Влажные химии и пептидный иммобилизации на политетрафторэтилена для улучшенного клеточной адгезии

Summary

Клеточная адгезивность является ключом ко многим подходам в исследовании биоматериалов и тканевой инженерии. Представлена пошаговая методика с использованием влажной химии для модификации поверхности важного полимера ПТФЭ пептидами.

Abstract

Наделение материалы поверхность с клеточно-адгезионные свойства является общей стратегией в исследовании биоматериалов и тканевой инженерии. Это особенно интересно для уже утвержденных полимеров, которые имеют длительный срок использования, стоя в медицине, так как эти материалы хорошо охарактеризованы и правовые вопросы, связанные с введением новых синтезированных полимеров можно избежать. Политетрафторэтилен (PTFE), является одним из наиболее часто применяемых материалов для изготовления сосудистых тканей, но полимер испытывает недостаток клеток, усиливающего адгезию особенности. Эндотелиализацию, то есть полный охват трансплантатов внутренней поверхности с вырожденным слоем эндотелиальных клеток считается ключом к оптимальной производительности, в основном , за счет снижения тромбогенности искусственного интерфейса.

Это исследование исследует рост эндотелиальных клеток на пептид-модифицированный ПТФЭ, и сравнивает эти результаты, полученные на немодифицированной подложке. Сцепление сэндотелиальный клей клетка пептид Arg-Glu-Asp-Val (REDV) осуществляется через активацию Fluorin полимера, содержащего, используя реагент нафталинид натрия с последующим последующих стадий конъюгации. Культура клеток осуществляется с использованием человеческих эндотелиальных клеток пупочной вены (HUVECs) и отличный клеточный рост на пептидной иммобилизованным материале демонстрируется в течение двух недель.

Introduction

Различные полимеры , используемые в медицине , которые были утверждены в течение некоторого времени не проявляют повышенную биосовместимость, т.е. отсутствие клеток-липкости, индукцию фиброзной капсулой и тромбообразования, чтобы упомянуть некоторые из них. Взаимодействие между биоматериала и биологической системы происходит в основном на поверхности имплантата. Как следствие этого, исследование сосредоточилось на модификации поверхности для того, чтобы создать соответствующие свойства для требуемого применения, оставляя объемные свойства материала не изменяются. Политетрафторэтилена (ПТФЭ) в качестве физиологически инертный полимер используется во многих об....

Protocol

1. Получение натрия нафталинид активизирующего раствора и поверхности активации

Примечание: Проведение реакции в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу. Следуйте общим правилам для сылно растворителей и коррозионные металлы, такие как металлический натрий. Нафталин имеет очень неприятный запах (законсервировать), даже в очень небольших количествах! Если не указано иначе реакции проводят при комнатной температуре. Азид натрия очень токсичен! ТГФ (99,9%, см список материалов) хранился в течение примерно 20% (по объему) молекулярного сита. Отфильтровываю ТГФ с заметным содержанием воды над натрием. Формирование нафталенидом натрия не происходит, ....

Results

Результаты важнейших химических стадий реакции контролировали с помощью ИК - спектроскопии (рис 1). Первоначальная активация нафталенидом натрия порождает двойные связи - и в незначительной степени - ОН-функциональные возможности. Сигнал, указывающий С = С связей исчезают при окислении, что дает Несущая поверхность почти исключительно к гидроксильным группам групп. Анализ дальнейших стандартных шагов конъюгации здесь не показаны. Изменения цвета за счет активации и окисл.......

Discussion

Подробное описание протокола модификации поверхности ПТФЭ состоит из последовательных этапов , начиная с преодолением фтора из полимерной цепи , как показано на рисунке 6. В результате, слой образуется , который содержит большое количество конъюгированных двойных углерод-углеродных связей в соответствии с темно-коричневого цвета, что разработанный при обработке нафталинид. Стандартный окисление с кислой перекисью водорода дает гидроксилированная поверхность сопровождается осветление до бледно-коричневог.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Фольгированная пленка из ПТФЭ 0,5 мм	Cadillac Plastic	н/д
пептид REDV	Genecust	н/а	индивидуальный синтез >95% чистоты
изо-пропанол	Sigma Aldrich	34965
тетрагидрофуран (ТГФ)	Sigma Aldrich	401757
диметилсульфоксид	Sigma Aldrich	D8418
молекулярное сито 3 Å	Sigma Aldrich	208574
натрий металлический	Sigma Aldrich	483745
фосфатный буферный раствор (PBS)	Sigma Aldrich	D8537
нафталин	Sigma Aldrich	147141
перекисью водорода 30%	Sigma Aldrich	95321
трихлоруксусная кислота	Sigma Aldrich	T6399
диглицидиловый эфир диэтиленгликоля	Sigma Aldrich	17741
гексаметилендиизоцианат (HMDI)	Sigma Aldrich	52650
Кальцеин-AM	Sigma Aldrich	56496
бикарбонат натрия	Sigma Aldrich	S6014
азид натрия	Sigma Aldrich	71290
24-луночные планшеты	Greiner-Bio-One	662 160
ATR-FTIR спектрофотометр Nicolet Magna-IR 850	Николе	н/а
сосудистый трансплантат из ПТФЭ	Гор	н/д