Summary
Beschrijven we een protocol voor de detectie van wasmiddel-gevoelige interacties tussen membraaneiwitten binding van de sorteer-receptor, sortilin, aan de eerste luminal lus van de glucose transporter proteïne, GLUT4, waarbij als voorbeeld.
Abstract
Ons vermogen om te verkennen van eiwit-eiwitinteractie is de sleutel tot het begrijpen van regelgevende verbindingen in de cel. Detectie van eiwit-eiwitinteractie in veel gevallen is echter geassocieerd met significante experimentele uitdagingen. In het bijzonder, interageren Sorteer receptoren met hun lading van de eiwitten in het lumen van het membraan compartimenten vaak in een wasmiddel-gevoelige mode, waardoor co-immunoprecipitation van deze proteïnen onbruikbaar. Binding van het sorteren receptor sortilin aan glucose transporter die glut4 als een voorbeeld van zwakke luminal interacties tussen membraaneiwitten dienen kan. Hier beschrijven we een snelle, eenvoudige en goedkope assay voor het valideren van de interactie tussen sortilin en GLUT4. Wij hebben daarvoor ontworpen en chemisch gesynthetiseerd het myc-gelabeld peptide overeenkomt met de potentiële sortilin-bindende epitoop in het luminal deel van GLUT4. Gelabeld met zes histidines Sortilin was uitgedrukt in zoogdiercellen en geïsoleerd van cel lysates met behulp van kobalt kralen. Sortilin geïmmobiliseerd op de parels was geïncubeerd met de peptide oplossing bij verschillende pH-waarden, en het eluted materiaal werd geanalyseerd door het westelijke bevlekken. Deze test kan gemakkelijk aangepast worden aan andere wasmiddel-gevoelige eiwit-eiwitinteractie te bestuderen.
Introduction
GLUT4 is een glucose transporter proteïne die overwegend wordt uitgedrukt in vet en skeletale spiercellen, waar het het effect van de insuline op postprandiale bloed glucose goedkeuring1bemiddelt. Wordt een zeer stabiele eiwitten, is GLUT4 op een posttranslationele niveau geregeld. Bij gebrek aan insuline, GLUT4 is grotendeels uitgesloten uit het plasma-membraan (vandaar lage basale permeabiliteit voor glucose) en is gelokaliseerd vooral binnen de cel in kleine insuline-responsieve blaasjes (IRVs) en trans-Golgi network (TGN) die dreigt te vertegenwoordigen de IRV donor compartiment. Op insuline toediening, de IRVs zekering met het plasma-membraan en GLUT4 leveren op de site van de werking ervan. Dit verhoogt de permeabiliteit van het plasma-membraan voor glucose, zodat dat glucose-opname uit bloed in adipocytes en skeletale myocytes 10 tot 40-fold stijgt. Na de terugtrekking van de insuline, is GLUT4 geïnternaliseerd in vroege/sorteren Endosomen en vervolgens opgehaald voor TGN waar de IRVs zich opnieuw gevormd. Beide sorteren stappen in het GLUT4 traject, d.w.z. wegnemen uit de perifere vroege Endosomen tot het perinuclear TGN, en de vorming van de IRVs op de TGN donor membranen zijn ingeschakeld door een familielid van Vps10p, sortilin, die een type vertegenwoordigt I transmembraan eiwit en een sorteer receptor. Volgens één model, sortilin werkt als een transmembraan steiger eiwit: het GLUT4 in het lumen van de Endosomen en TGN bindt, en werft adapters van de retromer of clathrin naar de cytoplasmatische kant van de donor membraan via haar C-terminus2, 3. Dit vergemakkelijkt de verdeling van de GLUT4 in vesiculaire dragers die GLUT4 tussen de intracellulaire compartimenten translocate.
De interactie van de cytoplasmatische staart van sortilin met retromer en verschillende adaptor eiwitten is goed gedocumenteerd. Echter, de binding van sortilin naar GLUT4 (en op een aantal van haar andere proteïne liganden) heeft zijn uitdagend om te bewijzen. In het bijzonder, pogingen om te co-immunoprecipitate sortilin en GLUT4 niet gelukt waarschijnlijk te wijten aan het wasmiddel-gevoelige aard van de interactie tussen deze twee eiwitten. Bovendien, als een typische transporter proteïne, heeft GLUT4 12 transmembraan domeinen en 6 luminal loops elke mogelijke combinatie van die potentieel een sortilin-bindende site vertegenwoordigen kan. Op hetzelfde moment, een grote hoeveelheid indirect bewijs, zoals aanzienlijke co lokalisatie in de cel, dwarsbinding met membraan-permeabele DSP, en de interactie in gist twee hybridesysteem suggereren dat sortilin kan binden aan de GLUT4. Bovendien hebben gebruikt de laatste benadering in een combinatie met de alanine scannen mutagenese, wij eerder vastgesteld dat het domein van de Vps10p van sortilin voornamelijk aan de eerste luminal lus van GLUT4 bindt. Echter, het bewijs van een dergelijke interactie in zoogdiercellen heeft ontbroken. Hier hebben we geïsoleerd zijn-gelabeld sortilin uit cellen transfected 3T3-L1 met behulp van kobalt hars en aangetoond dat kan communiceren met chemisch gesynthetiseerde peptide overeenkomt met de eerste luminal lus van GLUT4 bij pH 6 en pH 8 die lijken op zure milieu in de endosomal lumen en neutrale omgeving in het lumen van de TGN membranen. Geen bindend peptide werd ontdekt in controle experimenten waar uittreksel bereid uit niet-transfected cellen was geladen op de dezelfde parels.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. het hanteren van de Peptide
- Ontwerpen en bestellen van de peptide
- Kies de gewenste volgorde van de peptide en toevoegen van een tag, zoals myc epitope (EQKLISEED) op haar beide N - of C-terminus.
- Controleer de voorspelde oplosbaarheid van de peptide in water, met behulp van peptide oplosbaarheid rekenmachine http://pepcalc.com/peptide-solubility-calculator.php. Als de oplosbaarheid laag is, probeert toe te voegen een andere in water oplosbare tag als de balans van de kosten wilt wijzigen.
Opmerking: We gebruikten de peptide die overeenkomt met de eerste luminal lus (fll) van GLUT4 die zijn gelabeld met de myc epitope (vet) in de N-terminus (Myc-fll-GLUT4): EQKLISEED-LNAPQKVIEQSYNATWLGRQGPGGPSSIPPGTLTTLWA met "goed" voorspelde oplosbaarheid in water . - Bestel de aangepaste peptide met ten minste 75% zuiverheid die is voldoende voor de bepaling, en vragen van de provider voor oplosbaarheid. Scheiden de volgorde in ten minste twee aliquots in geval van onvoorziene problemen met het oplossen van de peptide.
Opmerking: Myc-fll-GLUT4 werd besteld in twee porties. De gerapporteerde oplosbaarheid in water, ultrapure is ≤10 mg/mL.
- Ontbinding van de peptide
Opmerking: Ultrapure water is het beste oplosmiddel. Als de peptide niet oplosbaar in water lijkt, verwijzen naar http://www.genscript.com/peptide_solubility_and_stablity.html voor instructies.- 100 x werkoplossing van de peptide in ultrazuiver water of in de buffer van keuze, met de concentratie van 100 μg/mL voor te bereiden.
- Scheiden van de oplossing in 50-100 µL aliquots, en bewaar ze bij-20 ° C.
2. het hanteren van cellen
- Celcultuur
- Wild type (WT) cellen worden gebruikt als een negatieve controle, en de cellen, uiting geven aan het doel-eiwit gelabeld met zes histidines (HisP).
Opmerking: We gebruikt 3T3 L1 pre adipocytes stabiel transfected met Sortilin-myc/zijn5. - Het groeien van de cellen in de Dulbecco bewerkt Eagle Medium (DMEM) hoge suiker, aangevuld met 10% kalf runderserum, glutamine (2 mM) en penicilline/streptomycine (5 μg/mL) bij 37 ° C in 10% CO,2.
- Vier 10 cm schotels van cellen zitten, twee van hen met HisP transfect en transfect van de andere twee met controle plasmide (WT). 48 h na transfectie, cellen moeten 80-90% confluentie bereiken.
- Wild type (WT) cellen worden gebruikt als een negatieve controle, en de cellen, uiting geven aan het doel-eiwit gelabeld met zes histidines (HisP).
- Voorbereiding van de cel Lysates
- Bereiden van lysis-buffermengsel (10 mM Hepes, 30 mM NaCl, 5% glycerol, 10 mM imidazool, 0,5% Triton X-100 en protease inhibitor van de omwenteling zonder EDTA cocktail voor de isolatie van Zijne-gelabelde proteïnen, pH 7.4) en houd het bij 4 ° C:
- Wassen van de cellen drie keer met 10 mL, 1 x met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) bij 4 ° C.
- Zet de gerechten op het ijs en 500 µL van lysis buffer toevoegen aan elk gerecht. Oogst van de cel lysates met behulp van een cel schraper.
- Plaats de cel lysate van elk gerecht in een verschillende 1,5 mL-buis. Label de buizen als WT-pH6 WT-pH8, HisP-pH6, HisP-pH8.
- Passeren de cel lysates een injectiespuit met een naald 26G vijf keer op en neer, tot volledige lysis.
- Centrifugeer de cel lysates bij 16.000 x g gedurende 10 minuten bij 4 ° C.
- Het supernatant overbrengen in nieuwe identiek gelabelde buizen.
- Analyseren met behulp van de BCA eiwit Assay Kit of andere kit eiwitconcentratie.
- Met behulp van lysis-buffermengsel, egaliseren eiwitconcentratie van alle vier lysates.
- Scheiden van een klein (ca. 20 µL) hoeveelheid van elk lysate en houd het bij-20 ° C voor mogelijke controle experimenten en/of het oplossen van problemen.
3. bindende van Zijne-gelabeld eiwitten aan de HisPur Cobalt kralen
- Het gebruik van verkrijgbare was buffer of bereiden een (50 mM nb2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazool, pH 8) en houd het bij 4 ° C.
- Bereiden van wassen buffer met pH 6 door tittering wassen buffer pH 8 met HCl. Houd het bij 4 ° C.
- Zachtjes swirl de fles van de kobalt parels te maken van homogene suspensie.
- Afzien 40 µL van de schorsing van de kralen kobalt in vier 1,5 mL buizen zoals hierboven aangegeven (stap 2.2.4).
- Voeg 1 mL lysisbuffermengsel aan elke buis, de buizen bij 1000 x g Centrifugeer gedurende 5 s. Aspirate het supernatant en 40 μL van lysis buffer toevoegen aan vaste kralen.
- De cel lysates aan overeenkomstige buizen toevoegen.
- Incubeer de buizen voor 90 min bij 4 ° C op een buis rotator bij 20 omwentelingen per minuut.
- Centrifugeer de buizen bij 1000 x g voor 5 s en verzamel het supernatant. Houd het supernatant bij 4 ° C.
- Voeg 500 µL van pH 8 of pH 6 was buffer overeenkomstige buizen en resuspendeer de kralen zachtjes.
- Centrifugeer de buizen bij 1000 x g gedurende 5 s en negeren het supernatant.
- Herhaal stap 3.9 en 3.10 voor vier keer.
4. de binding van de Peptide aan de zijne-gelabeld proteïne geïmmobiliseerd op de parels
- Met behulp van 100 x werkende oplossing van de peptide (stap 1.2.1), bereiden 1 x werkoplossing in pH 6 of pH 8 was buffer (twee 100 µL aliquots voor elk, 1 µg/mL).
- Voeg 100 μl van 1 x peptide oplossing aan de gewassen kralen met de bijbehorende pH.
- Incubeer de kralen gedurende 30 minuten bij 4 ° C op een buis rotator bij 20 omwentelingen per minuut.
- Centrifugeer de buizen bij 1.000 x g gedurende 5 s, verzamelen het supernatant en bewaar deze bij-20 ° C.
- Herhaal stap 3.9 en 3.10 voor vier keer.
Opmerking: Ter vermindering mogelijk achtergrond, kunnen de volgende stappen stappen 4.4 en 4.5 vervangen. - Neem vier micro kolommen met 30 μm poriën, label hen zoals in stap 2.2.4, en plaats van de kolommen in collectie buizen.
- Na voltooiing van stap 4.3, breng het incubatie-mengsel in de kolommen, kunt u de oplossing te passeren door de zwaartekracht. Houden van de stroom door bij-20 ° C.
- Pass 500 µL van wassen buffer met pH 6 of pH 8 door overeenkomstige kolommen door de zwaartekracht. Gooi de stroom door.
- Herhaal stap 4.8 vier keer.
- Na de laatste wassen, centrifugeren de kolommen bij 1.000 x g gedurende 15 s.
5. de elutie van kobalt kralen
- Gebruik commerciële Tricine monster buffer (200 mM Tris-HCl, 40% glycerol, 2% SDS, 0,04% Coomassie Blue, pH 6.8) en β-mercaptoethanol toevoegen aan de uiteindelijke concentratie van 2%.
- Voeg toe 40 µL van Tricine monster buffer (met β-mercaptoethanol) aan de gewassen kralen en vortex het monster.
- Verwarm de monsters gedurende 10 minuten bij 100 ° C, vortex de monsters weer samen en centrifugeer de buizen bij 1.000 x g gedurende 5 s.
Opmerking: Ter vermindering van mogelijke niet-specifieke binding in de elutie, kunnen de volgende stappen stappen 5.1-5.3 vervangen. - 40 μL van elutie imidazool Buffer (50 mM nb2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 0,25 M imidazol) toevoegen aan de gewassen kralen, vortex en de buizen bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten uit te broeden.
- Centrifugeer de buizen bij 3000 x g gedurende 30 s, het supernatant (geëlueerd monsters) verzamelen en overdragen naar nieuwe gelabelde buizen.
- Voeg 40 l Tricine monster buffer aan elke buis, heat van de monsters gedurende 10 minuten bij 100 ° C, vortex en centrifuge de buizen bij 1.000 x g gedurende 5 s.
Opmerking: Als micro kolommen worden gebruikt, de elutie buffer toevoegen aan de gewassen kralen, Incubeer gedurende 20 min en verzamelen de elutie door centrifugeren bij 8.000 x g gedurende 2 min.
Opmerking: Monsters kunnen worden bewaard bij-20 ° C tot elektroforese wordt uitgevoerd.
6. elektroforese en het westelijke bevlekken
Opmerking: De monsters zijn klaar voor de scheiding door SDS-pagina en de daaropvolgende westelijke bevlekken. Volg protocol van de Elektroforese van het gel (https://www.jove.com/science-education/5065/the-western-blot) met de volgende wijzigingen.
- Gebruik verkrijgbare 10-20% Tricine kleurovergang gels.
- Op de gel, door 20 µL van de eluted monsters en 20 µL van lysates (stap 2.2.10) te laden. Voor het oplossen van problemen, is het aangeraden om te laden 20 µL van niet-afhankelijke materiaal (stap 3.8) en 10 ng van de peptide; vóór het laden, toevoegen u gelijke hoeveelheid Tricine monster buffer aan deze monsters.
- Verrichten van elektroforese in commerciële Tris/Tricine/SDS buffer (100 mM Tris, 100 mM Tricine, en 0,1% SDS, pH 8.3) uitgevoerd.
- Het materiaal van de gel op een membraan van 0,45 µm nitrocellulose met overdracht buffer (25 mM Tris base, 192 mM glycine, pH 8.4) aangevuld met 20% methanol overbrengen.
- Blokkeren van het membraan met 3% boviene serumalbumine (BSA) gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. Met behulp van vooraf gebeitst molecuulgewicht markeringen als gidsen, knippen het membraan horizontaal, vlek van het bovenste deel met een antilichaam tegen HisP en vlek het onderste gedeelte met een antilichaam tegen het myc epitoop te identificeren van de peptide myc-gelabeld.
Opmerking: In ons geval, snijden van het membraan is niet vereist omdat zowel HisP als Myc-fll-GLUT4 kunnen worden opgespoord met een anti-myc antilichaam.
7. analyse van de resultaten
- De intensiteit van alle westelijke vlek signalen met behulp van een Image Station of ImageJ programma te kwantificeren.
- Normaliseren van het signaal van de peptide myc-gelabeld tegen het signaal van de HisP op beide pH-waarden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Lysates waren bereid uit 3T3 L1 cellen transfected stabiel met Sortilin-myc/zijn5 en uit WT 3T3 L1 cellen, gebruikt als een negatieve controle. Beide lysates werden geïncubeerd met kobalt kralen op pH 6 of pH 8 en grondig gewassen. Kralen met geïmmobiliseerdet eiwitten werden vervolgens geïncubeerd in de oplossing van Myc-fll-Glut4. Na voorzichtig wast, werden eiwitten gebonden aan de parels geëlueerd met 0,25 M imidazool. Monsters werden blootgesteld, samen met de oorspronkelijke lysates, SDS-pagina in een 10-20% Tricine kleurovergang gel gevolgd door het westelijke bevlekken met anti-Myc antilichaam dat is toegestaan voor de detectie van zowel sortilin-myc/zijn (110 kD) en Myc-fll-GLUT4 (5 kD) (Figuur 1) .
Myc-fll-GLUT4 (10 ng) was geladen op de eerste baan van de gel als referentie. Als de zuiverheid van de peptide is slechts 75%, zijn verontreinigingen herkenbaar (hogere banden). Oorspronkelijke cel lysates van zowel de WT en de Sortilin-myc/zijn waarin cellen bevatten meerdere banden erkend door het antilichaam van de anti-myc. Materiaal geïsoleerd uit Sortilin-myc/zijn waarin cellen is veel schoner. Naast enkele kleine niet-specifieke banden, heeft het slechts twee myc-houdende componenten: Sortilin-myc/zijn en Myc-fll-GLUT4. Contaminerende peptiden in de eerste rijstrook lijken niet te binden aan Sortilin-myc/zijn. Negatieve controle (WT eluaat) heeft een overwegend niet-specifieke banden.
Als GLUT4 passeert van intracellulaire compartimenten, zoals Endosomen en TGN, die verschillende luminal pH hebben, wilden we beoordelen van de interactie tussen GLUT4 en sortilin bij pH 6 en pH 8 (Figuur 2). Densitometrie van resultaten (niet afgebeeld) heeft niet bekendgemaakt significante verschillen in de verhouding tussen Myc-fll-GLUT4 en Sortilin-myc/zijn bewaard op de kralen op verschillende pH-waarden. Zo concluderen wij dat GLUT4 de mogelijkheid heeft tot interactie met sortilin in zowel Endosomen als TGN.
Figuur 1 . Interactie van Sortilin-myc/zijn met Myc-fll-GLUT4 op kobalt parels. Lysates bereid uit WT 3T3-L1 cellen en cellen van de 3T3-L1 stabiel uitdrukken Sortilin-myc/zijn (S) waren gepasseerd kobalt kralen, gewassen, geïncubeerd met Myc-fll-Glut4 bij pH 8, weer gewassen en geëlueerd met imidazool buffer. Myc-fll-Glut4 (10 ng) was geladen op de eerste baan als referentie.
Figuur 2 . Sortilin-myc/zijn interageert met Myc-fll-GLUT4 bij zowel pH 8 en pH 6. Myc-fll-Glut4 was geïncubeerd met materiaal geïmmobiliseerd op de parels bij pH 6 en pH 8, gewassen, en geëlueerd met Glycine monster buffer. De figuur is aangepast van Pan X., et al.3zijn.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Sortilin is een evolutionaire Geconserveerde proteïne van de multi ligand-receptor die betrokken is in beide signalering op het plasma-membraan en intracellulaire Sorteer gebeurtenissen6,7. De zoektocht naar de authentieke sortilin liganden (waarvan sommige zijn luminal of integraal membraaneiwitten) is echter ingewikkeld als de interactie van sortilin met een aantal van haar partners bindende lijkt te zijn gevoelig voor detergentia. Daarom een eenvoudig en een brede aanpak voor de studie van eiwit-eiwitinteractie, co-immunoprecipitation, kan niet gemakkelijk worden toegepast. Sommige onderzoeksgroepen hebben co-immunoprecipitation gebruikt om aan te tonen van de interactie tussen sortilin en zijn potentiële liganden8,9. Echter, deze experimenten zijn uitgevoerd ofwel in 0,1% Triton of in 0,6% CHAPS die twijfels in de volledigheid van membraan solubilisatie werpt.
Andere onderzoekers bestudeerd de interactie tussen sortilin en de liganden door oppervlakte plasmon resonantie10,11. Hoewel oppervlak plasmon resonantie misschien wel de beste aanpak van het probleem is, vereist het dure apparatuur en aanzienlijke hoeveelheden van pure recombinante eiwitten die is kostbaar en tijdrovend.
Hier beschrijven we een techniek die, in combinatie met andere methoden, zoals dwarsbinding, en de gist twee hybridesysteem, raden dat die sortilin kunt binden aan GLUT4. De bepaling is snel en eenvoudig en gemakkelijk kan worden aangepast aan andere eiwitten en verschillende maten van peptiden.
Er zijn een paar kritische stappen in deze test. De eerste is de peptide de oplosbaarheid in water. Een andere is de selectie van het juiste besturingselement. Duidelijk, een significante hoeveelheid van het biologisch materiaal kan interactief werken met kobalt kralen via de sequenties van de endogene zijn bereiken of niet-specifiek. Daarom is het essentieel om te immobiliseren op de kralen lysates WT cellen en cellen transfected met de proteïne van belang, in ons geval Sortilin-myc/zijn. In dergelijke een proefopzet, materiaal gebonden aan de kralen zal verschillen in slechts één eiwit, Sortilin-myc/zijn, zodat een zekere mate van binding van de achtergrond van de peptide aan controle kralen kan worden getolereerd. Nog steeds, de binding van de achtergrond van de peptide aan de kralen kan worden verminderd door het verhogen van de striktheid van de definitieve wassen stappen. Het gebruik van mini kolommen voor het wassen van de kralen kan achtergrond bindend nog verder afnemen.
Vanwege de aard van de "GLUT4 route" wilden we adres binding van Myc-fll-GLUT4 met sortilin op verschillende pH-waarden. We beseffen dat pH in het lumen van het vroege/sorteren Endosomen kan vallen minder dan 6. PH lager dan 6 verstoort echter binding van Zijne-gelabeld eiwitten aan kobalt-kralen kunnen worden beschouwd als een beperking van de methode.
Isolatie van het target-eiwit op kobalt parels met behulp van de zijn epitoop is te verkiezen boven andere stappen uit voor de zuivering van affiniteit, zoals immunoprecipitation met specifieke antilichamen, in termen van de opbrengst en de niet-specifieke binding. Toch is het volledig mogelijk dat isolement van het target-eiwit op elke andere hars (bij voorkeur, magnetische kralen) met goede controles zal blijken succesvol.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Dit werk werd gesteund door DK52057 en DK107498 van de NIH naar KvK X.P werd gesteund door de institutionele opleiding-subsidie 2T32DK007201 van de NIH onderzoekssubsidies.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma | P8849 | for use in purification of histidine tag protein |
| Phosphate-Buffered Saline | Corning | 21-040-CV | PBS |
| 1mL Insulin Syringe U-100 | BD | 329652 | 26G x 1/2 |
| BCA Protein Assay Kit | Pierce | 23228 | |
| Wash buffer | Boston BioProducts | BP-234 | For His-tag protein purification |
| HisPur Cobalt Resin | Thermo Scientific | 89964 | |
| Tricine sample Buffer | Bio-Rad | 161-0739 | with SDS, bMercaptaethanol should be added |
| Elution Buffer | Boston BioProducts | BP-236 | For His-tag protein purificationwith 250mM Imidazole |
| Mini-Protean Tris-Tricine precast gels 10-20% | Bio-Rad | 456-3115 | For seperation of peptide and small protein |
| Tris/Tricine/SDS running buffer | Bio-Rad | 161-0744 | |
| Transfer Buffer | Boston BioProducts | BP-190 | Add 20% methanol |
| Nitrocellulose membrane 0.45 mm | Bio-Rad | 1620115 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | A9647 | BSA |
| Anti Myc antibody | Cell Signaling | 2272 | Rabbit |
| Peptide | Genscipt | customize ordering | |
| Precision Plus Protein Dual color Standarts | BioRad | 161-0374 |
References
- Bogan, J. S. Regulation of glucose transporter translocation in health and diabetes. Annu Rev Biochem. 81, 507-532 (2012).
- Kandror, K. V., Pilch, P. F. The sugar is sIRVed: sorting Glut4 and its fellow travelers. Traffic. 12 (6), 665-671 (2011).
- Pan, X., Zaarur, N., Singh, M., Morin, P., Kandror, K. V. Sortilin and retromer mediate retrograde transport of Glut4 in 3T3-L1 adipocytes. Mol Biol Cell. 28 (12), 1667-1675 (2017).
- Kim, J., Kandror, K. V. The first luminal loop confers insulin responsiveness to the glucose transporter 4. Mol Biol Cell. 23 (5), 910-917 (2012).
- Shi, J., Kandror, K. V. Sortilin is essential and sufficient for the formation of Glut4-storage vesicles in 3T3-L1 adipocytes. Dev Cell. 9 (1), 99-108 (2005).
- Coutinho, M. F., Prata, M. J., Alves, S. A shortcut to the lysosome: the mannose-6-phosphate-independent pathway. Mol Genet Metab. 107 (3), 257-266 (2012).
- Willnow, T. E., Petersen, C. M., Nykjaer, A. VPS10P-domain receptors - regulators of neuronal viability and function. Nat Rev Neurosci. 9 (12), 899-909 (2008).
- Mazella, J., et al. The 100-kDa neurotensin receptor is gp95/sortilin, a non-G-protein-coupled receptor. J Biol Chem. 273 (41), 26273-26276 (1998).
- Ni, X., Morales, C. R. The Lysosomal Trafficking of Acid Sphingomyelinase is Mediated by Sortilin and Mannose 6-phosphate Receptor. Traffic. 7 (7), 889-902 (2006).
- Westergaard, U. B., et al.
- Nykjaer, A., et al. Sortilin is essential for proNGF-induced neuronal cell death. Nature. 427 (6977), 843-848 (2004).
