Представлены подробные сведения о лабораторных процедурах безмедикаментозной активации in vitro (IVA) фолликулов яичников у пациенток с тяжелой дисфункцией яичников. Этот метод может увеличить количество извлекаемых ооцитов на гиперстимуляцию яичников и принести пользу сохранению фертильности для этих пациентов.
Функция яичников постепенно снижается во время старения и в некоторых патофизиологических условиях, включая аномалии кариотипа, аутоиммунные заболевания, химио- и лучевую терапию, а также операции на яичниках. У незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников сохранение фертильности важно для будущих беременностей. Хотя криоконсервация ооцитов является признанным методом сохранения фертильности, эти пациенты могут сохранять только ограниченное количество ооцитов даже после гиперстимуляции яичников, что приводит к повторным стимуляциям для обеспечения достаточного количества ооцитов, чтобы гарантировать будущую беременность. Чтобы решить эту проблему, мы недавно разработали процедуру безлекарстванной активации in vitro (IVA), которая позволяет нам стимулировать ранние стадии фолликулов яичников развиваться до стадии преантрального фолликула. Эти преантральные фолликулы могут реагировать на уникальный протокол стимуляции гонадотропином, что приводит к увеличению количества извлеченных ооцитов на стимуляцию яичников для криоконсервации. Безмедикаментозная ИВА состоит из хирургического подхода и стимуляции яичников. Мы удалили часть коры из одного или обоих яичников у пациенток с помощью лапароскопической хирургии. Кортикальные ткани яичников были разрезаны на небольшие кубики, чтобы нарушить сигнальный путь гиппопотама и стимулировать развитие фолликулов на ранней стадии. Эти кубики были привиты ортотропически в оставшиеся яичники, а также под серозу обеих фаллопиевых труб. Мы уже публиковали хирургическую процедуру безмедикаментозной ИВА и протокол последующей стимуляции яичников, но здесь мы представляем подробности лабораторных методов, необходимых для безмедикаментозной ИВА.
Функция яичников постепенно снижается во время старения и некоторых патофизиологических состояний, включая аномалии кариотипа, аутоиммунные заболевания, химио- и лучевую терапию и операции на яичниках. Сохранение фертильности является одним из лучших вариантов для незамужних женщин с тяжелой дисфункцией яичников, чтобы сохранить их потенциал для будущей беременности. Для сохранения плодовитости в настоящее время доступны два метода, в основном в области онко-фертильности. Криоконсервация ооцитов является хорошо отлаженной процедурой сохранения фертильности, и было зарегистрировано много успешных случаев1,2. С другой стороны, криоконсервация ткани яичников также была установлена для сохранения фертильности у больных раком, но это все еще экспериментальная стратегия3,4. В обоих методах для наступления беременности необходимо множественное количество зрелых ооцитов. Как правило, пациентки с преждевременной недостаточностью яичников (POI), у которых аменорея в возрасте до 40 лет, и женщины среднего возраста с низким оварианным резервом показали плохую реакцию яичников (POR) на стимуляцию яичников для получения зрелых ооцитов5,6,7. Кроме того, у молодых пациенток с низким количеством антральных фолликулов также показал POR стимуляции яичников7. Эти пациентки имеют очень ограниченное количество извлекаемых ооцитов даже после правильной гиперстимуляции яичников, что требует нескольких дорогостоящих процедур для обеспечения достаточного количества ооцитов для беременности.
Донорство ооцитов с последующим экстракорпоральное оплодотворением (ЭКО) спермой мужа и переносом эмбрионов (ET) является единственным вариантом для этих пациентов POI и POR, которые испытывают трудности с получением собственных ооцитов8,9,10. Однако донорство ооцитов осложняется этическими проблемами, а также аутоиммунными осложнениями и осложнениями беременности11, 12,13,14. Для решения этих вопросов желательно налаживание лечения бесплодия с использованием собственных ооцитов пациентов. Для пациентов с POI мы разработали подход in vitro activation (IVA), чтобы обеспечить успешный рост фолликулов и генерацию зрелых ооцитов, что привело к ряду беременностей и родов15. В IVA мы фрагментировали кору яичников после удаления яичников под лапароскопической хирургией и культивировали их в течение двух дней, чтобы активировать фолликулы акт-стимулирующими препаратами, а затем выполнили гетеротопическую пересадку обратно в искусственные мешочки, сделанные под серозой фаллопиевых труб при второй лапароскопической операции15. Эта процедура способствовала росту первичных, первичных и вторичных фолликулов после фрагментации коры яичников, чтобы способствовать нарушению передачи сигналов гиппопотамов16,с последующей двухдневной культурой с сигнальными стимуляторами Akt17.
В отличие от тяжелых случаев POI, пациентки POR со сниженным овариалистным резервом имеют множественные вторичные фолликулы. Поскольку нарушение передачи сигналов гиппо гиппоспособникам само по себе эффективно способствует росту вторичного фолликула16,мы недавно продемонстрировали успешную беременность и родов для пациентов с ПОР, используя процедуру IVA без лекарств, включающую кортикальное фрагментирование и ортотопическую трансплантацию без лечения стимулирующими препаратами Akt. Безлекарстванная ИВА стимулирует раннюю стадию фолликулов яичников к развитию до стадии преантрального фолликула уже после одной операции и увеличивает количество извлеченных ооцитов для ЭКО-переноса эмбрионовна 15,18. Безмедикаментозный подход IVA имеет несколько преимуществ по сравнению с нашим оригинальным IVA: 1) избегая потенциальной потери фолликулов во время посева, 2) сводя к минимуму инвазивность и затраты на вторую операцию, 3) включая только краткосрочный послеоперационный постельный режим и 4) потенциал спонтанной беременности из-за ортотопической пересадки. Недавно мы опубликовали видео-статью, показывающую хирургические процедуры безмедикаментозного IVA19 и подробные протоколы стимуляции яичников после операции20. Здесь мы представляем подробную информацию о лабораторных методах, необходимых для безнаркотатической ИВА.
В этой рукописи мы показали подробный лабораторный протокол для IVA без лекарств. Безлекарствующий IVA – это новый подход к лечению бесплодия для пациентки POR с уменьшающимся овариалистным резервом для стимулирования роста вторичных фолликулов, что приводит к образованию более зрелых оо?…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим Тацудзи Ихану, Сачиё Куримото, Кадзуко Такахасиха, Юки Йошизаву, Махо Араши, Кентаро Фудзиту, Эрину Кудо, Юку Куримото и Маюко Вакацуки за поддержку безмедикаментозной процедуры IVA и профессора Аарона Дж.В. Хсуэ (Медицинская школа Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния) за критическое чтение и редактирование рукописи. Мы также благодарим Ребекку Трумэн и Грегори Трумэна за вставку английского повествования. Это исследование было поддержано Японским обществом содействия науке (JSPS), Scientific Research B (19H03801) и Challenging Exploratory Research (18K19624).
4.5 onz specimen container | FALCON | 354013 | Other products may also be suitable |
60mm dish | FALCON | 351007 | Other products may also be suitable |
50 x 50 cm sterile drape | HOGY Medical | SR-823 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
Disposable pippete | FALCON | 357575 | Other products may also be suitable |
Fine scissors, Curved | WPI | #14224-G | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
Hot plate | TOKAI HIT | TPiE-SP | Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation |
Human Serum Albumin Solution | Irvine Scientific | 9988 | Medium for handling ovarian tissue |
IVA cannule | KITAZATO | 446030 IVA-6030E | Specific cannula for tissue autografting |
KAI medical Disposable scalpel | WPI | #5 10-A | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
Micro scissors, Curved | WPI | #503364 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
Modified HTF Medium-HEPES | Irvine Scientific | 90126 | Medium for handling ovarian tissue |
Sterile gauze | Osaki Medical | 15004 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
Swiss Tweezers, Curved Tips | KAI | #504505 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |