नोट: एकत्रित करना और Norming द्वारा माप Preprocessing एक महत्वपूर्ण कदम है। इस preprocessing कदम व्यवहार कि अस्थायित्व अधिक आवृत्ति और अधिक के साथ घटित जरूरत से ज्यादा निकाले घटकों की व्याख्याओं को प्रभावित करती है बिना। एकत्रित करना और Norming की प्रक्रिया इस पूर्वाग्रह को दूर करेगा।
  4. निर्धारित करती है कि साहस और आक्रामकता एक व्यवहार सिंड्रोम के रूप में एक साथ जुड़े हुए हैं एक संबंध मैट्रिक्स के साथ एक पीसीए प्रदर्शन करना। 0.6 पर> प्रत्येक घटक महत्वपूर्ण के व्यवहार की व्याख्या लोडिंग। व्यवहार के अध्ययन के लिए पीसीए की रिपोर्टिंग के लिए एक व्यापक गाइड के लिए Budaev 2010 24 देखें। एक रोड़ी साजिश जानकारीपूर्ण किया जाएगा, जिस पर eigenvectors व्याख्या के लिए रखा जाना चाहिए।
  5. ऐसे आर या SPSS 31,32 के रूप में सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर पैकेज का उपयोग करना, प्रत्येक व्यक्ति के लिए प्रत्येक घटक के लिए स्कोर निकाल सकते हैं। स्कोर का प्रतिनिधित्व कितना भी व्यक्ति के व्यवहार को विशेष घटक के द्वारा समझाया जा सकता है।
  6. कारक प्रतिगमन स्कोर और 36 shoaling की ताकत के बीच स्पीयरमैन रैंक सहसंबंध की गणना।
    नोट: साहस और आक्रामकता व्यवहार ही घटक पर लोड या, यदि अगर महत्वपूर्ण व्याख्या लोडिंग के साथ किसी भी घटक shoaling की ताकत के साथ संबद्ध एक व्यवहार सिंड्रोम वर्तमान माना जाता है। यह भी ध्यान रखें कि shoaling की ताकत पीसीए में शामिल नहीं है और अधिक जटिल व्यवहार quantifications (साहस और आक्रामकता) के बेहतर व्याख्याओं के लिए अनुमति देने के लिए। पीसीए orthogonally साहस टूट जाएगी और आक्रामकता राशि भिन्नता के बारे में बताया और अच्छी तरह से इन जटिल माप के लिए अनुकूल है अधिकतम करने के लिए eigenvectors में पेश करता है। व्याख्याeigenvectors जिसके परिणामस्वरूप और उनमें से प्रत्येक पर shoaling माप के बारे में हमारी ताकत regressing कैसे जटिल व्यवहार (साहस और आक्रामकता) में से प्रत्येक के लिए एक अधिक अच्छी तरह से परिभाषित बाइनरी shoaling माप से संबंधित की एक बहुत अधिक सहज व्याख्या देता है (यानी, मछली shoaling है या shoaling नहीं)।

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Representative Results

अध्ययन की प्रकृति, और विशिष्ट प्रोटोकॉल कार्यरत पर निर्भर करता है, कई अलग परिणाम एक व्यवहार सिंड्रोम प्रयोग में संभव हो रहे हैं। निम्न टेबल और आंकड़े, जहां संकेत दिया है, हमारे पिछले जर्नल में प्रकाशित एक अध्ययन से अनुकूलित कर रहे हैं व्यवहार 14 और पत्रिका Zebrafish 17 प्रक्रियाओं। जब प्रस्ताव (ऊपर वर्णित के रूप में) अपनी संपूर्णता, परिणाम के दो सेट, 'परख सहसंबंध के भीतर' और में किया जाता है 'परख के बीच परस्पर,' उम्मीद कर रहे हैं (चित्रा 1)।

परिणामों के पहले सेट परख स्थिरता के भीतर का वर्णन है। विशेष रूप से, परिणामों का वर्णन कैसे व्यवहार साहस परख के भीतर एक दूसरे को और आक्रामकता परख के भीतर अलग से। टेबल्स 1 और 2 क्या इन सहसंबंध साहस और एजी के लिए की तरह दिखना चाहिए वर्णन के साथ सहसंबद्ध होते हैंgression assays और प्रस्तुत डाटा पिछले एक अध्ययन 14 से अनुकूलित कर रहे हैं। साहस परख के लिए, यह ऊपरी हिस्से को नकारात्मक रूप से जोड़ा जाता है में प्रवेश करने के संक्रमण और समय टैंक के ऊपरी हिस्से में खर्च सकारात्मक सहसंबद्ध होते हैं की संख्या है, लेकिन विलंबता की उम्मीद है। साहस की टंकी में व्यवहार का साहस अक्ष पर मापा व्यक्तियों के लिए प्रतिनिधि परिणाम तालिका 1 में दिया जाता है (4.1 कदम देखें)। आक्रामकता परख के लिए, यह उम्मीद है कि काटता है, पार्श्व प्रदर्शित करता है, और समय के आईने के पास बिताया सभी सहसंबद्ध होते हैं। आक्रामकता टैंक में व्यवहार की आक्रामकता अक्ष पर मापा व्यक्तियों के लिए प्रतिनिधि परिणाम (3.1 कदम देखें) तालिका 2 में दिए गए हैं। डार्ट्स आमतौर पर आक्रामक व्यवहार के साथ सहसंबद्ध नहीं कर रहे हैं, हालांकि, कुछ मामलों में, nonaggressive मछली डार्ट के लिए (इसलिए एक नकारात्मक सहसंबंध करते हैं )। अन्त में, shoaling परख के लिए Shoaling (एसओएस) माप की एक ताकत shoaling टी के एक व्यक्ति के स्तर के उपाय प्रदान करता हैendency। Shoaling shoaling assays की एक किस्म भर में एक अत्यधिक repeatable व्यवहार जब SOS (आईसीसी = 0.641) 14 का उपयोग करके मापा और हमारे पिछले अध्ययनों के कई zebrafish 23,38 में shoaling व्यवहार की पुष्टि की है। चूंकि सभी व्यक्तियों के व्यवहार से प्रत्येक के लिए मापा जाएगा, हम इन कार्यों भर स्पीयरमैन सहसंबंध की गणना और उम्मीद कुछ व्यवहार, सहसंबद्ध किया जा करने के लिए के रूप में प्रतिनिधि परिणामों में zebrafish के लिए पहचान कर सकते हैं।

परिणामों का दूसरा भाग एक व्यवहार सिंड्रोम की उपस्थिति की जांच। साहस और आक्रामकता व्यवहार assays में मात्रा निर्धारित सभी व्यवहार की एकीकृत विश्लेषण के परिणामों के एक प्रधान घटक विश्लेषण (पीसीए) का उपयोग संक्षेप हैं। प्रत्येक व्यवहार के लिए उच्च लोडिंग के आधार पर दो से चार व्याख्या घटक होना चाहिए। एक भी eigenvector कि बदलाव का एक अच्छा हिस्सा बताते दोनों साहस एक से व्यवहार भी शामिल हैडी आक्रामकता assays, तो एक व्यवहार सिंड्रोम देखा गया है। हालांकि, अगर साहस और आक्रामकता assays से व्यवहार एक भी eigenvector पर ओवरलैप नहीं है, तो अध्ययन एक व्यवहार सिंड्रोम का वर्णन नहीं है। प्रतिनिधि परिणाम एक साहस-आक्रामकता व्यवहार सिंड्रोम (चित्रा 2) की अनुपस्थिति के लिए प्रस्तुत कर रहे हैं। इस उदाहरण में, घटक 1 सबसे जोरदार आक्रमण के व्यवहार के प्रतिनिधि, जबकि घटक 2 सबसे जोरदार साहस व्यवहार के साथ जुड़ा हुआ है। क्योंकि आक्रामकता और साहस व्यवहार ही घटक द्वारा प्रतिनिधित्व नहीं कर रहे हैं, यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि एक साहस-आक्रामकता व्यवहार सिंड्रोम का अभाव है कि वहाँ (साहस वैक्टर मोटे तौर पर आक्रामकता वैक्टर के लिए orthogonal) कर रहे हैं। इसके अलावा, इन कार्यों सेक्स से प्रभावित नहीं कर रहे हैं क्योंकि वितरण पैटर्न पुरुषों और महिलाओं के बीच ही है। यदि साहस या आक्रामकता व्यवहार shoaling साथ जुड़े रहे हैं का निरीक्षण करने के लिए, प्रत्येक मछली के लिए निकाले प्रतिगमन स्कोर CORR हैंमछली की मुसीबत का इशारा माप के साथ उत्तेजित। यह सुनिश्चित करने के लिए कि किसी भी सम्बंधित घटकों वास्तव व्यवहार की एक व्याख्या सेट वर्णन कर रहे हैं महत्वपूर्ण है। किसी भी घटक और shoaling माप के बीच उच्च निरपेक्ष मूल्य स्पीयरमैन सहसंबंध देखते हैं, तो एक shoaling व्यवहार सिंड्रोम मौजूद है। विशिष्ट परिणाम की परवाह किए बिना, यह सभी टिप्पणियों के लिए संभव जैविक व्याख्याओं प्रदान करने के लिए महत्वपूर्ण है। प्रतिनिधि परिणाम एक साहस-shoaling व्यवहार सिंड्रोम (3 टेबल) 14 के वर्णन के लिए प्रदान की जाती हैं। प्रस्तुत डाटा zebrafish के लिए विशिष्ट परिणाम का प्रतिनिधित्व करते हैं, वे डेटा की गुणवत्ता की माप के रूप में व्याख्या नहीं की जानी चाहिए। इसके कई कारण क्यों डेटा ऐसी प्रजाति या जनसंख्या मतभेद के रूप में विभिन्न प्रयोगों भर में अलग दिखेगा हैं।

आकृति 1
चित्रा 1. प्रस्तावितएक साहस, आक्रामकता के लिए कार्यप्रवाह, और व्यवहार सिंड्रोम प्रयोग shoaling। ठेठ माप प्रत्येक परख के लिए सूचीबद्ध हैं। कैसे व्यक्तिगत रूप से और फिर कैसे विश्लेषण एकीकृत करने के लिए भी सूचीबद्ध है assays का विश्लेषण करने की एक रूपरेखा। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. एक पीसीए के प्रतिनिधि परिणाम यह दर्शाता है कि एक साहस-आक्रामकता व्यवहार सिंड्रोम से अनुपस्थित है। लाल वैक्टर व्यवहार जो प्रत्येक घटक के साथ व्यक्तिगत स्कोर (सही और शीर्ष कुल्हाड़ियों का प्रतिनिधित्व घटक स्कोर (छोड़ दिया और नीचे कुल्हाड़ियों) और अंक के लिए योगदान का संकेत )। नर नीले अंक का प्रतिनिधित्व कर रहे हैं और महिलाओं हरी अंक का प्रतिनिधित्व करती हैं। ध्यान दें कि 'अनियमित व्यवहार' का उल्लेख करने के लिए 'डार्ट्स' और'आक्रामकता' दर के काटने और पार्श्व प्रदर्शित करता है कुल समय दर्पण के साथ बातचीत से विभाजित की संख्या को जोड़कर गणना की जा सकती। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

बदलाव विलंब डार्ट
ᴩ पी ᴩ पी ᴩ पी
भूतल समय 0.65 <0.001 * -0.68 <0.001 * 0.42 0.007 *
बदलाव -0.40 0.012 * 0.33 0.041 *
विलंब -0.47 0.002
* Α <0.05

तालिका 1:।। एक उपन्यास टैंक परख में साहस स्पीयरमैन रैंक सहसंबंध इस तालिका एट अल, 2015 से संशोधित किया गया था।

पार्श्व प्रदर्शित करता है डार्ट मिरर समय
ᴩ पी ᴩ पी ᴩ पी
काटने 0.69 <0.001 * -0.10 0.547 0.63 <0.001 *
पार्श्व प्रदर्शित करता है -0.06 0.735 0.66 <0.001 *
डार्ट -0.18 0.285
* Α <0.05

तालिका 2:।। एक उपन्यास टैंक परख में आक्रामकता स्पीयरमैन रैंक सहसंबंध इस तालिका एट अल, 2015 से संशोधित किया गया था।

ᴩ पी
पीसीए अवयव
साहस 0.339 0.035 *
आक्रमण 0.075 0.65
तीव्र गति -0.012 0.944

टी सक्षम 3:।। एक shoaling और साहस व्यवहार इस आबादी में मौजूद सिंड्रोम की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए पीसीए घटकों का प्रयोग इस तालिका एट अल, 2015 से संशोधित किया गया था।

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Discussion

प्रोटोकॉल अगर वहाँ साहस, आक्रामकता में लगातार संघों, और zebrafish में shoaling व्यवहार कर रहे हैं का निर्धारण करेगा। वहाँ इन कार्यों में से किसी के बीच एक दिया आबादी में लगातार संघों हैं, तो एक व्यवहार सिंड्रोम मौजूद है। आबादी के प्राकृतिक व्यवहार सिंड्रोम का अध्ययन करके, शोधकर्ताओं ने अपने व्यवहार गतिशील की एक और पूरी समझ, जनसंख्या संरचना, और संभवतः विकास के इतिहास 3 हो सकता है। इसके अलावा, औषध विज्ञान 6, 7 विष विज्ञान, व्यवहार आनुवंशिकी 8,9 में की तरह, इन व्यवहार सिंड्रोम को प्रभावित करता है कि पर्यावरण, और Endocrinology 10 अध्ययनों से छेड़छाड़, कैसे विभिन्न कारकों व्यवहार संघों को प्रभावित कर सकता है पर प्रकाश डाला सकता है। आक्रामकता-साहस-shoaling व्यवहार इस प्रोटोकॉल में पाया सिंड्रोम की विशिष्ट रचना सामान्य व्यवहार में अच्छी तरह से मॉडल जीव zebrafish 11-13 में अध्ययन शामिल हैं। हालांकि इस पद्धतिकिसी भी मछली प्रजातियों के लिए लागू किया जा सकता है, zebrafish का उपयोग के लिए विस्तृत आवेदन इस प्रोटोकॉल के अंतःविषय मानकीकरण के साथ मदद कर सकता है। प्रत्येक परख ऊपर वर्णित अधिक आसानी से नियंत्रित और अन्य तुलनीय तकनीक से चालाकी से किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, आक्रामकता परख नहीं बल्कि 17 उत्तेजना एक जीवित या मिट्टी मॉडल, वीडियो प्रोत्साहन, या खड़ी दर्पण छवि का उपयोग करने से आक्रामकता प्रतिक्रियाओं की एक व्यापक सरणी प्रकाश में लाना करने के लिए इच्छुक दर्पण का उपयोग करता है। साहस परख में मापा व्यवहार और अधिक आसानी से एक टी भूलभुलैया या बड़े खुले क्षेत्र परीक्षण 15 में से मात्रा निर्धारित कर रहे हैं। अन्त में, shoaling परख आसानी से एक व्यक्ति है, जो अलग-अलग स्तर पर व्यवहार सिंड्रोम के अध्ययन के लिए आवश्यक है, और लक्ष्य शोल्स की असीमित संयोजनों के उपन्यास प्रयोगात्मक सवाल पूछने के लिए अनुमति दे सकते हैं ट्रैक कर सकते हैं का वर्णन किया। इस प्रोटोकॉल व्यवहार सवालों की एक किस्म को समायोजित करने के लिए बदला जा सकता है, यह के मानकीकरण कैसे डीएनए, सेलुलर तंत्र पर और अधिक जानकारी के लिए नेतृत्व कर सकते हैंएस, सेलुलर विकास, और शुरू की रसायन व्यक्तिगत और जनसंख्या व्यवहार सिंड्रोम को प्रभावित कर सकते हैं।

आदेश में पूरा विश्वास है कि मनाया संघों सत्य हैं होने के लिए, प्रोटोकॉल का सावधानी से पालन किया जाना चाहिए। अधिकांश भाग के लिए, प्रोटोकॉल विशिष्ट परिकल्पना के अनुसार परिवर्तनीय है; हालांकि, वहाँ कई कदम है कि परिणाम में विश्वास सुनिश्चित करने के लिए प्रदर्शन किया जाना चाहिए रहे हैं। सबसे पहले, यह महत्वपूर्ण है कि व्यक्तियों इष्टतम स्थितियों (प्रोटोकॉल देखें) में, एक उपयुक्त टैंक में रखे जाते हैं और ठीक से तंग आ चुके हैं। पानी की स्थिति आवास रैक, दशानुकूलन टैंक, और परीक्षण के टैंक में अनुरूप होना चाहिए। पानी संगत नहीं है, तो मछली की स्थिति के लिए acclimate करने के लिए लंबे समय तक ले जाएगा, और व्यवहार माप ठीक से कब्जा नहीं दिया जाएगा। यह भी महत्वपूर्ण है कि पानी के साहस और आक्रामकता के बीच टैंक साफ किया है इतना है कि कृत्रिम odors assays के बीच खत्म नहीं किया जाता है। दूसरा, यह अत्यंत महत्व है कि सभी बिहेव की हैiors ठीक से रन बनाए हैं। यह सुनिश्चित करने के लिए, सभी assays कई प्रशिक्षण के अवसर के लिए कई दृश्यों के लिए अनुमति देने के लिए वीडियो टेप कर रहे हैं। एक भी प्रशिक्षित गणक सही मछली व्यवहार उपाय कर सकते हैं, लेकिन प्रशिक्षण के लिए कुछ समय ले करता है। एक सावधान प्रशिक्षण अवधि को नजरअंदाज कर दिया जाता है, तो व्यवहार अध्ययन के परिणामों का विश्वास कम है। कम नमूना आकार एक अच्छी तरह से प्रशिक्षित पर्यवेक्षक द्वारा किया जाता के साथ एक सावधान अध्ययन एक खराब प्रशिक्षित पर्यवेक्षक द्वारा किया जाता उच्च नमूना आकार के साथ एक अध्ययन की तुलना में अधिक शक्तिशाली है। अन्त में, एकत्र डेटा की गुणवत्ता नियंत्रण भी महत्वपूर्ण है। कदम है कि लिया जाता व्यक्तियों randomize करने के लिए, और पूर्वाग्रहों को दूर useable, विश्वसनीय आंकड़े में परिणाम चाहिए, और डेटा परिवर्तनों preprocessing विशिष्ट सांख्यिकीय परीक्षण के अनुसार (प्रोटोकॉल देखें) के लिए सिफारिश कर रहे हैं। तो इन चरणों का सावधानी से किया नहीं कर रहे हैं, विश्लेषण के उत्पादन में मज़बूती से व्याख्या नहीं हो सकता।

जैसा कि पहले उल्लेख, तकनीक भारी परिवर्तनीय accordi हैविशेष परीक्षा परिकल्पना करने के लिए एनजी। अन्य व्यवहार माप है कि विविध मछली प्रजातियों 39-41 की संख्या में एक व्यवहार सिंड्रोम में संबंधित होने की जांच की जा सकती है, वहाँ मौजूद हैं। जबकि प्रोटोकॉल के सिद्धांतों ही रहते हैं, विशिष्ट सवालों को आसानी से विविध परिकल्पना परीक्षण के लिए अनुमति देने के लिए बदला जा सकता है। उदाहरण के लिए, एक शोधकर्ता एक आक्रामकता और दोषी चिचिल्ड में खोजपूर्ण गतिविधि व्यवहार सिंड्रोम (Amatitlania nigrofasciata) की उपस्थिति के लिए परीक्षण करने के लिए ऊपर उल्लिखित प्रोटोकॉल का उपयोग कर सकते हैं। सवाल से संबंधित है, लेकिन अध्ययन जीव प्रोटोकॉल द्वारा वर्णित एक से अलग है। हालांकि, सामान्य चरण काफी हद तक ही रहते हैं। व्यक्तियों बेतरतीब किया जाना चाहिए और पता लगाया assays की एक श्रृंखला के माध्यम से, में assays के बीच, पानी सुसंगत और ताजा होना चाहिए दशानुकूलन समय के साथ, और वैज्ञानिक ठीक से प्रशिक्षित किया जाना चाहिए। एक बड़ा फर्क व्यवहार कि मापा जा रहे हैं विशिष्ट के अनुसार बदल जाने की संभावना हैएफआईसी परख, और व्यवहार संघों विशिष्ट प्रजातियों और मूल के माहौल के अनुसार बदल सकते हैं।

प्रोटोकॉल की सीमाओं के व्यवहार के अध्ययन के पारंपरिक अनिश्चितताओं से कुछ के साथ जुड़े हुए हैं। विशेष रूप से, यदि assays unreliably रन बनाए हैं तो यह संभावना निष्कर्षों की व्याख्या गलत हो रहा है, और यह इस त्रुटि की पहचान करना मुश्किल होगा। इस सीमा को पार करने के लिए, यह संभव है कि दो अच्छी तरह से प्रशिक्षित स्कोरर व्यवहार का निरीक्षण। उनकी विश्वसनीयता का आकलन करने के लिए, एक ही मछली पर लागू माप पर intraclass सहसंबंध गुणांक की गणना, और, यदि आवश्यक हो तो मतभेद के लिए समायोजित करें। वैकल्पिक रूप से, यदि उपलब्ध हो, इस तरह के Ethovision के रूप में स्वचालित ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर लागू किया है और एक अच्छी तरह से प्रशिक्षित पर्यवेक्षक द्वारा मान्य throughput और सटीकता 42 बढ़ाने के लिए किया जा सकता है। इसके अलावा, वहाँ नामकरण और "साहस" व्यवहार की स्कोरिंग के बारे में अलग अलग संभव व्याख्या कर रहे हैं। अन्य अध्ययनोंव्यवहार करार दिया है 43 में वर्णित है और दूसरों के रूप में "खोजपूर्ण" 44,45 व्यवहार का वर्णन किया है। हमारे काम में व्यवहार के रूप में "साहस" वर्णित किया गया था के रूप में यह एक ऐसा माहौल फोकल व्यक्ति के लिए अपरिचित में व्यवहार मापने था। हालांकि, जबकि अवधि वैकल्पिक व्याख्याओं के लिए विषय हो सकता है, इस प्रोटोकॉल या विश्लेषण को प्रभावित नहीं करता। इसके अतिरिक्त, हम उम्मीद करते हैं जबकि साहस और आक्रामकता assays के भीतर माप दृढ़ता से एक आबादी के भीतर सहसंबद्ध किया जाना है, वहाँ कुछ व्यवहार का कोई संबंध के लिए कम के कुछ उदाहरणों होने की संभावना है। इस सीमा, पीसीए की ताकत से दूर है क्योंकि यह परिवर्तनशीलता के महत्वपूर्ण स्रोत है और, भले ही माप सहसंबद्ध नहीं कर रहे हैं पर चाबियाँ, विश्लेषण व्यवहार भिन्नता एकत्र आंकड़ों में लगातार निकालने जाएगा। कुछ अन्त में, के रूप में, सभी वैज्ञानिक तरीकों के साथ मामला है, तो प्रोटोकॉल सार्वभौमिक रूप से अपनाया जाता है और लगातार कई प्रयोगशालाओं द्वारा किया जाता है, और वहाँ हैअप्रत्याशित, अपरिमेय confounding प्रोटोकॉल द्वारा शुरू की, तो यह संभावित हानिकारक तत्व साहित्य में बनी रहती है, और यह विघटित करने के लिए मुश्किल हो जाता है। औषधीय पुष्टि है कि assays के एक प्रतिनिधि सेट इरादा व्यवहार प्रतिक्रिया प्रकाश में लाना, व्यवहार तंत्रिका विज्ञान और हार्मोनल प्रतिक्रियाओं के एक अधिक व्यापक समझ की आवश्यकता है। व्यवहार सिंड्रोम व्यवहार के आधार को समझाने में सहायता कर सकते हैं, लेकिन इस प्रयोगशाला सीमा अधिक नियमित रूप से भविष्य के अध्ययनों में संबोधित करने के लिए सक्षम हो सकता है। फिर भी, परिणाम है कि उचित संशोधनों के साथ zebrafish में इस प्रोटोकॉल के उपयोग की पुष्टि की है, और, प्रदान किया गया है, प्रोटोकॉल विभिन्न मछली प्रजातियों की संख्या में परिकल्पना की एक किस्म के लिए बढ़ाया जा सकता है। ध्यान से आवास, चयन और विभिन्न व्यवहार के मानकों के परीक्षण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का पालन करके शोधकर्ताओं ने अध्ययन की एक विस्तृत सरणी पार अधिक विशिष्ट तुलना करने के लिए सक्षम हो जाएगा।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Zebrafish Rack System Aquaneering Inc Cat. # ZS550
Pet Valu Tropical Fish Food, 224.0 g Pet Valu Cat. # 31700
Premium Grade Brine Shrimp Eggs, 16 oz Brine Shrimp Direct
1.5 L Trapezoidal Tank Pentair Aquatic Ecosystems Cat. # itsts-a
19 L rectangular tank That Fish Place 211932
76 L rectangular tank That Fish Place 212180
Hitachi KP-D20A CCD Camera Prescott's, Inc.
Nikon AF Nikkor 35-105 mm f/305~4.5s MACRO lens Nikon Corporation
ArtMinds Square Mirror, Value Pack 3" x 3" Michaels Cat. # 10334162
Jwatcher
SPSS Statistics Base IBM
R The R Foundation

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References

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चिकित्सा अंक 114 zebrafish व्यवहार व्यवहार सिंड्रोम व्यक्तित्व साहस आक्रामकता shoaling
साहस, आक्रामकता, और Shoaling Zebrafish व्यवहार सिंड्रोम के लिए Assays
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Way, G. P., Southwell, M., McRobert, … More

Way, G. P., Southwell, M., McRobert, S. P. Boldness, Aggression, and Shoaling Assays for Zebrafish Behavioral Syndromes. J. Vis. Exp. (114), e54049, doi:10.3791/54049 (2016).

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