Summary
إينترالومينال الشعيرة انسداد الشريان الدماغي الأوسط هو النموذج الأكثر استخداماً في فيفو السكتة الدماغية التجريبية في القوارض. يتم تنفيذ نهج جراحية بديلة للسماح بإصلاح الشريان السباتي المشترك هنا، الذي يسمح لضخه الشريان السباتي المشترك وضخه كامل لإقليم الشريان الدماغي الأوسط.
Abstract
السكتة الدماغية سبب رئيسي للكبار طويلة الأجل الإعاقة والوفاة في جميع أنحاء العالم. العلاجات الحالية المتاحة محدودة، مع الأنسجة البلاسمينوجين منشط فقط (طن سنوياً) كعلاج المخدرات معتمدة لاستهداف السكتات الدماغية. البحوث الجارية في مجال السكتة الدماغية يركز على تحسين فهم الفسيولوجيا المرضية للسكتة الدماغية، لتطوير والتحقيق في رواية أهداف الصيدلية. نماذج موثوقة السكتة الدماغية التجريبية حاسمة بالنسبة لتطور العلاجات المحتملة. النموذج (مكاو) انسداد الشريان الدماغي الأوسط ذات الصلة سريرياً والأكثر استخداماً نموذج الجراحية من السكتة الدماغية في القوارض. غير أن نتائج هذا النموذج، مثل حجم الآفة، ترتبط بمستويات عالية من التقلب، لا سيما في الفئران. يسمح نموذج ماكاو البديلة الموضحة هنا ضخه الشريان السباتي المشترك (CCA) وزيادة التروية الإقليم الشريان الدماغي الأوسط (MCA)، استخدام لوحة أنسجة مع تسرب الفيبرينوجين المستندة إلى إصلاح السفينة، وتحسن الرعاية الاجتماعية للفئران بتجنب ربط الشريان السباتي الخارجي (اللجنة الاقتصادية لأفريقيا). وهذا يقلل الاعتماد على "دائرة ويليس"، الذي يعرف بأن تكون الغاية تشريحيا متغير في الفئران. وتظهر بيانات تمثيلية أن استخدام هذا النهج الجراحية البديلة يقلل من التفاوت في حجم الآفة بين ماكاو النهج التقليدي والنهج البديلة الموضحة هنا.
Introduction
هو أحد أسباب رئيسية للسكتة الدماغية الاسكيمية المحورية في إقليم الشريان الدماغي الأوسط. منشط البلاسمينوجين الأنسجة (طن سنوياً) هو العلاج الدوائي فقط المتوفرة مع أثبتت فعاليتها، على الرغم من المحاكمات المخدرات السريرية العديدة الموجهة إلى السكتة الدماغية1،2. ومع ذلك، بسبب مخاوف تتعلق بالسلامة، ونافذة علاجية ضيقة (< 4.5 ح)، ~ 15% فقط من جميع مرضى السكتة الدماغية تكون مؤهلة لتلقي طن سنوياً، ومعدلات إعادة الاستقناء يمكن < 50%3،4.
نماذج حيوانية ذات الصلة سريرياً واستنساخه من السكتة الدماغية تعتبر أساسية يسترشد بها في وضع العلاجات العلاجية السكتة الدماغية الجديدة والمحتملة. ومع ذلك، بسبب المخاوف بشأن الاتساق وتقلب في النتائج مع نماذج حيوانية، يظل من المهم صقل القائمة في فيفو نماذج لتحسين الترجمة من الدراسات الإكلينيكية للعيادة. عدم وجود ترجمة من فعالية التجارب السريرية للعلاجات المحتملة للاستخدام السريري مصدر قلق مستمر للسكتة الدماغية البحث5. أسباب الفشل للترجمة من المحتمل أن تكون متعددة، وقد تكون ذات صلة إلى، على سبيل المثال، تصميم التجربة، وتأخر العلاج، التغايرية السريرية السكتة الدماغية، والقيود المفروضة على النماذج الحيوانية المستخدمة6. ويظل تحديا رئيسيا لأبحاث السكتة الدماغية تطوير علاجات آمنة وفعالة.
انسداد الشريان الدماغي الأوسط (ماكاو) بالإدراج الشعيرة intraluminal هو الأكثر استخداماً في فيفو القوارض نموذج تجريبي السكتة الدماغية. هذا النموذج يتيح استعادة تدفق الدم بعد التعريفي الاسكيمية، ومحاكاة الأحداث التي تحدث في المخ البشري7. ومع ذلك، خاصة في الفئران، حجم الآفة غير متجانسة مع انحرافات قياسية متنوعة تحدث على الرغم من أن تعريف البروتوكولات الجراحية هي التطبيقية8،،من910. من المعتاد أن نرى توزيع ثنائي الصيغة سترياتال الصغيرة و كميات كبيرة من الآفة سترياتو القشرية11. للحث على الاسكيمية، يتم إدراج الشعيرة عادة من خلال شق للتقييم القطري المشترك أو اللجنة الاقتصادية لأفريقيا التي تظل ثم الواصلة بشكل دائم12. ربط دائم للتقييم القطري الموحد يمنع إعادة تدفق الدم إلى الشريان السباتي الداخلي (ICA)، وبعد ذلك الإقليم MCA. يؤدي ضخه تعتمد على العرض الجانبية داخل "دائرة ويليس" (بقرة). هيكل البقر قد تقلب التشريحية بين الحيوانات الفردية، ولا سيما في C57BL/6 الفئران سلالة المستخدمة عادة في فيفو السكتة الدماغية البحوث13. تسمح طريقة بديلة، من خيوط الإدراج من خلال اللجنة الاقتصادية لأفريقيا، التروية المستمرة من خلال التقييم القطري المشترك، ولكن هذه التنازلات أسلوب الإمداد الشرياني لإقليم اللجنة الاقتصادية لأفريقيا، التي تبين، بالنسبة للفئران، يكون لها تأثير ضار على الحيوان 14من الرفاه.
الاعتماد على البقرة للعرض الجانبية وضخه في ماكاو نموذج المنشأة، جزئيا، تستأثر بتباين حجم الآفة بعد انسداد. يصف لنا إجراء العمليات جراحية مورين بديل حيث يتم تجنب ربط اللجنة الاقتصادية لأفريقيا وهو إصلاح شق التقييم القطري المشترك، مما يسمح بضخه من خلال التقييم القطري المشترك، مستقلة عن البقرة. إصلاح شق التقييم القطري المشترك سابقا ثبت في الفئران يؤدي ضخه ناجحة من خلال التقييم القطري المشترك15. ونحن بتطبيق هذا النهج بنجاح في الفئران11 وتقرير هنا في البروتوكول الذي ينتج تقلب انخفاض في حجم الآفة، قياس النتيجة الرئيسية المستخدمة في الدراسات التجريبية السكتة الدماغية.
في هذا البروتوكول، نحن لشرح كيفية إجراء ماكاو من خلال التقييم القطري المشترك السفينة الشعيرة الإدراج متبوعاً بإصلاح السفينة التقييم القطري المشترك، والذي ينطوي على تطبيق لوحة وتسرب أنسجة للسماح بضخه.
Protocol
وأجريت هذا البروتوكول والبيانات المبلغ عنها وفقا لقانون "المملكة المتحدة الحيوانات" (إجراءات علمية)، 1986 (رخصة المشروع 60/4315)، وعقب الموافقة الأخلاقية المؤسسية. وترد جميع التجارب وفقا "بحوث الحيوان": الإبلاغ في فيفو تجارب (سيصلون) المبادئ التوجيهية16.
1-إعداد
- تعريف الكبار ذكور الفئران C57BL/6 للرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية (مثل، البيئة، الفراش، الأطعمة الاسترداد) مالا يقل عن 48 ساعة قبل الجراحة.
ملاحظة: وظيفة-ماكاو الحيوانات غالباً ما يكون صعوبة بالأكل والشرب بعد الجراحة.- لمنع فقدان الوزن الزائد بعد الجراحة، التأقلم الحيوانات لأي نظام غذائي ماكاو بوست، على سبيل المثال، وضع جل الإماهة وجل الغذاء والنظام الغذائي العادي غارقة الرطب الكريات مباشرة على أرضية القفص.
- تغيير الفراش القفص إلى الفراش بعد العمليات الجراحية، مثل رقائق الورق الأبيض.
- تعقيم كل الأدوات الجراحية قبل البدء في إعداد العمليات الجراحية أو الإجراءات.
- القيام بذلك بالتعقيم الأدوات (مع حد أدنى من 121 درجة مئوية، 15 رطل/بوصة مربعة، لمدة 15 دقيقة) أو من خلال استخدام أكسيد الإيثيلين (اتباع إرشادات الشركة المصنعة الصحيح، عن ح 8 – 10).
- تطهير جميع الأسطح قبل إعداد الإجراء. تغطية جميع الأسطح مع الستائر الجراحية المعقمة أو إحباط يعقم للبنود التي تتطلب معالجة أثناء الجراحة. استخدام تقنية معقمة لمدة الإجراء.
ملاحظة: يمكن استخدام رقائق يعقم لتغطية الأدوات أو المعدات التي تحتاج إليها المقرر عقدها أثناء الجراحة. استخدام قفازات معقمة والتقنيات، يمكن تطبيقها إحباط، وثم، يمكن وضع العنصر في حقل العقيمة. وفي أعقاب ذلك، سوف يلزم تغيير قفازات معقمة.
2. جراحة انسداد الشريان الدماغي الأوسط
- استخدام الكبار ذكور الفئران C57BL/6 وزنها ز 24 – 31 في وقت الجراحة. حمل التخدير استخدام isoflurane 5% في الدقيقة 2 ل س2، في دائرة أحمر تخدير بلاستيك.
- بعد التعريفي، والحد من إيسوفلوراني للحفاظ على عمق تخدير الكافي لعملية جراحية (مثلاً، 1.5-2% في 70% ن2س230% O2)، ألقي بقناع الوجه جنبا إلى جنب مع نظام الكاسح إلى انخفاض الجراح التعرض إلى إيسوفلوراني.
ملاحظة: يمكن استخدام أكسيد النيتروز (ن2س2) في تركيبة مع الأكسجين (O2) لتخفيض المبلغ المطلوب من إيسوفلوراني عمق تخدير الكافي. - إدارة التسكين الجهازية بريوبيراتيفيلي [والايبوبروفين, 10 مغ/كغ تحت الجلد (المحكمة العليا.)] والتخدير الموضعي للشق في الموقع (bupivacaine، المحكمة العليا. 2 مغ/كغ، المخفف 01:10 في المحلول الملحي 0.9 في المائة) المحيطة عمليا.
- إدارة السوائل بداخل (ip.) حقن 200 ميليلتر من محلول كلوريد الصوديوم 0.9% بريوارميد العقيمة بريوبيراتيفيلي.
- يحلق الفراء حق منطقة الرقبة البطني باستخدام مقص الشعر الصغيرة لفضح الجلد والمنطقة الزمنية. تطهير منطقة الجلد الجراحي، استخدام محلول الكلورهيكسيدين 5% من الحد الأدنى 3 تطبيق مواد التشحيم العين على كلتا العينين، لمنعها من الجفاف أثناء الجراحة.
ملاحظة: إذا لزم الأمر لنبض oximetry قراءات لرصد الدم تشبع الأكسجين ومعدل ضربات القلب ومعدل التنفس، استخدام كريم لإزالة الشعر لمسح الساق الخلفية من الشعر. تطبيق كريم استخدام القطن النظيفة البراعم، وبعد إزالة الشعر، أغسل المنطقة بمحلول الكلورهيكسيدين مخفف. تنفيذ هذه الخطوة في منطقة قبل العملية التقليل من مخاطر الفراء فضفاضة تلويث الحقل الجراحية المعقمة. الباحثين قد تفضل استخدام مستحضرات أخرى موقع الجراحية وفقا للممارسة المحلية. - نقل الماوس إلى منطقة العمليات الجراحية ووضعه في موقف المعرضة على حصيرة حرارة هوميوثيرميك مشمولة ثني عقيمة. المحافظة على التخدير عن طريق الآنف مخروط. إدراج تحقيق المستقيم لرصد درجة حرارة الجسم للماوس والحفاظ عليه في 37.0 ± 0.6 درجة مئوية.
- قبل أي شقوق جراحية، تحقق منعكس سحب هند مخلب والوميض المنعكس لتأكيد عمق التخدير.
- إرفاق مجس ليزر دوبلر flowmetry (LDF) لتسجيل تدفق الدم إلى إقليم MCA.
- استخدام ستيريوسكوبي تشريح، جعل شق < 1 سم في نقطة الوسط بين العين اليمنى والإذن على الجلد الزمانية المكشوفة باستخدام مشرط رقم 15. صراحة تشريح الأنسجة الكامنة تغطي الجمجمة ولطف إلغاء هذا بعيداً عن العظم وتجفيف السطح مع مسحات القطن المعقمة.
ملاحظة: يجب الحرص لا للتلف في العضلات تيمبوراليس. - اتخاذ إجراء من 0.7 مم، مرنة مسبار الألياف واحد يعلق على رصد LDF، قص نهايتها باستخدام مشرط حاد للحصول على حافة مسطحة ودفع هذا عن طريق حامل مسبار على شكل دونات، ووضع كمية صغيرة من هلام مطابقة البصرية في نهاية الألياف.
- ضع كمية صغيرة من الغراء فائقة لاصقة مقاومة للماء حول الحافة السفلية لصاحب التحقيق؛ يسمح هذا لتجف جزئيا وأصبح مبتذل.
- الجاف للجمجمة أعلاه العظم الصدغي ووضع كمية صغيرة من مادة لاصقة الأنسجة الموضعية في حلقة مفرغة للعظام، ويكفي لصاحب التحقيق.
- مكان صاحب التحقيق، مع التحقيق الألياف البصرية الموجودة بالفعل، في هذا المجال (الجانبي 6 مم والبعيدة من بريجما 2 مم).
- إتاحة الوقت للغراء الجافة؛ بمجرد جفاف والمرفقة، يبدأ تسجيل البيانات LDF.
- استخدام ستيريوسكوبي تشريح، جعل شق < 1 سم في نقطة الوسط بين العين اليمنى والإذن على الجلد الزمانية المكشوفة باستخدام مشرط رقم 15. صراحة تشريح الأنسجة الكامنة تغطي الجمجمة ولطف إلغاء هذا بعيداً عن العظم وتجفيف السطح مع مسحات القطن المعقمة.
- بلطف تسليم الحيوان في موقف ضعيف، مع الحرص على دعم التحقيق دوبلر الليزر ومنع به مفرزة. الشريط بلطف فوريباوس اثنين أسفل مع الشريط الطبي microporous، انزلاق زوج من القطن البراعم (أو شيئا من هذا القبيل، مثل الملقط مغلقة) تحت الرقبة لرفع المنطقة وخلق التوتر. تغطية الماوس مع ثني عقيمة للحفاظ على التغطية العقيم.
- يبدأ بالتشريح والتعرض للتقييم القطري المشترك.
- جعل شق خط الوسط 1.5 سم في الرقبة البطني المكشوفة باستخدام شفرة المبضع 15 رقم.
- باستخدام تقنيات التشريح كليلة لطيف، تتراجع بلطف في الغدد اللعابية للجانبين، وفضح القصبة الهوائية.
- استخدام بلانت التشريح، تشريح خالية من الأنسجة المحيطة وتحفيزه العصب التقييم القطري المشترك.
ملاحظة: تجنب لمس العصب تحفيزه مباشرة، كما يمكن أن يضعف أي ضرر في العصب تحفيزه التنقل، والتغذية، والتنفس.
- تمرير قسمين صغيرة (2 سم) من غير ديسولفابل خياطة 6-0 أدناه التقييم القطري الموحد، الظهرية للسفينة والبطني للعصب تحفيزه. رسم واحد الحرير التعادل أقرب إلى الجراح وربط ذلك بأحكام حول التقييم القطري المشترك (الدانية التعادل). فضفاضة التعادل التعادل الحرير الثاني (التعادل القاصي) نحو التشعب للتحالف التعاوني الدولي/اللجنة الاقتصادية لأفريقيا.
- للبدء في عزل قسم التقييم القطري المشترك، وتطبيق قصاصة microvascular فقط فوق التعادل القاصي ولكن عدم عرقلة في التشعب. باستخدام مقص فانس الصغرى، جعل ثقب صغير في التقييم القطري المشترك.
ملاحظة: اللجنة الاقتصادية لأفريقيا يجب أن تبقى براءات الاختراع في جميع الأوقات. شق التقييم القطري المشترك يجب أن لا يزيد عن 40% العرض للسفينة، وفي موقف البطني يسهل الوصول إليها؛ هذا وسوف تلعب دوراً مهما في مرحلة إصلاح السفينة الوظيفة-ماكاو. - إدراج شعيرات المغلفة بالسيليكون 7-0 في التقييم القطري المشترك، تتقدم نحو مقطع ميكروفاسكولار.
ملاحظة: حجم الشعيرة يجب إنشاء استناداً إلى وزن الماوس قبل الجراحة؛ راجع إرشادات الشركة المصنعة.- تشديد التعادل القاصي، ما يكفي لربط الشعيرة في مكانها دون الأضرار بها. قم بإزالة مقطع microvascular استخدام أصحاب القصاصة.
ملاحظة: ينبغي أن ينظر أي فقدان الدم في هذه المرحلة. إذا لم يكن هناك الدفق دم، التعادل عقد خيوط لا ضيق ما يكفي.
- تشديد التعادل القاصي، ما يكفي لربط الشعيرة في مكانها دون الأضرار بها. قم بإزالة مقطع microvascular استخدام أصحاب القصاصة.
- النهوض خيوط في منطقة السيطرة الإسرائيلية.
- ضمان الشعيرة لا تزال داخل منطقة السيطرة الإسرائيلية ولا يمر في الشريان بتيريجوبالاتيني (PPA). القيام بذلك برفع قليلاً وسحب التقييم القطري الموحد، باستخدام واحد من الروابط الحرير، إلى الجانب الخارجي من جسم الحيوان، وتوجيه خيوط لثني السابقة التي تواجهها داخليا فتح PPA.
ملاحظة: مرة واحدة متقدمة لأصل فرع اتحاد الماليزيين الصينيين، انخفاض في تدفق الدم النسبي إلى الأراضي التي تم توفيرها ستكون مرئية على قيم LDF؛ وهذا يؤكد تنسيب الشعيرة.
- ضمان الشعيرة لا تزال داخل منطقة السيطرة الإسرائيلية ولا يمر في الشريان بتيريجوبالاتيني (PPA). القيام بذلك برفع قليلاً وسحب التقييم القطري الموحد، باستخدام واحد من الروابط الحرير، إلى الجانب الخارجي من جسم الحيوان، وتوجيه خيوط لثني السابقة التي تواجهها داخليا فتح PPA.
- تأمين الشعيرة في مكان مع التعادل الحرير البعيدة، وربط هذا أكثر تشدداً. تترك في مكان لمدة انسداد الفترة الزمنية.
ملاحظة: تعتمد على البروتوكولات الفردية، يمكن نقل الحيوان إلى قفص انتعاش، ويلي الجرح خياطة، لاسترداد، أو تبقى تحت التخدير لمدة فترة الانسداد. وفي الحالة الأخيرة، ضمان منع الجرح من الجفاف باستخدام عقيمة المالحة كلوريد الصوديوم 0.9% بريوارميد.
3-بعد انسداد
- في نهاية فترة ماكاو، تتراجع فورا الخيط حتى يصبح الرأس خيوط بيضاء مرئية بوضوح.
- ثم ترخي التقييم القطري المشترك القاصي التعادل يكفي لإزالة الشعيرة الرأس أكثر من طريقة للخروج من السفينة.
ملاحظة: الشعيرة يمكن تماما إزالة عند هذه النقطة إذا كان الجراح على ثقة بسرعة إلى التعادل التعادل القاصي لمنع فقدان الدم. - ضع مقطع ميكروفاسكولار واحد في وضع أفقي نحو التشعب التقييم القطري المشترك إلى جانب التعادل القاصي. تخفيف التعادل القاصي وإزالة الشعيرة تماما. إضافة قصاصة microvascular آخر أدناه الدانية التعادل التقييم القطري المشترك تجاه الجراح.
ملاحظة: تأكد من السفينة قدر كاف إلى شوكات المشبك لمنع أي انزلاق. وضع القصاصات من الضروري ضمان مزيلات قصاصة الوصول السهل أثناء الخطوات اللاحقة. يمكن استخدام القصاصات لانتشال السفينة للسماح بإزالة الألغام ووضع التصحيح الأنسجة، وضع القصاصات أفقياً عبر العضلات المحيطة بها أفضل. - بعناية إزالة كل العلاقات الحرير باستخدام الملقط دومون #5 أو مايكرو Vannas مقص والجاف للمنطقة باستخدام براعم القطن المعقمة.
ملاحظة: يجب الحرص لا قطع من خلال إلى السفينة. - في طبق بتري معقم، إضافة الفيبرينوجين وثرومبين تسرب حلول 1 و 2 (انظر الجدول للمواد)، ضمان هاتين المادتين البقاء منفصلة، جاهز للخلط في وقت لاحق.
ملاحظة: أحجام صغيرة جداً فقط من العوامل المطلوبة (< 0.25 مل كل). حفظ الحلول منفصلة يمنع رد فعل سابق لأوانه بين مكونات اثنين. ضمان الحد الأقصى هو الاستعاضة عنها بنفس الطريقة كما تمت إزالته لمنع التلوث عبر الحقن اثنين، مما سيسبب الوكيل للرد وتعيين حدود المحاقن. قبل استخدام وتخزين الحلول عند-20 درجة مئوية. عند الحاجة للجراحة الأولى، ذوبان الجليد التسرب إلى درجة حرارة الغرفة. عدم إعادة تجميد التسرب؛ فإنه يجب أن يبقى في درجة حرارة الغرفة ويمكن تخزينها بهذه الطريقة. يمكن استخدام المحاقن عبر عملية جراحية متعددة جعلها فعالة من حيث التكلفة؛ مع ذلك، نوصي بعدم استخدام القنينة نفسها لمدة أطول من أسبوع واحد لمنع التلوث. - استخدام تشريح حادة على طول العضلات مع الملقط دومون لا 5 والصغرى Vannas مقص للحصول على شريحة البطني رقيقة من العضلات الترقوية لاستخدام لوحة الأنسجة، ضمان الشريحة لا تزيد عن 1 مم ويمتد على طول الألياف أعلى من العضلات.
