Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

הערכות מבניות In vivo של מחלות עיניים במודלים של מכרסמים באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

Published: July 24, 2020 doi: 10.3791/61588
Automatic Translation
1,2, 1,3, 1,2, 1,2,3
1Center of Excellence for Visual and Neurocognitive Rehabilitation, Atlanta Veterans Affairs Medical Center, 2Department of Biomedical Engineering, Georgia Institute of Technology, 3Department of Ophthalmology, Emory University

Summary

כאן, אנו מתארים את השימוש בטומוגרפיית קוהרנטיות אופטית בתחום ספקטרלי (SD-OCT) כדי לדמיין מבנים ברשתית ובעין in vivo במודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית וקוצר ראייה.

Abstract

טומוגרפיית קוהרנטיות אופטית בתחום ספקטרלי (SD-OCT) שימושית להדמיה של מבני רשתית ועיניים in vivo. במחקר, SD-OCT הוא כלי רב ערך להערכה ואפיון של שינויים במגוון מודלים של מחלות רשתית ועיניים ופציעות. במודלים של ניוון רשתית המושרה באור, ניתן להשתמש ב-SD-OCT כדי לעקוב אחר דילול שכבת קולטני האור לאורך זמן. במודלים של גלאוקומה, SD-OCT יכול לשמש לניטור ירידה בשכבת סיבי עצב הרשתית ועובי הרשתית הכולל ולצפייה בכוסות רוח של עצב הראייה לאחר גרימת יתר לחץ דם עיני. במכרסמים סוכרתיים, SD-OCT סייע לחוקרים להבחין בירידה בעובי הרשתית הכולל וכן בירידה בעובי של שכבות רשתית ספציפיות, במיוחד שכבת סיבי עצב הרשתית עם התקדמות המחלה. במודלים עכבריים של קוצר ראייה, SD-OCT יכול לשמש להערכת פרמטרים ציריים, כגון שינויים באורך הצירים. היתרונות של SD-OCT כוללים הדמיה in vivo של מבני עיניים, היכולת לעקוב כמותית אחר שינויים בממדי העין לאורך זמן, ומהירות הסריקה המהירה והרזולוציה הגבוהה שלה. כאן, אנו מפרטים את השיטות של SD-OCT ומראים דוגמאות לשימוש בו במעבדה שלנו במודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית וקוצר ראייה. השיטות כוללות הרדמה, הדמיית SD-OCT ועיבוד התמונות למדידות עובי.

Introduction

טומוגרפיית קוהרנטיות אופטית בתחום ספקטרלי (SD-OCT) היא שיטת הדמיה מדויקת ברזולוציה גבוהה המאפשרת לרופאים ולחוקרים לבחון מבנים עיניים באופן לא פולשני. טכניקת הדמיה זו מבוססת על אינטרפרומטריה ללכידת תמונות רשתית תלת ממדיות in vivo בקנה מידה מיקרומטרי 1,2. זה הפך לאחד משיטות ההדמיה הנפוצות ביותר במחקר הראייה ובמרפאה בשל זיהוי קל ודיוק של תכונות פתולוגיות כגון פגמים מבניים ו / או דילול של שכבות הרשתית ונוזל תת רשתית3. במחקר באמצעות מודלים של בעלי חיים של הפרעות הקשורות לראייה, SD-OCT סיפק ניתוחים לא פולשניים חיוניים של היחסים בין מבנה ותפקוד ומקורותיהם ההיסטופתולוגיים4. בשל הרזולוציה שלה (עד 2-3 מיקרון, בהתאם לעומק לתוך העין5), SD-OCT יש את היכולת לזהות אפילו שינויים קטנים בעובי שכבת הרשתית. סוג זה של ניתוח יכול לספק מידע חיוני להתקדמות המחלה ולהעריך את היעילות של שיטות neuroprotective וטיפולים עבור הפרעות הקשורות לראייה.

SD-OCT היא חלופה לא פולשנית לבחינת המבנה מבחינה היסטולוגית, והשניים הוכחו כמתואמים6. בעוד SD-OCT אינו מגיע לרזולוציה תאית, הוא מאפשר מחקרי אורך בבעלי חיים. זה יתרון מכיוון שניתן לעקוב אחר התקדמות המחלה בבעלי חיים בודדים לאורך זמן, בניגוד לצורך להרדים בעלי חיים בנקודות זמן ספציפיות. ככל שטכניקות ההדמיה ממשיכות להשתפר, טכנולוגיית SD-OCT תתקדם גם היא, ותספק איכות תמונה משופרת, כמו גם את היכולת להעריך תהליכים ביולוגיים כגון תפקוד כלי דם ברשתית בפירוט רב. אפילו מאז הופעתה בשנת 1991, טכנולוגיית SD-OCT ראתה התקדמות עצומה ברזולוציה, במהירות וברגישות7.

המחקר הנוכחי משתמש במערכת SD-OCT כדי לכמת שינויים בשכבות הרשתית במודלים של מכרסמים של ניוון רשתית, גלאוקומה ורטינופתיה סוכרתית. מערכת SD-OCT המשמשת כאן היא מערכת OCT בתחום פורייה המשתמשת באור אינפרא אדום קרוב בהספק נמוך כדי לרכוש, לעבד ולאחסן תמונות עם רזולוציית עומק בזמן אמת. למערכת SD-OCT יכולת דימות עומק מורחבת בתחום אורכי הגל של 800 ננומטר, המספקת עומק של 8 מ"מ ורזולוציה של 4 מיקרומטר. בזיהוי תחום פורייה, אות ההתאבכות בין האור המפוזר מהרקמה לבין נתיב ייחוס עובר טרנספורמציה של פורייה לבניית סריקות ציריות ו/או פרופילי עומק ציריים בעוצמה מפוזרת8. עבור המחקרים כאן, קרן OCT נסרקת מעל מבנה הרשתית הרצוי תוך רכישה סדרתית של סריקות ציריות. בדרך כלל, תבנית סריקה מקבלת את הרשת הדו-ממדית (B-Scans) כאוסף של קווי סריקה חד-ממדיים ליניאריים (A-Scans), המתאימים לתמונות חתך דו-ממדיות המשתמשות בתבנית סריקת רסטר. עבור מחקרים המתמקדים בקוצר ראייה בעכברים, מערכת זו משמשת גם למדידת ממדים של מבני עיניים (למשל, עובי הקרנית, עובי העדשה, עומק חדר הזגוגית ואורך הצירים).

המערכת הנוכחית מאפשרת למשתמשים לעצב פרוטוקולים משלהם, וליצור סריקות שניתן להתאים ולבחור בהתבסס על מבני העין המעניינים. הסריקות העיקריות המוצגות בפרוטוקולים אלה המוגדרים על-ידי המשתמש הופכות את טכניקת ההדמיה הזו לידידותית למשתמש. עבור ניתוח תמונות, פיתחנו תכנות מותאם אישית בתוכנית מידול מתמטית. SD-OCT הוא כלי רב עוצמה לזיהוי וכימות לא פולשני של שינויים פתומורפולוגיים במבני העין ולמעקב אחר התקדמות מחלות הקשורות לראייה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל הנהלים המתוארים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים לענייני חיילים משוחררים באטלנטה ותאמו את מדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (פרסומי NIH, מהדורה8 , עודכן 2011).

הערה: מערכת SD-OCT המשמשת לפיתוח הפרוטוקול להלן מתוארת בטבלת החומרים. בעוד שחלק מהנהלים ספציפיים למערכת מסוימת זו, ניתן להתאים את הגישה הכוללת למכשירי OCT אחרים ולמודלים של בעלי חיים. יתר על כן, במעבדה שלנו, פרוטוקולים אלה משמשים בדרך כלל בעכברים וחולדות; עם זאת, ניתן לאמץ את הגישה הכוללת למודלים שונים של בעלי חיים ולהתקני SD-OCT בתנאי שלאדם יש את העדשה והיכולות הנכונות במכשיר שלו.

1. הגדר את ציוד טומוגרפיית הקוהרנטיות האופטית

  1. פתח את תוכנת SD-OCT (רשימת חומרים).
  2. הגדירו מי לוקח את ה-OCT, את המחקר ואת זרוע הטיפול (אם רלוונטי). תן שמות לקטגוריות אלה באופן שיסייע לחוקרים לחפש את הסריקות הרצויות מאוחר יותר במהלך ניתוח הנתונים.
    1. בכרטיסיה מטופל/מבחן , לחץ על בודק בדיקה. בחר את שם הבוחן. השתמש בלחצן הגדרת בודקים ורופאים כדי להוסיף בודקים חדשים.
    2. לחץ על שם המחקר כדי להגדיר את המחקר. לחץ על הכרטיסיה מחקר כדי להוסיף מחקר חדש או לשנות טיפולים במחקר קיים. לחץ משמאל ל - Select Treatment Arm כדי לבחור זרוע טיפולית.
  3. לחץ על לחצן הוסף מטופל , המשמש להוספת נקודת זמן חדשה עבור קבוצה שלמה. כאשר החלון מופיע, הזן מספר תעודת זהות, שם פרטי ושם משפחה. בחר זכר או נקבה. הזן את תאריך הלידה.
  4. לחצו על הלחצן 'הוסף מבחן ' כדי להוסיף את החולדות הבודדות. כדי לזהות את החולדות, לחצו על מבחן. לחצו על ' ערוך מבחן'. הזן את מספר הזיהוי בתיבה הזן הערות . לחץ על הלחצן שמור שינויים .
  5. חבר את העדשה המתאימה להתקן (איור 1B), בחר את התצורה המתאימה בתוכנה וחייג במיקום זרוע הייחוס המשויך.
    הערה: מערכת SD-OCT המתוארת כוללת עדשות מותאמות אישית, דפוסי סריקה מוגדרים מראש והגדרות זרוע התייחסות ספציפיות למין בעלי החיים ולאזור העין המצולם (רשתית או קרנית, עכבר או חולדה). חלק מפרטים אלה ספציפיים למערכת SD-OCT המתוארת (ראה טבלת חומרים). לדוגמה, לא כל המכשירים מציעים התאמה ידנית של אורך נתיב זרוע הייחוס .
  6. בכרטיסיה מטופל/מבחן , לחץ פעמיים על הבחינה המסומנת כדי להמשיך לכרטיסייה הדמיה ולהתחיל בהדמיה או פשוט לחץ על הכרטיסיה דימות . אם קיימת סריקת ברירת מחדל, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני כדי למחוק אותה.
  7. טען פרוטוקול סריקה מוגדר מראש על-ידי לחיצה על לחצן בחר פרוטוקול מהרשימה . לחלופין, הוסף סריקות בודדות.
  8. עבור מודלים של חולדות של גלאוקומה ורטינופתיה סוכרתית ומודלים עכבריים של ניוון רשתית, בחר קבוצה מראש המורכבת מארבע תמונות: 2 OD ו -2 סריקות מערכת הפעלה. עבור קוצר ראייה של עכבר, בחר קבוצה מוגדרת מראש הכוללת 8 תמונות: 4 OD ו 4 סריקות מערכת הפעלה.
    הערה: הדמיה מוגדרת מראש תוסבר בפירוט רב יותר בסעיף 3. זה משהו שכל מעבדה מייצרת עבור עצמה או עם היצרן במהלך ההתקנה באתר.

2. להרדים את החיה

  1. מתן הרדמה.
    1. הרדימו חולדות עם קטמין (60 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (7.5 מ"ג/ק"ג) באמצעות הזרקה תוך צפקית.
    2. מרדימים עכברים עם קטמין (80 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (16 מ"ג/ק"ג) באמצעות הזרקה תוך צפקית.
    3. יש להמתין עד שבעלי החיים מורדמים לחלוטין ואינם מגיבים לצביטת בהונות.
  2. מתן טיפות הרחבת אישונים (1% טרופיקמיד). המתן לאישונים להתרחב לפני ההדמיה.
    הערה: הרחבת אישונים מגדילה את שדה הראייה אך אינה דרישה. יש להשתמש גם בטיפות הרדמה מקומיות (0.5% טטרקאין) כדי להרדים את העין אם משהו ייגע בעין (לדוגמה, אם מרכיבים עדשות מגע או משתמשים במדריך). מדריך הוא מכשיר הממוקם מעל ראש הסריקה ומסייע למתחילים ליישר את העין ואת ראש הסריקה.
  3. לאחר הרדמת המכרסם, הניחו את המכרסם במערכת יישור מכרסמים שיכולה לסובב את החיה במרחב תלת-ממדי (איור 1, A, 1C ו-1D). ספק תמיכה תרמית.
    הערה: כיום, אנו משתמשים במערכות יישור מכרסמים עבור עכברים וחולדות שתוכננו ונמכרו עם מכשיר SD-OCT.
  4. יש למרוח נוזל (למשל, מלח או דמעות מלאכותיות) כדי לשמור על העיניים משומנות. יש לוודא שהעין אינה מתייבשת במהלך ההדמיה, כך שהתכונות האופטיות של העין נשמרות בין הסריקות (כאשר הקרנית רטובה, ניתן לראות את הרשתית בבירור).
    1. יש להקפיד לשמור על לחות בעין הנגדית בעת סריקת העין הראשונה כדי שלא תתייבש.
  5. השתמשו במגבון עדין כדי לנדף עודפי מלח ממש לפני ההדמיה, מכיוון שיותר מדי או מעט מדי חומר סיכה על העין ישפיע על איכות התמונה.
    הערה: השימוש בג'ל סיכה סטרילי אינו מומלץ במהלך OCT מכיוון שהוא עלול להפריע להדמיה. במידת הצורך, ניתן להשתמש בג'ל סיכה סטרילי לאחר ההליך. ניתן גם להתקין עדשת מגע כדי להבטיח לחות מספקת על העין לאורך כל הבדיקה. מניסיוננו, עדשת מגע לא סיפקה שיפור ניכר באיכות התמונה, אך עדשות מגע עוזרות להפחית את הסיכון להתייבשות הקרנית במהלך ההדמיה.

3. הדמיית OCT של מכרסמים

  1. התחל עם עין אחת (OS או OD) ודמיין את העין הנגדית אחרי.
    1. מקמו את החיה באמצעות שתי תנועות סיבוב של מערכת יישור המכרסמים, כך שהמבט יהיה אופקי ויביט מטה על ציר עדשת OCT (איור 1D).
    2. השתמש ב-OCT במצב הפעלה חופשית כדי לכוון את הרשתית לאיסוף נתונים. השתמש במצב Aim (על ידי לחיצה על לחצן Aim ) תחילה לתצוגה רציפה של סריקות B אופקיות ואנכיות בזמן אמת.
    3. קרבו את ראש הסריקה לעין עד שהרשתית נראית לעין (מכיוון שעדשות הרשתית של עכבר וחולדה ממוקדות באופן קבוע, הזזת העדשה לכיוון העין מתמקדת עמוק יותר לתוך הרשתית). לאחר מכן השתמשו במערכת יישור המכרסמים כדי לכוונן את מיקום החיה למעלה/למטה ולסובב/לסובב כדי למקם את ראש עצב הראייה במרכז, להפוך את הסריקה האופקית לאופקית ואת הסריקה האנכית לאנכית (איור 1A).
    4. התאימו את מרחק העבודה כך שתמונת הרשתית תהיה שטוחה ולא מעוקמת.
    5. התאימו את מיקום זרוע הייחוס כדי לשמור על התמונה קרוב לחלק העליון של חלון התצוגה. היזהרו לא לדחוף פנימה יותר מדי, אחרת תמונת העין תתהפך על עצמה.
  2. הדמיית רשתית
    1. עבור מודלים של גלאוקומה, ניוון רשתית ורטינופתיה סוכרתית: הגדר סריקת נפח הכוללת 1000 x 100 x 1 (A סורק x B סורק x סריקות B חוזרות) לממוצע. בחולדות, בצע סריקת נפח בגודל 3X3 מ"מ. בעכברים, בצע סריקה בנפח 1.5 x 1.5 מ"מ.
    2. מרכז את עצב הראייה בגישה האופקית והאנכית כך שסריקת הנפח תהיה במרכז. הקדישו זמן כדי לוודא שראש עצב הראייה נמצא במרכז הסריקה וישר לאורך הצירים האף-טמפורלי והעליונים-נחותים (איור 2). סרוק ומרכז מחדש כדי לוודא שהוא בדיוק במרכז, במידת הצורך. חזור על סריקה זו לפי הצורך עד שראש עצב הראייה ממורכז ומיושר לאורך שני הצירים. לחץ על לחצן תצלום בזק כדי לצלם תמונה.
      הערה: למכשירי SD-OCT מסוימים יש אפשרות לתפעל אופטית את עקמומיות העין (למשל, התמונה משוטחת) על ידי התאמת מרחק העין ממקור האור באמצעות זרוע הייחוס. אנו ממליצים לשטח ולמרכז את התמונות בעת ביצוע מדידות עובי ישירות דרך שכבות הרשתית כדי לשפר את הדיוק לאורך הכיוון הקדמי-אחורי.
    3. לחץ על להציל כפתור לשמירת התמונה.
    4. בצע סריקה רדיאלית הממורכזת בראש עצב הראייה בגודל 1000 x 4 x 20 (סריקת A x סריקת B x סריקות B חוזרות ונשנות). השתמש בסריקות B חוזרות ונשנות כדי לשפר את בהירות התמונה של העין או הרשתית, אשר יסייעו לפענח אזורים של העין או שכבות הרשתית במהלך ניתוח נתונים.
      הערה: שוב, בחולדות סריקה רדיאלית זו היא 3 מ"מ, בעוד שבעכברים הסריקה הרדיאלית היא 1.5 מ"מ.
    5. שמור את התמונה.
    6. חזור על שלבים 3.1 עד 3.2.5 בעין הנגדית.
  3. מדידות אורך ציר
    1. עבור פרויקטים הכוללים הדמיה של כל העין, כגון קוצר ראייה של עכבר, בצע שלוש סריקות של העין כולה וסריקת רשתית אחת עבור כל עין. בחר סט מראש המורכב מסריקה רדיאלית בגודל 500 x 20 x 1 ומקיף את קוטר העין המלא.
      הערה: הגדרה זו מספקת תמונה של כל אורך עין העכבר מהקרנית ועד לכורואיד.
    2. מרכז מרכז העין והרשתית בשדה הראייה. בצע שלוש סריקות רדיאליות (סריקות עיניים שלמות): סריקת B ליניארית בגודל 1000 x 5 x 2 ושתי סריקות B ליניאריות נוספות בגודל 1000 x 5 x 2 באותו מיקום. שמור את התמונות.
    3. לאחר מכן, אם תרצה, התקרב ובצע סריקה ווליום או מלבנית (סריקת רשתית) בדומה לתיאור ב- 3.2 המורכב מסריקות 1000 x 20 A x B. שמור את סריקת עוצמת הקול.
    4. חזור על שלבים 3.3 עד 3.3.3 בעין הנגדית.
      הערה: מדידות אורך ציר אפשריות רק בעיניים קטנות (עכבר או קטנות יותר) מכיוון שחלון ההדמיה של מערכות זרם אינו גדול מספיק כדי ללכוד עין גדולה יותר.

4. שלבים לאחר הדמיה

  1. אחסן נתונים שמורים בענן, שהוא נוהג טוב לניהול נתונים ומאפשר גישה קלה לניתוח מאוחר יותר. ביצוע ניתוח נתונים באמצעות תוכנה מותאמת אישית שפותחה בתוכנית מידול מתמטית (Table of Materials).
  2. הסר את המכרסם ממערכת יישור המכרסם ותן זריקה intraperitoneal של atipamezole (1 מ"ג / ק"ג עבור חולדות ועכברים) כדי להפוך את ההשפעות של xylazine, כך מכרסם יתעורר מהר יותר.
  3. אפשרו למכרסמים להתאושש על כרית חימום בחום נמוך. יש לתת טיפות מלח נוספות לפי הצורך. להחזיר מכרסמים לכלוב הביתי שלהם כאשר הם חזרו אמבולציה מלאה.
  4. סגור את התוכנית וכבה את ה- OCT.

5. עיבוד לאחר עיבוד של תמונות OCT

  1. עבד את התמונות באמצעות תוכנה מותאמת אישית שפותחה בתוכנת מידול מתמטית כדי להתאים לצרכי OCT ספציפיים (למשל, למדוד את עובי אזורי העניין על ידי סימון ידני של התמונות).
  2. בהתאם למטרה של התמונה (רשתית עכבר, רשתית חולדה, או קוצר ראייה/אורך ציר), השתמש באחת משלוש תוכניות שונות:
    1. לעיבוד הרשתית, בחר בסריקות OCT לטעינה. ראשית, הגדירו את מרכז ראש עצב הראייה בלחיצה פשוטה.
    2. צפו כיצד התוכנה מייצרת קווים אנכיים המגדירים מרחקים משני צדי ראש עצב הראייה. שימו לב שברשתית החולדה, קווים אלה נמצאים במרחק של 0.5 מ"מ ו-1.2 מ"מ ממרכז ראש עצב הראייה, ובסך הכל 4 קווים אנכיים המייצגים את הצירים האף-טמפורלי והתחתון-עליון של העין בהתאם לסריקת B רדיאלית המנותחת כעת.
      הערה: ברשתית העכבר, קווים אנכיים אלה נמצאים במרחק של 0.25 מ"מ ו-0.5 מ"מ ממרכז ראש עצב הראייה.
    3. תחמו את השכבות הבאות לאורך כל שורה:
      שכבת סיבי עצב הרשתית (RNFL), שכבת הפרספקס הפנימית (IPL), השכבה הגרעינית הפנימית (INL), שכבת הפרספקס החיצונית (OPL), השכבה הגרעינית החיצונית (ONL), הממברנה המגבילה החיצונית (ELM), מקטעים פנימיים/מקטעים חיצוניים (IS/OS), אפיתל פיגמנט הרשתית (RPE) ועובי הרשתית הכולל.
      הערה: לסריקה הרדיאלית אין בדרך כלל תוויות אף/טמפורליות ועליונות/נחותות בעת פתיחתה. סריקות עשויות להיווצר כך שיש להן כיוון n/t ו-s/i, וסריקות אלה בפרט ינותחו מאוחר יותר.
    4. לאחר שתמונה הוגדרה והתוכנית נסגרה, יצא מדידות אלה לתוכנת גיליון אלקטרוני לניתוח נתונים.
  3. השתמש בערכי אורך ועובי אלה משלב 5 כדי לבצע השוואות בין קבוצות, לדוגמה, לקבוע אם קיימים הבדלים אזוריים (n/t/s/i) או שינויי אורך.
  4. עבור מדידות רשתית, ראשית יש לקבוע אם יש הבדלים בציר האף-טמפורלי והתחתון-עליון במרחקים של 0.5 מ"מ ו-1.2 מ"מ.
    הערה: אם לא נצפים הבדלים ברבעים, ניתן לחשב את המדידות של 0.5 מ"מ ו-1.2 מ"מ יחד. זוהי גישה דומה עבור סריקות רשתית עכבר רק ב 0.25 מ"מ ו 0.5 מ"מ.
  5. עבור מחקרי קוצר ראייה, השתמש בתוכנית זו כדי להעריך את הפרמטרים העיניים לאורך הציר האופטי של העין. פתח את תוכנית המידול המתמטי. תחילה, בחרו תמונה לטעינה.
    1. לאחר טעינת התמונה, סמן ידנית כל סריקה (סריקה רדיאלית וסריקה B). סמן את הקצוות הקדמיים והאחוריים של הקרנית, העדשה, חדר הזגוגית והרשתית, כך שהתוכנית תחשב את עובי הקרנית, עובי העדשה, עומק החדר הקדמי והזגוגי, עובי הרשתית הכולל, אורך הציר הכולל.
    2. לאחר הסימון, צא מהתוכנית המנחה תפריט שמירה. שמור את הערכים המסומנים בתוכנת גיליון אלקטרוני ובצע ממוצע של שלוש הסריקות הנפרדות יחד.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

SD-OCT נחשב מוצלח אם מתקבלות תמונות באיכות גבוהה כך שניתן למדוד את ממדי העין בצורה אמינה. כאן, מגוון שימושים של SD-OCT מודגמים באמצעות מודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית, וקוצר ראייה.

במודל ניוון רשתית המושרה על ידי אור (LIRD), חשיפה לאור בהיר (10,000 לוקס) גורמת לניוון של תאים קולטי אור ברשתית9. תמונות מייצגות של SD-OCT חושפות שכבה גרעינית חיצונית דקה יותר, שמכילה את גופי התאים קולטי האור, ברשתית של עכברי LIRD BALB/c בהשוואה לעכברים שלא ניזוקו (בקרה) (איור 3A&3B). לאחר כימות עובי שכבת הרשתית, נצפה הבדל משמעותי בין עכברים שלא ניזוקו לבין עכברי LIRD בעובי הרשתית הכולל (איור 3C), עובי השכבה הגרעינית החיצונית (איור 3D) ועובי IS/OS (איור 3E).

כדי למדל באופן ניסיוני נזק גלאוקומטי השתמשנו במודל של יתר לחץ דם עיני (OHT)10. בקצרה, חולדות בראון נורבגיות (n=35) קיבלו הזרקה של מי מלח היפרטוניים לווריד הלימבוס של עין אחת, בעוד שהעין הנגדית שימשה כבקרה פנימית11. עבור מחקרי גלאוקומה, כימתנו את עובי שכבת סיבי עצב הרשתית (RNFL). לאחר 8 שבועות של OHT, הבחנו בעיצוב מחדש מובהק בראש עצב הראייה, כולל כוסות רוח של עצב הראייה (איור 4A&B). לאחר מכן כימתנו את עובי ה-RNFL ומצאנו דילול RNFL לאחר 8 שבועות של OHT בהשוואה למדידות בסיסיות (איור 4C).

כדי למדל רטינופתיה סוכרתית, חולדות גוטו-קאקיזאקי, מודל פוליגני שאינו שמן של סוכרת המפתחת היפרגליקמיה כבר בגיל 2-3 שבועות, שימשו12,13. רשתיות מחולדות גוטו-קאקיזאקי וחולדות וויסטאר (קבוצת ביקורת שאינה סוכרתית) צולמו באמצעות SD-OCT (איור 5, A&5B). בגיל 6 שבועות, RNFL ועובי הרשתית הכולל הופחתו בחולדות גוטו-קאקיזאקי בהשוואה לחולדות וויסטאר ברשתית המרכזית (הנתונים לא מוצגים) וברשתית ההיקפית (איור 5C&D). ההבדלים הגדולים ביותר נצפו ברביע התחתון והרקתי של הרשתית (איור 5C&D).

כדי להעריך מודלים של עכברים לקוצר ראייה, אורך ציר נמדד בעכברי Bmal1-/- עכברים. Bmal1 הוא גן שעון מעניין מכיוון שמקצבים צירקדיים עשויים לשחק תפקיד בהתפתחות קוצר ראייה14,15. האורך הצירי של עין העכבר Bmal1-/- (איור 6B) ארוך יותר באופן ניכר מהעין הפראית (איור 6A) בתמונות OCT. כימות אורך הציר מאשר שלעכברי Bmal1-/- יש אורכי ציר ארוכים יותר באופן משמעותי בגיל 84 ימים (איור 6C), מה שמראה שהיעדר גן השעון תורם להתפתחות קוצר ראייה.

פרוטוקול זה יצר תמונות של מבנים עיניים במודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית וקוצר ראייה. התמונות היו באיכות מספקת כך שניתן היה לכמת את ממדי העין, כולל השכבה הגרעינית החיצונית, שכבת סיבי העצב ברשתית, עובי הרשתית הכולל ואורך הציר. התוצאות הראו כי ניתן היה להבחין בהבדלים משמעותיים בממדים של מבני העין in vivo באמצעות SD-OCT.

Figure 1
איור 1: הגדרת ציוד SD-OCT.
(A) תמונה של מערכת יישור מכרסמים וראש סריקת OCT. (B) תמונה של עדשות OCT של חולדה ועכבר. (C) תמונה של מערכת יישור מכרסמים של עכבר הממחישה את יכולתו לנוע במרחב תלת-ממדי. (D) תקריב של מערכת יישור המכרסמים, במיוחד הידיות השולטות בתנועתו. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: סריקה לדוגמה של SD-OCT.
תמונה של סריקה חיה של רשתית העכבר ממש לפני ביצוע סריקה עוצמת קול או סריקה רדיאלית. (A) מתאר את היישור האף-טמפורלי, ואילו (B) מראה את היישור העליון-נחות. ברגע שהרשתיות בשתי התמונות האלה ישרות במישור האנכי או האופקי שלהן, ועצב הראייה ממורכז בשתי התמונות, אנו ממשיכים לקבל את תמונת SD-OCT. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3: שימוש ב-SD-OCT כדי לעקוב אחר הידלדלות שכבת קולטני האור לאורך זמן במודל עכבר של ניוון רשתית.
(A) סריקת SD-OCT מייצגת של רשתית (בקרה) לא פגומה מעכבר BALB/c. (B) סריקת SD-OCT מייצגת של רשתית מעכבר BALB/c של ניוון רשתית המושרה באור (LIRD). (ג-ה) כימות עובי הרשתית הכולל (C), עובי השכבה הגרעינית החיצונית (ONL) (D) ועובי המקטע הפנימי/המקטע החיצוני (IS/OS) (E) בעכברים שלא ניזוקו ו-LIRD Balb/c. ממוצע ± SEM. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 4
איור 4: באמצעות SD-OCT מדדנו ירידה בעובי שכבת סיבי העצב ברשתית וצפינו בכוסות רוח של עצב הראייה לאחר גרימת יתר לחץ דם עיני במודל חולדה של גלאוקומה.
(A) סריקת SD-OCT מייצגת של ראש רשתית ועצב ראייה מעין חולדה שנלקחה לפני גרימת יתר לחץ דם עיני (קו בסיס: OHT). (B) סריקת SD-OCT של אותה רשתית חולדה לאחר 8 שבועות של OHT (מודל ניסיוני של גלאוקומה). (C) כימות עובי שכבת סיבי עצב הרשתית (RNFL) בקו הבסיס בהשוואה לעיני OHT. מתכוון ± SEM. נתונים אלה שונו מ- Feola et al.11אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 5
איור 5: שימוש ב-SD-OCT כדי לצפות בירידה בעובי הרשתית הכולל וגם בירידה בעובי של שכבות רשתית ספציפיות במודל של סוכרת בחולדה.
(A) סריקת SD-OCT מייצגת של רשתית מחולדת Wistar (ביקורת מסוג Wild). (B) סריקת SD-OCT מייצגת של רשתית מחולדת גוטו-קאקיזאקי (סוכרתית). שכבות רשתית: שכבת סיבי עצב רשתית (RNFL), שכבת פרספקס פנימית (IPL), שכבה גרעינית פנימית (INL), שכבת פרספקס חיצונית (OPL), שכבה גרעינית חיצונית (ONL), קרום מגביל חיצוני (ELM), מקטעים פנימיים/מקטעים חיצוניים (IS/OS), אפיתל פיגמנט רשתית (RPE) ועובי רשתית כולל (TRT). (ג-ד) כימות RNFL (C) ועובי הרשתית הכולל (D) ברשתיות Wistar ו-Goto-Kakizaki כאשר הקו המרכזי הוא הממוצע והאזור המוצל הוא ה-SEM עבור כל ארבעת הרבעים (Sup, Superior; זמני, זמני; אינף, נחות; Nas, Nasal) של הרשתית ההיקפית (1.2 מ"מ מראש עצב הראייה). ** עמ' < 0.01, *** עמ' < 0.001. נתון זה שונה מ- Allen et al.13לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 6
איור 6: שימוש ב-SD-OCT להערכת אורך ציר במודל עכבר של קוצר ראייה.
תמונות SD-OCT שלמות של עיני עכבר מסוג פרא (A) ו- Bmal1-/- (B) בגיל 84 ימים. העיניים של עכברי Bmal1-/- הן בעלות אורך ציר ארוך משמעותית מהעיניים מסוג פרא (C). AL: אורך ציר; RT: עובי הרשתית; VCD: עומק תא הזגוגית; LT: עובי עדשה; ACD: עומק החדר הקדמי; CT: עובי הקרנית. הקו האנכי הארוך מציין גבולות אורך ציריים (למעלה ולמטה המסומנים בקו אופקי) לעין מסוג פרא. חץ קצר מציין את סימון אורך הציר האחורי עבור העין Bmal1-/- . מתכוון ± SEM. הקו המרכזי באמצע כל תמונה (A&B) הוא חפץ רוויה אנכי. הוא משמש בדרך כלל כמדריך למרכז העין, אך אם הסריקה מיושרת היטב, ניתן לגרום לה להיעלם. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

הדמיה ברזולוציה גבוהה של מבני עיניים in vivo מאפשרת הערכה של שינויים ברשתית ובעין לאורך זמן. בפרוטוקול זה, הוכח כי SD-OCT לוכד הבדלים במבנים עיניים in vivo במודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית וקוצר ראייה.

ההיבט הקריטי ביותר בעת ביצוע SD-OCT הוא קבלת תמונה ברורה של הרשתית או מבנה עיני אחר של עניין. חשוב להקדיש זמן כדי לוודא שהרשתית ממורכזת בצורה מושלמת ובעלת בהירות מצוינת. נשימה כבדה של המכרסם עלולה לגרום לתמונות רועשות (ניתן לראות את הרשתית מתנועעת על המסך). זה קורה לפעמים אם בעל חיים אינו מחוסר הכרה לחלוטין לאחר מתן הרדמה. כדי לעקוף בעיה זו, ניתן לבצע ממוצע של סריקות B מרובות כדי לסייע בהדמיה היכן נמצאים גבולות שכבות הרשתית, ולאחר מכן ניתן לנתח את תמונת סריקת B היחידה הטובה ביותר.

טעות נפוצה נוספת היא שהעין יבשה מדי או רטובה מדי. ניתן לבדוק זאת בקלות על ידי מריחת טיפה נוספת של מלח, פתילה עם מגבון מעבדה, והערכה אם התמונה השתפרה בבהירות. שיקול שיש לקחת בחשבון בעת סימון עובי שכבת הרשתית בתמונות SD-OCT הוא כיצד לסמן את ה- RNFL. בעוד שניתן להבדיל בין RNFL ו- GCL על כמה OCT מכרסמים, לעתים קרובות שתי שכבות אלה אינן ניתנות להבחנה. לקבלת עקביות, אנו מסמנים את כל אזור RNFL (RNFL + GCL, כאשר גלוי) כמו RNFL. מחקרים מסוימים מדווחים על RNFL ו- GCL כשכבות נפרדות או משלבים את שכבת GCL ושכבת הפרספקס הפנימית16,17,18, אם כי מחקר זה בוצע בדרך כלל בבני אדם, שיש להם עיניים גדולות בהרבה ממכרסמים. דיווח על עובי RNFL אופייני יותר במחקרי מכרסמים11,13,19,20. נושא חשוב נוסף הוא ששינויים קלים מאוד בסימון יכולים לגרום לשינוי גדול מאוד, במיוחד בקוצר ראייה בגלל גודלם הקטן של המבנים הנמדדים. לדוגמה, הפרש של 6 מיקרומטר במדידה שווה לדיאופטר של שינוי בשגיאת השבירה21. מכיוון ששינויים קלים עושים הבדל כה גדול במדידה, בהירות התמונה היא קריטית.

מגבלה של פרוטוקול זה, ושל SD-OCT בכלל, היא שנדרשת מדיה עינית ברורה לתמונה טובה. לדוגמה, נגעים בקרנית, הפרעות בעדשה וקטרקט יכולים למנוע מהמשתמשים לקבל תמונות ברורות. זוהי בעיה בהדמיית רטינופתיה סוכרתית, בפרט, שכן קטרקט מתפתח בדרך כלל במכרסמים סוכרתיים22. אם הקטרקט או בעיה עינית אחרת קטנה, לעיתים ניתן לתמרן את ראש הסריקה סביבו. עבור הפרעות גדולות יותר במדיה העינית, לא ניתן להשיג תמונות OCT ברשתית. רשתיות אלה עדיין יכולות להיחקר באמצעות היסטולוגיה מכיוון שהיסטולוגיה רשתית אינה מותנית במדיה עינית ברורה.

מגבלה נוספת היא העובדה שנגעים היפררפלקטיביים, כגון הפרשה ודימומים, כמו גם כלי דם רשתית עיקריים, גורמים להצללה של מבני הרשתית שמתחתיו, ובכך פרטים של המורפולוגיה הבסיסית הולכים לאיבוד. במקרה של קרום ניאו-וסקולרי כורואידי ורטינופתיה/בצקת מקולרית סוכרתית כאשר עובי הרשתית היה מעל 400 מיקרומטר, היה קשה להבחין בפתולוגיה הבסיסית ובכורואיד23. בנוסף, ניתן להשתמש ב-SD-OCT רק כדי להעריך עובי במיקומים ספציפיים. ל-SD-OCT יש גם עומק חדירה מוגבל להדמיית הכורואיד ולהדמיית עיניים שלמות (ניתן לצלם את כל העין בעכבר, אך לא בבעלי חיים גדולים יותר). מגבלה נוספת היא שלא ניתן להשתמש בסמנים פלואורסצנטיים או אחרים עם SD-OCT כמו בסריקת אופטלמוסקופיה בלייזר (SLO). עם זאת, התקני SLO טיפוסיים אינם מאפשרים הדמיה של שכבות רשתית בחתך רוחב באותה קלות שנצפתה עם SD-OCT. לבסוף, הרזולוציה עם SD-OCT אינה מושלמת. עם זאת, הוא השתפר בהרבה לעומת הרזולוציה שהייתה זמינה בתחילת SD-OCT וממשיך להשתפר עם הזמן.

לסיכום, היתרונות והמשמעות של טכניקת SD-OCT הם בכך שהיא מאפשרת הדמיה in vivo של מבני עיניים ומעקב כמותי אחר שינויים בממדי העין לאורך זמן, וכי היא מבצעת הדמיה זו במהירות סריקה מהירה. בגלל הרזולוציה הגבוהה של SD-OCT, ניתן להשתמש בו כדי לזהות הבדלים עדינים שלא ניתן להבחין בהם בעין בלתי (איור 4 ואיור 5). יתר על כן, SD-OCT הוא כלי שימושי למדידת פרמטרים מרובים של העין במספר מודלים של מחלות ופציעות. בפרוטוקול זה בלבד, SD-OCT שימש למדידת עובי הרשתית במודלים של ניוון רשתית ורטינופתיה סוכרתית, עובי רשתית וכוסות רוח במודל גלאוקומה ואורך ציר במודל קוצר ראייה. SD-OCT יכול לשמש גם למדידת עקמומיות הקרנית 24, הערכת שינויים ברשתית לאחר פיצוץ ופגיעה מוחית טראומטית 19,25,26, זיהוי פתולוגיה בניוון מקולרי הקשור לגיל27, וניטור בריאות הרשתית במהלך ואחרי זריקות עיניים 28 ומיקום רשתית של מכשירים תותבים כמו שתלים תת-רשתית 29. ניתן להשתמש בו גם במודלים אחרים של בעלי חיים כגון חרסי עצים30 ופרימטים לא אנושיים31. SD-OCT יכול לשמש גם כדי למקם פתולוגיה רשתית בהתבסס על רביע (עליון, נחות, אף, טמפורלי) ומיקום (מרכזי לעומת היקפי). מכשירי SD-OCT עתידיים ישיגו רזולוציה גדולה עוד יותר. בנוסף, OCT אנגיוגרפיה מאפשרת הדמיה של כלי הדם הזעירים ברשתית וכורואידלית על ידי ניצול השתקפות אור לייזר מפני השטח של תאי הדם האדומים כשהם נעים דרך כלי הדם ברשתית32,33.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי פרסי פיתוח הקריירה של המחלקה לענייני חיילים משוחררים (CDA-1, RX002111; CDA-2; RX002928) ל-RSA, פרס הצטיינות (RX002615) ופרס מדען קריירת מחקר (RX003134) ל-MTP, פרס פיתוח קריירה (CDA-2, RX002342) ל-AJF, EY028859 ל-MTP, מענק ליבה NEI P30EY006360, מחקר למניעת עיוורון ו-Foundation Fighting Blindness.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1% tropicamide Sandoz Sandoz #6131403550; NDC- 24208-585-59
0.5% tetracaine Alcon NDC 0065-0741-12
AIM-RAS G3 120 V Leica Bioptigen 90-AIMRAS-G3-120 Specialized platform to hold the OCT Scanner Head for mice
Celluvisc gel REFRESH CELLUVISC #4554; NDC-0023-4554-30
G3 18 mm Telecentric Lens Leica Bioptigen 90-BORE-G3-18
G3 Mouse Lens Leica Bioptigen 90-BORE-G3-M
G3 Rat Lens Leica Bioptigen 90-BORE-G3-R
heating pad Fabrication 11-1130
InVivoVue software Leica Bioptigen Specialized software that pairs with the Leica Bioptigen SD-OCT system
MATLAB Mathworks mathematical modeling program
Mouse/Rat Kit Leica Bioptigen 90-KIT-M/R Mouse/rat rodent alignment system
saline ADDIPAK 200-39
System Envisu R4300 VHR 120 V Leica Bioptigen 90-R4300-V1-120 SD-OCT system

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wojtkowski, M., et al. Ultrahigh-resolution, high-speed, Fourier domain optical coherence tomography and methods for dispersion compensation. Optics Express. 12 (11), 2404-2422 (2004).
  2. Nassif, N., et al. In vivo high-resolution video-rate spectral-domain optical coherence tomography of the human retina and optic nerve. Optics Express. 12 (3), 367-376 (2004).
  3. Theelen, T., Teussink, M. M. Inspection of the Human Retina by Optical Coherence Tomography. Methods in Molecular Biology. 1715, 351-358 (2018).
  4. Nakazawa, M., Hara, A., Ishiguro, S. I. Optical Coherence Tomography of Animal Models of Retinitis Pigmentosa: From Animal Studies to Clinical Applications. Biomed Research International. 2019, 8276140 (2019).
  5. Drexler, W., et al. Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography. Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).
  6. VanLeeuwen, J. E., et al. Altered AMPA receptor expression with treadmill exercise in the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-lesioned mouse model of basal ganglia injury. Journal of Neuroscience Research. 88 (3), 650-668 (2010).
  7. Tian, J., et al. Performance evaluation of automated segmentation software on optical coherence tomography volume data. Journal of Biophotonics. 9 (5), 478-489 (2016).
  8. Kraus, M. F., et al. Motion correction in optical coherence tomography volumes on a per A-scan basis using orthogonal scan patterns. Biomedical Optics Express. 3 (6), 1182-1199 (2012).
  9. Boatright, J. H., et al. Tool from ancient pharmacopoeia prevents vision loss. Molecular Vision. 12, 1706-1714 (2006).
  10. Morrison, J. C., et al. A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage. Experimental Eye Research. 64 (1), 85-96 (1997).
  11. Feola, A. J., et al. Menopause exacerbates visual dysfunction in experimental glaucoma. Experimental Eye Research. 186, 107706 (2019).
  12. Goto, Y., Kakizaki, M., Masaki, N. Production of spontaneous diabetic rats by repetition of selective breeding. The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 119 (1), 85-90 (1976).
  13. Allen, R. S., et al. Retinal Deficits Precede Cognitive and Motor Deficits in a Rat Model of Type II Diabetes. Investigative Ophthalmolology & Visual Science. 60 (1), 123-133 (2019).
  14. Stone, R. A., et al. Altered ocular parameters from circadian clock gene disruptions. PLoS One. 14 (6), 0217111 (2019).
  15. Chakraborty, R., et al. Circadian rhythms, refractive development, and myopia. Ophthalmic & Physiological Optics. 38 (3), 217-245 (2018).
  16. Davies, E. C., et al. Retinal ganglion cell layer volumetric assessment by spectral-domain optical coherence tomography in multiple sclerosis: application of a high-precision manual estimation technique. Journal of Neuro-ophthalmology. 31 (3), 260-264 (2011).
  17. Carnevali, A., et al. Optical coherence tomography angiography analysis of retinal vascular plexuses and choriocapillaris in patients with type 1 diabetes without diabetic retinopathy. Acta Diabetologica. 54 (7), 695-702 (2017).
  18. Springelkamp, H., et al. Population-based evaluation of retinal nerve fiber layer, retinal ganglion cell layer, and inner plexiform layer as a diagnostic tool for glaucoma. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (12), 8428-8438 (2014).
  19. Allen, R. S., et al. Long-Term Functional and Structural Consequences of Primary Blast Overpressure to the Eye. Journal of Neurotrauma. 35 (17), 2104-2116 (2018).
  20. Zhao, D., et al. Age-related changes in the response of retinal structure, function and blood flow to pressure modification in rats. Scientific Reports. 8 (1), 2947 (2018).
  21. Schmucker, C., Schaeffel, F. A paraxial schematic eye model for the growing C57BL/6 mouse. Vision Research. 44 (16), 1857-1867 (2004).
  22. Aung, M. H., Kim, M. K., Olson, D. E., Thule, P. M., Pardue, M. T. Early visual deficits in streptozotocin-induced diabetic long evans rats. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (2), 1370-1377 (2013).
  23. Puzyeyeva, O., et al. High-Resolution Optical Coherence Tomography Retinal Imaging: A Case Series Illustrating Potential and Limitations. Journal of Ophthalmology. 2011, 764183 (2011).
  24. Liu, A. S., et al. Topography and pachymetry maps for mouse corneas using optical coherence tomography. Experimental Eye Research. 190, 107868 (2020).
  25. Mohan, K., Kecova, H., Hernandez-Merino, E., Kardon, R. H., Harper, M. M. Retinal ganglion cell damage in an experimental rodent model of blast-mediated traumatic brain injury. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (5), 3440-3450 (2013).
  26. Harper, M. M., et al. Blast-Mediated Traumatic Brain Injury Exacerbates Retinal Damage and Amyloidosis in the APPswePSENd19e Mouse Model of Alzheimer's Disease. Investigative Ophthalmology Visual Science. 60 (7), 2716-2725 (2019).
  27. Zhang, M., et al. Advanced image processing for optical coherence tomographic angiography of macular diseases. Biomedical Optics Express. 6 (12), 4661-4675 (2015).
  28. Muhlfriedel, R., et al. Optimized Subretinal Injection Technique for Gene Therapy Approaches. Methods in Molecular Biology. 1834, 405-412 (2019).
  29. Adekunle, A. N., et al. Integration of Perforated Subretinal Prostheses With Retinal Tissue. Translational Vision Science & Technology. 4 (4), 5 (2015).
  30. Sajdak, B. S., et al. Noninvasive imaging of the tree shrew eye: Wavefront analysis and retinal imaging with correlative histology. Experimental Eye Research. 185, 107683 (2019).
  31. Dominik Fischer, M., et al. Detailed functional and structural characterization of a macular lesion in a rhesus macaque. Documenta Ophthalmologica. 125 (3), 179-194 (2012).
  32. Hagag, A. M., Gao, S. S., Jia, Y., Huang, D. Optical coherence tomography angiography: Technical principles and clinical applications in ophthalmology. Taiwan Journal of Ophthalmology. 7 (3), 115-129 (2017).
  33. Treister, A. D., et al. Prevalence of Subclinical CNV and Choriocapillaris Nonperfusion in Fellow Eyes of Unilateral Exudative AMD on OCT Angiography. Translational Vision Science & Technology. 7 (5), 19 (2018).

Tags

ביו-הנדסה גיליון 161 טומוגרפיה קוהרנטית אופטית רשתית ניוון רשתית גלאוקומה רטינופתיה סוכרתית קוצר ראייה מכרסם
הערכות מבניות In vivo של מחלות עיניים במודלים של מכרסמים באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Allen, R. S., Bales, K., Feola, A.,… More

Allen, R. S., Bales, K., Feola, A., Pardue, M. T. In vivo Structural Assessments of Ocular Disease in Rodent Models using Optical Coherence Tomography. J. Vis. Exp. (161), e61588, doi:10.3791/61588 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter