Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

En I Vitro modell å studere effekten av 5-Aminolevulinic syre-mediert Fotodynamisk terapi på Staphylococcus aureus Biofilm

Published: April 16, 2018 doi: 10.3791/57604
Automatic Translation
*1, *2, 2, 2, 2, 3, 1, 2
1Department of Otorhinolaryngology-Head and Neck Surgery, Eye & ENT Hospital, Shanghai Key Clinical Disciplines of otorhinolaryngology, Fudan University, 2Key Laboratory of Medical Molecular Virology of Ministries of Education and Health, Department of Medical Microbiology and Parasitology, School of Basic Medical Science, Shanghai Medical College of Fudan University, 3Department of Dermatology, Huashan Hospital, Fudan University
* These authors contributed equally

Summary

Dette manuskriptet beskriver en protokoll for å studere antimikrobielle effekten av 5-aminolevulinic syre-mediert Fotodynamisk terapi (ALA-PDT) på en Staphylococcus aureus biofilm. Denne protokollen kan brukes til å utvikle en i vitro modell for å studere behandling av bakterielle biofilm med PDT i fremtiden.

Abstract

Gule stafylokokker (S. aureus) er en vanlig human patogen, som forårsaker pyogenic og systemisk infeksjoner. S. aureus infeksjoner er vanskelig å utrydde skyldes fremveksten av antibiotika-resistente bakteriestammer, men også dens evne til skjemaet biofilm. Nylig er Fotodynamisk terapi (PDT) angitt som en av de mulige behandlingene for å kontrollere biofilm infeksjoner. Men videre trengs studier for å forbedre vår kunnskap om sin effekt på bakteriell biofilm, i tillegg til de underliggende mekanismene. Dette manuskriptet beskriver en i vitro modell av PDT med 5-aminolevulinic syre (5-ALA), en forløper til den faktiske photosensitizer, protoporphyrin IX (PpIX). Eldre kort, S. aureus biofilm ble inkubert med ALA og deretter eksponert for lys. Deretter var antibakterielle effekten av ALA-PDT på S. aureus biofilm kvantifisert ved å beregne kolonien danner enheter (CFUs) og visualisert ved levedyktighet fluorescerende flekker via AC confocal laserskanning mikroskopi (CLSM). Representativt resultater viste en sterk antibakteriell effekt av ALA-PDT på S. aureus biofilm. Denne protokollen er enkel og kan brukes til å utvikle en i vitro modell for å studere behandling av S. aureus biofilm med ALA-PDT. I fremtiden kan det også bli referert i PDT studier utnytte andre photosensitizers for forskjellige bakteriell stammer med minimal justeringer.

Introduction

S. aureus er en viktig Gram-positive patogen som colonizes hud og mucosa i menneskelige verter. Dens evne til skjemaet biofilm regnes som en viktig del av dens patogenesen1. Bakteriell biofilm er et fellesskap av bakterier i en egenproduserte matrise som består av ekstracellulære polymere stoffer, inkludert polysakkarid, DNA og proteiner. Denne matrisen spiller en betydelig rolle i for bakterieinfeksjoner, bidrar til en høy grad av motstand mot menneskets immunsystem og gjeldende anti-mikrobielle terapier2. Antibiotika er fortsatt store behandling for biofilm infeksjoner, selv om effekten av antibiotika på biofilm er begrenset. Det har vist tidligere at celler i biofilm er 10 - 1000 ganger mer resistente mot antibiotika sammenlignet med deres planktoniske kolleger3. Dermed for alternative strategier å overvinne problemet.

PDT, et alternativ behandling for bakterieinfeksjoner, bruker lys av en passende bølgelengde for å aktivere photosensitizers. Dette fører til produksjon av reaktive oksygen arter (ROS), som er dødelige til målcellene forstyrre cellen vegg, inaktivere enzymer og skade DNA4. Denne flere mottakere karakteristiske gjør det vanskelig for bacteria å utvikle resistens til PDT behandling.

