Summary
هنا ، نصف استخدام التصوير المقطعي للتماسك البصري للمجال الطيفي (SD-OCT) لتصور هياكل الشبكية والعين في الجسم الحي في نماذج تنكس الشبكية ، والزرق ، واعتلال الشبكية السكري ، وقصر النظر.
Abstract
التصوير المقطعي للتماسك البصري الطيفي (SD-OCT) مفيد لتصور هياكل الشبكية والعين في الجسم الحي. في مجال البحث ، يعد SD-OCT أداة قيمة لتقييم وتوصيف التغيرات في مجموعة متنوعة من نماذج أمراض وإصابات الشبكية والعين. في نماذج تنكس الشبكية الناجم عن الضوء ، يمكن استخدام SD-OCT لتتبع ترقق طبقة المستقبلات الضوئية بمرور الوقت. في نماذج الجلوكوما ، يمكن استخدام SD-OCT لمراقبة انخفاض طبقة الألياف العصبية في شبكية العين وسمك الشبكية الكلي ومراقبة حجامة العصب البصري بعد إحداث ارتفاع ضغط الدم في العين. في القوارض المصابة بالسكري ، ساعد SD-OCT الباحثين على ملاحظة انخفاض سمك الشبكية الكلي وكذلك انخفاض سمك طبقات شبكية معينة ، وخاصة طبقة الألياف العصبية في شبكية العين مع تطور المرض. في نماذج الماوس من قصر النظر ، يمكن استخدام SD-OCT لتقييم المعلمات المحورية ، مثل تغيرات الطول المحوري. تشمل مزايا SD-OCT التصوير في الجسم الحي لهياكل العين ، والقدرة على تتبع التغيرات الكمية في أبعاد العين بمرور الوقت ، وسرعة المسح السريع والدقة العالية. هنا ، نقوم بتفصيل طرق SD-OCT ونعرض أمثلة على استخدامه في مختبرنا في نماذج تنكس الشبكية ، والزرق ، واعتلال الشبكية السكري ، وقصر النظر. تشمل الطرق التخدير وتصوير SD-OCT ومعالجة الصور لقياسات السماكة.
Introduction
التصوير المقطعي للتماسك البصري الطيفي (SD-OCT) هو طريقة تصوير دقيقة وعالية الدقة تسمح للأطباء والباحثين بفحص هياكل العين بشكل غير جراحي. تعتمد تقنية التصوير هذه على قياس التداخل لالتقاط صور شبكية ثلاثية الأبعاد في الجسم الحي بمقياس ميكرومتر 1,2. لقد أصبحت واحدة من أكثر طرق التصوير استخداما في أبحاث الرؤية وفي العيادة بسبب سهولة اكتشاف ودقة السمات المرضية مثل العيوب الهيكلية و / أو ترقق طبقات الشبكية والسائل تحت الشبكية3. في البحث باستخدام النماذج الحيوانية للاضطرابات المرتبطة بالرؤية ، قدمت SD-OCT تحليلات أساسية غير جراحية للعلاقات بين البنية والوظيفة وأصولها النسيجية المرضية4. نظرا لدقتها (حتى 2-3 ميكرون ، اعتمادا على العمق في العين5) ، فإن SD-OCT لديها القدرة على اكتشاف حتى التغيرات الصغيرة في سمك طبقة الشبكية. يمكن أن يوفر هذا النوع من التحليل معلومات أساسية لتطور المرض وتقييم فعالية طرق الحماية العصبية والعلاجات للاضطرابات المرتبطة بالرؤية.
SD-OCT هو بديل غير جراحي لفحص البنية نسيجيا ، وقد ثبت أن الاثنين مرتبطان6. في حين أن SD-OCT لا يصل إلى الدقة الخلوية ، إلا أنه يسمح بإجراء دراسات طولية على الحيوانات. هذا مفيد لأنه يمكن تتبع تطور المرض في الحيوانات الفردية بمرور الوقت بدلا من الاضطرار إلى القتل الرحيم للحيوانات في نقاط زمنية محددة. ومع استمرار تحسن تقنيات التصوير، ستتقدم تقنية SD-OCT أيضا، مما يوفر جودة صورة محسنة بالإضافة إلى القدرة على تقييم العمليات البيولوجية مثل وظيفة الأوعية الدموية في شبكية العين بتفاصيل دقيقة. حتى منذ ظهورها في عام 1991 ، شهدت تقنية SD-OCT تقدما هائلا في الدقة والسرعة والحساسية7.
تستخدم الدراسة الحالية نظام SD-OCT لقياس التغيرات في طبقات الشبكية في نماذج القوارض لتنكس الشبكية والزرق واعتلال الشبكية السكري. نظام SD-OCT المستخدم هنا هو نظام OCT بمجال فورييه يستخدم ضوءا منخفضا للطاقة وقريبا من الأشعة تحت الحمراء للحصول على الصور التي تم حلها بعمق ومعالجتها وتخزينها في الوقت الفعلي. يتمتع نظام SD-OCT بقدرة تصوير عمق ممتدة في نطاق الطول الموجي 800 نانومتر ، مما يوفر عمقا 8 مم ودقة 4 ميكرومتر. في اكتشاف مجال فورييه ، يتم تحويل إشارة التداخل بين الضوء المتناثر من الأنسجة والمسار المرجعي إلى فورييه لإنشاء عمليات مسح محورية و / أو ملامح عمق محورية ذات كثافة مبعثرة8. بالنسبة للدراسات هنا ، يتم فحص شعاع OCT على بنية الشبكية المطلوبة أثناء الحصول على مسح محوري بشكل متسلسل. عادة ، يكتسب نمط المسح الشبكة ثنائية الأبعاد (B-Scans) كمجموعة من خطوط المسح الخطي أحادي البعد (A-Scans) ، والتي تتوافق مع صور مقطعية 2D باستخدام نمط المسح النقطية. بالنسبة للدراسات التي تركز على قصر النظر في الفئران ، يستخدم هذا النظام أيضا لقياس أبعاد هياكل العين (على سبيل المثال ، سمك القرنية ، وسمك العدسة ، وعمق الغرفة الزجاجية ، والطول المحوري).
يسمح النظام الحالي للمستخدمين بتصميم بروتوكولاتهم الخاصة ، وإنشاء عمليات مسح يمكن تخصيصها واختيارها بناء على الهياكل العينية ذات الاهتمام. تجعل عمليات الفحص الرئيسية الواردة في هذه البروتوكولات المحددة من قبل المستخدم تقنية التصوير هذه سهلة الاستخدام. بالنسبة لتحليلات الصور ، قمنا بتطوير برمجة مخصصة في برنامج نمذجة رياضية. SD-OCT هي أداة قوية لتحديد التغيرات المرضية في هياكل العين وقياسها بشكل غير جراحي ومراقبة تطور الأمراض المرتبطة بالرؤية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على جميع الإجراءات الموصوفة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية لشؤون المحاربين القدامى في أتلانتا وتتوافق مع دليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر (منشورات المعاهد الوطنية للصحة، الطبعة 8 ، محدثة 2011).
ملاحظة: نظام SD-OCT المستخدم لتطوير البروتوكول أدناه موضح في جدول المواد. في حين أن بعض الإجراءات خاصة بهذا النظام المعين ، يمكن تكييف النهج العام مع أجهزة OCT الأخرى والنماذج الحيوانية. علاوة على ذلك ، في مختبرنا ، تستخدم هذه البروتوكولات بشكل شائع في الفئران والجرذان. ومع ذلك ، يمكن اعتماد النهج العام لنماذج حيوانية مختلفة وأجهزة SD-OCT بشرط أن يكون لدى الفرد العدسة والقدرات الصحيحة على أجهزته.
1. قم بإعداد معدات التصوير المقطعي للتماسك البصري
- افتح برنامج SD-OCT (جدول المواد).
- حدد من يأخذ OCT ، والدراسة ، وذراع العلاج (إذا كان ذلك مناسبا). قم بتسمية هذه الفئات بطريقة تساعد الباحثين في البحث عن عمليات الفحص المطلوبة لاحقا أثناء تحليل البيانات.
- في علامة التبويب المريض/الفحص ، انقر فوق فاحص الاختبار. حدد اسم الفاحص. استخدم زر إعداد الفاحصين والأطباء لإضافة فاحصين جدد.
- انقر فوق اسم الدراسة لتعريف الدراسة. انقر فوق علامة التبويب دراسة لإضافة دراسة جديدة أو تعديل العلاجات في دراسة موجودة. انقر على يمين حدد ذراع العلاج لتحديد ذراع العلاج .
- انقر فوق الزر إضافة مريض ، والذي يستخدم لإضافة نقطة زمنية جديدة لمجموعة بأكملها. عندما تظهر النافذة ، أدخل رقم الهوية والاسم الأول واسم العائلة. حدد ذكر أو أنثى. أدخل تاريخ الميلاد.
- انقر فوق الزر "إضافة اختبار " لإضافة الفئران الفردية. لتحديد الفئران ، انقر فوق امتحان. انقر على تحرير الاختبار. أدخل رقم المعرف في المربع إدخال ملاحظات . انقر فوق الزر حفظ التغييرات .
- قم بتوصيل العدسة المناسبة بالجهاز (الشكل 1B) ، وحدد التكوين المقابل في البرنامج ، واطلب موضع الذراع المرجعي المرتبط.
ملاحظة: يحتوي نظام SD-OCT الموصوف على عدسات مخصصة وأنماط مسح محددة مسبقا وإعدادات ذراع مرجعية خاصة بأنواع الحيوانات ومنطقة العين التي يتم تصويرها (شبكية العين أو القرنية أو الفأر أو الفئران). بعض هذه التفاصيل خاصة بنظام SD-OCT الموصوف (انظر جدول المواد). على سبيل المثال ، لا توفر جميع الأجهزة ضبطا يدويا لطول مسار الذراع المرجعي . - في علامة التبويب المريض / الفحص ، انقر نقرا مزدوجا فوق الاختبار المميز للمتابعة إلى علامة التبويب التصوير وبدء التصوير أو ببساطة انقر فوق علامة التبويب التصوير . إذا كان هناك فحص افتراضي ، فانقر بزر الماوس الأيمن لحذفه.
- قم بتحميل بروتوكول فحص محدد مسبقا بالنقر فوق الزر تحديد بروتوكول من القائمة . بدلا من ذلك ، أضف عمليات مسح فردية.
- بالنسبة لنماذج الفئران من الجلوكوما واعتلال الشبكية السكري ونماذج الفئران من تنكس الشبكية ، اختر مجموعة مسبقة تتكون من أربع صور: 2 OD و 2 OS scans. بالنسبة لقصر النظر بالماوس ، اختر إعدادا مسبقا يتكون من 8 صور: 4 OD و 4 عمليات مسح لنظام التشغيل.
ملاحظة: سيتم شرح التصوير المحدد مسبقا بمزيد من التفصيل في القسم 3. هذا شيء يصنعه كل مختبر لنفسه أو مع الشركة المصنعة أثناء التثبيت في الموقع.
2. تخدير الحيوان
- تطبيق مخدر.
- تخدير الفئران بالكيتامين (60 ملغ/كغ) وزيلازين (7.5 ملغ/كغم) عن طريق الحقن داخل الصفاق.
- تخدير الفئران بالكيتامين (80 ملغ/كغ) وزيلازين (16 ملغ/كغ) عن طريق الحقن داخل الصفاق.
- انتظر حتى يتم تخدير الحيوانات بالكامل ولا تستجيب لقرصة إصبع القدم.
- تطبيق قطرات توسيع حدقة العين (1٪ تروبيكاميد). انتظر حتى يتوسع التلاميذ قبل التصوير.
ملاحظة: توسيع حدقة العين يزيد من مجال الرؤية ولكنه ليس شرطا. يجب أيضا استخدام قطرات مخدر موضعية (القرنية) (0.5٪ تيتراكائين) لتخدير العين إذا كان أي شيء سيلمس العين (على سبيل المثال ، في حالة وضع العدسات اللاصقة أو استخدام دليل). الدليل هو جهاز يتم وضعه فوق رأس المسح الضوئي ويساعد المبتدئين على اصطفاف العين ورأس المسح. - بعد تخدير القوارض ، ضع القوارض في نظام محاذاة القوارض الذي يمكنه تدوير الحيوان في مساحة ثلاثية الأبعاد (الشكل 1 أ ، 1 ج ، & 1 د). توفير الدعم الحراري.
ملاحظة: حاليا ، نستخدم أنظمة محاذاة القوارض للفئران والجرذان المصممة والمباعة بجهاز SD-OCT. - ضع سائلا (مثل الدموع المالحة أو الاصطناعية) للحفاظ على ترطيب العينين. تأكد من أن العين لا تجف أثناء التصوير بحيث يتم الحفاظ على الخصائص البصرية للعين بين عمليات المسح (عندما تكون القرنية مبللة ، يمكن رؤية الشبكية بوضوح).
- تأكد من الحفاظ على الرطوبة في العين المقابلة عند مسح العين الأولى حتى لا تجف.
- استخدم مسحا دقيقا للتخلص من المحلول الملحي الزائد قبل التصوير مباشرة ، لأن الكثير أو القليل جدا من مواد التشحيم على العين ستؤثر على جودة الصورة.
ملاحظة: لا ينصح باستخدام جل التشحيم المعقم أثناء OCT لأنه يمكن أن يتداخل مع التصوير. إذا لزم الأمر ، يمكن استخدام هلام التشحيم المعقم بعد العملية. يمكن أيضا وضع العدسات اللاصقة لضمان الرطوبة الكافية على العين طوال الاختبار. في تجربتنا ، لم توفر العدسات اللاصقة تحسنا ملحوظا في جودة الصورة ، لكن العدسات اللاصقة تساعد في تقليل خطر جفاف القرنية أثناء جلسة التصوير.
3. تصوير القوارض OCT
- ابدأ بعين واحدة (OS أو OD) وصور العين المقابلة بعد ذلك.
- ضع الحيوان باستخدام حركتي الدوران لنظام محاذاة القوارض ، بحيث تكون النظرة أفقية وتنظر إلى أسفل محور عدسة OCT (الشكل 1D).
- استخدم OCT في وضع التشغيل الحر لتوجيه شبكية العين لجمع البيانات. استخدم وضع الهدف (بالنقر فوق زر الهدف) في البداية لعرض مستمر لكل من عمليات المسح الأفقية والرأسية B في الوقت الفعلي.
- حرك رأس الفحص بالقرب من العين حتى تصبح شبكية العين مرئية (نظرا لأن عدسات شبكية العين للفأر والفئران ذات تركيز ثابت ، فإن تحريك العدسة نحو العين يركز بشكل أعمق في شبكية العين). ثم استخدم نظام محاذاة القوارض لضبط وضع الحيوان لأعلى / لأسفل والدوران / الالتواء لوضع رأس العصب البصري في المركز ، وجعل المسح الأفقي أفقيا ، والمسح الرأسي الرأسي (الشكل 1 أ).
- اضبط مسافة العمل بحيث تكون صورة الشبكية مسطحة وليست منحنية.
- اضبط موضع الذراع المرجعي للاحتفاظ بالصورة بالقرب من أعلى نافذة العرض. احرص على عدم الدفع بعيدا وإلا ستنقلب صورة العين على نفسها.
- تصوير الشبكية
- بالنسبة لنماذج الجلوكوما وتنكس الشبكية واعتلال الشبكية السكري: حدد فحصا حجميا يتكون من 1000 × 100 × 1 (مسح A × B مسح x مسح B متكرر) لحساب المتوسط. في الفئران ، خذ فحصا للحجم بحجم 3 × 3 مم. في الفئران ، قم بإجراء مسح بحجم 1.5 × 1.5 مم.
- قم بتوسيط العصب البصري في الوصول الأفقي والرأسي بحيث يكون مسح الحجم في المنتصف. خذ بعض الوقت للتأكد من أن رأس العصب البصري في مركز الفحص ومستقيم على طول المحاور الأنفية الصدغية والعلوية السفلية (الشكل 2). قم بالمسح وإعادة التوسيط للتأكد من أنه في المنتصف تماما ، إذا لزم الأمر. كرر هذا الفحص حسب الضرورة حتى يتم توسيط رأس العصب البصري ومحاذاته على طول كلا المحورين. انقر فوق الزر لقطة لالتقاط صورة.
ملاحظة: تحتوي بعض أجهزة SD-OCT على خيار معالجة انحناء العين بصريا (على سبيل المثال ، الصورة مسطحة) عن طريق ضبط مسافة العين من مصدر الضوء باستخدام الذراع المرجعي. نوصي بتسطيح الصور وتوسيطها عند إجراء قياسات سمك مباشرة عبر طبقات الشبكية لتحسين الدقة على طول الاتجاه الأمامي الخلفي. - انقر فوق الزر حفظ لحفظ الصورة.
- قم بإجراء فحص شعاعي متمركز عند رأس العصب البصري بحجم 1000 × 4 × 20 (A-scan x B-scan x B-scans المتكرر). استخدم فحوصات B المتكررة لتعزيز وضوح صورة العين أو شبكية العين ، مما سيساعد على تفسير مناطق العين أو طبقات الشبكية أثناء تحليل البيانات.
ملاحظة: مرة أخرى ، في الفئران هذا المسح الشعاعي هو 3 ملم ، بينما في الفئران المسح شعاعي هو 1.5 ملم. - احفظ الصورة.
- كرر الخطوات من 3.1 إلى 3.2.5 في العين المقابلة.
- قياسات الطول المحوري
- بالنسبة للمشاريع التي تتضمن تصوير العين بأكملها ، مثل قصر نظر الفأر ، قم بإجراء ثلاثة فحوصات للعين بأكملها ومسح شبكية واحد لكل عين. اختر مجموعة مسبقة تتكون من مسح شعاعي بحجم 500 × 20 × 1 ويشمل القطر الكامل للعين.
ملاحظة: يوفر هذا الإعداد صورة لكامل طول عين الفأرة من القرنية إلى المشيمية. - تمركز منتصف العين والشبكية في مجال الرؤية. خذ ثلاث فحوصات شعاعية (مسح كامل للعين): مسح B خطي بحجم 1000 × 5 × 2 ومسحان خطيان B إضافيان 1000 × 5 × 2 في نفس الموقع. احفظ الصور.
- بعد ذلك ، إذا رغبت في ذلك ، قم بالتكبير وإجراء مسح حجمي أو مستطيل (مسح شبكية العين) مشابه للوصف الوارد في 3.2 والذي يتكون من مسح 1000 × 20 أمبير × ب. احفظ مسح وحدة التخزين.
- كرر الخطوات من 3.3 إلى 3.3.3 في العين المقابلة.
ملاحظة: قياسات الطول المحوري ممكنة فقط على العيون الصغيرة (الماوس أو أصغر) نظرا لأن نافذة التصوير للأنظمة الحالية ليست كبيرة بما يكفي لالتقاط عين أكبر.
- بالنسبة للمشاريع التي تتضمن تصوير العين بأكملها ، مثل قصر نظر الفأر ، قم بإجراء ثلاثة فحوصات للعين بأكملها ومسح شبكية واحد لكل عين. اختر مجموعة مسبقة تتكون من مسح شعاعي بحجم 500 × 20 × 1 ويشمل القطر الكامل للعين.
4. خطوات ما بعد التصوير
- قم بتخزين البيانات المحفوظة على سحابة ، وهي ممارسة جيدة لإدارة البيانات وتسمح بالوصول السهل للتحليل اللاحق. إجراء تحليل البيانات باستخدام برنامج مخصص تم تطويره في برنامج النمذجة الرياضية (جدول المواد).
- قم بإزالة القوارض من نظام محاذاة القوارض وإعطاء حقنة داخل الصفاق من أتيباميزول (1 مجم / كجم للجرذان والفئران) لعكس آثار الزيلازين ، بحيث يستيقظ القوارض بسرعة أكبر.
- اسمح للقوارض بالتعافي على وسادة التدفئة على نار خفيفة. أعط قطرات ملحية إضافية حسب الحاجة. إعادة القوارض إلى قفص منزلهم عندما يستعيدون الإسعاف الكامل.
- أغلق البرنامج وأوقف تشغيل OCT.
5. المعالجة اللاحقة لصور OCT
- معالجة الصور باستخدام برنامج مخصص تم تطويره في برنامج نمذجة رياضية ليناسب احتياجات OCT المحددة (على سبيل المثال ، قياس سمك مناطق الاهتمام عن طريق وضع علامة على الصور يدويا).
- اعتمادا على الغرض من الصورة (شبكية الفأر أو شبكية الفئران أو قصر النظر / الطول المحوري) ، استخدم أحد البرامج الثلاثة المختلفة:
- لمعالجة شبكية العين ، حدد فحوصات OCT لتحميلها. أولا ، حدد مركز رأس العصب البصري بنقرة بسيطة.
- شاهد البرنامج وهو يولد خطوطا عمودية تحدد المسافات على جانبي رأس العصب البصري. لاحظ أنه في شبكية الفئران ، تكون هذه الخطوط على بعد 0.5 مم و 1.2 مم من مركز رأس العصب البصري ، ليصبح المجموع 4 خطوط رأسية تمثل المحاور الأنفية الصدغية والسفلية العلوية للعين اعتمادا على الفحص B الشعاعي الذي تم تحليله حاليا.
ملاحظة: في شبكية الفأر ، تكون هذه الخطوط الرأسية عند 0.25 مم و 0.5 مم من مركز رأس العصب البصري. - حدد الطبقات التالية على طول كل سطر:
طبقة الألياف العصبية الشبكية (RNFL) ، طبقة الضفيرة الداخلية (IPL) ، الطبقة النووية الداخلية (INL) ، طبقة الضفيرة الخارجية (OPL) ، الطبقة النووية الخارجية (ONL) ، غشاء الحد الخارجي (ELM) ، الأجزاء الداخلية / الأجزاء الخارجية (IS / OS) ، ظهارة صبغة الشبكية (RPE) ، وسمك الشبكية الكلي.
ملاحظة: لا يحتوي الفحص الشعاعي عادة على تسميات أنفية / زمنية وأعلى / أدنى عند فتحه. يمكن إنشاء عمليات المسح بحيث يكون لها اتجاه n / t و s / I ، ويتم تحليل عمليات المسح هذه على وجه الخصوص لاحقا. - بعد تحديد صورة وإغلاق البرنامج ، قم بتصدير هذه القياسات إلى برنامج جدول بيانات لتحليل البيانات.
- استخدم قيم الطول والسمك هذه من الخطوة 5 لإجراء مقارنات بين المجموعات ، على سبيل المثال ، تحديد ما إذا كانت هناك اختلافات إقليمية (n / t / s / i) ، أو تغييرات طولية.
- بالنسبة لقياسات الشبكية ، حدد أولا ما إذا كانت هناك أي اختلافات في المحور الأنفي الصدغي والمحور السفلي العلوي عند مسافات 0.5 مم و 1.2 مم.
ملاحظة: إذا لم يتم ملاحظة الاختلافات في الأرباع ، فقد يتم حساب متوسط قياسات 0.5 مم و 1.2 مم معا. هذا هو نهج مماثل لمسح شبكية العين الماوس فقط في 0.25 ملم و 0.5 ملم. - لدراسات قصر النظر ، استخدم هذا البرنامج لتقييم معلمات العين على طول المحور البصري للعين. افتح برنامج النمذجة الرياضية. أولا ، حدد صورة لتحميلها.
- بعد تحميل الصورة ، قم بتمييز كل مسح ضوئي يدويا (المسح الضوئي الشعاعي و B). حدد الحواف الأمامية والخلفية للقرنية والعدسة والغرفة الزجاجية والشبكية ، بحيث يقوم البرنامج بحساب سمك القرنية وسمك العدسة وعمق الغرفة الأمامية والزجاجية وسمك الشبكية الكلي والطول المحوري الكلي.
- بعد وضع العلامات ، اخرج من البرنامج الذي يطالب بقائمة حفظ. احفظ القيم المحددة في برنامج جدول بيانات وقم بحساب متوسط عمليات الفحص الثلاثة المنفصلة معا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يعتبر SD-OCT ناجحا إذا تم الحصول على صور عالية الجودة بحيث يمكن قياس أبعاد العين بشكل موثوق. هنا ، يتم توضيح مجموعة متنوعة من استخدامات SD-OCT باستخدام نماذج تنكس الشبكية ، والزرق ، واعتلال الشبكية السكري ، وقصر النظر.
في نموذج تنكس الشبكية الناجم عن الضوء (LIRD) ، يؤدي التعرض للضوء الساطع (10000 لوكس) إلى تنكس الخلايا المستقبلة للضوء في شبكية العين9. تكشف صور SD-OCT التمثيلية عن طبقة نووية خارجية أرق ، تحتوي على أجسام الخلايا المستقبلة للضوء ، في شبكية العين من فئران LIRD BALB / c مقارنة بالفئران غير التالفة (الضابطة) (الشكل 3A & 3B). بعد تحديد سمك طبقة الشبكية ، لوحظ فرق كبير بين الفئران غير التالفة و LIRD لسمك الشبكية الكلي (الشكل 3C) ، وسمك الطبقة النووية الخارجية (الشكل 3D) ، وسمك IS / OS (الشكل 3E).
لنمذجة الضرر الجلوكوما تجريبيا، استخدمنا نموذجا لارتفاع ضغط الدم العيني (OHT)10. باختصار ، تلقت فئران براون النرويج (ن = 35) حقنة من محلول ملحي مفرط التوتر في الوريد الجانبي لعين واحدة بينما كانت العين المقابلة بمثابة عنصر تحكم داخلي11. بالنسبة لدراسات الجلوكوما ، قمنا بقياس سمك طبقة الألياف العصبية في شبكية العين (RNFL). بعد 8 أسابيع من OHT ، لاحظنا إعادة تشكيل مميزة في رأس العصب البصري ، بما في ذلك حجامة العصب البصري (الشكل 4A و B). ثم قمنا بقياس سمك RNFL ووجدنا ترقق RNFL بعد 8 أسابيع من OHT مقارنة بقياسات خط الأساس (الشكل 4C).
لنمذجة اعتلال الشبكية السكري ، تم استخدام فئران Goto-Kakizaki ، وهي نموذج غير بدين متعدد الجينات لمرض السكري الذي يتطور إلى ارتفاع السكر في الدم في وقت مبكر من عمر 2-3 أسابيع ،12,13. تم تصوير شبكية العين من فئران Goto-Kakizaki وفئران Wistar (عناصر التحكم غير المصابة بالسكري) باستخدام SD-OCT (الشكل 5A&5B). في عمر 6 أسابيع ، تم تقليل RNFL وسمك الشبكية الكلي في فئران Goto-Kakizaki مقارنة بفئران Wistar في الشبكية المركزية (البيانات غير معروضة) والشبكية المحيطية (الشكل 5C&5D). لوحظت أكبر الاختلافات في الأرباع السفلية والزمنية لشبكية العين (الشكل 5C&5D).
لتقييم نماذج الفئران لقصر النظر ، تم قياس الطول المحوري في Bmal1-/- الفئران. Bmal1 هو جين ساعة مهم لأن إيقاعات الساعة البيولوجية قد تلعب دورا في تطور قصر النظر14,15. الطول المحوري لعين الفأرة Bmal1-/- (الشكل 6B) أطول بشكل واضح من العين البرية (الشكل 6A) في صور OCT. يؤكد القياس الكمي للطول المحوري أن الفئران Bmal1 لها أطوال محورية أطول بكثير في عمر 84 يوما (الشكل 6C) ، مما يدل على أن نقص جين الساعة يساهم في تطور قصر النظر.
أنتج هذا البروتوكول صورا لهياكل العين في نماذج تنكس الشبكية والزرق واعتلال الشبكية السكري وقصر النظر. كانت الصور ذات جودة كافية بحيث يمكن قياس أبعاد العين ، بما في ذلك الطبقة النووية الخارجية ، وطبقة الألياف العصبية في شبكية العين ، وسمك الشبكية الكلي ، والطول المحوري. أظهرت النتائج أنه يمكن ملاحظة اختلافات ذات دلالة إحصائية في أبعاد الهياكل العينية في الجسم الحي باستخدام SD-OCT.
الشكل 1: إعداد معدات SD-OCT.
(أ) صورة لنظام محاذاة القوارض ورأس مسح OCT. (ب) صورة لعدسات OCT للفأر والفأر. (ج) صورة لنظام محاذاة القوارض الفأر توضح قدرته على التحرك في الفضاء ثلاثي الأبعاد. (د) لقطة مقربة لنظام محاذاة القوارض، وتحديدا المقابض التي تتحكم في حركتها. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 2: مسح عينة SD-OCT.
صورة لمسح حي لشبكية العين قبل أخذ وحدة التخزين أو المسح الشعاعي مباشرة. (A) يصور المحاذاة الأنفية الصدغية ، بينما (B) يوضح المحاذاة العلوية السفلية. بمجرد أن تكون شبكية العين في هاتين الصورتين مستقيمة في مستوياتها الرأسية أو الأفقية ويتمركز العصب البصري في كلتا الصورتين ، ننتقل إلى الحصول على صورة SD-OCT. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 3: استخدام SD-OCT لتتبع ترقق طبقة المستقبلات الضوئية بمرور الوقت في نموذج فأر لتنكس الشبكية.
(أ) مسح SD-OCT التمثيلي لشبكية العين غير التالفة (التحكم) من ماوس BALB / c. (ب) مسح SD-OCT التمثيلي لشبكية العين من فأرة BALB / c الناتجة عن تنكس الشبكية الناجم عن الضوء (LIRD). (جيم - ه) القياس الكمي لسمك الشبكية الكلي (C) ، وسمك الطبقة النووية الخارجية (ONL) (D) ، وسمك الجزء الداخلي / الجزء الخارجي (IS / OS) (E) في الفئران غير التالفة و LIRD Balb / c. يعني ± SEM. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 4: باستخدام SD-OCT قمنا بقياس انخفاض في سمك طبقة الألياف العصبية في شبكية العين ولاحظنا حجامة العصب البصري بعد إحداث ارتفاع ضغط الدم في العين في نموذج الفئران من الجلوكوما.
(أ) مسح SD-OCT التمثيلي لشبكية العين ورأس العصب البصري من عين الجرذ المأخوذة قبل إحداث ارتفاع ضغط الدم في العين (خط الأساس: OHT). (ب) مسح SD-OCT لشبكية العين بعد 8 أسابيع من OHT (نموذج تجريبي للجلوكوما). (ج) القياس الكمي لسمك طبقة الألياف العصبية في شبكية العين (RNFL) عند خط الأساس مقارنة بعيون OHT. يعني ± SEM. تم تعديل هذه البيانات من Feola et al.11يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 5: استخدام SD-OCT لمراقبة انخفاض سمك الشبكية الكلي وكذلك انخفاض سمك طبقات شبكية معينة في نموذج الفئران لمرض السكري.
(أ) مسح SD-OCT التمثيلي لشبكية العين من فأر Wistar (التحكم من النوع البري). (ب) مسح SD-OCT التمثيلي لشبكية العين من فأر Goto-Kakizaki (مصاب بالسكري). طبقات الشبكية: طبقة الألياف العصبية الشبكية (RNFL) ، طبقة الضفيرة الداخلية (IPL) ، الطبقة النووية الداخلية (INL) ، طبقة الضفيرة الخارجية (OPL) ، الطبقة النووية الخارجية (ONL) ، الغشاء الخارجي المحدد (ELM) ، الأجزاء الداخلية / الأجزاء الخارجية (IS / OS) ، ظهارة صبغة الشبكية (RPE) ، وسمك الشبكية الكلي (TRT). (جيم - دال) القياس الكمي ل RNFL (C) وسمك الشبكية الكلي (D) في شبكية العين Wistar و Goto-Kakizaki حيث يكون الخط المركزي هو المتوسط والمنطقة المظللة هي SEM لجميع الأرباع الأربعة (Sup, Superior; درجة الحرارة ، الزمنية. INF ، أقل شأنا ؛ Nas، Nasal) من شبكية العين المحيطية (1.2 مم من رأس العصب البصري). ** ص < 0.01 ، *** ص < 0.001. تم تعديل هذا الرقم من Allen et al.13يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 6: استخدام SD-OCT لتقييم الطول المحوري في نموذج فأر لقصر النظر.
صور SD-OCT للعين بالكامل لعيون الفأر من النوع البري (A) و Bmal1-/- (B) في عمر 84 يوما. عيون الفئران Bmal1 - / - لها طول محوري أطول بكثير من العيون البرية (C). AL: الطول المحوري RT: سمك الشبكية. VCD: عمق الغرفة الزجاجية. LT: سمك العدسة. ACD: عمق الغرفة الأمامية. CT: سمك القرنية. يشير الخط العمودي الطويل إلى حدود الطول المحوري (يشار إلى الأعلى والأسفل بخط أفقي) للعين البرية. يشير السهم القصير إلى علامة الطول المحوري الخلفي للعين Bmal1-/- . يعني ± SEM. الخط المركزي أسفل منتصف كل صورة (A &B) هو قطعة أثرية تشبع عمودي. يتم استخدامه عادة كدليل لتوسيط العين ، ولكن إذا كان الفحص محاذيا جيدا ، فيمكن جعله يختفي. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يسمح التصوير عالي الدقة لهياكل العين في الجسم الحي بتقييم تغيرات الشبكية والعين بمرور الوقت. في هذا البروتوكول ، تم إثبات SD-OCT لالتقاط الاختلافات في هياكل العين في الجسم الحي في نماذج تنكس الشبكية ، الجلوكوما ، اعتلال الشبكية السكري ، وقصر النظر.
الجانب الأكثر أهمية عند إجراء SD-OCT هو الحصول على صورة واضحة لشبكية العين أو بنية العين الأخرى ذات الأهمية. من المهم أن تأخذ بعض الوقت للتأكد من أن شبكية العين متمركزة تماما ولديها وضوح ممتاز. يمكن أن يؤدي التنفس الثقيل من قبل القوارض إلى صور صاخبة (يمكن رؤية شبكية العين في الواقع وهي تهتز على الشاشة). يحدث هذا في بعض الأحيان إذا لم يكن الحيوان فاقدا للوعي تماما بعد إعطاء التخدير. للتغلب على هذه المشكلة، يمكن حساب متوسط عمليات مسح B المتعددة للمساعدة في تصور مكان حدود طبقات الشبكية، ومن ثم يمكن تحليل أفضل صورة مسح B مفردة.
خطأ شائع آخر هو أن العين جافة جدا أو رطبة جدا. يمكن التحقق من ذلك بسهولة عن طريق وضع قطرة إضافية من المحلول الملحي ، والتخلص منها بمسح المختبر ، وتقييم ما إذا كانت الصورة قد تحسنت في الوضوح. من الاعتبارات التي يجب مراعاتها عند تمييز سمك طبقة الشبكية على صور SD-OCT كيفية تمييز RNFL. في حين أنه من الممكن التمييز بين RNFL و GCL على بعض OCTs القوارض ، غالبا ما لا يمكن تمييز هاتين الطبقتين. من أجل الاتساق ، نحتفل بمنطقة RNFL بأكملها (RNFL + GCL ، عندما تكون مرئية) على أنها RNFL. تشير بعض الدراسات إلى RNFL و GCL كطبقات منفصلة أو تجمع بين GCL وطبقة الضفيرة الداخلية16،17،18 ، على الرغم من أن هذا البحث تم إجراؤه عادة على البشر ، الذين لديهم عيون أكبر بكثير من القوارض. يعد الإبلاغ عن سمك RNFL أكثر شيوعا في دراسات القوارض11،13،19،20. قضية أخرى مهمة هي أن التغييرات الطفيفة جدا في وضع العلامات يمكن أن تسبب تغييرا كبيرا جدا ، خاصة في قصر النظر بسبب صغر حجم الهياكل التي يتم قياسها. على سبيل المثال ، الفرق 6 ميكرومتر في القياس يساوي ديوبتر التغيير في الخطأ الانكساري21. نظرا لأن التغييرات الطفيفة تحدث فرقا كبيرا في القياس ، فإن وضوح الصورة أمر بالغ الأهمية.
أحد قيود هذا البروتوكول ، و SD-OCT بشكل عام ، هو أن وسائط العين الواضحة مطلوبة للحصول على صورة جيدة. على سبيل المثال ، يمكن أن تمنع آفات القرنية وتشوهات العدسة وإعتام عدسة العين المستخدمين من الحصول على صور واضحة. هذه مشكلة في تصوير اعتلال الشبكية السكري ، على وجه الخصوص ، حيث يتطور إعتام عدسة العين عادة في القوارض المصابة بالسكري22. إذا كان إعتام عدسة العين أو مشكلة العين الأخرى صغيرة ، فمن الممكن في بعض الأحيان مناورة رأس الفحص حوله. بالنسبة لاضطرابات وسائط العين الأكبر حجما ، من المستحيل الحصول على صور OCT للشبكية. لا يزال من الممكن فحص هذه الشبكية باستخدام الأنسجة لأن أنسجة الشبكية لا تعتمد على وسائط العين الواضحة.
هناك قيد آخر يتمثل في حقيقة أن الآفات شديدة الانعكاس ، مثل الإفرازات والنزيف ، وكذلك الأوعية الشبكية الرئيسية ، تؤدي إلى تظليل هياكل الشبكية الأساسية ، وبالتالي يتم فقدان تفاصيل التشكل الأساسي. في حالة تظهر غشاء الأوعية الدموية الحديثة المشيمية واعتلال الشبكية السكري / الوذمة البقعية حيث كان سمك الشبكية أكثر من 400 ميكرومتر ، كان من الصعب تمييز علم الأمراض الأساسي والمشيمية23. بالإضافة إلى ذلك ، لا يمكن استخدام SD-OCT إلا لتقييم السماكة في مواقع محددة. يحتوي SD-OCT أيضا على عمق اختراق محدود لتصوير المشيمية ولتصوير العيون بأكملها (يمكن تصوير العين بأكملها في الماوس ، ولكن ليس في الحيوانات الكبيرة). هناك قيد آخر وهو أنه لا يمكن استخدام علامات الفلورسنت أو غيرها مع SD-OCT كما هو الحال مع تنظير العين بالليزر (SLO). ومع ذلك ، لا تسمح أجهزة SLO النموذجية بتصور طبقات الشبكية في المقطع العرضي بنفس السهولة التي لوحظت مع SD-OCT. أخيرا ، الدقة مع SD-OCT ليست مثالية. ومع ذلك ، فقد تم تحسينه كثيرا مقارنة بالدقة المتاحة في بداية SD-OCT ويستمر في التحسن بمرور الوقت.
في الختام ، تتمثل مزايا وأهمية تقنية SD-OCT في أنها تسمح بالتصوير في الجسم الحي لهياكل العين والتتبع الكمي للتغيرات في أبعاد العين بمرور الوقت ، وأنها تقوم بهذا التصوير بسرعة مسح سريعة. نظرا للدقة العالية ل SD-OCT ، يمكن استخدامه للكشف عن الاختلافات الدقيقة التي لا يمكن ملاحظتها بالعين المجردة (الشكل 4 والشكل 5). علاوة على ذلك ، يعد SD-OCT أداة مفيدة لقياس المعلمات المتعددة للعين في عدد من نماذج الأمراض والإصابات. في هذا البروتوكول وحده ، تم استخدام SD-OCT لقياس سمك الشبكية في نماذج تنكس الشبكية واعتلال الشبكية السكري ، وسمك الشبكية والحجامة في نموذج الجلوكوما ، والطول المحوري في نموذج قصر النظر. يمكن أيضا استخدام SD-OCT لقياس انحناء القرنية 24 ، وتقييم تغيرات الشبكية بعد الانفجار وإصابات الدماغ الرضحية 19،25،26 ، وتحديد علم الأمراض في الضمور البقعي المرتبط بالعمر 27 ، ومراقبة صحة الشبكية أثناء وبعد حقن العين 28 ووضع الشبكية للأجهزة التعويضية مثل الغرسات تحت الشبكية 29. يمكن استخدامه في نماذج حيوانية أخرى مثل زبابة الأشجار30 والرئيسيات غير البشرية31 أيضا. يمكن أيضا استخدام SD-OCT لتوطين أمراض الشبكية بناء على الربع (العلوي ، السفلي ، الأنفي ، الزماني) والموقع (المركزي مقابل المحيطي). ستحقق أجهزة SD-OCT المستقبلية دقة أكبر. بالإضافة إلى ذلك ، يسمح تصوير الأوعية OCT بتصوير الأوعية الدموية الدقيقة في شبكية العين والمشيمية من خلال الاستفادة من انعكاس ضوء الليزر عن سطح خلايا الدم الحمراء أثناء تحركها عبر الأوعية الدموية في شبكية العين32,33.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
تم دعم هذا العمل من خلال جوائز التطوير الوظيفي لخدمة إعادة التأهيل في خدمة إعادة التأهيل التابعة لوزارة شؤون المحاربين القدامى (CDA-1, RX002111; CDA-2 ؛ RX002928) إلى RSA ، وجائزة الاستحقاق (RX002615) وجائزة عالم البحث الوظيفي (RX003134) إلى MTP ، وجائزة التطوير الوظيفي (CDA-2 ، RX002342) إلى AJF ، و EY028859 إلى MTP ، و NEI Core Grant P30EY006360 ، وأبحاث الوقاية من العمى ، ومؤسسة مكافحة العمى.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1% tropicamide | Sandoz | Sandoz #6131403550; NDC- 24208-585-59 | |
| 0.5% tetracaine | Alcon | NDC 0065-0741-12 | |
| AIM-RAS G3 120 V | Leica Bioptigen | 90-AIMRAS-G3-120 | Specialized platform to hold the OCT Scanner Head for mice |
| Celluvisc gel | REFRESH CELLUVISC | #4554; NDC-0023-4554-30 | |
| G3 18 mm Telecentric Lens | Leica Bioptigen | 90-BORE-G3-18 | |
| G3 Mouse Lens | Leica Bioptigen | 90-BORE-G3-M | |
| G3 Rat Lens | Leica Bioptigen | 90-BORE-G3-R | |
| heating pad | Fabrication | 11-1130 | |
| InVivoVue software | Leica Bioptigen | Specialized software that pairs with the Leica Bioptigen SD-OCT system | |
| MATLAB | Mathworks | mathematical modeling program | |
| Mouse/Rat Kit | Leica Bioptigen | 90-KIT-M/R | Mouse/rat rodent alignment system |
| saline | ADDIPAK | 200-39 | |
| System Envisu R4300 VHR 120 V | Leica Bioptigen | 90-R4300-V1-120 | SD-OCT system |
References
- Wojtkowski, M., et al. Ultrahigh-resolution, high-speed, Fourier domain optical coherence tomography and methods for dispersion compensation. Optics Express. 12 (11), 2404-2422 (2004).
- Nassif, N., et al. In vivo high-resolution video-rate spectral-domain optical coherence tomography of the human retina and optic nerve. Optics Express. 12 (3), 367-376 (2004).
- Theelen, T., Teussink, M. M. Inspection of the Human Retina by Optical Coherence Tomography. Methods in Molecular Biology. 1715, 351-358 (2018).
- Nakazawa, M., Hara, A., Ishiguro, S. I. Optical Coherence Tomography of Animal Models of Retinitis Pigmentosa: From Animal Studies to Clinical Applications. Biomed Research International. 2019, 8276140 (2019).
- Drexler, W., et al. Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography. Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).
- VanLeeuwen, J. E., et al. Altered AMPA receptor expression with treadmill exercise in the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-lesioned mouse model of basal ganglia injury. Journal of Neuroscience Research. 88 (3), 650-668 (2010).
- Tian, J., et al. Performance evaluation of automated segmentation software on optical coherence tomography volume data. Journal of Biophotonics. 9 (5), 478-489 (2016).
- Kraus, M. F., et al. Motion correction in optical coherence tomography volumes on a per A-scan basis using orthogonal scan patterns. Biomedical Optics Express. 3 (6), 1182-1199 (2012).
- Boatright, J. H., et al. Tool from ancient pharmacopoeia prevents vision loss. Molecular Vision. 12, 1706-1714 (2006).
- Morrison, J. C., et al. A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage. Experimental Eye Research. 64 (1), 85-96 (1997).
- Feola, A. J., et al. Menopause exacerbates visual dysfunction in experimental glaucoma. Experimental Eye Research. 186, 107706 (2019).
- Goto, Y., Kakizaki, M., Masaki, N. Production of spontaneous diabetic rats by repetition of selective breeding. The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 119 (1), 85-90 (1976).
- Allen, R. S., et al. Retinal Deficits Precede Cognitive and Motor Deficits in a Rat Model of Type II Diabetes. Investigative Ophthalmolology & Visual Science. 60 (1), 123-133 (2019).
- Stone, R. A., et al. Altered ocular parameters from circadian clock gene disruptions. PLoS One. 14 (6), 0217111 (2019).
- Chakraborty, R., et al. Circadian rhythms, refractive development, and myopia. Ophthalmic & Physiological Optics. 38 (3), 217-245 (2018).
- Davies, E. C., et al. Retinal ganglion cell layer volumetric assessment by spectral-domain optical coherence tomography in multiple sclerosis: application of a high-precision manual estimation technique. Journal of Neuro-ophthalmology. 31 (3), 260-264 (2011).
- Carnevali, A., et al. Optical coherence tomography angiography analysis of retinal vascular plexuses and choriocapillaris in patients with type 1 diabetes without diabetic retinopathy. Acta Diabetologica. 54 (7), 695-702 (2017).
- Springelkamp, H., et al. Population-based evaluation of retinal nerve fiber layer, retinal ganglion cell layer, and inner plexiform layer as a diagnostic tool for glaucoma. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (12), 8428-8438 (2014).
- Allen, R. S., et al. Long-Term Functional and Structural Consequences of Primary Blast Overpressure to the Eye. Journal of Neurotrauma. 35 (17), 2104-2116 (2018).
- Zhao, D., et al. Age-related changes in the response of retinal structure, function and blood flow to pressure modification in rats. Scientific Reports. 8 (1), 2947 (2018).
- Schmucker, C., Schaeffel, F. A paraxial schematic eye model for the growing C57BL/6 mouse. Vision Research. 44 (16), 1857-1867 (2004).
- Aung, M. H., Kim, M. K., Olson, D. E., Thule, P. M., Pardue, M. T. Early visual deficits in streptozotocin-induced diabetic long evans rats. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (2), 1370-1377 (2013).
- Puzyeyeva, O., et al. High-Resolution Optical Coherence Tomography Retinal Imaging: A Case Series Illustrating Potential and Limitations. Journal of Ophthalmology. 2011, 764183 (2011).
- Liu, A. S., et al. Topography and pachymetry maps for mouse corneas using optical coherence tomography. Experimental Eye Research. 190, 107868 (2020).
- Mohan, K., Kecova, H., Hernandez-Merino, E., Kardon, R. H., Harper, M. M. Retinal ganglion cell damage in an experimental rodent model of blast-mediated traumatic brain injury. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (5), 3440-3450 (2013).
- Harper, M. M., et al. Blast-Mediated Traumatic Brain Injury Exacerbates Retinal Damage and Amyloidosis in the APPswePSENd19e Mouse Model of Alzheimer's Disease. Investigative Ophthalmology Visual Science. 60 (7), 2716-2725 (2019).
- Zhang, M., et al. Advanced image processing for optical coherence tomographic angiography of macular diseases. Biomedical Optics Express. 6 (12), 4661-4675 (2015).
- Muhlfriedel, R., et al. Optimized Subretinal Injection Technique for Gene Therapy Approaches. Methods in Molecular Biology. 1834, 405-412 (2019).
- Adekunle, A. N., et al. Integration of Perforated Subretinal Prostheses With Retinal Tissue. Translational Vision Science & Technology. 4 (4), 5 (2015).
- Sajdak, B. S., et al. Noninvasive imaging of the tree shrew eye: Wavefront analysis and retinal imaging with correlative histology. Experimental Eye Research. 185, 107683 (2019).
- Dominik Fischer, M., et al. Detailed functional and structural characterization of a macular lesion in a rhesus macaque. Documenta Ophthalmologica. 125 (3), 179-194 (2012).
- Hagag, A. M., Gao, S. S., Jia, Y., Huang, D. Optical coherence tomography angiography: Technical principles and clinical applications in ophthalmology. Taiwan Journal of Ophthalmology. 7 (3), 115-129 (2017).
- Treister, A. D., et al. Prevalence of Subclinical CNV and Choriocapillaris Nonperfusion in Fellow Eyes of Unilateral Exudative AMD on OCT Angiography. Translational Vision Science & Technology. 7 (5), 19 (2018).
