Summary
这项工作提出了使用肾GFP转基因斑马鱼的节段性肾损伤的新的体内模型。该模型允许诱导肾上皮细胞的靶向消融以显示肾单位损伤和修复的细胞机制。
Abstract
急性肾损伤（AKI）是一种常见的死亡率高的疾病。具有肾脏的修复能力，可以在支持治疗后恢复足够的肾功能。然而，需要更好地了解如何在细胞水平上发生肾单位细胞死亡和修复以最小化细胞死亡并增强再生过程。斑马鱼背景是一个很好的模型系统来完成这个目标，因为它包含类似于哺乳动物肾单位的解剖段。以前，用于研究鱼类肾损伤的最常用模型是药物庆大霉素模型。然而，该模型不允许精确的时空控制损伤，因此难以研究涉及肾脏修复的细胞和分子过程。为了克服这个限制，这项工作提出了一种方法，与庆大霉素方法相反，特定的绿色荧光蛋白（GFP）-ex可以使用紫外激光（405nm）照射按压肾单位片段。这种AKI的新型模型提供了其他上皮损伤方法缺乏的许多优点。其主要优点是在健壮的体内动物模型中“拨”伤害水平和精确的时空控制能力。这种新方法有可能显着提高对肾损伤和修复机制的理解水平。
Introduction
急性肾损伤（AKI） 1,2 ，也可称为急性肾功能衰竭，广泛定义为肾功能的突发性损害3 。虽然多年来对这种状况的了解程度有了显着提高，但发病率和死亡率仍然高达1,2 。目前对这种病症的治疗主要是支持性的，因为药物治疗的多个临床试验的结果为阴性4,5 。肾脏是独一无二的，因为它具有修复自身的能力。因此，AKI早期诊断后的支持治疗是限制发病率的最佳途径6 。然而，很难早期检测AKI，对于需要透析的患者，死亡率为惊人的50-80％ 5。随着肾脏修复自身的能力和缺乏这种病症的治疗方案，重要的是开发增强这种肾单位再生过程的方法。
AKI研究中已经有许多不同的模型，包括不同的伤害和动物模型。就肾脏损伤剂而言，氨基糖苷类抗生素庆大霉素已被用作导致AKI 7,8的肾毒性药物。然而，有几组发现庆大霉素治疗对斑马鱼胚胎是致命的9 。它造成管状损伤对于胚胎恢复来说太严重，使得再生的研究难以进行某种干预。哺乳动物模型，如小鼠和老鼠，也被认为是有价值的，但在AKI研究期间它们面临许多限制。啮齿动物模型的主要缺点也许是visua的困难使啮齿动物肾脏化，从而确定导致上皮细胞死亡和修复的精确时空过程。
约翰逊已经报道了基于激光消融的技术在胚胎和幼虫斑马鱼中诱导急性肾损伤9 。在用葡聚糖缀合物肌内注射后，他们使用脉冲激光消融来损伤肾脏。来自葡聚糖共轭物的荧光允许在小管上皮9中的损伤和再生的可视化。该模式克服了上述两个限制，但不允许分级伤害，难以在大型，任意细胞群上进行。
这里描述的新的基于激光消融的AKI斑马鱼模型解决了上述所有限制。幼虫斑马鱼中的肾肾是一种成熟的功能性器官，其中包含与哺乳动物ne相似的节段包括肾小球，近端和远端小管以及收集管10 。斑马鱼幼虫也是光学透明的，使得通过荧光技术观察肾脏是可行的。因此，斑马鱼是AKI的有价值的体内模型，幼虫肾肾（5-12天 - 受精后（dpf））可用于研究肾损伤和修复中涉及的细胞和分子过程。
本文提出了一种通过使用低能量（与脉冲激光系统）紫激光（405nm）相比较来表达特定的表达绿色荧光蛋白（GFP）表达的肾单位片段的方法。 GFP荧光允许靶向一组细胞，通过观察GFP光漂白使得发生可见的变化。此外，GFP（通过吸收紫光）作为能量吸收器来增强GFP表达肾细胞中的损伤。延时微型然后复制可以用来研究修复过程。研究发现细胞增殖，细胞迁移和细胞化生11,12,13都是可能在肾脏修复中发挥重要作用的潜在过程。然而，由于AKI现有模型的局限性，这些过程的相对重要性及其相互作用的细节难以揭示。使用这种新颖的方法，可以显示细胞迁移在急性损伤后的肾脏修复中起核心作用14 。
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Protocol
本研究按照“国家卫生研究院实验动物护理与使用指南”中的建议进行。该协议由NYIT骨科医学机构动物护理和使用委员会（NYITCOM IACUC）批准。所有的手术和体内实验都是在三联麻醉下进行的，所有努力都是为了尽量减轻痛苦。
获取和维护胚胎
- 通过穿过肾GFP荧光斑马鱼获得胚胎。
注：荧光标记的斑马鱼转基因株系的实例列于表1 。 - 在受精24小时后，在E3溶液中将胚胎保持在28.5℃。
- 24小时后，用含有0.003％1-苯基-2-硫脲（PTU）的E3溶液代替培养基。
注意：使用PTU是因为它阻断了黑色素生成中依赖于酪氨酸酶的步骤从而防止色素沉着。这里，该解决方案被称为E3-PTU。 - 在28.5°C下培养受精胚胎直至> 6 dpf，此时肾脏已经成熟。
注意：最好在7-9 dpf窗口中使用幼虫。 - 使用40X放大的荧光解剖显微镜和绿色荧光发射滤光片，选择具有明亮的GFP荧光的幼虫。
2.安装斑马鱼进行实时成像
- 如果在3 dpf之前照射胚胎，请在安装斑马鱼进行成像之前从任何未孵化的斑马鱼中取出绒毛膜。
- 用镊子（优选）手动脱敏或用蛋白酶混合物进行化学处理。
注意：脱胶可以获得最佳的成像效果。
- 用镊子（优选）手动脱敏或用蛋白酶混合物进行化学处理。
- 使用E3-PTU溶液冲洗培养皿中的绒毛膜碎屑，并用E3-PTU补充盘。
- 准备工作重复1-2％低熔点（LMP）琼脂糖与0.2mg / mL三卡因溶液，以安装斑马鱼进行肾摄影和活体成像。
- 如果LMP琼脂糖已经预先准备好了，再在微波炉中加热，使其熔化。
- 一旦制备了LMP琼脂糖，将35 mm塑料培养皿放在解剖显微镜上。在附近放置一个拉玻璃探头，以正确定向麻醉的幼虫。
注意：重要的是要及时做这个步骤，并将所有的东西都放在适当位置，因为胚胎必须在琼脂糖凝固约1-3分钟之前定向。 - 在将胚胎转移到琼脂糖之前，确保琼脂糖是凉爽的（ 即在体温附近）。使用塑料或玻璃移液管将胚胎放入冷却的熔化琼脂糖三卡因溶液中。
注意：这是因为过热的琼脂糖可能不利于胚胎，导致心脏骤停或死亡 - 使用转移移液管，将琼脂糖溶液中的胚胎重新取出，并将胚胎/幼虫置于35毫米的中间。
- 快速铺展含有胚胎/幼虫的琼脂糖均匀地覆盖35毫米的盘底;琼脂糖的最佳使用量为〜1-1.1 mL。
- 使用玻璃探针将胚胎定位在最佳位置进行光消融和成像。
注意：电影1显示单边光消融的胚胎/幼虫的最佳方向。这个步骤是最时间敏感的，应该在琼脂糖开始凝胶化之前快速进行，因为在凝胶开始后重新调整鱼的任何尝试都是有害的。- 定向幼虫，使感兴趣的肾段垂直于束通道，而对侧段远离激光束（见影片1 ）。
注意：可以通过转动幼虫来实现，如电影1所示 。 - 让琼脂糖凝固约15分钟。覆盖培养皿以尽量减少蒸发。一旦琼脂糖凝固，胚胎或幼虫就可以进行光消毒。
激光烧蚀
- 操作共焦成像系统。
注意：使用参考的成像平台（参见材料表）时，推荐的设置包括40倍放大倍率，0.8 NA水浸透镜和第一个分色镜，可以对样品进行488和405 nm的照明。检测应在绿色通道上进行。 - 将包含固定化斑马鱼的盘定位在共焦阶段。
注意：此过程针对使用40-60X水浸透镜的直立配置进行了优化。然而，应该可以修改倒置显微镜的程序。 - 在直立的配置中，将包含胚胎的培养皿放在微观的顶部ope滑动，并使用造型粘土（ 例如，橡皮泥）将其保持在适当位置。将陪替氏培养皿的玻片放在共聚焦显微镜的台上。
- 加入3毫升成像溶液E3-PTU（见步骤1.3）与0.2毫克/毫升三卡因。
注意：在将幻灯片放在舞台上之前，也可以立即添加成像解决方案。成像溶液的添加应该非常小心，以防止琼脂糖漂浮在盘底部。 - 切换到水浸透镜（40或60X）。缓慢升起舞台，确保镜头稍微倾斜，以防止空气被束缚在光束路径中。一旦透镜以一定角度接触溶液，将其居中，使其处于胚胎的视野。
- 使用荧光光源查找感兴趣区段。表面定位受伤的分支，以尽量减少光散射（见影片1 ）。
注：子序列t步骤使用引用的软件（参见材料表），但该过程可以轻松适应其他平台。 - 打开软件导航到“查看”| “收购控制”| “C2plus Compact GUI”，将“像素停留时间”设置为“1.9μs”，“框架尺寸”设置为“512 x 512像素”，将“针孔尺寸”设置为“90μm”。将“405nm（或某些系统中的408nm）激光强度”设置为零，将“488激光强度”设置为“低”（优选<1％）。调整“增益”以获得良好的动态范围，但不会使信号饱和。
注意：这些值并不重要，用于一致性。当使用405nm激光时，会导致GFP荧光增加。为了避免光漂白期间信号的饱和（步骤3.11），信号增益值应在绿色通道上按比例缩小。蓝色通道增益可以保持为零，因为它不用于sampling。 - 点击软件界面上的“扫描”，使用488 nm激光扫描肾脏。找到垂直于光束路径的感兴趣区段，并且具有良好的可视化，具有良好的GFP荧光。一旦确定了该区域，使用椭圆的感兴趣区域（ROI）绘制感兴趣的区域。
- 转到“ROI”| “绘制椭圆投资回报率”。
注意：这将用于在进行光漂白时持续测量平均GFP强度，从而允许给予精确剂量的激光治疗。
- 转到“ROI”| “绘制椭圆投资回报率”。
- 导航到“查看”| “收购控制”| “C2plus扫描区域”，并选择“带扫描区域”。矩形蒙版将出现在该界面内。使用光标手动定义矩形扫描窗口（ 即拖动，调整大小并转动掩码）以覆盖激光切割的目标区域。右键单击面罩区域接受选择。
注意：仅扫描所选区域。 - 开始时间测量，同时使用488 nm激光监测绿色通道来激活GFP。确保488激光的强度相对较低（〜1％）。通过选择“Measure”|来测量感兴趣区域中GFP的平均强度“时间测量”。使用“图表”或“数据”选项卡来监视投资回报率内的平均强度值。
注意：采集速率由步骤3.9中设置的矩形窗口的像素驻留时间和大小定义，但通常可以快速监视信号（〜2-10帧/秒）。 - 通过将“激光功率”控制一直向右滑动，通过将强度增加到100％，用紫色激光（405nm）对肾细胞造成伤害。如果强度低，488nm激光器可以保持有效。
- 观察一行graph使用“图形”选项卡或GFP强度的数值使用“数据”选项卡，并等待它下降到所需的水平，例如基线的50％（ 如图1所示 ）。
注意：20 mW激光器已被用作参考激光单元的一部分（见材料表 ）;最大强度可能在系统之间变化。较低的强度可以通过更长时间的曝光来补偿（ 即使用百分比的GFP漂白作为总曝光量的度量）。
- 观察一行graph使用“图形”选项卡或GFP强度的数值使用“数据”选项卡，并等待它下降到所需的水平，例如基线的50％（ 如图1所示 ）。
- 一旦椭圆ROI（步骤3.8）中的GFP强度下降到所需的水平，通过将“激光功率”滑块一直向左移动，立即将紫色（405nm）激光的强度降低到“0”软件控制面板。
- 获得GFP荧光的新基线。通过获得X / Y的比例来确认消融。
注意： 见图1B; Y =消融前的平均强度，X =消融后的平均强度，使用ROI内平均4个连续样本。确切的目标比例（50％，60％ 等 ）取决于给定实验所需的损伤量。
- 获得GFP荧光的新基线。通过获得X / Y的比例来确认消融。
延时显微镜用碘化丙啶染色
- 应用一般的时间流逝考虑（在之前的研究15中概述），以观察碘化丙啶染色，作为光消除后肾细胞损伤的相关性。
- 如步骤2和3.7所述，将嵌入和光消除之前预孵育30μM碘化丙啶溶液（E3-PTU中的1％DMSO）3小时。
注意：在琼脂糖或成像溶液中不需要额外的碘化丙啶。 - 诱导分期性肾损伤，如步骤3.1-3.12所述。
- 获取时间流逝图像堆栈，作为描述在先前的研究中，使用488nm激光（GFP）和461nm激光（Propidium Iodide，PI）进行研究。
注意：两种颜色叠加在共焦点堆叠中，以关联GFP的消失和碘化丙啶染色的外观。 - 设置获取延时图像叠层的参数如下：虚拟切片厚度= 4μm，z叠层间隔= 2μm，像素停留时间= 1.9μs，图像尺寸= 512 x 512，平均值= 2。
注意：这些参数允许连续进行10到15分钟的间隔记录最多4个幼虫，并确保样品的光漂白最小。 - 使用与录制文件格式兼容的成像软件可视化和分析数据。
- 定向幼虫，使感兴趣的肾段垂直于束通道，而对侧段远离激光束（见影片1 ）。
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Representative Results
请注意，该协议已成功应用于许多肾转基因品系，包括ET（krt8：EGFP）sqet11-9，ET（krt8：EGFP）sqet33-d10和Tg（atp1a1a.4：GFP）。这里显示的示例结果是使用ET（krt8：EGFP）sqet11-9线获得的。
图1显示了实例的photoablation协议。在感兴趣的区域内监测平均GFP强度（ 图1A和电影1 ）。示例平均强度迹线如图1B所示 。
如图2所示 ，在暴露于405nm激光后，GFP荧光一直持续消失一个细胞，直到220分钟，整个消融的片段损失其GFP阳性的100％。 GFP的丢失f荧光确实是由于细胞死亡而不是例如GFP表达的下调。红细胞碘化丙啶阳性细胞核在出现GFP阳性的细胞中出现证明了这一点。
可以通过测量消融段中的平均GFP荧光并将其与消融段之前和之后的平均GFP强度进行比较来评估细胞死亡的程度。 图3显示了暴露部分的激光暴露程度（由光漂白的初始量测量）与细胞死亡程度之间的关系。这表明，通过改变初始暴露，可以“拨打”受伤上皮的损伤和反应。在10％的初始GFP光漂白中，在伤后5 h观察到GFP阳性几乎没有降低。 50％和60％光漂白导致完全消失5小时绿色荧光蛋白，30％和40％的漂白导致中间结果，在约35％光漂白时观察到50％的估计死亡率。这些结果由PI染色支持（ 图3B ）。 20％光漂白导致消融后100分钟几乎没有PI染色。在60分钟后，50％的漂白漂白导致消融的上皮中具有连续的PI阳性，而30％和40％的漂白剂导致中间体PI掺入。从该数据可以看出，该方法允许诱导分级量的上皮损伤和用于研究上皮对致死性和亚致死性上皮损伤的反应。
图1：光消融程序。 （ A ）显示胚胎/幼虫取向，激光曝光和感兴趣区域（椭圆）测量的示意图采用平均荧光来监测GFP漂白量;请参阅电影1.矩形框表示扫描窗口。 （ B ）在405nm激光曝光之前，期间和之后的实际感兴趣的平均GFP强度迹线的实例。四次连续测量（绿色框内显示）的平均GFP强度在光消除之前（Y）和（X）之后显示。比例X / Y用作总曝光量的量度，并且绘制在图3中的X轴上。 请点击此处查看此图的较大版本。
图2：405nm激光曝光后上皮细胞死亡。示例GFP的消失的连续帧d光蚀刻后的碘化丙啶染色出现（40％初始漂白）。在紫外光（405nm）曝光后，帧为0,130,170和220分钟。 GFP的消失与红色荧光PI核阳性的出现一致。请注意，使用红色通道检测到PrI荧光。在肾脏外部看到的红色荧光是由于发色团和肠内腔中存在PI。刻度棒=100μm。 请点击此处查看此图的较大版本。
图3：上皮损伤对光消融量的剂量反应。 （ A ）光消融通过曝光中GFP荧光初始降低的百分比来测量ed段。这与损伤后5小时受伤部分平均GFP荧光的下降进行比较。该测量被归一化为损伤部分的上游和下游的平均荧光量。目标剂量为10,20,30,40,50和60％的初始光漂白。实际量稍大一些，分别为14.8,24.4,33.8,45.4,56.5和62.1％的漂白剂，其中85.2,75.6,66.2,54.6,43.5和37.9％剩余荧光，n = 2-6个/靶组。误差条代表沿X的标准偏差（光消除后立即剩余荧光的百分比）和Y（光消解后5小时剩余荧光的百分比）。 （ BE ）PI染色与GFP阳性的总体消失相当。在激光曝光后100分钟（ B ，右图），20％（80％剩余荧光）光漂白几乎没有观察到PI染色。 （ C和
| 转基因 | 表达模式 | 参考 |
| TG（wt1b：GFP） | 小球，一些PT | [11] |
| TG（atp1a1a.4：GFP） | 远端肾小球 | [12] |
| TG（CDH17：GFP） | 远端肾小球 | [9,10] |
| TG（RET1：GFP） | 晚期DT，PD | [13] |
| TG（ENPEP：GFP） | 远端肾小球 | [14] |
| TG（CD41：GFP） | 多细胞细胞 | [15] |
| ET（KRT8：EGFP）sqet11-9 | 直PT，早期DT | [16,17] |
| ET（KRT8：EGFP）sqet33-D10 | 卷曲PT | [16,17] |
| PT =近端管 | ||
| DT =远端管 | ||
| PD - 肾管 |
电影1：Photoablation程序的动画摘要。在电影的第一部分，演示了适当的胚胎/幼体取向。两个肾分支显示为绿色。使用玻璃探针将鱼定位在琼脂糖中。如果需要控制，非受伤的分支，则这样做。钓鱼只允许激光暴露在肾肾的一个分支上。在电影的第二部分，概述了激光消融程序。椭圆表示经历消融的段内感兴趣的区域，用于监测初始光致裂纹的数量兴。矩形窗口允许精确调节烧蚀段的尺寸和位置。 请点击此处查看此视频。 （右键单击下载。）
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Discussion
应当注意，总体激光功率在系统之间变化。然而，使用百分比的GFP光漂白允许读出传递到荧光肾的总能量，而与激光功率的变化无关，并且由曝光长度补偿。但是，请记住，不同组织对这种光消融方法的反应有所不同。即使在肾成熟期间，在成年幼虫中获得GFP荧光在年轻胚胎中降低50％明显更难。在将该协议修改和适应不同应用时，应考虑到光消解的组织反应性的这些差异。因此，监测GFP荧光的百分比降低以适当地测量受伤的肾上皮的损伤量和预测的反应是至关重要的。
这种方法的主要优点是比较其他方法的肾损伤斑马鱼是允许精确控制损伤的时空位置的。此外，它允许研究人员上下拨号伤害水平。这种控制损伤量的能力应该允许检查上皮细胞的反应，并且应该有助于在恢复方面与凋亡与坏死方面的决策。例如，可以显示细胞迁移是存活的上皮细胞到节段性消融的初始反应，并且细胞增殖是二次过程，可能由细胞迁移产生的机械力驱动14 。
除了在细胞水平上研究修复过程的能力外，还有其他的优点。首先，以前的照相技术对光损伤量的控制有限9 。然而，这种模式允许对伤害量进行分级控制，使其更容易进行未来研究。另外，在这种方法中，可以靶向任意组的GFP荧光细胞，从而容易消融整个片段。虽然这可以通过脉冲激光技术实现，但是更费力，限制了实验设计的潜力。使用GFP靶向和增强上皮损伤是另一个优点，因为有这么多的GFP转基因斑马鱼可用（ 表1只是部分列表）。还研究了由转基因种类表达的其他荧光蛋白，例如杀死红蛋白，但这些鱼转基因不是广泛可用的16 。使用GFP的另一个优点是，使用不同的激光波长，GFP表达可用于光消融（405nm）或成像（488nm）。然而，应该注意的是，Johnson 等人发表的方法9可以应用于非荧光斑马鱼，因此可以比这种方法更广泛地使用。
该激光消融模型的另一个限制是它可能不考虑可导致人类AKI的所有不同因素。可能存在导致人体细胞坏死的事件链，以及在肾损伤期间诱导的细胞凋亡。激光消融中产生的不同环境是否可以模拟人类AKI病理生理学的各个方面尚不清楚。尽管如此，该激光烧蚀模型具有优于替代模型的许多优点。通过允许以高分辨率实时研究肾细胞死亡和修复，该方法可以更好地了解肾脏修复机制，为AKI治疗的新方法奠定基础。
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Disclosures
作者宣称他们没有竞争的经济利益。
Acknowledgments
我们要感谢Iain Drummond博士和Vladimir Korzh博士分享肾GFP转基因株系。我们也要感谢纽特派团提供必要的资源进行这项工作。这项研究部分得到赠款的支持：K08DK082782，R03DK097443（NIH）和HSCI Pilot Grant（AV）。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Petri Dishes, 35 x 10 mm | Genesee Scientific | 32-103 | Procedural Usage: Step 2.4, 2.7 |
| Petri Dishes, 100 x 15 mm | Midwest Scientific | 910 | Procedural Usage: Step 1 |
| Dechorination forceps - Electron Microscopy Sciences Dumont Tweezers 5 Dumostar | Fischer Scientific | 50-241-57 | Procedural Usage: Step 2.1.1 |
| Plastic Transfer Pipet | Globe Scientific | 135030 | Procedural Usage: Step 2.5, 3.6 |
| Tricaine | Sigma Aldrich | A5040-25G | Procedural Usage: Step 2.3, 3.4 |
| Agarose | Fischer Scientific | BP165-25 | Procedural Usage: Step 2.3 |
| Pulled glass probe (manufactured manually from glass capillary tubes) | Fischer Scientific | 21-1640-2C | Procedural Usage: Step 2.4 |
| Stereomicroscope | Nikon | SMZ1270 | Procedural Usage: Step 1.5 |
| SOLA Light Engine | Lumencor | SOLA SM-5-LCR-SB | Procedural Usage: Step 1.5 |
| Eclipse C2 Plus Confocal Microscope System | Nikon | Procedural Usage: Step 3 | |
| 1x E3 Solution | Recipe used to generate: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 Procedural Step Usage: 1.2, 1.3, 2.2, 2.3 | ||
| PTU | Sigma | P7629-10G | Procedural Step Usage: 1.3, 2.2, 3.4, 4.2 |
| NIS Elements Software | Nikon | C2+ | Procedural Usage: Step 3 |
| Laser Unit | Agilent | MLC 400 | Procedural Step 3.11 |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma Aldrich | P4170-100MG | Procedural Step Usage: 4.2 |
References
- Chertow, G. M. Acute Kidney Injury, Mortality, Length of Stay, And Costs In Hospitalized Patients. J Am Soc Nephrol. 16 (11), 3365-3370 (2005).
- Yasuda, H., et al. Incidence And Clinical Outcomes of Acute Kidney Injury Requiring Renal Replacement Therapy In Japan. Ther Apher Dial. 14 (6), 541-546 (2010).
- Waikar, S. S., Liu, K. D., Chertow, G. M. Diagnosis, Epidemiology And Outcomes of Acute Kidney Injury. Clin J Am Soc Nephrol. 3 (3), 844-861 (2008).
- Lameire, N., Van Biesen, W., Vanholder, R. Acute Kidney Injury. The Lancet. 372 (9653), 1863-1865 (2008).
- Esson, M. L. Diagnosis And Treatment of Acute Tubular Necrosis. Ann Intern Med. 137 (9), 744 (2002).
- Vaidya, V. S., Ferguson, M. A., Bonventre, J. V. Biomarkers of Acute Kidney Injury. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 48 (1), 463-493 (2008).
- Hentschel, D. M. Acute Renal Failure In Zebrafish: A Novel System To Study A Complex Disease. Am J Physiol Renal Physiol. 288 (5), F923-F929 (2005).
- Cianciolo Cosentino, C., et al. Intravenous Microinjections of Zebrafish Larvae To Study Acute Kidney Injury. J Vis Exp. (42), (2010).
- Johnson, C. S., Holzemer, N. F., Wingert, R. A. Laser Ablation of The Zebrafish Pronephros To Study Renal Epithelial Regeneration. J Vis Exp. (54), (2011).
- Drummond, I. A., Davidson, A. J. Zebrafish Kidney Development. Methods Cell Biol. , 233-260 (2010).
- Toback, F. G. Regeneration After Acute Tubular Necrosis. Kidney Int. 41 (1), 226-246 (1992).
- Witzgall, R., et al. Localization of Proliferating Cell Nuclear Antigen, Vimentin, C-Fos, And Clusterin In The Postischemic Kidney. Evidence For A Heterogenous Genetic Response Among Nephron Segments, And A Large Pool of Mitotically Active And Dedifferentiated Cells. J Clin Invest. 93 (5), 2175-2188 (1994).
- Bonventre, J. V. Dedifferentiation And Proliferation of Surviving Epithelial Cells In Acute Renal Failure. J Am Soc Nephrol. 14 (90001), (2003).
- Palmyre, A., et al. Collective Epithelial Migration Drives Kidney Repair After Acute Injury. PLoS ONE. 9 (7), e101304 (2014).
- Vasilyev, A., Drummond, I. A. Live Imaging Kidney Development In Zebrafish. Methods Mol Biol. , 55-70 (2012).
- Korzh, V., et al. Visualizing Compound Transgenic Zebrafish In Development: A Tale of Green Fluorescent Protein And Killerred . Zebrafish. 8 (1), 23-29 (2011).
- Bollig, F., Mehringer, R., Perner, B., et al. Identification and comparative expression analysis of a second wt1 gene in zebrafish. Dev Dyn. 235 (2), 554-561 (2006).
- Liu, Y., Pathak, N., Kramer-Zucker, A., Drummond, I. A. Notch signaling controls the differentiation of transporting epithelia and multiciliated cells in the zebrafish pronephros. Development. 134 (6), 1111-1122 (2007).
- Diep, C. Q., Ma, D., Deo, R. C., et al. Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish. Nature. 470 (7332), 95-100 (2011).
- Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebra fish. Am J Physiol. 299 (5), F1040-F1047 (2010).
- Fisher, S., Grice, E. A., Vinton, R. M., Bessling, S. L., McCallion, A. S. Conservation of RET regulatory function from human to zebrafish without sequence similarity. Science. 312 (5771), 276-279 (2006).
- Seiler, C., Pack, M. Transgenic labeling of the zebrafish pronephric duct and tubules using a promoter from the enpep gene. Gene Expr Patterns. 11 (0), 118-121 (2011).
- Lin, H. F., Traver, D., Zhu, H., et al. Analysis of thrombocyte development in CD41-GFP transgenic zebrafish. Blood. 106 (12), 3803-3810 (2005).
- Choo, B. G., Kondrichin, I., Parinov, S., et al. Zebrafish transgenic Enhancer TRAP line database (ZETRAP). BMC Dev Biol. 6 (1), 5 (2006).
- Parinov, S., Kondrichin, I., Korzh, V., Emelyanov, A. Tol2 transposon-mediated enhancer trap to identify developmentally regulated zebrafish genes in vivo. Dev Dyn. 231 (2), 449-459 (2004).