Antimikrobielle effekten av PDT på bakterier og sopp biofilm, med flere photosensitizers, for eksempel toluidine blå, malakitt grønn, methylene blåfarge, klor e6 og porphyrins, har vært studert i tidligere rapporter5,6, 7,8,9,10,11,12,13. 5-ALA, en prodrug av den faktiske photosensitizer, PpIX, er preget av små molekylvekt og rask klaring12,14. Disse fordelene gir ALA-PDT stort potensial som et terapeutisk program. Selv om effekten av ALA-PDT på planktoniske bakterier har blitt studert av mange grupper12, har antimikrobielle effekten av ALA-PDT på bakteriell biofilm ennå ikke utredet. Samtidig er det vanskelig å sammenligne resultater mellom tidligere studier. En av grunnene er at de ulike protokollene brukes av ulike grupper. Derfor beskriver denne protokollen en i vitro modell av en ALA-PDT system basert på våre tidligere arbeid15. Effekten av denne modellen ble bekreftet av CFU beregning og levedyktighet farging med CLSM.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Biofilm formasjon

  1. Biofilm formasjon i 96-brønnen microplates
    1. Hente S. aureus belastning USA300 og 3 biofilm-forming klinisk stammer (C1 - C3) lagret på-80 ° C.
      Merk: Evnen til de kliniske stammene skjemaet biofilm ble bestemt av være ferdig innen plate analysen beskrevet tidligere15.
    2. Vaksinere bakterien i 5 mL tryptone soya kjøttkraft (TSB) medium, og dyrke i en inkubator med skjelvende på 37 ° C over natten til stasjonære fase.
    3. Sentrifuge overnatting bakteriell kultur 4000 x g i 10 min ved 25 ° C, og deretter kaste nedbryting. Resuspend pellets i fosfat bufret saltvann (PBS) til en siste konsentrasjon av 2.0 x 109 CFU/mL.
      Merk: Konsentrasjonen av bakterier ble beregnet ved å måle optisk tetthet og ytterligere bestemmes av platen telle16, avslører at 1 OD600 hjuloppheng inneholdt 1,5 x 108 CFU/mL.
    4. Fortynne bakteriell suspensjon å 1:200 (1.0 x 107 CFU/mL) i TSB medium som inneholder 0,5% glukose. Vaksinere 200 µL av bakteriell suspensjon i hver brønn av en celle-kultur-behandlet polystyren 96-brønnen microplate.
    5. Inkuber microplate statisk på 37 ° C 24 h under et godt oksygenrikt miljø.
      Merk: Inkubasjon tiden for eldre biofilm formasjon kan variere for forskjellige bakteriell stammer; Dette bør fastsettes før PDT eksperimentere15.
    6. Forkaste media i brønnene og vask microplate brønnene forsiktig med PBS tre ganger og deretter kaste nedbryting.
      Merk: Trinnet skal utføres svært forsiktig for å unngå å forstyrre den dannet biofilm.
  2. Biofilm formasjon i retter
    1. Vaksinere S. aureus belastningen USA300 i 5 mL av TSB medium, og dyrke i en inkubator med skjelvende på 37 ° C over natten til stasjonære fase.
    2. Sentrifuge overnatting bakteriell kultur 4000 x g i 10 min ved 25 ° C, og deretter kaste nedbryting. Resuspend pellets i PBS til en siste konsentrasjon av 2.0 x 109 CFU/mL. Deretter fortynne bakteriell suspensjon å 1:200 (1.0 x 107 CFU/mL) i TSB medium som inneholder 0,5% glukose. Vaksinere 2 mL av bakteriell suspensjon i en 35 mm optisk kvalitet glass bunn celle kultur parabol og ruge statisk på 37 ° C i 24 timer.
      Merk: Konsentrasjonen av bakterier ble beregnet ved å måle optisk densitet.
    3. Sug opp media med en pipette, og deretter skyll biofilm i fatet forsiktig med PBS tre ganger og deretter kaste nedbryting nøye.
      Merk: Unngå å berøre pipette spissen til bunnen av parabolen. Trinnet 2.2 skal utføres umiddelbart etter dette trinnet å hindre tørking av dannet biofilm.

2. lett bestråling

  1. Lagre 5-ALA i 4 ° C kjøleskap. Før eksperimentet fortynne 5-ALA med PBS 10 mm.
    Merk: 5-ALA løsning bør være nylaget før eksperimentet.
  2. I forsøksgruppen, tilsett 200 µL av 10 mM ALA hver brønn av microplate eller 2 mL til kultur parabolen. Dekk platen/parabolen med aluminiumsfolie og ruge 1t. Deretter irradiate plate/parabolen med en lysdiode (LED) med lav intensitet av 100 mW/cm2 1t å oppnå en lys dose av 360 J/cm2 på en stor bølgelengde 633 ± 10 nm17.
    Merk: For å la lyset energi effektivt og like leveres til biofilm i alle brønnene/rettene, fikse avstanden fra toppen av lyskilden til godt/retten på 6.0 cm, og begrense eksperimentelle regionen til sentrale bestråling området (10 cm x 8 cm). Å sikre at resultatene er reproduserbare, eksperimenter bør utføres på samme romtemperatur.
    For å unngå direkte eksponering av platen til andre lyskilder, for eksempel sollys, belysning eller lamplight, LED ble aktivert før plate/parabolen bestråling området i LED bestråling trinn, og lyset var sterke nok til å fullføre operasjonen.
  3. Konfigurere kontroll grupper (tre kontroll grupper ble definert i vårt eksperiment).
    1. For den første kontrollen gruppe (ALA - LED-), tilsett 200 µL av PBS hver brønn i microplate eller 2 mL til kultur parabolen. Dekk platen/parabolen med aluminiumsfolie og ruge det 2 h.
    2. For den andre kontrollgruppen (ALA + LED-), tilsett 200 µL av 10 mM ALA hver brønn i microplate eller 2 mL til kultur parabolen. Dekk platen/parabolen med aluminiumsfolie og ruge det 2 h.
    3. For tredje kontrollgruppen (ALA-ledet +), tilsett 200 µL av PBS hver brønn i microplate eller 2 mL til kultur parabolen. Dekk platen/parabolen med aluminiumsfolie og ruge det 1t. Så utsette platen til LED med 360 J/cm2 lys irradiation en stor bølgelengde 633 ± 10 nm17.
      Merk: I LED bestråling trinn unngå direkte eksponering av platen til andre lyskilder, som sollys, belysning eller lamplight.

3. fastsettelse av effektiviteten av PDT behandling

Merk: For å bekrefte effekten av ALA-PDT på S. aureus biofilm, levedyktigheten til cellene med eller uten ALA-PDT ble evaluert CFU teller og levedyktighet flekker.

  1. Fastsettelse av gjenværende levedyktig bakterieceller
    1. ALA-PDT behandling, forkaste media i brønnene og vaskes brønner med PBS tre ganger å fjerne alle ikke-tilhenger celler både eksperimentelle og kontroll grupper.
      Merk: Dette trinnet skal utføres svært forsiktig.
    2. Skrape tilhenger bakterier cellene grundig fra brønnene pipette spissen og samle cellene i konisk rør.
    3. Sentrifuge bakteriell suspensjon 4000 x g i 10 min på 4 ° C, og forkaste nedbryting.
    4. Resuspend bakterier i 1 mL av 0,25% pancreatin enzym i PBS og ruge ved 37 ° C i 1,5 t.
    5. Sentrifuge 4000 x g i 10 min; forkaste nedbryting, deretter resuspend i pellet i 200 µL av PBS.
    6. Gjøre 1:10 føljetong fortynninger av cellen løsningen med PBS; deretter legge til 5 µL av hver serielle fortynning prøve på tryptone soya agar (TSA) plate. Inkuber TSA platen på 37 ° C 16 h; deretter antall (av blotte øye) bakteriell koloniene (CFU/mL).
  2. Observasjon av S. aureus biofilm av CLSM
    1. Lys bestråling, vaskes biofilm i kultur parabol med PBS tre ganger.
      Merk: Dette trinnet skal utføres svært forsiktig.
    2. Legg 1 mL 1 µM grønn-fluorescerende kjernefysiske og kromosom Pletten at er permeabel prokaryote celle membraner (f.eksSYTO9) og 1 mL 1 µM propidium iodide (PI) for 20 min stain biofilm samt døde celler.
    3. Observere levedyktig celler (grønne fluorescens, Ex / Em 485 nm/530 nm) og døde celler (rød fluorescens, Ex / Em 485 nm/630nm) under en CLSM med en 63 X 1.4-NA oljeneddyp linsen.
    4. Generere bilder ved hjelp av mikroskopi programvare.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Levedyktigheten til bakterier i biofilm ble redusert etter ALA-PDT behandling sammenlignet med kontrollene (ALA - LED-, ALA + LED- og ALA-ledet +) i både USA300 og de tre kliniske stammene (figur 1).

For å bekrefte resultatene fra CFU analysen og observere antibakterielt effekt av ALA-PDT på den S. aureus biofilm i situUSA300 biofilm var visualisert ved CLSM med levedyktighet flekker. Levedyktig og død cellene var farget med grønne og røde fluorescens, henholdsvis. Bildet viste at de fleste av bakterier i biofilm ble drept av ALA-PDT, som var i samsvar med resultatene av CFU analysen (figur 2).

Figure 1
Figur 1: effekten av ALA-PDT på biofilm. CFU/mL var Logg-forvandlet og vises som gjennomsnittlig ± standardavviket i USA300 og tre klinisk stammer (C1 - C3) behandlet med ALA-PDT (ALA + LED +) eller under kontroll forhold (ALA - LED-, ALA + LED-, ALA-ledet +). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2: representant CLSM bilder av S. aureus biofilm med LIVE/døde flekker. Biofilm dannet av USA300 bakterier ble behandlet med eller uten ALA-PDT (panel A: ALA - LED-, panelet B: ALA + LED-, panelet C: ALA-ledet +, panelet D: ALA + LED +), og deretter farget med SYTO9 (grønn fluorescens) og PI (rød fluorescens) representerer levende og døde bakterier uavhengig. En 63 X 1.4-NA nedsenking oljeobjektiv ble brukt. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

PDT har vært en godt studert terapi for behandling av kreft siden den ble oppfunnet mer enn 100 år siden18. Det siste tiåret, PDT er brukt som en antimikrobiell strategi og har vist effektivitet mot noen antibiotika-resistente patogene bakterier12. Sammenlignet med planktoniske staten, synes bakteriell biofilm å være mer motstandsdyktige mot antibiotika behandling3, mens effekten av ALA-PDT på biofilm ikke har blitt fullstendig undersøkt ennå.

En i vitro ALA-PDT system ble beskrevet i denne artikkelen, og antibakterielle effekten av denne modellen på S. aureus biofilm ble demonstrert. Metodene ble brukt til å teste effekten av ALA-PDT på S. aureus biofilm i denne protokollen. Mens CFU testen viste antimikrobielle effekten ved å beregne levedyktig cellene etter behandling, fluorescerende levedyktighet farging med CLSM ikke bare bekreftet resultatene av CFU testen, men også oppdaget morfologiske tegnet av levende og døde bakterier i situ. Bruke både analytiske teknikker sammen er en ideell tilnærming for å bestemme effekten av ALA-PDT på biofilm. Basert på CLSM resultatene, ble død bakterieceller hovedsakelig distribuert i det øvre laget, mens noen av bakterier i det nederste laget forble levende15. Sistnevnte kan være kilden til bakteriell koloniene i CFU analysen. Et lignende resultat er observert i en studie utført av O'Neill et al., som ble forklart av lav akkumulering av photosensitizers i det indre laget eller manglende evne til lys å trenge disse regionene19.

I denne protokollen, ble de eldre biofilm inkubert med 10 mM ALA 1t før eksponering for PDT. Disse parameterne ble valgt basert på resultatene av to pre eksperimenter. Først ble antimikrobielle effekten av ALA testet mot biofilm uten lys bestråling med ulike konsentrasjoner ALA og ulike mengder tid for inkubasjon med S. aureus biofilm. Gruppene uten noen bakteriedrepende effekt ble valgt som kandidater. Andre PDT effekten ble oppdaget i gruppene kandidat, og gruppen med mest potente bakteriedrepende effekten ble til slutt valgt i denne protokollen. Dermed sikrer parameterne som brukes i denne protokollen at det var ingen bakteriedrepende effekt av ALA alene. En 1-h inkubasjon er betydelig kortere enn de som brukes i tidligere studier17,20, gjør det praktisk for i vitro studier og potensiell program i fremtidige kliniske behandlinger.

Det er flere kritiske punkter for vellykket bruk av denne modellen. Hele prosessen involverer manipulering av ALA behandlet bakterier skal først utføres i mørket. Andre bør manipulering av den eldre biofilm være forsiktig å unngå å forstyrre den dannet biofilm. Tredje i CFU testen skal skraping bakterier fra bunnen av platene grundig. Til slutt, den nylagde ALA skal brukes; Derfor er det bedre å forberede ALA rett før eksperimentet.

Selv om denne protokollen kan brukes til å teste effekten av ALA-PDT på S. aureus biofilm i vitro, er det fortsatt forskjellig fra klinisk situasjonen i vivo. For eksempel biofilm i menneskekroppen er vanligvis dannet av flere bakteriell stammer21,22, og miljø i vivo er mer kompleks enn det i vitro, som kan påvirke effekten av PDT. Derfor er fremtidige i vivo eksperimenter nødvendig for en fullstendig vurdering av antibakterielle effekten av ALA-PDT på S. aureus biofilm. Men på grunn av sine fordeler av bekvemmelighet og etiske problemstillinger å gjennomføre studier i vivo , vil denne i vitro -plattformen være nyttig og praktisk å forbedre studier av effekten av ALA-PDT på S. aureus biofilm. Det bør også bemerkes at selv om ALA, en forløper til photosensitizer PpIX, har gode egenskaper, inkludert rask fortolling, færre og kortere levetid kutan fotosensitivitet, begrenset lys penetrasjon begrenset til overfladiske lesjoner og spesielt dens ikke kumulative toksisitet14, lys dose og photosensitizer konsentrasjon kreves for å oppnå bakterier drepe kan fortsatt ha en tilskuer effekt på verten celle levedyktighet. Dermed er studere endring av ALA23 målrettet behandling av valgte patogene bakterielle stammer som S. aureus verdifulle for fremtidige antimikrobielle terapi.

Denne protokollen kan ikke bare brukes for studier av effekten av ALA-PDT på S. aureus stammer i fremtiden, men kan også refereres til å studere sin effekt på biofilm dannet av andre bakterier. Parametrene som konsentrasjonen av ALA og varigheten av den bakterier inkubering med ALA, kan variere mellom forskjellige bakteriell stammer, men prinsippene omtalt ovenfor er vanligvis delt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre

Acknowledgments

Dette arbeidet ble finansiert av National natur Science Foundation i Kina for unge forskere (nr. 81300810), Shanghai unge legen treningsprogram (nr. 20141057) og National Natural Science Foundation i Kina (81671982, 81271791 og 81571955). Vi ønsker å takke LetPub (www.letpub.com) for å gi språklige hjelp under utarbeidelsen av dette manuskriptet.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Tryptone Soya Broth (TSB) OXOID CM0129B
Tryptone Soya Agar (TSA) OXOID CM0131
SYTO9 Thermo Fisher Scientific L7012 The LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kits 
Propidium iodide (PI) Thermo Fisher Scientific L7012 The LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kits 
Pancreatin Sigma-Aldrich P3292
5-aminolevulinic acid (ALA) Fudan Zhangjiang Bio-Pharm 3.1
Staphylococcus aureus strain USA300 / / The source of USA 300 references “Tenover FC, Goering RV. J Antimicrob Chemother. 2009 Sep; 64(3):441-6”.
Staphylococcus aureus clinical strains (C1-C3) / / All clinical strains were isolated from patients with chronic rhinosinusitis in the Department of Otorhinolaryngology-Head and Neck Surgery, Eye and ENT Hospital of Fudan University [Zhang QZ, Zhao KQ, Wu Y, et al. PLoS One. 2017 Mar; 12(3): e0174627].
96-well microplate Corning Inc 3599 Clear Flat Bottom Polystyrene TC-Treated Microplates, Individually Wrapped, with Lid, Sterile
Fluorodish NEST Biotechnology 801001 Glass bottom, Non-pyrogenic
Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL Eppendorf 0030120086
Eppendorf microcentrifuge 5417 Eppendorf Z365998 | SIGMA
Incubator Thermo Fisher Scientific SHKE4000 MaxQ 4000 Benchtop Orbital Shakers
Light emitting diode (LED) Wuhan Yage Optic and Electronic Technique CO LED-IB
Leica TCS SP8 confocal laser-scanning microscope Leica Microsystems
Leica LAS AF software Leica Microsystems
IMARIS software Bitplane

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lewis, K. Riddle of biofilm resistance. Antimicrob Agents Chemother. 45 (4), 999-1007 (2001).
  2. Rabin, N., et al. Biofilm formation mechanisms and targets for developing antibiofilm agents. Future Med Chem. 7 (4), 493-512 (2015).
  3. Mah, T. F., O'Toole, G. A. Mechanisms of biofilm resistance to antimicrobial agents. Trends Microbiol. 9 (1), 34-39 (2001).
  4. Sharma, M., et al. Toluidine blue-mediated photodynamic effects on staphylococcal biofilms. Antimicrob Agents Chemother. 52 (1), 299-305 (2008).
  5. Rosa, L. P., da Silva, F. C., Nader, S. A., Meira, G. A., Viana, M. S. In vitro effectiveness of antimicrobial photodynamic therapy (APDT) using a 660 nm laser and malachite green dye in Staphylococcus aureus biofilms arranged on compact and cancellous bone specimens. Lasers Med Sci. 29 (6), 1959-1965 (2014).
  6. Rosa, L. P., Silva, F. C., Nader, S. A., Meira, G. A., Viana, M. S. Effectiveness of antimicrobial photodynamic therapy using a 660 nm laser and methyline blue dye for inactivating Staphylococcus aureus biofilms in compact and cancellous bones: An in vitro study. Photodiagnosis Photodyn Ther. 12 (2), 276-281 (2015).
  7. Mai, B., et al. The antibacterial effect of sinoporphyrin sodium photodynamic therapy on Staphylococcus aureus planktonic and biofilm cultures. Lasers Surg Med. 48 (4), 400-408 (2016).
  8. Gandara, L., Mamone, L., Bohm, G. C., Buzzola, F., Casas, A. Enhancement of photodynamic inactivation of Staphylococcus aureus biofilms by disruptive strategies. Lasers Med Sci. 32 (8), 1757-1767 (2017).
  9. Baltazar, L. M., et al. Antimicrobial photodynamic therapy: an effective alternative approach to control fungal infections. Front Microbiol. 6, 202 (2015).
  10. Fernandes, T., Bhavsar, C., Sawarkar, S., D'Souza, A. Current and novel approaches for control of dental biofilm. Int J Pharm. 536 (1), 199-210 (2017).
  11. De Sordi, L., et al. Development of Photodynamic Antimicrobial Chemotherapy (PACT) for Clostridium difficile. PLoS One. 10 (8), e0135039 (2015).
  12. Harris, F., Pierpoint, L. Photodynamic therapy based on 5-aminolevulinic acid and its use as an antimicrobial agent. Med Res Rev. 32 (6), 1292-1327 (2012).
  13. Donnelly, R. F., McCarron, P. A., Tunney, M. M. Antifungal photodynamic therapy. Microbiol Res. 163 (1), 1-12 (2008).
  14. Shi, H., Li, J., Zhang, H., Zhang, J., Sun, H. Effect of 5-aminolevulinic acid photodynamic therapy on Candida albicans biofilms: An in vitro study. Photodiagnosis Photodyn Ther. 15, 40-45 (2016).
  15. Zhang, Q. Z., et al. 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy and its strain-dependent combined effect with antibiotics on Staphylococcus aureus biofilm. PLoS One. 12 (3), 0174627 (2017).
  16. Chang, Y. C., et al. Rapid single cell detection of Staphylococcus aureus by aptamer-conjugated gold nanoparticles. Sci Rep. 3, 1863 (2013).
  17. Barra, F., et al. Photodynamic and Antibiotic Therapy in Combination to Fight Biofilms and Resistant Surface Bacterial Infections. Int J Mol Sci. 16 (9), 20417-20430 (2015).
  18. St Denis, T. G., et al. All you need is light: antimicrobial photoinactivation as an evolving and emerging discovery strategy against infectious disease. Virulence. 2 (6), 509-520 (2011).
  19. O'Neill, J. F., Hope, C. K., Wilson, M. Oral bacteria in multi-species biofilms can be killed by red light in the presence of toluidine blue. Lasers Surg Med. 31 (2), 86-90 (2002).
  20. Li, X., et al. Effects of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy on antibiotic-resistant staphylococcal biofilm: an in vitro study. J Surg Res. 184 (2), 1013-1021 (2013).
  21. Hall-Stoodley, L., Costerton, J. W., Stoodley, P. Bacterial biofilms: from the natural environment to infectious diseases. Nat Rev Microbiol. 2 (2), 95-108 (2004).
  22. Elias, S., Banin, E. Multi-species biofilms: living with friendly neighbors. FEMS Microbiol Rev. 36 (5), 990-1004 (2012).
  23. Wu, J., et al. Design and Proof of Programmed 5-Aminolevulinic Acid Prodrug Nanocarriers for Targeted Photodynamic Cancer Therapy. ACS Appl Mater Interfaces. 9 (17), 14596-14605 (2017).

Tags

Biologi problemet 134 Fotodynamisk terapi 5-aminolevulinic syre biofilm Staphylococcus aureus protokoll modell i vitro
En <em>I Vitro</em> modell å studere effekten av 5-Aminolevulinic syre-mediert Fotodynamisk terapi på <em>Staphylococcus aureus</em> Biofilm
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zhao, K. Q., Wu, Y., Yi, Y. X.,… More

Zhao, K. Q., Wu, Y., Yi, Y. X., Feng, S. J., Wei, R. Y., Ma, Y., Zheng, C. Q., Qu, D. An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm. J. Vis. Exp. (134), e57604, doi:10.3791/57604 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter