Summary
यहां, हम कई मायलोमा रोगियों से अस्थि मज्जा स्मीयर पर सीटू संकरण का पता लगाने में इंटरफेज प्रतिदीप्ति की सफलता में सुधार के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।
Abstract
प्रतिदीप्ति इन सीटू संकरण (FISH) का पता लगाना एकाधिक मायलोमा (MM) में आनुवंशिक जोखिम स्तरीकरण में एक अपरिहार्य विधि है, जो सबसे आम हेमेटोलॉजिकल दुर्दमताओं में से एक है। एमएम की पहचान विशेषता अस्थि मज्जा में घातक प्लाज्मा कोशिकाओं को संचित करती है। एमएम के लिए फिश रिपोर्ट मुख्य रूप से सभी न्यूक्लिएटेड कोशिकाओं के बजाय शुद्ध या पहचाने गए क्लोनल प्लाज्मा कोशिकाओं पर ध्यान केंद्रित करती है, एंटी-सीडी 138 चुंबकीय मोतियों के साथ छंटाई करके या साइटोप्लाज्मिक इम्युनोग्लोबुलिन लाइट चेन के साथ चिह्नित करके या π। अस्थि मज्जा इंटरफ़ेज़ नाभिक आमतौर पर ताजा अस्थि मज्जा कोशिकाओं से प्राप्त होते हैं। हालांकि, प्लाज्मा सेल नमूनों के संतोषजनक संवर्धन के लिए बड़ी मात्रा में ताजा हेपरिन एंटी-कोगुलेटेड अस्थि मज्जा की आवश्यकता होती है, जिसे मुश्किल अस्थि मज्जा निष्कर्षण या अस्थि मज्जा सूखे नल के मामले में प्राप्त नहीं किया जा सकता है। यहां, हम दाग या unstained अस्थि मज्जा smears पर FISH का पता लगाने की सफलता में सुधार करने के लिए एक उपन्यास विधि स्थापित करते हैं। अस्थि मज्जा स्मीयर एंटीकोगुलेटेड अस्थि मज्जा नमूनों की तुलना में प्राप्त करना आसान है।
Introduction
मल्टीपल मायलोमा (एमएम) एक घातक प्लाज्मा सेल (पीसी) रोग है जिसमें मजबूत जैविक विषमता और नैदानिक प्रभावकारिता में बड़े व्यक्तिगत अंतर हैं, जिसमें महीनों से लेकर दशकों तक जीवित रहने की अवधि होती है। साइटोजेनेटिक विशेषताएं एमएम के महत्वपूर्ण पूर्वानुमान संकेतक हैं। आनुवांशिक विशेषताओं के आधार पर जोखिम स्तरीकरण प्रणाली और व्यक्तिगत उपचार एमएम 1 पर नैदानिक अनुसंधान में गहन रुचि के विषय बन गए हैं। अस्थि मज्जा (BM) के सीटू संकरण (FISH) पैनल में प्रतिदीप्ति में परीक्षण किए गए पीसी के विपथनों में del 13q14 (RB1), del 17p13 (TP53), t(4;14) (IGH/FGFR3), t(11;14) (IGH/MYEOV), t(14;16) (IGH/MAF), t(14:20) (IGH/MAFB) (IGH/MAFB) शामिल हैं।
मानक मेटाफेज साइटोजेनेटिक्स को एमएम रोगियों के प्रारंभिक मूल्यांकन में शामिल किया जाना चाहिए। यद्यपि पारंपरिक जी-बैंडेड कैरियोटाइपिंग एक पूरे गुणसूत्र विश्लेषण का लाभ प्रदान करता है, इस विधि की कम उपज कई झूठे नकारात्मक परिणामों की ओर ले जाती है2। परंपरागत रूप से, पीसी को विभाजित करने में काफी हद तक असमर्थ के रूप में देखा गया है क्योंकि वे बी लिम्फोसाइट भेदभाव के अंतिम चरण के उत्पाद हैं। यह विभाजित छवियों को प्राप्त करना मुश्किल बनाता है। दीर्घकालिक संस्कृतियों (6 दिन) और साइटोकिन्स द्वारा संस्कृतियों की उत्तेजना के साथ एमएम में बेहतर साइटोजेनेटिक विश्लेषण नए निदान किए गए एमएम रोगियों में साइटोजेनेटिक असामान्यताओं की पहचान करने के लिए एक आशाजनक तरीका हो सकता है3। यहां तक कि जब संस्कृति का समय 6 दिनों तक बढ़ाया गया था, हालांकि, साइटोजेनेटिक असामान्यताओं को एमएम रोगियों के 30% -50% में सटीक रूप से सूचित किया गया था। इसके अलावा, एमएम को जटिल साइटोजेनेटिक विपथन की विशेषता है जो इसकी भविष्यवाणी विषमता को दर्शाता है। हालांकि, पारंपरिक गुणसूत्र बैंडिंग तकनीक का रिज़ॉल्यूशन कम है, जिससे आसानी से एमएम में क्रोमोसोमल असामान्यताओं का पता लगाने से चूक हो सकती है।
Interphase FISH, अधिमानतः CD138-सकारात्मक चुंबकीय मनका-आधारित पीसी सॉर्टिंग या साइटोप्लाज्मिक इम्युनोग्लोबुलिन प्रकाश श्रृंखला के साथ अंकन के बाद, MM5,6 के विश्लेषण में अपरिहार्य है। एक CD138-सकारात्मक चयनित नमूना दृढ़ता से ट्यूमर कोशिकाओं की अनुकूलित उपज के लिए अनुशंसित है। हालांकि, साइटोजेनेटिक विपथन की सटीक मात्रा के लिए पीसी सॉर्टिंग के लिए कम से कम 4 मिलीलीटर एंटीकोएगुलेटेड बीएम की आवश्यकता होती है। इसके अतिरिक्त, या तो CD138 इम्युनोमैग्नेटिक मनका के संयोजन मछली या साइटोप्लाज्मिक के साथ छंटाई /
आमतौर पर, पीसी अनुपात का आकलन पहले दाग वाले बीएम स्मीयर या बीएम बायोप्सी अनुभागों 7,8 की रूपात्मक परीक्षा से किया जाता है। उच्चतम गुणवत्ता (पहले मज्जा एस्पिरेट नमूनों) के बीएम नमूनों का उपयोग रूपात्मक परीक्षण के लिए किया जाता है, जबकि मछली या अन्य पहचान के लिए भेजे गए लोग अक्सर परिधीय रक्त के साथ कमजोर पड़ने के उच्च अनुपात के साथ माध्यमिक एस्पिरेट नमूने होते हैं।
1990 के दशक की शुरुआत में, कई अध्ययनों से पता चला है कि बीएम स्मीयर का उपयोग सीधे अंतरालीय मछली परीक्षाओं के लिए किया जा सकता है, जो एक विश्वसनीय और दोहराने योग्य विधि साबित हुई है। परिधीय रक्त और बीएम स्मीयर के मछली के साथ संयुक्त सेल आकृति विज्ञान और एस्टेरेस साइटोकेमिस्ट्री पर आधारित एक सुरुचिपूर्ण अध्ययन ने ग्रैनुलोसाइटिक और लिम्फोसाइटिक ल्यूकेमिया 10 वाले रोगियों में गुणसूत्र असामान्यताओं को स्पष्ट करने के लिए इसके महान नैदानिक महत्व की पुष्टि की।
यहां, हम एमएम रोगियों में इंटरफ़ेज़ मछली का पता लगाने की सफलता में सुधार के लिए एक उपन्यास विधि प्रदान करते हैं।
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Protocol
यह अध्ययन हेलसिंकी घोषणा के सिद्धांतों के अनुसार आयोजित किया गया था और वुहान विश्वविद्यालय के झोंगनान अस्पताल की नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था (नंबर 2019065)। नमूनों को वुहान विश्वविद्यालय (चीन) के झोंगनान अस्पताल के हेमेटोलॉजी विभाग में एक एमएम रोगी से एकत्र किया गया था।
1. बीएम स्मीयर की तैयारी
- एक साफ डिस्पोजेबल ग्लास स्लाइड पर बीएम समाधान के पहले 0.2 मिलीलीटर रखें।
- जल्दी से बीएम को हटाने से तेज पूंछ के साथ समान मोटाई के लिए बीएम स्मीयर फैलाएं। फिर, स्वाभाविक रूप से सूखजाएं।
- कमरे के तापमान पर लगभग 10 s के लिए राइट-Giemsa समाधान के 1 mL के साथ BM फिल्मों को कवर करें।
- स्लाइड में फॉस्फेट बफर के 1 मिलीलीटर जोड़ें।
नोट: डाई समाधान को सूखने या स्लाइड से बहने से रोकने के लिए ध्यान रखें। - डाई समाधान को धीरे से मिलाएं और इसे कमरे के तापमान पर 15 मिनट तक बनाए रखें।
- स्लाइड को साफ पानी से कुल्ला करें और उन्हें कमरे के तापमान पर हवा में सुखाएं।