ملاحظة: لا تقطع عن طريق عبر العضلات، كهذا سيضعف إلى حد كبير وظيفته. الأنسجة يجب أن تكون كبيرة بما يكفي لتغطية شق التقييم القطري المشترك بشكل مريح. - استخدام الملقط دومون #5، تتخذ من لوحة النسيج وخلط الأنسجة بالتساوي عبر اثنين الفيبرينوجين وثرومبين الحلول للتسرب، وتشكيل قناة بين الكواشف اثنين. وسوف يحدث التخثر بسرعة؛ بمجرد أن يبدأ تخثر الدم، إزالة لوحة المفاتيح الأنسجة إلى شق التقييم القطري المشترك. ضع لوحة الأنسجة في شقة أسفل مع متوسط الضغط الثابت والملقط مفتوحة.
- سرعة إزالة مقطع microvascular القاصي حين لا يزال عقد لوحة المفاتيح الأنسجة بلطف في مكان.
ملاحظة: يسمح هذا الدفق بعض الدم إلى زيادة تنشيط الكواشف تسرب الفيبرينوجين وثرومبين. مطلوب فقط ما يكفي من الضغط لعقد لوحة المفاتيح في مكانها ولكن ليس إلى كتلة السفينة تماما. - تخفيف الضغط من لوحة المفاتيح الأنسجة، مما يسمح بتدفق تحت منطقة شق الدم ببطء. الآن، ببطء ولطف الإفراج عن الضغط من قصاصة microvascular الدانية وإزالتها تماما.
- ملاحظة: بغية ضمان السفينة يصبح البراءة تماما، وضع لوحة المفاتيح الأنسجة وإزالة القصاصات microvascular يجب أن يحدث بسرعة لمنع pad الأنسجة من ختم إلى الداخل من التقييم القطري المشترك. ومع ذلك، إذا لم يكن هناك كمية صغيرة من تسرب الدم، إعادة وضع بعض الضغط الخفيف على لوحة الأنسجة إتاحة المزيد من الوقت لتشكيل جلطة والختم بحيث تحدث. إذا تسرب الدم كبيرة أو لوحة الأنسجة لا يبدو أن يكون الختم، مواصلة الضغط لمنع فقدان الدم ويحل محل كل مقاطع microvascular التقييم القطري المشترك لعزل الشق ومنع المزيد من الخسائر في الدم.
- سرعة إزالة مقطع microvascular القاصي حين لا يزال عقد لوحة المفاتيح الأنسجة بلطف في مكان.
- وفي حالة عدم ختم pad الأنسجة للسفينة، يمكن إجراء محاولة ثانية، في أعقاب الخطوات 3.3-3.7.3.
- مرة واحدة هو مختومة السفينة، وخياطة الجرح باستخدام خيوط ديسولفابل 6-0. إذا كان تسجيل LDF استمر طوال عملية جراحية، إزالة LDF من الجمجمة وخياطة الجرح باستخدام ديسولفابل خياطة 6-0.
4-بعد العمليات الجراحية الرعاية
- ضع الحيوان في قفص انتعاش بريوارميد (الواقعة في الجرف ساخنة/حصيرة عند 35 درجة مئوية، أو داخل غرفة دافئة).
ملاحظة: قد تفضل الباحثين استخدام درجات حرارة والمدد الزمنية وفقا للممارسة المحلية الأخرى. - توفير جميع الحيوانات مع 200 ميليلتر من بريوارميد 0.9% كلوريد الصوديوم المالحة والمحكمة العليا. فورا بعد انتهاء العملية، في ح 4 بعد انتهاء العملية، و 2 x يوميا ح 72.
ملاحظة: إدارة بريوارميد 0.9% كلوريد الصوديوم هو الحيوان أدى. إذا كان أكثر من المطلوب، يمكن إدارة سوائل أكثر لضمان انتعاش جيدة. - في القفص الانتعاش، إعطاء الحيوانات الوصول غير المقيد للحمية مندي الكريات والكريات حمية جافة وجل الإماهة والغذاء جل، جنبا إلى جنب مع إعلانية libitum الوصول إلى المياه.
- تكرار الحقن والايبوبروفين والمحكمة العليا. في 24 ساعة بعد انتهاء العملية (راجع الخطوة 2، 3).
ملاحظة: جميع الحيوانات تلقي نفس جرعة والايبوبروفين؛ أي أثر محصن من المرجح أن تكون ضئيلة. - على فترات منتظمة ح 48، أداء كشر الماوس البروتوكول الاختياري بعد تسجيله17 لتقييم مستويات الألم المعونة أن قرار مواصلة إدارة التسكين.
- وزن الحيوانات قبل الجراحة ويوميا ثم بعد الإجراء مباشرة. تنفيذ الملاحظات اليومية وأوراق الرعاية الكاملة لرصد الأغذية وكمية المياه وعلامات سريرية.
- إجراء الملاحظات الفنية في ح 24 و 48 ساعة بعد العملية. تقييم الفئران على نطاق عجز في تنسيق. تقييم هيئة التماثل، والدوران الإلزامي، مشيه، الشبكة 45° التسلق، والدوران حول السلوك واطرافهم الجبهة عدم التماثل، والخط الطولي اللمس استجابة18،،من1920.
5-التصوير بالرنين المغناطيسي، ومعالجة الصور
- قياس حجم الآفة (LV) استخدام الهيكلية التصوير بالرنين المغناطيسي (التصوير بالرنين المغناطيسي).
ملاحظة: الأساليب البديلة، مثل تلطيخ نسيجية مع كلوريد تريفينيلتيترازوليوم (TTC)، وقد استخدمت سابقا وربط بيانات التصوير بالرنين المغناطيسي الهيكلية. ومع ذلك، يمكن استخدام هذا الأسلوب فقط عند نقطة النهاية لدراسة وليس طوليا. استخدام طولية فحص التصوير بالرنين المغناطيسي سوف يقلل من عدد الحيوانات اللازمة لدراسة.- بعد 48 ساعة، عقب تنصيب ماكاو، تخدير الماوس مع إيسوفلوراني (إيسوفلوراني 5% في 1 لتر في الدقيقة س2 لتحريض)، إيسوفلوراني 1.5-2% للصيانة.
- نقل الماوس إلى مهد التصوير بالرنين المغناطيسي ووضعه على استشعار التنفس لرصد معدل التنفس، وزرع مجس درجة حرارة المستقيم لرصد درجة الحرارة أثناء المسح الضوئي. تلقي مكان RF 2-قناة الماوس والدماغ لفائف عبر الدماغ لإشارة ومكان المهد في 9.4 T الأفقي يحمل الماسح الضوئي.
ملاحظة: استخدمت لفائف حجم يبلغ قطرها داخلي مم 72 هنا، لانتقال الترددات اللاسلكية. - الحصول على فحص T2 المرجحة باستخدام تسلسل صدى تدور بسرعة. تعيين وقت التكرار (TR) 3,000 ms والوقت صدى (TE) إلى السيدة 40 استخدام 18 ملم × 18 ملم كمجال الرؤية (FOV)، والحصول على مصفوفة اقتناء 256 × 256 مع شرائح من 18 ملم × 0.8 ملم وثلاثة إشارة المتوسطات في حوالي 10 دقيقة.
- الحصول على صور موتر نشرها (وزارة التجارة والصناعة) باستخدام تسلسل صدى تدور بسرعة. تعيين TR إلى 1,730 ms، الشركة المصرية للاتصالات إلى 35 مرض التصلب العصبي المتعدد، فوف إلى 20 ملم × 20 ملم، والحصول على مصفوفة اقتناء 128 × 128 مع شرائح من إشارة المتوسطات 16 مم × 1 مم، اثنين، 14 نشر توجيهات الترميز، و الحد أقصى ب-القيمة 1,024 s/مم2.
- قياس الوقف على الصور T2 المرجحة عرض صور باستخدام وقياس مجموعة من البرامج. قياس المنطقة ليسيونيد، جمع القيم معا لحساب حجم الآفة المجموع مع الأخذ في الاعتبار سمك شريحة التصوير بالرنين المغناطيسي (تعيين أثناء التصوير بالرنين المغناطيسي).
- تأخذ في الاعتبار أي تورم والنسبة المئوية لحجم الآفة المنطقة أثناء قياس في نصفي الكرة الأرضية contralateral وعن الكامل. الصحيح للدماغ أي تورم بسبب استخدام أسلوب غير مباشر لقياس حجم الآفة ذمة الموصوفة سابقا21،22. وتشمل فقط الشرائح التي تحتوي على أنسجة اللحاء ولا فص جبهي أو أنسجة المخيخ وفقا أطلس الدماغ ماوس قياسية لتجنب أوفيركوريكتيون.
- قياس بارامترات انتشار الآفة والحصول على مناطق المصالح الأساسية وغبش.
- إنشاء معامل انتشار الظاهرة (ADC) وخرائط تباين كسرية (اتحاد كرة القدم) من موتر نشر الصور باستخدام البرامج الحاسوبية المناسبة في تحليل التصوير بالرنين المغناطيسي.
- محاذاة الصور وزارة التجارة والصناعة مع الصور T2 المرجحة باستخدام برمجيات تحليل الصورة المناسبة قادرة على أداء تسجيل خطي للصور. وبعد التسجيل، طرح أقنعة المرجحة انتشار الآفة (الدماغية الأساسية) من الأقنعة الآفة T2 المرجحة (الدماغية الأساسية وغبش) لتقدير المنطقة غبش. تطبيق أقنعة الناتجة (الأساسية وغبش) إلى خرائط ADC واتحاد كرة القدم لتحديد المعلمات نشرها داخل غبش وجوهر.
- ترجمة الأساسية عن وأقنعة غبش حول خط الوسط الدماغ بغية الحصول على قيم ADC واتحاد كرة القدم كونترالاتيرال للمقارنة.
Representative Results
ما مجموعة 24 الفئران C57BL/6 الذكور البالغين، وزنها بين 24 – 31 ز في وقت الجراحة، واستخدمت في هذه الدراسة. مات الحيوان واحد عقب انسداد الشريان الدماغي الأوسط (ماكاو) وتم استبعاد أحد بسبب المضاعفات الجراحية. البيانات المعروضة هنا مأخوذة من عمل سبق نشرها قبل المؤلفين. واستخدمت هذه لتوضيح أثر إصلاح السفن في ماكاو نتائج11. يتم التعبير عن كافة البيانات كمنتدى المجالس الرومانسية يعني ± الانحراف المعياري. تم تقييم البيانات إحصائيا للحالة الطبيعية باستخدام اختبار بيرسون داغوستينو الجامع الحياة الطبيعية. تمت مقارنة المعطيات حدودي استخدام الطالب t-ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار صداق (وسائل متعددة) واختبار (للوسائل اثنين). تمت مقارنة المعطيات عدم حدودي باستخدام اختبار مان-ويتني U. تباين البيانات حدودي تم تقييم استخدام F-اختبار، وتقلب البيانات غير حدودي تم تقييم استخدام الاختبار في ليفينى.
عادة، في إجراءات ماكاو، خيوط أوككلودينج يتم إدراجها في التقييم القطري المشترك، وهي متصلة اللجنة الاقتصادية لأفريقيا لمنع هذه الشعيرة من المارة في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا بدلاً من منطقة السيطرة الإسرائيلية. تجنب ربط اللجنة الاقتصادية لأفريقيا، وإضافة التسكين وأظهرت اتجاها نحو انخفاض الوزن في ح 48 وظيفة-ماكاو، بالمقارنة مع بيانات من دراسات سابقة أجراها الجراح نفسه لنفس الوقت ماكاو باستخدام ربط اللجنة الاقتصادية لأفريقيا مع لا التسكين، بينما الوقف تبدو غير متأثرة، انظر الشكل 1.
وخضع الفئران الاسكيمية الناجمين عن ماكاو 60 دقيقة تليها ضخه مع إصلاح السفينة التقييم القطري المشترك أو ربط نموذجي لنهج التقييم القطري المشترك. ويرد في الشكل 2تخطيطي الواصلة وأونليجاتيد تم إصلاحه التقييم القطري المشترك.
واستخدمت ليزر دوبلر flowmetry للتأكد من الدم تدفق التروية في الإقليم اتحاد الماليزيين الصينيين في ماكاو، قبل وبعد إصلاح السفينة التقييم القطري المشترك. يوضح الشكل 3 أن 5 دقائق بعد إزالة خيوط، تدفق الدم الدماغي الإقليمية (rCBF) زيادة كبيرة في منطقة الدماغ لهيئة مكافحة الاحتكارات. وأبقى التروية حتى إصلاح السفن، مع زيادة في التروية للإقليم MCA سيظهر بعد إصلاح السفينة التقييم القطري المشترك، مما يوحي بأن إصلاح التقييم القطري المشترك يسمح نضح دم المتزايد إلى الإقليم الدماغية مقارنة بالاعتماد على "دائرة ويليس" وحدها.
التصوير بالرنين المغناطيسي T2 مرجح استخدمت لتحديد الوقف التام، واستخدمت وزارة التجارة والصناعة بمسح لتحديد جوهر LV، ح 48 بعد ماكاو. الشكل 4A يظهر لا اختلاف كبير في LV الإجمالي أو الأساسية بين إصلاح ومجموعات الإجراء الواصلة. بيد مجموع تباين البيانات على حد سواء وكور LV، وفقا لتقييم استخدام الاختبار في بندوري لغير حدودي أو واو-اختبار لبيانات حدودي، انخفضت انخفاضا كبيرا داخل مجموعة إصلاح التقييم القطري المشترك. LV مجموع تم تقسيمها إلى LV القشرية وسوبكورتيكال، كما هو مبين في الشكل 4 باء. الجزء القشرية كان المتغير أقل بكثير في المجموعة إصلاح التقييم القطري المشترك، بينما الجزء الفرعي القشرية الآفة لم تتأثر بين المجموعتين الإجرائية.
إجراء تحليل طاقة أشارت إلى أن الحيوانات أقل كل مجموعة العلاج المطلوب لإثبات تخفيض 30% في الوقف بعد ماكاو باستخدام التقييم القطري المشترك إصلاح مقابل الإجراء النموذجي متصلة التقييم القطري الموحد، انظر الجدول 1. افتراض أن السلطة 1-β = 0.8 ومستوى الأهمية α = 0.05 وتنبؤ تخفيض 30% في الوقف بين عنصر التحكم الافتراضية واختبار واستخدمت مجموعات لتحليل السلطة. وعلاوة على ذلك، كان يفترض فرق متساوية بين الجماعات. ويبين الجدول 1 عدد الحيوانات اللازمة للاختبار ومجموعات التحكم عند أما نموذجي متصلة التقييم القطري المشترك هو استخدام الأسلوب أو أسلوب إصلاح تحديث التقييم القطري الموحد، كما هو موضح هنا، يستخدم. علما بأن مجموعة الاختبار يشير إلى مجموعة معالجة افتراضية من الحيوانات والسيطرة على المجموعة يشير إلى مجموعة عناصر تحكم افتراضية؛ كلا الفريقين سيخضع لمكاو.
رقم 1: الجمع بين العلاج التسكين وإغفال ربط اللجنة الاقتصادية لأفريقيا على النتائج التالية ماكاو. (أ) انخفض وزن الجسم، سيظهر كنسبة مئوية من الوزن ما قبل-ماكاو، د 2 الأولى عقب ماكاو لكلا الفريقين. مجموعة أونليجاتيد من اللجنة الاقتصادية لأفريقيا (التسكين-تعامل مع لا ربط اللجنة الاقتصادية لأفريقيا في ماكاو) أظهرت اتجاها نحو انخفاض الوزن في اليوم الثاني في ماكاو. (ب) هذا الفريق يظهر حجم الآفة (مم3) تقاس بمعيار تريفينيلتيترازوليوم كلوريد (عقاري) تلطيخ 48 ساعة بعد ماكاو. البيانات المعروضة هي ± متوسط الانحراف المعياري. اللجنة الاقتصادية لأفريقيا متصلة: n = 17، اللجنة الاقتصادية لأفريقيا أونليجاتيد: n = 10. وقد تم تعديل هذا الرقم من لوكاس تروتمان et al. 11- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: التخطيطي تبين طريقة التقييم القطري المشترك القياسية، والتقييم القطري المشترك البديلة إصلاح أسلوب عقب ماكاو. (أ) يصور هذا التخطيطي قطري الواصلة بشكل دائم باستخدام خيوط غير ديسولفابل تطبيقها على أي من جانبي شق التقييم القطري المشترك، أسفر عن ربط دائم حق التقييم القطري المشترك. (ب) هذا التخطيطي يصور أسلوب التقييم القطري المشترك إصلاح بديلة. وسادة صغيرة من أنسجة المطلي مع الفيبرينوجين وتسرب ثرومبين يستخدم لتغطية شق التقييم القطري الموحد، ختم للسماح نضح كامل الحق في التقييم القطري المشترك. وقد تم تعديل هذا الرقم من لوكاس تروتمان et al. 11- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: معلمات التدفق (rCBF) الدم الدماغي الإقليمية عقب ماكاو. RCBF تغيير مدة 5 دقائق بعد إزالة خيوط ماكاو لكلا متصلة التقييم القطري المشترك، والتقييم القطري المشترك--إصلاح المجموعات (وظيفة-ماكاو)، بالنسبة إلى ركبف قياس خلال ماكاو. هذا الفريق يظهر البيانات rCBF فورا قبل إصلاح السفينة التقييم القطري المشترك (قبل الإصلاح) و 5 دقائق بعد إصلاح التقييم القطري المشترك (بعد إصلاح). تظهر زيادات كبيرة في ركبف 5 دقائق بعد إزالة خيوط (وظيفة-ماكاو) في كلتا المجموعتين. ويرد زيادة إضافية في ركبف بعد إصلاح التقييم القطري المشترك (بعد إصلاح) في مجموعة إصلاح التقييم القطري المشترك. لا يوجد فرق في ركبف يرد بين وظيفة دقيقة 5-ماكاو وقبل الإصلاح. البيانات المعروضة هي مكثف من تحليل الوقت-الدورة التدريبية في إبلاغ البيانات من النقاط الزمنية الرئيسية، هنا كالانحراف المعياري ± يعني. التقييم القطري المشترك متصلة: n = 10، التقييم القطري المشترك إصلاحه: n = 10؛ ف < 0.01، * * *ف < 0.001، ns: غير هامة. وقد تم تعديل هذا الرقم من لوكاس تروتمان et al. 11- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: تحليل لحجم الآفة التي تم الحصول عليها باستخدام تقنيات التصوير بالرنين المغناطيسي- (أ) يظهر هذا الفريق حجم الآفة (LV؛ مم3) في 48 ساعة عقب ماكاو والوقف التام مأخوذة من صور الرنين المغناطيسي T2 المرجحة (مجموع LV) والوقف الأساسية المتخذة من وزارة التجارة والصناعة بمسح وتحليل (LV الأساسية). تظهر الصور التمثيلية حجم الآفة المجموع من صورة شريحة تفحص T2 مع وزارة التجارة والصناعة الأساسية الآفة حجم قناع تطبيقها. تباين داخل المجموعات انخفضت انخفاضا كبيرا لكلا الوقف التام (ف = 0.015، إصلاح التقييم القطري المشترك: n = 10، التقييم القطري المشترك متصلة: n = 10، واختبار) ولب LV (ف = 0.043، إصلاح التقييم القطري المشترك: n = 9، التقييم القطري المشترك متصلة: ن = 6, الاختبار بندوري)، تقييم استخدام F-اختبار لبيانات حدودي أو اختبار ليفينى للحصول على بيانات غير حدودي. (ب) يظهر هذا الفريق الوقف في 48 ساعة عقب ماكاو، أخذت من صور الرنين المغناطيسي T2 المرجحة وتقسيمها إلى مناطق الآفة القشرية وسوبكورتيكال. إصلاح التقييمات القطرية المشتركة انخفاض كبير في تباين البيانات (P = 0.03، واختبار) في الجزء القشرية من الآفة، ولكن لا يؤثر على البيانات تبين تقلب في الجزء سوبكورتيكال من الآفة. إصلاح التقييم القطري المشترك: n = 10، التقييم القطري المشترك متصلة: n = 10. البيانات المعروضة هي ± متوسط الانحراف المعياري. # ف < 0.05 (F-اختبار)، سف < 0.05 (الاختبار بندوري). وقد تم تعديل هذا الرقم من لوكاس تروتمان et al. 11- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| النهج | حجم الآفة (LV؛ مم3يعني ± التنمية المستدامة) |
الطاقة | مستوى الأهمية | الفرق أنتيسيابتيد | حجم المجموعة المطلوبة |
| التقييم القطري المشترك متصلة (النهج التقليدي) | 94.08 ± 53.79 | 0.8 | 0.05 | 30% | n = 58 |
| إصلاح التقييم القطري المشترك (النهج الجديد) | 51.73 ± 22.78 | 0.8 | 0.05 | 30% | n = 35 |
الجدول 1: تحليل السلطة التمثيلية مقارنة التقليدية ربط التقييم القطري المشترك مع البديل القطري إصلاح أسلوب أوضح هنا. يظهر هذا الجدول السلطة تحليل أجرى لحساب حجم المجموعة المتوقعة المطلوبة للكشف عن فارق كبير في الوقف بين مجموعة مراقبة والنهج التقليدية أو البديلة (الجديدة)، ومجموعة اختبار (توقع). يظهر الجدول المجموعة أحجام كالمطلوبة إذا كان يفترض قوة 0.8 ويتم تطبيق مستوى الأهمية 0.05 وإذا مجموعة اختبار توقع يبين فرق 30% في خامس وخمسون مقارنة بمجموعة التحكم. ويبين الجدول النتائج لكلا النهجين ماكاو (متصلة التقييم القطري المشترك وفي التقييم القطري المشترك--إصلاح) لتحديد ما إذا كان هناك اختلاف في عدد الحيوانات اللازمة للحصول على فارق 30% في العائلة لكلتا الطريقتين، يفترض تساوي فرق بين الاختبار والسيطرة على المجموعة. وقد تم تعديل هذا الرقم من لوكاس تروتمان et al. 11.
Discussion
التعريفي خيوط من ماكاو عابر في القوارض الأكثر استخداماً نموذج تجريبي السكتة الدماغية، وأنها تتيح ضخه إلى المنطقة المتضررة، محاكاة وقوع الأحداث عقب السكتة الدماغية السريرية7. ذكرت هنا نهج جراحية بديلة للطريقة التقليدية في ماكاو عابر المستحثة بخيوط في الفئران. ويؤدي النهج البديلة، التي تنطوي على معاملة التسكين وتجنب ربط اللجنة الاقتصادية لأفريقيا، وإصلاح شق التقييم القطري المشترك، انخفاض تقلب LV عند تقييم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي و أساليب نسيجية المصبوغة11.
النهج التقليدي للحث على ماكاو إلى حد كبير الاعتماد ترانسيكشن، أو ربط أقل، للجنة الاقتصادية لأفريقيا، التي تبين، بالنسبة للفئران، تؤثر على سلوك الشرب وزيادة في الوزن الجسم عقب ماكاو14. البروتوكول المحدد هنا، في الفئران، مع تجنب ربط اللجنة الاقتصادية لأفريقيا والتسكين علاوة على ذلك، اقترح تخفيض الوزن الجسم بعد مكاو مع أي تأثير على حجم الآفة. تجنب استخدام التسكين، أو على الأقل لم يبلغ، في معظم الدراسات التجريبية السكتة الدماغية، نتيجة للتأثيرات التباس ممكن على نتائج تجريبية. ومع ذلك، تجنب التسكين تماما غير مبررة دائماً وهناك حاجة لتحقيق التوازن بين احتياجات رعاية الحيوانات مع تحقيق الأهداف العلمية.
الاختلافات في حجم الحيوان والسلالة والتشريح المخية، بالإضافة إلى الاختلافات حجم ونوع الشعيرة، كل ما يقترح للتأثير على نتائج السكتة الدماغية23،24. ويتجنب النهج البديلة الموصوفة هنا الاعتماد على البقرة أثناء ضخه، مما يقلل، على الأقل في جزء منه، تقلب بين الحيوانات في حجم الآفة. تشريح البقر اختلافاً كبيرا في الفئران، وبخاصة في C57BL/6 سلالة، التي غالباً ما تستخدم في الدراسات التجريبية السكتة الدماغية. 90% فئران C57BL/6 يكون البقر ناقصة بسبب متنوعة الخلفي اتصال شريان (بكوما) سالكيه، التي قد يكون لها تأثير على حجم الأضرار الدماغية سبب نضح عدم كفاية الهياكل خارج الإقليم MCA13، 25-إصلاح التقييم القطري المشترك في الفئران، كما هو موضح هنا، تدفق النتائج في إعادة إنشاء الدم عن طريق التقييم القطري المشترك إلى منطقة الدماغية، كما سبق ذكره في الفئران15. إظهار البيانات الممثلة هنا أن إصلاح التقييم القطري المشترك يزيد ضخه، على الرغم من أن تدفق الدم في التقييم القطري الموحد قد لا تقاس مباشرة. ومع ذلك، من الممكن للجراح لتصور ريبيرفوسي التقييم القطري المشترك مع الدم بعد إصلاح السفن، كما أنه يعود إلى دولة النبض وكامل على طول الجذع، الدانية والبعيدة إلى موقع إصلاح. يمكن استخدام هذا التأكيد البصرية، جنبا إلى جنب مع الليزر دوبلر flowmetry قراءات المنطقة الدماغية، لتأكيد نجاح إصلاح السفينة. الوقت بين تطبيق لوحة الأنسجة وإزالة مقطع السفينة من التقييم القطري المشترك يمكن أن يكون لها تأثير على سالكيه الناتجة عن التقييم القطري الموحد، كخفض الوقت بين تطبيق لوحة الأنسجة وإزالة مقطع سيمنع pad الأنسجة من التمسك س الجانب بسيط للتقييم القطري المشترك. إجراء بديل ماكاو أوضح هنا على الرغم من أن تحديا من الناحية التقنية، لا تتطلب أي مهارات إضافية من تلك المطلوبة لأداء التعريفي الجراحية من ماكاو في الفئران.
الدراسات التجريبية السكتة الدماغية المرتبطة تقليديا تقلب عالية في مقاييس النتائج، قد تميل إلى أن تكون أضعفت. المتطلبات الأخلاقية والرعاية في تركيبة مع الشواغل الاقتصادية والعملية قد تسهم الدراسات التي أضعفت. الحد من التفاوت في النتائج، والتالي، تنتج نتائج الآفة أكثر اتساقا عبر مجموعة تجريبية، يمكن إجراء حسابات الطاقة أكثر فعالية مع الهدف النهائي للدراسات ويجري مدعوم على نحو ملائم.
وفي الختام، هذا الإجراء إصلاح التقييم القطري المشترك البديلة، في الفئران، ينتج أقل تقلب في حجم الآفة بعد السكتة الدماغية التجريبية وتمكن أصغر من المجموعات التجريبية لتكون مطلوبة لاختبار تأثير معاملة عند الاقتضاء السلطة العمليات الحسابية وتستخدم.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
تم تمويل هذا العمل من "المركز الوطني" للاستبدال، وصقل والحد من الحيوانات في البحوث (NC3Rs؛ NC/M000117/1 للفريق الاستشاري). يشكر المؤلفون موظفي "شعبة الخدمات الطبية"، جامعة ليستر، على رعايتهم للحيوانات التجريبية وماريا فيسكادوراكي للمشورة الإحصائية لها. نتائج تمثيلية يتم تكييفها مع إذن من الموديلات المرض والآليات11.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.7 mm flexible single fibre optic probe | Moor Instruments, UK | P10d | Use with master probe code: VP10M200ST |
| 7-0 silicone coated monofilament | Doccol, USA | 701956PKRe | Item dependent on animal size and weight - use manufacteurer guidelines. Product code here was used for representative results shown in article. |
| 9.4T Preclinical MRI system | Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA | MY11520101 | Equipped with gradient and RF coils suitable for mouse brain imaging |
| Animal monitoring and gating equipment | SA Instruments, Stony Brook, New York, USA | 22124005 | MRI compatible temperature and respiration monitoring |
| Bupivacaine | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 512345 | Marcaine |
| C57BL/6 Mice | Charles River, Oxford, UK | B6JSIMA49D | |
| Carprofen | Norbrook Laboratories | 143658 | Carprieve 5% w/v Small animal solution for injection |
| Chlorhexidine 4% hand cleanser solution | VWR International Ltd, Lutterworth, UK | MOLN10008780 | HibiScrub Antimicrobial hand cleanser, Molnlycke Health Care |
| Cotton buds | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 213512 | Any plastic body, cotton bud tip are suitable once made sterile by autoclaving. |
| Dissecting stereoscope | Carl Zeiss | OPMI99 | Resident piece of equipment. Any binocular dissecting stereoscope capable of x1-x5 magnification will be suitable. |
| dissolvable 6-0 sutures | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 9544 | Absorbable Sutures Ethicon Coated Vicryl 6/0 (Ethicon code: W9981) |
| Donut probe holder | Moor Instruments, UK | PHDO | Probe holder for mouse, required to be used with single fibre optic probe when used with laser doppler flowmtry machine. |
| dumont #5 forceps | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 500342 | |
| Fibrinogen and thrombin sealant | Baxter, Berkshire, UK | 1502243 | TISSEEL Ready to use solutions for Sealant 2 mL |
| Gel food | Datesand group, Manchester, UK | 72065022 | Diet Gel Recovery |
| Image display and measuring software package | 3D Slicer | https://www.slicer.org/ | Version 4.0 |
| Image display and measuring software package | NIH, Maryland, USA | https://imagej.nih.gov/ij/index.html | NIH/ImageJ |
| LDF monitor | Moor Instruments, UK | moorVMS-LDF | |
| micro vannas scissors | InterFocus Ltd, Linton, UK | 15000-08 | Other microvannas spring scissors can be used as an alternative, although fine tips are required. |
| Microvascular clip | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 15911 | 10 G Vessel Clip |
| microvascular clip holders | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 14189 | |
| MRI acquisition and analysis software | Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA | VnmrJ Version 4.2 | Revision A |
| no. 15 scalpel | Scientific Laboratory Supplies, Nottingham, UK | INS4678 | Sterile No15 Scalpel - manufactuer number P305. Other suppliers are available. |
| Non-disolvable 6-0 suture | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | W529 | Ethicon Mersilk Sutures |
| Ocular lubricant | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 847288 | Lacrilube (5100G13) |
| Optical matching gel | Moor Instruments, UK | PMG | |
| Pulse Oximetry Reader | Starr Life Sciences Corp., Oakmont, PA, USA | MouseOx | MouseOx - rat & mouse pulse oximeter & physiological monitor Use with mouse thigh sensor. |
| Rehydration gel | Datesand group, Manchester, UK | 70015022 | HydroGel |
| Small hair clippers | vetproductsuk.com | HS61 | Contura Cordless trimmer/clippers |
| Sterile 0.9 % NaCl Solution | VWR International Ltd, Lutterworth, UK |
LOCA3528286 | SODIUM CHLORIDE 0.9% W/V INTRAVENOUS INFUSION BP 500 ML IN ECOFLAC½ PLUS |
| sterile Petri dish | VWR International Ltd, Lutterworth, UK | 5168021 | 50 mm sterile Petri dish. Any brand is suitable. Minimum 50 mm diameter is required. |
| Topical tissue adhesive | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 503763 | GLUture topical Tissue Adhesive |
| Waterproof superglue | Loctite | Loctite Superglue Precision Max | Available at most hardware shops. |
| White paper chip | Datesand group, Manchester, UK | CS1BPB | Pure-O'Cel |
References
- O'Collins, V. E., et al. 1,026 Experimental treatments in acute stroke. Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).
- Sutherland, B. A., et al. Neuroprotection for Ischaemic Stroke: Translation from the Bench to the Bedside. International Journal of Stroke. 7 (5), 407-418 (2012).
- Reeves, M. J., et al. Acute Stroke Care in the US: Results from 4 Pilot Prototypes of the Paul Coverdell National Acute Stroke Registry. Stroke. 36 (6), 1232-1240 (2005).
- Wardlaw, J. M., Murray, V., Berge, E., del Zoppo, G. J. Thrombolysis for acute ischaemic stroke. Cochrane Database of Systematic Reviews. (7), CD000213 (2014).
- Pangalos, M. N., Schechter, L. E., Hurko, O. Drug development for CNS disorders: strategies for balancing risk and reducing attrition. Nature Reviews Drug Discovery. 6 (7), 521-532 (2007).
- Hossmann, K. A. Pathophysiological basis of translational stroke research. Folia Neuropathologica. 47 (3), 213-227 (2009).
- Ringelstein, E. B., et al. Type and extent of hemispheric brain infarctions and clinical outcome in early and delayed middle cerebral artery recanalization. Neurology. 42 (2), 289-289 (1992).
- Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: Size, mechanism, and purpose. NeuroRX. 2 (3), 396-409 (2005).
- Dirnagl, U. Bench to Bedside: The Quest for Quality in Experimental Stroke Research. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 26 (12), 1465-1478 (2006).
- Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O. Method parameters' impact on mortality and variability in mouse stroke experiments: a meta-analysis. Scientific Reports. 6, 21086 (2016).
- Trotman-Lucas, M., Kelly, M. E., Janus, J., Fern, R., Gibson, C. L. An alternative surgical approach reduces variability following filament induction of experimental stroke in mice. Disease Models & Mechanisms. 10 (7), 931-938 (2017).
- Macrae, I. M. Preclinical stroke research - advantages and disadvantages of the most common rodent models of focal ischaemia. British Journal of Pharmacology. 164 (4), 1062-1078 (2011).
- McColl, B. W., Carswell, H. V., McCulloch, J., Horsburgh, K. Extension of cerebral hypoperfusion and ischaemic pathology beyond MCA territory after intraluminal filament occlusion in C57Bl/6J mice. Brain Research. 997 (1), 15-23 (2004).
- Trueman, R. C., et al. A Critical Re-Examination of the Intraluminal Filament MCAO Model: Impact of External Carotid Artery Transection. Translational Stroke Research. 2 (4), 651-661 (2011).
- Dittmar, M. S., et al. The role of ECA transection in the development of masticatory lesions in the MCAO filament model. Experimental Neurology. 195 (2), 372-378 (2005).
- Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving Bioscience Research Reporting: The ARRIVE Guidelines for Reporting Animal Research. Plos Biology. 8 (6), e1000412 (2010).
- Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nature Methods. 7 (6), 447-479 (2010).
- Orsini, F., et al. Targeting Mannose-Binding Lectin Confers Long-Lasting Protection With a Surprisingly Wide Therapeutic Window in Cerebral Ischemia. Circulation. 126 (12), 1484-1494 (2012).
- Simoni, M. G. D., et al. Neuroprotection by Complement (C1) Inhibitor in Mouse Transient Brain Ischemia. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 23 (2), 232-239 (2003).
- Clark, W., Gunion-Rinker, L., Lessov, N., Hazel, K. Citicoline Treatment for Experimental Intracerebral Hemorrhage in Mice. Stroke. 29 (10), 2136-2140 (1998).
- Lin, T. N., He, Y. Y., Wu, G., Khan, M., Hsu, C. Y. Effect of Brain Edema on Infarct Volume in a Focal Cerebral-Ischemia Model in Rats. Stroke. 24 (1), 117-121 (1993).
- Loihl, A. K., Asensio, V., Campbell, I. L., Murphy, S. Expression of nitric oxide synthase (NOS)-2 following permanent focal ischemia and the role of nitric oxide in infarct generation in male, female and NOS-2 gene-deficient mice. Brain Research. 830 (1), 155-164 (1999).
- Connolly, E. S., Winfree, C. J., Stern, D. M., Solomon, R. A., Pinsky, D. J. Procedural and strain-related variables significantly affect outcome in a murine model of focal cerebral ischemia. Neurosurgery. 38 (3), 523-531 (1996).
- Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse Strain Differences in Susceptibility to Cerebral Ischemia are Related to Cerebral Vascular Anatomy. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).
- Kitagawa, K., et al. Cerebral Ischemia after Bilateral Carotid Artery Occlusion and Intraluminal Suture Occlusion in Mice: Evaluation of the Patency of the Posterior Communicating Artery. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).