- घातक पीसी का पता लगाने के लिए आगे प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग करें। पीसी को अच्छी तरह से तितर-बितर किया जाना चाहिए।
2. मछली बीएम smears के पूर्व प्रसंस्करण
- पीसी को बदरंग करने और ठीक करने के लिए 10 मिनट के लिए फिक्सेटिव समाधान के साथ संकरित क्षेत्र को कवर करें।
- ताजा फिक्सेटिव समाधान तैयार करने के लिए, 3: 1 के आयतन अनुपात में ग्लेशियल एसिटिक एसिड के साथ मेथनॉल मिलाएं।
- विआयनीकृत पानी (dH2O) के साथ स्लाइड को कुल्ला और कमरे के तापमान पर हवा में सुखाएं।
- एक पानी के स्नान में 56 डिग्री सेल्सियस के लिए 2x एसएससी बफर युक्त एक जार preheat. उपयोग से पहले बफर को 20x SSC में ताजा पतला करें।
- 20x SSC तैयार करने के लिए, 176 ग्राम सोडियम क्लोराइड और 88 ग्राम सोडियम साइट्रेट को 800 mL dH2O के साथ अच्छी तरह से मिलाएं। pH को मापें और pH 5.3 ± 0.2 पर समायोजित करें। फिर, अंतिम वॉल्यूम को 1 एल तक लाने के लिए dH2O जोड़ें।
- 10 मिनट के लिए preheated 2x SSC बफर में तैयार बीएम स्मीयर को धोएं, इसके बाद इसे कमरे के तापमान पर विआयनीकृत पानी में डुबोएं।
- एक इथेनॉल ढाल (70%, 85%, और 100% इथेनॉल, प्रत्येक 1 मिनट के लिए) में स्मीयर को निर्जलित करें। 10 मिनट के लिए स्मीयर को एयर-ड्राई करें।
3. बीएम स्मीयर मछली और धोने
नोट: प्रतिदीप्ति शमन को रोकने के लिए सभी चरणों को एक अंधेरे कमरे में किया गया था।
- संकरण क्षेत्र में गुणसूत्र 17 (CEP17) जांच मिश्रण के TP53/centromere जोड़ें और इसे एक coverslip के साथ कवर करें। नीचे से हवा के बुलबुले को हटाने के लिए ठीक-नुकीले चिमटी के साथ धीरे से दबाएं।
- अच्छी जकड़न सुनिश्चित करने के लिए रबर सीमेंट के साथ कवरस्लिप के सभी किनारों को सील करें।
- रबर सीमेंट के ठोसीकरण के बाद, एक स्वचालित मछली मशीन पर स्लाइड जगह. 5 मिनट के लिए 78 डिग्री सेल्सियस पर विकृतीकरण करें, इसके बाद रात भर में 37 डिग्री सेल्सियस पर संकरण करें।
- मछली मशीन से स्लाइड उठाओ. रबर सीमेंट को धीरे से हटाने के लिए ठीक-नुकीले चिमटी का उपयोग करें।
- कवरस्लिप को धोने के लिए लगभग 1 या 2 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 2x एसएससी में स्लाइड को विसर्जित करें।
- 68 °C preheated 0.4x SSC/ 0.3% NP-40 बफर में स्लाइड को 2 मिनट के लिए पानी के स्नान में धोएं।
- 0.4x SSC/0.3% NP-40 समाधान तैयार करें, जो 20x SSC (pH 5.3) के 20 mL को dH2O के 950 mL के साथ अच्छी तरह से मिला कर तैयार करें। फिर, एनपी -40 के 3 एमएल जोड़ें और पूरी तरह से भंग होने तक अच्छी तरह से मिलाएं। पीएच को मापें और NaOH के साथ 7.0-7.5 को समायोजित करें। फिर, कुल समाधान की अंतिम मात्रा को 1 एल तक लाने के लिए dH2O जोड़ें।
- 1 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में 2x एसएससी के साथ स्लाइड को धोएं। 10 मिनट के लिए अच्छी तरह से सूखने के लिए अंधेरे में सीधा सेट करें।
- संकरित क्षेत्र में DAPI के 10 μL जोड़ें और एक coverslip के साथ कवर।
4. मछली विश्लेषण और इमेजिंग
- प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप पर एक उपयुक्त फ़िल्टर सेट का उपयोग करके संकरित स्लाइड देखें.
- सेल नाभिक की प्रतिदीप्ति तीव्रता का निरीक्षण करने के लिए एक मोनोक्रोमैटिक ब्लू फ्लोरोफोर ऑप्टिकल फिल्टर का उपयोग करें। DAPI फ़िल्टर सेट के अंतर्गत सेल नाभिक छवियाँ लें.
- एक गुणसूत्र सेंट्रोमियर जांच का उपयोग करें यह दिखाने के लिए कि एक कोशिका में कितने गुणसूत्र होते हैं। हरे रंग की प्रतिदीप्ति के साथ लेबल CEP17. CEP17 के स्थान का निरीक्षण करने के लिए एक स्पेक्ट्रम हरे फ्लोरोफोर ऑप्टिकल फ़िल्टर का उपयोग करें। हरे रंग के फ़िल्टर सेट के तहत एक CEP17 संकेत छवि ले लो।
- नारंगी प्रतिदीप्ति के साथ TP53 जीन लेबल. TP53 का निरीक्षण करने के लिए एक स्पेक्ट्रम नारंगी fluorophore ऑप्टिकल फिल्टर का उपयोग करें। इस सेट के अंतर्गत एक TP53 संकेत छवि ले लो।
- इन तीन छवियों को मर्ज करें और संख्यात्मक असामान्यताओं के लिए उनकी जांच करें।
नोट: एक सामान्य इंटरफेज सेल में, नीले प्रतिदीप्ति के साथ एक नाभिक के अंदर दो नारंगी और दो हरे रंग के संकेत देखे जाते हैं, जो सामान्य गुणसूत्र 17 (चित्रा 1) की एक जोड़ी को दर्शाते हैं।
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Representative Results
एक नए निदान एमएम रोगी के प्रारंभिक रूपात्मक मूल्यांकन में, बीएम स्मीयर में पीसी के 15% को सामान्य पीसी (चित्रा 2 ए) की तुलना में साइटोप्लाज्म की बड़ी मात्रा के साथ बड़े और गहरे नाभिक पाए गए थे। immunophenotype तकनीक द्वारा पता लगाया हेपरिन विरोधी coagulated BM की पहली ट्यूब मोनोक्लोनल aberrant पीसी का केवल 2.3% पता चला है। CD138 immunomagnetic मनका FISH या cIg-FISH तकनीक के साथ संयोजन में छँटाई एक सटीक FISH परिणाम प्राप्त करने के लिए आवश्यक है। हालांकि, एस्पिरेटेड बीएम एक सूखा नल होने की स्थिति में सीमित है। बीएम स्मीयर का उपयोग इंटरफेज फिश का परीक्षण करने के लिए किया गया था। बीएम फिल्म में एक प्रतिनिधि binucleated पीसी एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप चरण Vernier कैलिपर (चित्रा 2B) द्वारा स्थानीयकृत किया गया था। TP53 और CEP17 के लिए परीक्षण करने के लिए BM स्मीयर पर FISH लागू किया गया था। FISH परिणामों ने एक इंटरफ़ेज़ पीसी नाभिक (चित्रा 2 C) में चार नारंगी और चार हरे रंग के संकेत दिखाए, यह सुझाव देते हुए कि गुणसूत्र 17 की चार प्रतियां मेटाफेज पीसी नाभिक में स्थानीयकृत थीं। कैरियोटाइपिंग परिणाम संस्कृति के समय को 3 दिनों तक बढ़ाकर प्राप्त किए गए थे और आगे फिश एनालिटिक सॉफ्टवेयर (चित्रा 2 डी) का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। BM smears पर interphase FISH परिणामों की सटीकता को आगे सत्यापित किया गया था।
चित्रा 1: इंटरफ़ेज़ कोशिकाओं (1000x) के लिए TP53/CEP17 FISH जांच के सामान्य संकेत। सेल नाभिक की प्रतिदीप्ति तीव्रता नीली थी, TP53 नारंगी था, और CEP17 हरा था। उन 3 सामान्य इंटरफेज कोशिकाओं में, दो नारंगी और दो हरे रंग के संकेत नीले-फ्लोरेसिंग नाभिक के अंदर दिखाई दिए, जो सामान्य गुणसूत्र 17 के दो जोड़े को दर्शाते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: एकाधिक मायलोमा (एमएम) रोगियों में अस्थि मज्जा (बीएम) की आकृति विज्ञान और आनुवंशिक छवियां। (ए) संकुल वितरण के साथ मायलोमा कोशिकाएं तीर द्वारा इंगित की जाती हैं (
) बीएम स्मीयर (1000×) के राइट-गिमसा स्टेनिंग के बाद। (बी) एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (
1000×) पर एक काले और सफेद कैमरे द्वारा ली गई ग्रेस्केल छवि पर तीर () द्वारा इंगित द्विकेंद्रीय प्लाज्मासाइटोइड कोशिकाएं। (C) BM स्मीयर के लिए TP53/सेंट्रोमियर ऑफ क्रोमोसोम 17 (CEP17) प्रतिदीप्ति इन सीटू संकरण (FISH) जांच परीक्षण। FISH प्रत्येक नाभिक (→) (1000×) में चार TP53 और चार CEP17 संकेतों का पता चलता है। (d) असामान्य गुणसूत्र कैरियोग्राम एक नाभिक (
) में गुणसूत्र 17 के दो जोड़े दिखाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
एमएम में आनुवांशिक जोखिम स्तरीकरण के लिए मछली का आवेदन आवश्यक है। FISH रिपोर्ट का महत्वपूर्ण हिस्सा सभी न्यूक्लिएटेड कोशिकाएं नहीं हैं, लेकिन क्लोनल पीसी विशेष रूप से एंटी-CD138 चुंबकीय मोतियों के साथ छंटाई करके शुद्ध या पहचाने जाते हैं या साइटोप्लाज्मिक इम्युनोग्लोबुलिन प्रकाश श्रृंखला के साथ चिह्नित करते हैं। पीसी छँटाई या cIg-FISH के बाद Interphase FISH BM में पीसी के अपेक्षाकृत कम अनुपात के कारण एमएम के निदान में महत्वपूर्ण पाया गया था। हालांकि, इन तरीकों में कुछ कमियां हैं, जिनमें जटिल प्रक्रियाएं, उच्च नमूना मांग और उच्च प्रयोगात्मक लागत शामिल हैं। पचास पीसी जल्दी से एक माइक्रोस्कोप-चरण वर्नियर कैलिपर द्वारा स्थित किया जा सकता है। एंटीकोआगुलेंट बीएम नमूनों की तुलना में बीएम स्मीयर प्राप्त करना बहुत आसान है क्योंकि एंटी-कोगुलेटेड बीएम प्राप्त करने के लिए नाभिक को प्राप्त करने के लिए जटिल प्रक्रियाओं की आवश्यकता होती है। तदनुसार, हमने एमएम कोशिकाओं का पता लगाने के लिए बीएम स्मीयर फिश के लिए एक ठोस विधि स्थापित की।
सबसे पहले, बीएम स्मीयर को एक अनुभवी रूपात्मक विश्लेषक द्वारा बनाया जाना चाहिए। बीएम को स्मीयर में फैलाने के लिए, स्प्रेडर को 30 डिग्री -45 डिग्री के कोण पर एस्पिरेट के सामने रखा जाता है और तरल पदार्थ 11 के साथ संपर्क करने के लिए वापस खींच लिया जाता है। फिर, स्प्रेडर को एक स्थिर गति में समान रूप से आगे बढ़ाया जाता है। बीएम स्मीयर के घनत्व को सिलवाया जाना चाहिए ताकि लंबाई स्लाइड 12 के लगभग तीन-चौथाई हो। BM फिल्म स्लाइड की तुलना में संकीर्ण होना चाहिए गारंटी है कि सभी किनारों पर कोशिकाओं का पता लगाया जा सकता है13. संकरण क्षेत्र का चयन और पीसी का स्थानीयकरण हमारे प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण था, और इसके लिए एक अनुभवी रूपात्मक विश्लेषक की आवश्यकता होती है। कम पीसी वाले बीएम स्मीयर के लिए, पीसी को उद्देश्य चरण पर एक आगे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप तेल विसर्जन उद्देश्य और वर्नियर कैलिपर्स का उपयोग करके स्थानीयकृत किया जाना चाहिए, और उनकी छवियों को मोनोक्रोम शॉट्स द्वारा लिया जा सकता है। उदाहरण के लिए, यदि पीसी रूपात्मक परीक्षा द्वारा बीएम फिल्म में कुल न्यूक्लिएटेड कोशिकाओं का केवल 3% के लिए जिम्मेदार है, तो 8 मिमी x 8 मिमी के एक अच्छी तरह से बिखरे हुए हाइब्रिड क्षेत्र में मछली परीक्षण के लिए 50 पीसी से कम नहीं होना चाहिए। मछली संकरण के बाद, कम से कम 50 पीसी में प्रतिदीप्ति संकेतों को एक अनुभवी विश्लेषक द्वारा गिना जाना चाहिए।
हालांकि, इस तकनीक की एक सीमा ताजा बीएम स्मीयर की आवश्यकता है। यदि बीएम स्मीयर 2 साल से अधिक समय तक संग्रहीत किए जाते हैं, तो परिणामी मछली छवियां अस्पष्ट हो सकती हैं, जिसके परिणामस्वरूप गलत व्याख्या हो सकती है।
एक साथ लिया, उपर्युक्त बीएम स्मीयर मछली को हेमेटोलॉजिकल दुर्दमता वाले रोगियों के लिए बड़े पैमाने पर उपयोग किया जा सकता है जब बीएम निष्कर्षण मुश्किल होता है या बीएम सूखा नल होता है, यहां तक कि कम न्यूक्लिएटेड कोशिकाओं के साथ हाइपो-प्रोलिफेरेटिव बीमारियों में भी। हम आशा करते हैं कि हेमेटोलॉजिकल दुर्दमताओं वाले अधिक रोगियों को इस विधि से लाभ हो सकता है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
इस परियोजना को WNLO 2018WNLOKF023 के इनोवेशन फंड द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| automatic FISH machine | Leica Corporation | S500-24 | FINAL Assy Thermobrite 240V |
| DAPI | Abbott Molecular Inc. | 06J49-001 | DAPI Counterstain |
| FISH Analysis Software | IMSTAR Corporation | IMSTAR | FISH Analysis Software |
| FISH Probe | Abbott Molecular Inc. | 05N56-020 | Vysis Locus Specifc Identifer TP53 / CEP 17 FISH Probe Kit |
| Fixed volume pipette | Eppendorf China Ltd. | M33768H | 10 microliter |
| Fluorescence Microscope | Olympus Corporation | BX53 | Forward Fluorescence Microscope |
| Karyotype Analysis Software | IMSTAR Corporation | IMSTAR | Karyotype Analysis Software |
| Light Microscope | Olympus Corporation | BX41 | Forward Light Microscope |
| NP-40 | Abbott Molecular Inc. | 07J05-001 | NP-40 |
| Plastic staining dyeing rack | Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd. | RSJ-501 | 24 slides |
| Plastic staining dyeing tank | Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd. | RSJ-516 | 24 slides |
| Rubber Cement | Marabu GmbH & Co. KG | FixoGum | Rubber Cement |
| SSC | Abbott Molecular Inc. | 02J10-032 | 20×SSC |
| Water bath | Shanghai Boxun Medical Bio-Instrument Co., Ltd. | DK-8D | Multiple Temperature Water bath |
References
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